聚合酶链反应与反向线点杂交检测沙眼衣原体及分型 被引量：6

1

作者 熊礼宽 孔繁荣 +2 位作者 周华 程锦泉 Lyn Gilbert 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期251-253,共3页

目的建立和评价一个新的多重和巢式PCR反向线点杂交试验(RLB)检测泌尿生殖道沙眼衣原体及其分型方法。方法该试验设计了3对引物分别针对CT外膜蛋白(omp1)基因VD2区和质粒进行扩增,用CT15种血清型(A、B/Ba、C、D/Da、E、F、G/Ga、H、I/Ia... 目的建立和评价一个新的多重和巢式PCR反向线点杂交试验(RLB)检测泌尿生殖道沙眼衣原体及其分型方法。方法该试验设计了3对引物分别针对CT外膜蛋白(omp1)基因VD2区和质粒进行扩增,用CT15种血清型(A、B/Ba、C、D/Da、E、F、G/Ga、H、I/Ia、J、Ja、K、L1、L2和L3)探针与扩增后的产物杂交。经COBASAmplicor检测的355份标本,其中277份尿液,2份男性直肠拭子和78份女性宫颈试子,进行PCRRLB检测CT并分型。结果192份COBASAmplicor阳性标本中175份PCRRLB阳性,其中93.1%(163/175)的CT感染可被正确分型,其单一型感染分型结果与DNA测序结果一致。163份COBASAmplicor阴性标本中6份巢式PCRRLB阳性。85.3%(139/163)为单一型CT感染,最常见的CT是E(38.6%)F(28.5%)和D(18.2%)。14.7%(24/163)为CT混合感染,混合感染以H和K为主。结论PCRRLB检测CT是一种简便、快速、特异和敏感的方法,并准确的进行CT分型,为CT感染的临床诊断和分子流行病学研究提供了一种可靠的方法。 展开更多

关键词 聚合酶链反应 核酸杂交 衣原体 沙眼 血清分型

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PPARγ_2基因Pro12Ala多态性与肥胖的相关性 被引量：4

2

作者 李秀丽 章琳 +1 位作者 杨渭临 王妮 《福建医科大学学报》 2007年第5期423-425,共3页

目的探讨PPARγ2基因Pro12ALa多态性与肥胖相关性。方法将研究对象按体质量指数(BMI)分为肥胖组(n=62)和非肥胖组(n=121)。再将所有对象分为糖尿病组(DM组,n=79)、对照组(NC组,n=104);DM组和NC组再分别根据BMI分为肥胖组与非肥胖组。应... 目的探讨PPARγ2基因Pro12ALa多态性与肥胖相关性。方法将研究对象按体质量指数(BMI)分为肥胖组(n=62)和非肥胖组(n=121)。再将所有对象分为糖尿病组(DM组,n=79)、对照组(NC组,n=104);DM组和NC组再分别根据BMI分为肥胖组与非肥胖组。应用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性方法检测PPARγ2基因Pro12Ala多态性。比较肥胖与非肥胖组、DM组中的肥胖与非肥胖人群、NC组中的肥胖与非肥胖人群基因型频率及等位基因频率。结果肥胖组和非肥胖组基因型频率和等位基因频率无显著性差异(P>0.05)。进一步分组,DM组中肥胖组和非肥胖组基因型频率、等位基因频率之间无显著性差异(P>0.05),NC组中肥胖组和非肥胖组基因型频率无显著性差异(P>0.05),而等位基因频率有显著性差异(P<0.05)。结论PPARγ2基因Pro12Ala多态性与无T2DM家族史的正常人群肥胖有关,与糖尿病组中肥胖人群无关。 展开更多

