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κ、λ轻链C区基因的克隆与表达
被引量：
1
1
作者
陆慧琦
韩焕兴
+1 位作者
叶伟民
杨丹榕
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第5期394-396,共3页
目的 利用pBAd/gⅢA表达载体和大肠杆菌Top 10克隆和表达κ、λ轻链C区基因片段,探索生物工程技术制备小分子抗原的可行性。方法 经RT-PCR从正常人的外周血淋巴细胞mRNA中扩增出κ、λ轻链恒定区基因,限制性双酶切后分别克隆到同样酶切...
目的 利用pBAd/gⅢA表达载体和大肠杆菌Top 10克隆和表达κ、λ轻链C区基因片段,探索生物工程技术制备小分子抗原的可行性。方法 经RT-PCR从正常人的外周血淋巴细胞mRNA中扩增出κ、λ轻链恒定区基因,限制性双酶切后分别克隆到同样酶切的pBAd/gⅢ A质粒中,转化大肠杆菌。酶切鉴定与PCR法筛选出阳性克隆菌株,经Arabinose诱导表达出κ、λ轻链片段。Ni^(2+)-NTA亲和层析纯化后,以150 mg/mL SDS-PACE与Western blot鉴定纯化产物,并测定蛋白的相对浓度。结果 SDS-PACE与Western blot结果显示,纯化后的产物在M_r 16000处呈致密的单一条带,与克隆基因表达产物的相对分子质量一致,该带经HRP标记的羊抗人IgG Fab抗体证实为抗体片段成分。结论 κ、λ轻链C区基因的pBAd/gⅢA表达在技术上是可行的,该原核系统表达的片段具抗原性,为后续的开发应用打下了基础。
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关键词
pbad
/
g
ⅲ
A
κ基因序列
λ基因序列
表达
纯化
免疫印迹
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职称材料
大肠杆菌TOP10F’中重组质粒pBAD/gⅢA-NTF2稳定性考察
被引量：
2
2
作者
邵哲旭
李芊
+1 位作者
边春象
阮期平
《绵阳师范学院学报》
2010年第2期79-83,共5页
本实验考察了基因工程菌E.coliTOP10F’重组质粒pBAD/gⅢA-NTF2的稳定性。结果表明,该基因工程菌在连续传代30代后,质粒的目的基因片断没有缺失,具有结构稳定性;在无抗生素选择压力下,经传10代后,菌株的质粒没发生质粒丢失现象,20代后...
本实验考察了基因工程菌E.coliTOP10F’重组质粒pBAD/gⅢA-NTF2的稳定性。结果表明,该基因工程菌在连续传代30代后,质粒的目的基因片断没有缺失,具有结构稳定性;在无抗生素选择压力下,经传10代后,菌株的质粒没发生质粒丢失现象,20代后各代菌种质粒保有率低于100%,但50代后的菌种质粒保有率仍高达88%。因此,表现出一定的分离稳定性。该基因工程菌在优化培养基和优化条件下的整个发酵过程中,始终表现出良好的结构和分离稳定性。
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关键词
传代
基因工程菌
质粒稳定性
pbad
/
g
ⅲ
A-NTF2
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职称材料
鼠疫耶尔森菌F1抗原蛋白大肠杆菌分泌表达载体的构建
被引量：
1
3
作者
王铁峰
王照
+1 位作者
吴丹
刘冬冬
《中国地方病防治》
CAS
北大核心
2016年第9期974-975,共2页
目的构建鼠疫耶尔森菌F1抗原蛋白的大肠杆菌分泌表达载体。方法 PCR法扩增鼠疫耶尔森菌的F1抗原基因,并插入大肠杆菌分泌表达载体p BAD/gⅢC中构建分泌表达载体。结果扩增出了长约500 bp的鼠疫耶尔森菌F1抗原基因并构建了该抗原的大肠...
