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番鸭细小病毒与鹅细小病毒PCR鉴别诊断方法的建立 被引量:35
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作者 刘家森 姜骞 +3 位作者 司昌德 甘一迪 韩凌霞 曲连东 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期469-472,共4页
根据番鸭细小病毒(MDPV)和鹅细小病毒(GPV)基因组的非同源序列各设计了1对引物MDPVF1/R1和GPVF1/R1,建立了一种PCR方法,用该PCR方法分别对GPV、MDPV、鸭瘟病毒(DPV)、鸭肝炎病毒(DHV)、鸭呼肠孤病毒(DRV)、犬细小病毒(CPV)和猫泛白细胞... 根据番鸭细小病毒(MDPV)和鹅细小病毒(GPV)基因组的非同源序列各设计了1对引物MDPVF1/R1和GPVF1/R1,建立了一种PCR方法,用该PCR方法分别对GPV、MDPV、鸭瘟病毒(DPV)、鸭肝炎病毒(DHV)、鸭呼肠孤病毒(DRV)、犬细小病毒(CPV)和猫泛白细胞减少症病毒(FPLV)的病毒培养物及其核酸进行扩增。结果,引物MDPVF1/R1仅特异性扩增出MDPV的900 bp核酸片段,引物GPVF1/R1仅特异性扩增出GPV的465 bp核酸片段。表明,建立的PCR方法可用于GPV和MDPV的鉴别诊断。 展开更多
关键词 番鸭细小病毒 鹅细小病毒 聚合酶链式反应 鉴别诊断
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鹅和番鸭细小病毒全基因克隆与序列分析 被引量:39
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作者 张云 耿宏伟 +5 位作者 郭东春 胡奇林 相文华 刘明 杨涛 林巍 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期415-419,共5页
本研究采用PCR技术扩增了鹅和番鸭全长细小病毒基因;其中鹅和番鸭细小病毒非结构蛋白基因(NS)全长为1884bp,编码627个氨基酸;结构基因(VP)全长为2199bp,编码732个氨基酸;序列分析表明:鹅和番鸭细小病毒NS之间的核苷酸和氨基酸同源性分别... 本研究采用PCR技术扩增了鹅和番鸭全长细小病毒基因;其中鹅和番鸭细小病毒非结构蛋白基因(NS)全长为1884bp,编码627个氨基酸;结构基因(VP)全长为2199bp,编码732个氨基酸;序列分析表明:鹅和番鸭细小病毒NS之间的核苷酸和氨基酸同源性分别为80.9%~82.9%和89.5%~91.2%,而相应的鹅细小病毒之间的同源性为93.7%~99.8%和96.8%~99.7%,番鸭细小病毒之间的同源性为98.8%~99.8%和98.6%~99.5%;在核苷酸和氨基酸水平上,鹅和番鸭细小病毒VP1之间的同源性分别为79.7%~88.7%和85.5%~93.3%,而相应的鹅细小病毒之间的同源性为88.8%~99.6%和91.5%~99.2%,番鸭细小病毒之间的同源性为98.1%~99.6%和97.1%~98.8%;番鸭和鹅细小病毒NS和vp1基因的系统进化树分析表明:番鸭和鹅呼细小病毒来自共同的祖先,但随着宿主的不同而演化为不同的分支。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 番鸭细小病毒 NS基因 VP1基因 序列分析
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番鸭细小病毒与鹅细小病毒的PCR鉴别诊断 被引量:17
3
作者 娄华 杨德威 +3 位作者 贺东升 白挨泉 秦智锋 刘福安 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第6期459-461,共3页
通过比较基因bank中番鸭细小病毒 (MDPV)和鹅细小病毒 (GPV)的全基因序列 ,针对两种病毒非结构蛋白基因序列的相同区段 ,分别设计了两对PCR引物LHMP1/LHMP2和LHGP1/LHGP2 ,用这两对引物分别对MDPV和GPV进行检测 ,其结果引物LHMP1/LHMP2... 通过比较基因bank中番鸭细小病毒 (MDPV)和鹅细小病毒 (GPV)的全基因序列 ,针对两种病毒非结构蛋白基因序列的相同区段 ,分别设计了两对PCR引物LHMP1/LHMP2和LHGP1/LHGP2 ,用这两对引物分别对MDPV和GPV进行检测 ,其结果引物LHMP1/LHMP2只特异性地扩增MDPV ,而引物LHGP1/LHGP2也只特异性地扩增GPV ,并且两对引物均扩增出约 72 0bp的长度序列。 展开更多