关键词 过氧化物酶体增殖物激活受体 糖尿病 2型 肥胖症 多态性 限制性片断长度 聚合酶链反应

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脑膜炎奈瑟菌4种聚合酶链反应检测方法的评价 被引量：5

3

作者 徐丽 朱兵清 +2 位作者 徐征 高源 邵祝军 《中国疫苗和免疫》 CAS 北大核心 2015年第2期173-176,共4页

目的对脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm)检测中常用的聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)方法进行适用性评价。方法选取130株不同血清群Nm及109株其他种属细菌,通过PCR检测荚膜转移基因A(Capsule Transport A,ctr A)... 目的对脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm)检测中常用的聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)方法进行适用性评价。方法选取130株不同血清群Nm及109株其他种属细菌,通过PCR检测荚膜转移基因A(Capsule Transport A,ctr A)、铜-锌超氧化物歧化酶(Cu-Zn Superoxide Dismutase C,sod C)和lysR家族转录调节基因A(LysR-family Transcriptional Regulator A,crg A),其中,荧光实时(Real Time)-PCR(RT-PCR)检测ctr A基因(ctr A-RT)和sod C基因(sod C-RT),普通PCR检测crg A(crg A)和sod C(sod C);并采用281份脑脊液(Cerebrospinal Fluid,CSF)标本和162份健康人群咽拭子标本对两种RT-PCR检测方法进行了比较。结果在菌株检测中,ctr A-RT法能检测出所有可分群Nm菌株和大部分不可分群菌株,未检出其他菌株;sod C-RT、crg A和sod C法除检测出所有Nm菌株,还能检测出部分其他菌株。在CSF标本检测中,ctr A-RT和sod C-RT法结果完全一致。在咽拭子标本检测中,ctr A-RT和sod C-RT法符合率低。结论 4种PCR检测方法中,单独采用任何1种,均不能将Nm与其他细菌完全区分开。建议根据不同的标本选择适宜的检测方法。 展开更多

关键词 脑膜炎奈瑟菌 聚合酶链反应

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poly(A)聚合酶加尾实时荧光定量聚合酶链反应法检测血清miR-103方法学建立和初步临床应用 被引量：1

4

作者 臧素纲 陈曦 +2 位作者 陈鑫 周玉贵 韩霜 《实用医技杂志》 2019年第2期143-145,共3页

目的建立ploy(A)聚合酶加尾SYBR GreenⅠ实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法测定血标本中miR-103的检测方法,并进行初步的临床应用研究。方法使用Trizols溶解试剂提取待检标本总RNA,逆转录反应获得cDNA,通过SYBR GreenⅠ实时定量PCR法测... 目的建立ploy(A)聚合酶加尾SYBR GreenⅠ实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法测定血标本中miR-103的检测方法,并进行初步的临床应用研究。方法使用Trizols溶解试剂提取待检标本总RNA,逆转录反应获得cDNA,通过SYBR GreenⅠ实时定量PCR法测定血清标本mi R-103。结果本方法可以用于定量检测血清miR-103的浓度,其PCR反应熔解曲线表现为单峰状,PCR产物具有特异性,在10~3～10~6 copies/μL线性范围间检测重复性好,有良好的线性关系(R^2=0.999)。2型糖尿病患者标本中mi R-103表达水平明显低于健康对照人群,差异有统计学意义(P<0.05)。结论本研究所创立的用于检测血清mi R-103的poly(A)加尾实时荧光定量PCR法具有很好的灵敏度和特异性,为进一步应用研究提供方法学保证。 展开更多

关键词 聚合酶链反应 荧光免疫测定 miR-103 糖尿病 2型

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日本血吸虫(中国大陆株)谷胱甘肽转移酶编码区基因的体外扩增、克隆及在原核细胞的高效表达 被引量：1

5

作者 沈际佳 蒋作君 +2 位作者 余新炳 汪学龙 王维 《生物学杂志》 CAS CSCD 2000年第3期13-15,共3页

为表达、获取日本血吸虫谷胱甘肽转移酶 (SjGST)基因工程重组蛋白 ,以日本血吸虫 (中国大陆株 )cDNA为模板 ,设计、合成特定寡核苷酸引物 ,RT—PCR法扩增GST编码基因序列 ,将扩增产物连接 pGEM-T克隆载体 ,再亚克隆到真、原核表达质粒pB... 为表达、获取日本血吸虫谷胱甘肽转移酶 (SjGST)基因工程重组蛋白 ,以日本血吸虫 (中国大陆株 )cDNA为模板 ,设计、合成特定寡核苷酸引物 ,RT—PCR法扩增GST编码基因序列 ,将扩增产物连接 pGEM-T克隆载体 ,再亚克隆到真、原核表达质粒pBK -CMV中 ,转染大肠杆菌XL1 -blue ,经IPTG诱导后用SDS—PAGE分析表达效果。结果RT—PCR法特异性扩增出日本血吸虫GST编码区基因片段 ,其大小约为 670bp。重组 pGEM -T克隆载体和重组 -GST表达质粒经双酶切及以相应质粒为模板的PCR法均证实其中含有插入的GST目的基因。重组菌经IPTG诱导后以大小约 2 9KD融合蛋白形式表达 ,诱导后 6小时表达产物约占菌体蛋白 3 0 %。结论　pBK -SjcGST重组质粒的成功构建和高效表达 ,为进一步纯化提取基因工程重组日本血吸虫GST蛋白 ,分析其在血吸虫病免疫诊断、免疫预防中的作用提供了必要的条件。 展开更多