目的构建鼠疫耶尔森菌F1抗原蛋白的大肠杆菌分泌表达载体。方法 PCR法扩增鼠疫耶尔森菌的F1抗原基因,并插入大肠杆菌分泌表达载体p BAD/gⅢC中构建分泌表达载体。结果扩增出了长约500 bp的鼠疫耶尔森菌F1抗原基因并构建了该抗原的大肠杆菌分泌表达载体。结论本研究中我们用载体p BAD/gⅢC构建鼠疫耶尔森菌F1抗原的大肠杆菌分泌表达质粒,为后期制备针对鼠疫F1抗原的单克隆抗体或多克隆抗体,进一步建立便捷高效的鼠疫诊断方法奠定基础。
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关键词
鼠疫耶尔森菌
鼠疫
F1抗原
pbad
/
g
ⅲ
C载体
原文传递
题名
κ、λ轻链C区基因的克隆与表达
被引量：
1
1
作者
陆慧琦
韩焕兴
叶伟民
杨丹榕
机构
第二军医大学附属长征医院临床免疫中心
出处
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第5期394-396,共3页
文摘
目的 利用pBAd/gⅢA表达载体和大肠杆菌Top 10克隆和表达κ、λ轻链C区基因片段,探索生物工程技术制备小分子抗原的可行性。方法 经RT-PCR从正常人的外周血淋巴细胞mRNA中扩增出κ、λ轻链恒定区基因,限制性双酶切后分别克隆到同样酶切的pBAd/gⅢ A质粒中,转化大肠杆菌。酶切鉴定与PCR法筛选出阳性克隆菌株,经Arabinose诱导表达出κ、λ轻链片段。Ni^(2+)-NTA亲和层析纯化后,以150 mg/mL SDS-PACE与Western blot鉴定纯化产物,并测定蛋白的相对浓度。结果 SDS-PACE与Western blot结果显示,纯化后的产物在M_r 16000处呈致密的单一条带,与克隆基因表达产物的相对分子质量一致,该带经HRP标记的羊抗人IgG Fab抗体证实为抗体片段成分。结论 κ、λ轻链C区基因的pBAd/gⅢA表达在技术上是可行的,该原核系统表达的片段具抗原性,为后续的开发应用打下了基础。
关键词
pbad
/
g
ⅲ
A
κ基因序列
λ基因序列
表达
纯化
免疫印迹
Keywords
pbad
/
g
ⅲ
A
κ
g
ene sequence
λ
g
ene sequence
Expression
Purification
Western blot
分类号
R392.116 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
大肠杆菌TOP10F’中重组质粒pBAD/gⅢA-NTF2稳定性考察
被引量：
2
2
作者
邵哲旭
李芊
边春象
阮期平
机构
绵阳师范学院生命科学与技术学院
出处
《绵阳师范学院学报》
2010年第2期79-83,共5页
文摘
本实验考察了基因工程菌E.coliTOP10F’重组质粒pBAD/gⅢA-NTF2的稳定性。结果表明,该基因工程菌在连续传代30代后,质粒的目的基因片断没有缺失,具有结构稳定性;在无抗生素选择压力下,经传10代后,菌株的质粒没发生质粒丢失现象,20代后各代菌种质粒保有率低于100%,但50代后的菌种质粒保有率仍高达88%。因此,表现出一定的分离稳定性。该基因工程菌在优化培养基和优化条件下的整个发酵过程中,始终表现出良好的结构和分离稳定性。
关键词
传代
基因工程菌
质粒稳定性
pbad
/
g
ⅲ
A-NTF2
Keywords
g
enerations
g
enetically en
g
ineered Escherichia coli bacteria strain
plasmid stability
pbad
/
g
ⅲ
A - NTF
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
鼠疫耶尔森菌F1抗原蛋白大肠杆菌分泌表达载体的构建
被引量：
1
3
作者
王铁峰
王照
吴丹
刘冬冬
机构
白城市师范学院
吉林省地方病第一防治研究所
吉林省动物疫病预防控制中心
出处
《中国地方病防治》
CAS
北大核心
2016年第9期974-975,共2页
基金
吉林省卫生厅科研课题项目(2012Z065)
文摘
目的构建鼠疫耶尔森菌F1抗原蛋白的大肠杆菌分泌表达载体。方法 PCR法扩增鼠疫耶尔森菌的F1抗原基因,并插入大肠杆菌分泌表达载体p BAD/gⅢC中构建分泌表达载体。结果扩增出了长约500 bp的鼠疫耶尔森菌F1抗原基因并构建了该抗原的大肠杆菌分泌表达载体。结论本研究中我们用载体p BAD/gⅢC构建鼠疫耶尔森菌F1抗原的大肠杆菌分泌表达质粒,为后期制备针对鼠疫F1抗原的单克隆抗体或多克隆抗体,进一步建立便捷高效的鼠疫诊断方法奠定基础。
关键词
鼠疫耶尔森菌
鼠疫
F1抗原
pbad
/
g
ⅲ
C载体
Keywords
Yersinia
Pestis
Pla
g
ue
Anti
g
en F1
pbad
/
g
ⅲ
C
分类号
R516.8 [医药卫生—内科学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
κ、λ轻链C区基因的克隆与表达
陆慧琦
韩焕兴
叶伟民
杨丹榕
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003
1
下载PDF
职称材料
2
大肠杆菌TOP10F’中重组质粒pBAD/gⅢA-NTF2稳定性考察
邵哲旭
李芊
边春象
阮期平
《绵阳师范学院学报》
2010
2
下载PDF
职称材料
3
鼠疫耶尔森菌F1抗原蛋白大肠杆菌分泌表达载体的构建
王铁峰
王照
吴丹
刘冬冬
《中国地方病防治》
CAS
北大核心
2016
1
原文传递
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