关键词 番鸭细小病毒 鹅细小病毒 鉴别诊断
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番鸭细小病毒和鹅细小病毒生化及基因组特性的比较 被引量:26
4
作者 程由铨 胡奇林 +2 位作者 陈少莺 李怡英 林天龙 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期429-433,共5页
番鸭细小病毒莆田株 ( MPV-P)和鹅细小病毒莆田株 ( GPV-P)分别感染的番鸭胚尿囊液经氯仿处理、PEG沉淀和 Sepharose 4 B柱纯化。纯化样品在电镜下观察 ,均见到实心和空心 2种病毒粒子。病毒粒子呈圆形 ,立体对称 ,无囊膜 ,直径为 2 0~... 番鸭细小病毒莆田株 ( MPV-P)和鹅细小病毒莆田株 ( GPV-P)分别感染的番鸭胚尿囊液经氯仿处理、PEG沉淀和 Sepharose 4 B柱纯化。纯化样品在电镜下观察 ,均见到实心和空心 2种病毒粒子。病毒粒子呈圆形 ,立体对称 ,无囊膜 ,直径为 2 0~ 2 4 nm。经 SDS-PAGE分析 ,MPV和 GPV均呈现 3条结构蛋白带。 MPV结构蛋白的相对分子质量约为 VP1890 0 0、VP2 780 0 0和 VP3 6 1 0 0 0 ,其中 VP3 为主要结构蛋白。GPV的相对分子质量与 MPV有微小差别。 MPV和 GPV核酸均为单链 DNA,长度约为 5 1 0 0 0 bp。分别以 MPV核酸和GPV核酸为模板 ,加到无引物的 DNA聚合酶 大片段合成体系中 ,合成产物经 1 %琼脂糖凝胶电泳 ,均可见长度约为 5 6 0 0 bp的双链 DNA带 ,证明 MPV和 GPV核酸的 3′末端具有发夹结构。对这 2种病毒核酸及经 Klenow合成的双链核酸进行限制性内切酶分析 ,两者的酶切结果明显不同 ,表明 MPV和 GPV核酸在一级结构上存在明显差异。以上结果证明 ,MPV和 GPV不但在致病性上有显著差异 。 展开更多
关键词 番鸭细小病毒 鹅细小病毒 生物化学特性 基因特性 比较
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番鸭细小病毒和鹅细小病毒的抗原相关性研究 被引量:17
5
作者 程晓霞 陈仕龙 +3 位作者 陈少莺 林锋强 王劭 朱小丽 《福建农业学报》 CAS 2013年第9期869-871,共3页
应用微量交叉中和试验(NT)和胶乳凝集抑制试验(LPAI)比较番鸭细小病毒、鹅细小病毒和番鸭源鹅细小病毒之间的抗原相关性。结果显示:3种病毒与同源抗血清的中和效价和LPAI效价均明显高于异源血清;番鸭细小病毒与番鸭源鹅细小病毒、鹅细... 应用微量交叉中和试验(NT)和胶乳凝集抑制试验(LPAI)比较番鸭细小病毒、鹅细小病毒和番鸭源鹅细小病毒之间的抗原相关性。结果显示:3种病毒与同源抗血清的中和效价和LPAI效价均明显高于异源血清;番鸭细小病毒与番鸭源鹅细小病毒、鹅细小病毒之间的R值均小于0.1;番鸭源鹅细小病毒与鹅细小病毒的R值大于0.25。结果表明番鸭细小病毒与鹅细小病毒(番鸭源或鹅源)的抗原相关性较低,提示番鸭源鹅细小病毒与鹅细小病毒属于同一血清型的不同亚型。 展开更多
关键词 番鸭细小病毒 番鸭源鹅细小病毒 鹅细小病毒 抗原相关性
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番鸭细小病毒琼扩抗原研制及初步应用 被引量:13
6
作者 何海蓉 季明 +1 位作者 朱国强 王永坤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第1期59-60,共2页
应用番鸭细小病毒鹅胚适应毒M91毒株接种易感鹅胚,收获鹅胚尿囊液毒经浓缩后制成琼扩抗原。
关键词 番鸭细小病毒 鹅细小病毒 琼扩试验
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新型鹅细小病毒研究进展 被引量:15
7
作者 卞国志 马海彬 +4 位作者 罗梦萍 龚凤平 王贵平 廖明 袁建丰 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第4期102-107,共6页