关键词 日本血吸虫病 SjGST 基因工程疫苗 免疫诊断

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某地区吸毒人员丙型肝炎病毒的流行病学和基因分型研究 被引量：1

6

作者 王乃昌 吴立平 +6 位作者 刘玉萍 乔晓春 毛爱玲 段元宏 郭晓黎 聂晓勇 张丽芬 《山西职工医学院学报》 CAS 2001年第4期24-26,共3页

目的 :了解吸毒人群中丙型肝炎病毒 (HCV)的流行和基因分布现状 ,探索HCV的传播规律。方法 :采集本市强制戒毒所 5 76份吸毒人员和本站体检的从业人员 2 10份血清标本 ,用ELISA法对所有标本进行抗HCV的检测 ;检出抗HCV阳性的血清进一步... 目的 :了解吸毒人群中丙型肝炎病毒 (HCV)的流行和基因分布现状 ,探索HCV的传播规律。方法 :采集本市强制戒毒所 5 76份吸毒人员和本站体检的从业人员 2 10份血清标本 ,用ELISA法对所有标本进行抗HCV的检测 ;检出抗HCV阳性的血清进一步用特异性引物RT -PCR法进行基因分型。结果 :5 76份标本中 ,经血途径 (静脉吸毒、共用注射器 )吸毒或有输血史和用血制品史的吸毒者 ,其抗HCV检出率 ( 13 8% )明显高于经口吸毒者 ( 6 3% ) ,说明静脉吸毒、共用注射器吸毒、用血制品、输血都是感染HCV的危险因素。经口吸毒者抗HCB检出率明显高于从业人员 ,提示经口吸毒在传播HCV上具有重要意义。此外 ,本地籍吸毒者的抗HCV检出率 ( 5 7% )明显低于外省吸毒者 ( 2 7 7% )、外省有血途径感染机会的吸毒者 ,83 3%都感染了HCV ,本地有同样途径有吸毒者 ,仅有 8 6%感染了HCV ;这可能与外省有关城市的高感染率有关。结果还显示 ,山西省吸毒人群的HCV基因型的分布与从业人员较一致 ,均以 1b型为主 ( 78 9% ) ,其次为 2a型 ( 15 8% )和 1b/2a混合型 ( 5 3% ) ;未检出 1b型、2b型和 3a型。结论 :该吸毒人群中HCV基因以 1b型占优势。其分布与南方城市和本省的其他人群相近[6 ] 。血途径仍是HCV感染的主要途径 。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 吸毒 抗HCV 聚合酶链反应 基因型 流行病学

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双重荧光定量RT—PCR在快速检测A、B型流感病毒上的应用

7

作者 韩建康 徐德顺 +1 位作者 季蕾 吴晓芳 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期295-297,共3页

目的 建立双重荧光定量RT-PCR技术同时快速检测A、B型流感病毒,并应用于临床样本的检测.方法 在A型流感病毒M基因和B型流感病毒HA基因的保守区序列分别设计特异性引物和Taqman探针,建立优化双重荧光RT-PCR反应体系,评价所建双重RT-PCR... 目的 建立双重荧光定量RT-PCR技术同时快速检测A、B型流感病毒,并应用于临床样本的检测.方法 在A型流感病毒M基因和B型流感病毒HA基因的保守区序列分别设计特异性引物和Taqman探针,建立优化双重荧光RT-PCR反应体系,评价所建双重RT-PCR反应体系的特异性、敏感性和稳定性,并应用于疑似流感含漱液标本检测.结果 该方法对A、B型流感病毒检测具有高度特异性,检出限分别为0.1TCID50和0.01TCID50,具有较好的稳定性.可从疑似流感患者含漱液中直接检测到流感病毒核酸.结论 本研究建立的双重荧光定量RT-PCR可以同时准确分型A、B型流感病毒,灵敏度高,稳定性好,是一种快速检测流感病毒的新方法. 展开更多

关键词 正黏病毒科 序列分析 聚合酶链反应

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肾上腺脑白质营养不良外显子6、7、8基因突变研究

8

作者 施晓容 陈育才 +4 位作者 谢文煌 章涛 黄梅芳 侯晓君 王柠 《中国优生与遗传杂志》 2003年第5期25-27,共3页

目的　探讨中国人X -连锁隐性遗传肾上腺脑白质营养不良 (adrenoleukodystrophy)的分子发病机理。方法　应用聚合酶链反应 (polymerasechainreaction)结合DNA测序技术 (DNAsequencing) ,对收集的 6例患者、患者母亲及 2 0名正常对照的AL... 目的　探讨中国人X -连锁隐性遗传肾上腺脑白质营养不良 (adrenoleukodystrophy)的分子发病机理。方法　应用聚合酶链反应 (polymerasechainreaction)结合DNA测序技术 (DNAsequencing) ,对收集的 6例患者、患者母亲及 2 0名正常对照的ALD基因外显子 6、7、8及其侧翼进行突变检测。结果　检出一例患者在ALD基因外显子 6发生了Val5 17Ile(G→A)的碱基错义突变 ;另一侧患者在ALD基因外显子 7发生了Gln5 5 6Arg(A→G)的碱基错义突变。ALD基因突变合成异常不稳定的蛋白 (ALDP) ,从而使VLCFA在脑白质、肾上腺及血浆聚集增多 ,导致疾病发生。结论　ALD基因突变是中国人X -连锁隐性遗传ALD发病原因之一。 展开更多

关键词 肾上腺脑白质营养不良 聚合酶链反应 DNA序列分析 基因突变

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涎腺腺样囊性癌转移细胞株的Notch基因表达 被引量：6

9

作者 卢友光 杨春桃 +1 位作者 丁林灿 佘林 《福建医科大学学报》 2008年第1期6-8,29,共4页

目的筛选与涎腺腺样囊性癌转移相关的候选基因,并对其进行初步验证。方法限制片段差异显示PCR技术(RFDD-PCR)构建涎腺腺样囊性癌高低转移细胞株(ACC-M、ACC-2)基因表达谱,生物信息学分析两个表达谱的Notch基因,半定量RT-PCR技术对两细... 目的筛选与涎腺腺样囊性癌转移相关的候选基因,并对其进行初步验证。方法限制片段差异显示PCR技术(RFDD-PCR)构建涎腺腺样囊性癌高低转移细胞株(ACC-M、ACC-2)基因表达谱,生物信息学分析两个表达谱的Notch基因,半定量RT-PCR技术对两细胞株的Notch基因差异表达进行验证。结果用RFDD-PCR方法成功构建涎腺腺样囊性癌高低转移细胞株(ACC-M、ACC-2)的表达谱,共获得5420个基因片段,其中包含3个Notch基因。半定量RT-PCR证实Notch2、Notch4在ACC-M的表达高于ACC-2,Notch1在两表达谱未见表达,半定量RT-PCR发现其在ACC-M的表达高于ACC-2。Notch3在两个细胞株表达的差别无统计学意义。结论Notch1、Notch2、Notch4可能与涎腺腺样囊性癌的发生、发展、转移有关。 展开更多

关键词 癌 腺样囊性 涎腺肿瘤 基因表达谱 逆转录聚合酶链反应 基因

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结核分枝杆菌inhA基因突变的研究 被引量：4

10

作者 姚孟晖 罗映辉 《实用预防医学》 CAS 2001年第2期81-83,共3页

目的　了解我国结核分枝杆菌耐异烟肼 (INH)临床分离株 inh A基因突变情况 ,探讨快速检测结核分枝杆菌耐药基因型的分子药敏检测方法。　方法　用 PCR单链构象多态性 (PCR- SSCP)和 PCR直接测序法 (PCR- DS)分析30株结核分枝杆菌临床分... 目的　了解我国结核分枝杆菌耐异烟肼 (INH)临床分离株 inh A基因突变情况 ,探讨快速检测结核分枝杆菌耐药基因型的分子药敏检测方法。　方法　用 PCR单链构象多态性 (PCR- SSCP)和 PCR直接测序法 (PCR- DS)分析30株结核分枝杆菌临床分离株 inh A基因。　结果　以结核分枝杆菌 H37Rv标准株对照观察所有 INH敏感株的 PCR-SSCP和 PCR- DS图谱 ,均未发现 inh A基因突变 ;在 12株 INH耐药株中 ,有 5株无 PCR- SSCP和 PCR- DS图谱异常 ,占 INH耐药株的 41.7% ,另有 5株和 2株分别发生核苷酸错义突变和同义突变 ,共占 INH耐药株的 5 8.3%。　结论　多数结核分枝杆菌耐 INH与 inh A基因突变密切相关 ,但检测 inh 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 药物耐受性 PCR SSCP 序列分析 异烟肼