鸭细小病毒病是由鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)或番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)引起的一种传染病。经典MDPV和GPV毒株引起的病鸭主要症状为腹泻、脚软、渗出性肠炎,三周龄内雏鸭感染发病率和死亡率都很高。但是2008... 鸭细小病毒病是由鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)或番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)引起的一种传染病。经典MDPV和GPV毒株引起的病鸭主要症状为腹泻、脚软、渗出性肠炎,三周龄内雏鸭感染发病率和死亡率都很高。但是2008年下半年以来,福建省、浙江省、安徽省及江苏省等地的雏半番鸭和樱桃谷鸭陆续出现一种新型细小病毒病,该病发病率10%~30%,病死率低于3%,临床症状主要为软脚、短嘴和生长障碍。通过对该病病原进行全基因组测序及系统发育树分析,结果发现该病原与鹅细小病毒亲缘性很近。本文通过比较新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus,N-GPV)与经典的MDPV和GPV在基因组、感染宿主范围和致病性的区别,为新型鹅细小病毒病的防控提供理论依据。 展开更多
关键词 新型鹅细小病毒 鹅细小病毒 番鸭细小病毒
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鹅细小病毒和番鸭细小病毒双重PCR检测方法的建立 被引量:14
8
作者 鲜思美 文心田 +1 位作者 曹三杰 黄小波 《畜牧与兽医》 北大核心 2010年第4期32-35,共4页
根据GenBank上登录的鹅细小病毒(GPV)和番鸭细小病毒(MDPV)基因序列,分别设计合成针对GPV非结构蛋白(NS)和MDPV NS2-VP1基因片段的2对引物GPV U/L和MDPV U/L,将GPV和MDPV提取核酸混合后作为模板,优化PCR反应条件,建立了能同时检测这2种... 根据GenBank上登录的鹅细小病毒(GPV)和番鸭细小病毒(MDPV)基因序列,分别设计合成针对GPV非结构蛋白(NS)和MDPV NS2-VP1基因片段的2对引物GPV U/L和MDPV U/L,将GPV和MDPV提取核酸混合后作为模板,优化PCR反应条件,建立了能同时检测这2种病毒的双重PCR。特异性试验结果显示,引物GPV U/L仅特异性扩增出GPV-GZ1和GPV-GZ2株730bp核酸片段,引物MDPVU/L仅特异性扩增出MDPV的624bp核酸片段,双重PCR扩增出长度分别为730bp和624bp的2条特异性片段,而扩增鸭瘟病毒(DPV)和鹅副黏病毒(GPMV)的核酸扩增结果均为阴性。敏感性试验结果显示,双重PCR能同时检测到14.4pg的GPV核酸和28.8pg的MDPV核酸。结果表明,建立的双重PCR可用于GPV和MDPV的鉴别诊断和联合检测。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 番鸭细小病毒 双重PCR 鉴别诊断
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鹅细小病毒、番鸭细小病毒及鸭圆环病毒多重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与临床应用 被引量:12
9
作者 谢守玉 刘惠心 +11 位作者 熊陈勇 郑敏 施开创 韦显凯 冯淑萍 龙凤 梁凤 吕思明 屈素洁 陆文俊 尹彦文 李军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期38-44,共7页
为建立鉴别检测鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)及鸭圆环病毒(DuCV)的方法,本研究分别针对GPV、MDPV NS基因与DuCV Rep基因,设计特异性引物和TaqMan探针,经优化反应条件,建立了同一体系中同时鉴别检测GPV、MDPV及DuCV的TaqMan荧光... 为建立鉴别检测鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)及鸭圆环病毒(DuCV)的方法,本研究分别针对GPV、MDPV NS基因与DuCV Rep基因,设计特异性引物和TaqMan探针,经优化反应条件,建立了同一体系中同时鉴别检测GPV、MDPV及DuCV的TaqMan荧光定量PCR方法。利用该方法检测GPV、MDPV、DuCV及禽流感病毒、新城疫病毒、鸭瘟病毒、减蛋综合征病毒、鸭坦布苏病毒、番鸭呼肠孤病毒等主要水禽源病毒,结果显示,该方法仅能扩增出GPV、MDPV及DuCV,与其他主要水禽源病毒均无交叉反应,特异性强;利用该方法检测等体积混合后的GPV、MDPV及DuCV质粒标准品混合物,结果显示,该方法对3种质粒标准品的检测限均为7.5×10^(1)拷贝/μL,普通单一PCR对上述3种质粒标准品混合物的检测限均为7.5×10^(3)拷贝/μL,表明本研究建立方法的敏感性高于普通PCR;该方法组内与组间重复性试验的变异系数均小于2.0%,重复性好。利用该方法与MDPV和GPV双重荧光定量PCR方法及DuCV荧光定量PCR方法同时检测96份临床发病鸭的组织样品,该方法检测结果显示,共检出58份阳性样品,其中GPV检出率为18.75%(18/96),MDPV检出率为4.17%(4/96),DuCV检出率为37.50%(36/96),GPV与DuCV混合感染率为8.33%(8/96),阴性样品38份。与GPV和MDPV双重荧光定量PCR及DuCV荧光定量PCR方法的检测结果均一致,三者的符合率达100%。本研究建立的GPV、MDPV及DuCV多重TaqMan荧光定量PCR方法为临床鉴别检测该3种病原及其流行病学调查提供了特异、敏感、高效的技术手段。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 番鸭细小病毒 鸭圆环病毒 荧光定量PCR 临床应用
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鹅细小病毒和番鸭细小病毒核酸疫苗重组质粒的构建及表达 被引量:9
10
作者 李雪梅 章金刚 +3 位作者 向华 陈晓月 金宁一 费恩阁 《生物技术通讯》 CAS 2002年第6期433-435,共3页
将鹅细小病毒(GPV)和番鸭细小病毒(MPV)主要结构蛋白(VP2-VP3)基因克隆到核酸疫苗质粒pIRES1neo载体上,构建了核酸疫苗重组质粒pIGVP1和pIMVP,通过脂质体转染法分别将重组质粒转染到鹅胚成纤维细胞和番鸭胚成纤维细胞中,核酸疫苗重组质... 将鹅细小病毒(GPV)和番鸭细小病毒(MPV)主要结构蛋白(VP2-VP3)基因克隆到核酸疫苗质粒pIRES1neo载体上,构建了核酸疫苗重组质粒pIGVP1和pIMVP,通过脂质体转染法分别将重组质粒转染到鹅胚成纤维细胞和番鸭胚成纤维细胞中,核酸疫苗重组质粒pIGVP1和pIMVP分别转染鹅胚成纤维细胞和番鸭成纤维细胞中,于转染后72h收取细胞,细胞裂解液裂解后,经Westernblot检测其表达产物可出现特异性反应带,证明表达产物具有很好的反应原性。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 番鸭细小病毒 核酸疫苗 重组质粒 构建 表达 VP2-VP3基因
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番鸭源小鹅瘟病毒和番鸭细小病毒的结构蛋白及其抗原性 被引量:9
11
作者 刘伟 程晓霞 陈少莺 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2015年第1期64-68,共5页
应用交叉免疫印迹方法,分析比较了番鸭源小鹅瘟病毒(MDGPV)和番鸭细小病毒(MDPV)结构蛋白抗原性的差异.结果表明:MDGPV和MDPV纯化病毒在SDS-PAGE分析中均呈现3种结构蛋白,分子质量分别为81、65和55 ku;在免疫印迹试验中,MDGPV和MDPV的VP... 应用交叉免疫印迹方法,分析比较了番鸭源小鹅瘟病毒(MDGPV)和番鸭细小病毒(MDPV)结构蛋白抗原性的差异.结果表明:MDGPV和MDPV纯化病毒在SDS-PAGE分析中均呈现3种结构蛋白,分子质量分别为81、65和55 ku;在免疫印迹试验中,MDGPV和MDPV的VP1、VP2和VP3三种结构蛋白均可被同源抗血清识别,而异源抗血清均不能识别VP1蛋白;免疫番鸭血清和感染耐过番鸭血清识别的条带无明显区别.可见,MDGPV和MDPV的抗原性差异主要体现在VP1蛋白上. 展开更多
关键词 番鸭源小鹅瘟病毒 番鸭细小病毒 结构蛋白 抗原性
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番鸭细小病毒强、弱毒株VP2基因的序列测定比较 被引量:6
12
作者 娄华 白挨泉 +3 位作者 顾万军 贺东生 杨德威 刘福安 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期175-179,共5页