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浙江沿海地区汉族人A型及AB型血型的基因亚型研究 被引量：5

11

作者 严建新 陈敏霞 《中国卫生检验杂志》 CAS 2010年第2期341-342,344,共3页

目的:探讨浙江沿海地区汉族人A型及AB型血型的基因亚型分布情况,为输血及血库血量储存提供理论依据。方法:采用序列特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)检测该地区汉族成人体检者血样本DNA基因亚型,A型280份,AB型110份,根据PCR-SSP反应产生... 目的:探讨浙江沿海地区汉族人A型及AB型血型的基因亚型分布情况,为输血及血库血量储存提供理论依据。方法:采用序列特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)检测该地区汉族成人体检者血样本DNA基因亚型,A型280份,AB型110份,根据PCR-SSP反应产生的特异性阳性条带判定相应的基因亚型。结果:A型样本分型成功278份,AB型样本分型成功107份。A型血基因亚型以A/A201、A/O及A201/O较多,占97.84%,而A201/A201及A/A占2.16%;AB型血中基因亚型A/B型(51.40%)及A201/B型(48.60%)所占比例较为接近。A型及AB型血型的基因亚型分布在男女性别之间无显著性差异(P>0.05)。结论:浙江沿海地区汉族人群A型血中存在多种基因亚型,A型血型遗传多态性以及不同亚型之间的抗原性差异需进一步研究。 展开更多

关键词 ABO血型 基因分型 序列特异引物聚合酶链反应

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GSTA1基因多态性对环磷酰胺辅助化疗的乳腺癌患者预后的影响 被引量：4

12

作者 李莉华 郭子健 +4 位作者 杭晓声 周希科 何杰 宋明旭 刘志辉 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期309-314,共6页

目的 探讨GSTA1基因多态性与接受CTX类药物辅助化疗乳腺癌患者预后的关系.方法 对采用CTX类药物为主的方案进行辅助化疗的137例确诊乳腺癌患者（浸润性导管癌患者124例,浸润性小叶癌患者5例,其他类型癌症患者8例）,用PCR-LDR检测其GSTA... 目的 探讨GSTA1基因多态性与接受CTX类药物辅助化疗乳腺癌患者预后的关系.方法 对采用CTX类药物为主的方案进行辅助化疗的137例确诊乳腺癌患者（浸润性导管癌患者124例,浸润性小叶癌患者5例,其他类型癌症患者8例）,用PCR-LDR检测其GSTA1基因多态性,Kaplan-Meier法绘制生存曲线,log-rank法比较不同基因型组间生存差异,并用Cox比例风险回归模型进行预后影响因素的多因素分析.结果 137例乳腺癌患者中,GSTA1＊A/＊A、＊A/＊B和-B/＊B基因型频率分别为67.2%（92/137）、31.4%（43/137）和1.5%（2/137）.乳腺癌患者的GSTA1基因型频率在按年龄、临床分期、淋巴结转移、雌、孕激素受体状态等临床病理特征分组的分布差异均无统计学意义（x2值分别为0.722、1.967、3.303、0.226、0.709,P均＞0.05）;经Fisher精确概率分析,肿瘤大小、病理组织类型、病理分级的差异均无统计学意义（P均＞0.05）.携带GSTA1-A/＊A基因型和＊A/＊B或＊B/-B基因型的乳腺癌患者复发率分别为47.8%（44/92）和31.1%（14/45）,死亡率分别为22.8%（21/92）和17.8%（8/45）.Kaplan-Meier生存曲线和log-rank分析显示,携带GSTA1＊A/＊B＋＊B/＊B基因型乳腺癌患者的无复发生存率和总生存率均高于携带GSTA1＊A/＊A基因型患者,且差异均有统计学意义（x2值分别为18.723、7.352,P均＜0.01）.经Cox多因素分析,GSTA1基因多态性是影响乳腺癌患者无复发生存[OR=0.222,95%CI：0.108～0.458,P＜0.01]和总生存[OR=0.362,95%CI：0.145～0.902,P＜0.05]的独立因素.结论 GSTA1基因多态性是乳腺癌患者CTX药物辅助化疗无复发生存和总生存的预测标志. 展开更多

关键词 乳腺癌 聚合酶链反应-连接酶检测反应 多态性 单核苷酸 谷胱甘肽S转移酶A1 化学治疗

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二胺氧化酶在肝癌组织中的基因表达 被引量：4

13

作者 王红珊 王红梅 +1 位作者 吴琳 简美贞 《临床医药实践》 2007年第9期805-807,共3页

目的:探讨二胺氧化酶(DAO)在人类原发性肝癌组织中基因表达。方法:应用半定量逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测22例人类正常肝脏组织、36例人原发性肝癌旁组织和36例人原发性肝癌组织新鲜标本中基因mRNA的表达情况。结果:在肝癌组... 目的:探讨二胺氧化酶(DAO)在人类原发性肝癌组织中基因表达。方法:应用半定量逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测22例人类正常肝脏组织、36例人原发性肝癌旁组织和36例人原发性肝癌组织新鲜标本中基因mRNA的表达情况。结果:在肝癌组织中DAO基因呈高表达。结论:肝脏中DAO基因表达随肿瘤的发展而变化。 展开更多

关键词 原发性肝癌组织 二胺氧化酶 RT-PCR

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FoxP3相关微RNA-210微RNA-155及微RNA-34a在系统性红斑狼疮患者外周血的表达及临床意义 被引量：4

14

作者 王友庆 陈士芳 +1 位作者 梅珏 许瑜佳 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期603-608,共6页

目的探讨微RNA（miR）-210、miR-155及miR-34a在SLE患者外周血的表达情况及临床意义。方法将126例SLE患者根据SLEDAI评分分为稳定组（35例）、轻度活动组（49例）和中重度活动组（42例），同时选取40名健康体检者作为对照组，收集患者... 目的探讨微RNA（miR）-210、miR-155及miR-34a在SLE患者外周血的表达情况及临床意义。方法将126例SLE患者根据SLEDAI评分分为稳定组（35例）、轻度活动组（49例）和中重度活动组（42例），同时选取40名健康体检者作为对照组，收集患者临床资料，检测血常规、肝肾功能、免疫学指标，并评估狼疮活动指数；采用实时荧光定量（RT）-qPCR的方法检测患者外周血miR-210、miR-155及miR-34a的水平，并分析其与患者临床特征之间的关系；各组血清miR-210、miR-155、miR-34a的表达量比较采用单因素方差分析进行统计；相关性分析采用非参数Spearman相关分析；应用受试者工作特征曲线（ROC曲线）评价各指标对SLE的诊断价值。结果miR-210和miR-155的表达在对照组（0.015±0.010）；（0.071±0.034）、稳定组（0.017±0.012）和（0.150±0.101）之间差异无统计学意义，但轻度活动组（0.502±0.166）、（1.521±1.138）和中重度活动组（1.237±0.584）、（13.589±9.827）依次升高（F=124.321，70.065，P均〈0.05）；miR-34a的表达在对照组、稳定组、轻度活动组和中重度活动组的平均表达水平分别为（0.005±0.003）、（0.249±0.137）、（2.981±1.762）、（9.625±5.873），呈现依次升高的趋势（F=75.668，P〈0.05）；miR-210、miR-155、miR-34a在LN和非LN患者中的表达差异无统计学意义（P〉0.05）。miR-210、miR-155、miR-34a的表达与免疫球蛋白（Ig）G、IgA、IgM、ESR、C3、C4、ANA滴度、抗dsDNA抗体及SLEDAL评分均有明显的相关关系（P〈0.05），r值分别为：IgG（0.347；0.518；0.482），IgA（0.463；0.635；0.379），IgM（0.287；0.392；0.336），ESR（0.317；0.428；0.369），C3（0.243；0.429；0.381），C4（0.317；0.513；0.429），ANA滴度（0.462；0.594；0.527），抗dsDNA抗体（0.391；0.586；0.483），SLEDAI评分（-0.412；-0.558；-0.493）。在SLE患者中，无论是单用激素治疗或是� 展开更多

关键词 红斑狼疮 系统性 微RNAS 逆转录聚合酶链反应

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精神发育迟滞患者的X染色体脆性位点和FMR-1基因突变的研究 被引量：3

15

作者 陈建芳 陈一心 焦公凯 《中国神经精神疾病杂志》 CSCD 北大核心 1999年第2期88-89,共2页

目的探讨精神发育迟滞患者病因的检测方法。方法采用细胞遗传学方法检测Ｘｑ２７脆性位点，利用ＰＣＲ法检测ＦＭＲ－１基因突变。结果１０８８名精神发育迟滞患者中有１１２名为脆性Ｘ综合征［Ｆｒａ（Ｘ）］患者，９７％的Ｆｒａ（Ｘ... 目的探讨精神发育迟滞患者病因的检测方法。方法采用细胞遗传学方法检测Ｘｑ２７脆性位点，利用ＰＣＲ法检测ＦＭＲ－１基因突变。结果１０８８名精神发育迟滞患者中有１１２名为脆性Ｘ综合征［Ｆｒａ（Ｘ）］患者，９７％的Ｆｒａ（Ｘ）有ＦＭＲ－１基因突变。结论细胞遗传学方法和ＰＣＲ法结合运用。 展开更多

关键词 脆性X综合征 FMR-1基因突变 精神发育迟滞 PCR

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酪蛋白激酶1基因在恶性黑色素瘤中的表达及临床意义 被引量：2

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作者 孙达欣 王宝胜 戴显伟 《实用肿瘤杂志》 CAS 2012年第1期64-67,共4页

目的研究酪蛋白激酶-1(CK1)在恶性黑色素瘤细胞及组织中的表达并探讨其临床意义。方法采用qRT-PCR检测CK1 mRNA在恶性黑色素瘤细胞及正常黑色素细胞中的表达。Western blot检测CK1蛋白在恶性黑色素瘤细胞及正常黑色素细胞中的表达。应... 目的研究酪蛋白激酶-1(CK1)在恶性黑色素瘤细胞及组织中的表达并探讨其临床意义。方法采用qRT-PCR检测CK1 mRNA在恶性黑色素瘤细胞及正常黑色素细胞中的表达。Western blot检测CK1蛋白在恶性黑色素瘤细胞及正常黑色素细胞中的表达。应用免疫组织化学方法检测59例恶性黑色素瘤及30例色素痣标本中CK1的表达。结果恶性黑色素瘤细胞及组织中CK1基因表达明显高于在黑色素细胞及色素痣组织中的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CK1基因在恶性黑色素瘤细胞及组织中高表达揭示CK1可能与恶性黑色素瘤的发病机制相关。以CK1为靶点的抑制剂或反义基因治疗黑色素瘤可能会展示广阔的前景。 展开更多

关键词 黑色素瘤 黑素细胞 痣 酪蛋白激酶-1 基因 免疫组织化学 逆转录聚合酶链反应

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环状RGDfK肽对肌成纤维细胞整合素αVβ3表达调控的实验研究 被引量：2

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作者 董毅 董念国 +5 位作者 史嘉玮 洪昊 谢霆 胡畅 陈思 邓诚 《中国胸心血管外科临床杂志》 CAS 2008年第5期360-364,共5页

目的探讨环状精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-D-脯氨酸-赖氨酸短肽(Cyclo-RGDfK)能否提高去细胞瓣对肌成纤维细胞(myofibroblast)的黏附性能,以及RGD肽对Integrin αVβ3基因表达的调控。方法组织块培养法获取大鼠主动脉壁肌成纤维细胞(myofibr... 目的探讨环状精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-D-脯氨酸-赖氨酸短肽(Cyclo-RGDfK)能否提高去细胞瓣对肌成纤维细胞(myofibroblast)的黏附性能,以及RGD肽对Integrin αVβ3基因表达的调控。方法组织块培养法获取大鼠主动脉壁肌成纤维细胞(myofibroblast),免疫荧光染色检测波形蛋白(Vimentin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)分子在培养myofibroblast中的表达。将去细胞瓣随机分为3组(每组7个),A组:去细胞瓣未接受任何处理;B组:去细胞瓣与交联剂1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)-碳化二亚胺盐酸盐(EDC)反应36h;实验组:去细胞瓣与EDC反应36h后,再与Cyclo-RGDfK反应24h,使RGD肽共价结合于去细胞瓣。将第5代myofibroblast分别接种至各组瓣膜上。HE染色和扫描电子显微镜观察细胞黏附增殖状况,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Integrin αVβ3基因在各组的表达。结果免疫荧光染色显示原代培养的myofibroblast生长良好,高表达Vimentin和α-SMA分子。HE染色和扫描电子显微镜显示myofibroblast在实验组的生长好于A组和B组,半定量PCR示Integrin αVβ3 mRNA在实验组的表达高于A组和B组,差异有统计学意义(P<0.05),而A组与B组比较差异无统计学意义(P=0.900)。结论Cyclo-RGDfK促进myofibroblast在去细胞瓣上黏附,此效应可能与RGD肽上调Integrin αVβ3基因表达有关。 展开更多

关键词 组织工程瓣膜 去细胞瓣 精氨酸-苷氨酸-天冬氨酸肽 细胞黏附 整合素基因 半定量聚合 酶链反应

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SYBR Green实时荧光PCR方法检测广谱人乳头瘤病毒的方法建立 被引量：1

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作者 徐平 章晓鹰 张慧敏 《国际检验医学杂志》 CAS 2011年第7期734-735,738,共3页

目的建立实时荧光PCR方法以检测广谱人乳头瘤病毒。方法该实时荧光PCR方法利用了degenerate PCR引物与非特异性的SYBR Green染料替代通常使用的PCR特异性引物与探针,并与市售高危13型、低危6型试剂盒以及degener-ate PCR方法进行比较。... 目的建立实时荧光PCR方法以检测广谱人乳头瘤病毒。方法该实时荧光PCR方法利用了degenerate PCR引物与非特异性的SYBR Green染料替代通常使用的PCR特异性引物与探针,并与市售高危13型、低危6型试剂盒以及degener-ate PCR方法进行比较。结果对于用高危13型试剂盒及低危6型试剂盒检测的100例黏膜型人乳头瘤病毒阳性标本,用SYBR Green实时荧光PCR方法检出的阳性数为69例,敏感性为69%,相反,用SYBR Green实时荧光PCR方法检测出的40例皮肤型人乳头瘤病毒阳性标本,用高危13型试剂盒以及低危6型试剂盒检测均为阴性;对于用SYBR Green实时荧光PCR方法及degenerate PCR方法检测的90例黏膜型、60例皮肤型标本,其检测结果显示两种方法有高度一致性(Kappa=0.907)。结论与市售试剂盒相比,SYBR Green实时荧光PCR方法可以覆盖广谱的HPV型别(皮肤型与黏膜型),并且比degenerate PCR方法高效、快速和简便,不失为一个可用于临床与科研的良好检测手段。 展开更多

关键词 皮肤 人乳头瘤病毒 聚合酶链反应

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杜安眼球后退综合征和染色体组异常(英文) 被引量：1

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作者 Alireza K-Jafari Seyed-Masoud Hoshmand +4 位作者 Iraj Ahadzadeghan Faramarz Anvari Ahmad Ameri Mohammad-Reza Akbari Mohammad Taher Rajabi 《国际眼科杂志》 CAS 2008年第9期1747-1748,共2页

目的:观察I型杜安眼球后退综合征患者的第8染色体。方法:连续观测了29例I型杜安眼球后退综合征患者的第8染色体。采用质粒DNA提取试剂盒方法从患者的外周血白细胞里分离提取DNA,选取D8S553和D8S1797做标记,用PCR法进行测定。结果:实验... 目的:观察I型杜安眼球后退综合征患者的第8染色体。方法:连续观测了29例I型杜安眼球后退综合征患者的第8染色体。采用质粒DNA提取试剂盒方法从患者的外周血白细胞里分离提取DNA,选取D8S553和D8S1797做标记,用PCR法进行测定。结果:实验的所有病人样本中没有D8S553和D8S1797标记阳性。结论:我们的发现提示所观察的I型杜安眼球后退综合征患者的可能病因是属散发病例而没有家族史,建议纳入更多病例、选取其他的标记和不同的染色体进行进一步的研究。 展开更多

关键词 杜安眼球后退综合征 聚合酶链反应 染色体

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用DNA扩增法检测46,XX男性的Y染色体特异序列 被引量：1

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作者 裘建英 张云福 +1 位作者 刘坚 毛裕民 《遗传与疾病》 CSCD 北大核心 1991年第3期142-143,191,共2页

应用Y染色体特异DNA体外扩增法检测工例46,XX男性,结果显示有Y染色体特异DNA重复序列出现。这对该征的病因学研究和检测方法学的探讨具有重要意义。

关键词 XX男性 DNA扩增法 Y染色体

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