According to the complete nucleotide sequence of Muscovy duck parvovirus registered in the gene bank, two modified primers (LHMP7/LHMP8) were designed and, for each of them, a restriction endonuclease recognition site... According to the complete nucleotide sequence of Muscovy duck parvovirus registered in the gene bank, two modified primers (LHMP7/LHMP8) were designed and, for each of them, a restriction endonuclease recognition site, SacⅡ or KpnⅠ, was included respectively. The DNA encoding VP2 structural protein of the wild strain MDPV Q and the attenuated strain MDPV 26 which had been derived by continued passage of virulent wild type (MDPV Q) in Muscovy duck embryo were amplified by PCR and recombined into T vector and sequenced respectively. It shows that both DNA encoding VP 2 structural protein of MDPV Q and MDPV which has been registered in the gene bank had the high homology (97.9%). MDPV 26 and MDPV Q displayed 99.7% identity, and shared 98.3% homology with that of reported MDPV. 展开更多
关键词 番鸭细小病毒 VP2基因克隆 序列测定
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番鸭细小病毒病和鹅细小病毒病的特征和防控 被引量:9
13
作者 吴娟 卢梁萍 +7 位作者 戴银 张丹俊 赵瑞宏 胡晓苗 侯宏艳 沈学怀 潘孝成 周学利 《畜牧与饲料科学》 2017年第8期100-102,共3页
番鸭细小病毒病和鹅细小病毒病已成为水禽养殖中危害比较严重的传染病,其病原分别是番鸭细小病毒(MDPV)和鹅细小病毒(GPV),二者临床上常在同一地区流行,有时还会发生混合感染。鹅细小病毒病和番鸭细小病毒病临床症状类似,均表现废食和... 番鸭细小病毒病和鹅细小病毒病已成为水禽养殖中危害比较严重的传染病,其病原分别是番鸭细小病毒(MDPV)和鹅细小病毒(GPV),二者临床上常在同一地区流行,有时还会发生混合感染。鹅细小病毒病和番鸭细小病毒病临床症状类似,均表现废食和下痢等消化道症状以及呼吸困难症状,鉴别诊断有一定的难度。虽然MDPV和GPV生物学特性相似,但二者致病力却有显著差异,MDPV只感染番鸭,GPV则既可感染鹅,又可感染番鸭,采用雏禽攻毒试验,可初步区分2种病毒。2种疫病均重在预防,除了加强饲养管理外,在该病流行地区,对雏禽免疫,或者在种禽产蛋前免疫,使禽苗获得被动免疫,均可达到较好的预防效果。 展开更多
关键词 番鸭细小病毒 鹅细小病毒 临床症状 防控措施
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鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒三重RT-PCR检测方法的建立 被引量:8
14
作者 谢丽基 谢芝勋 +4 位作者 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢志勤 范晴 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期29-33,共5页
为建立可同时鉴别检测鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒的三重RT-PCR方法,根据基因库中鸭Ⅰ型肝炎病毒、番鸭细小病毒和鸭圆环病毒的基因序列,分别设计3对特异性引物,通过三重RT-PCR扩增条件优化、敏感性和特异性试验,建立了... 为建立可同时鉴别检测鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒的三重RT-PCR方法,根据基因库中鸭Ⅰ型肝炎病毒、番鸭细小病毒和鸭圆环病毒的基因序列,分别设计3对特异性引物,通过三重RT-PCR扩增条件优化、敏感性和特异性试验,建立了鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒三重RT-PCR方法。使用该方法对同一样品中的鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒模板进行扩增,结果均得到与试验设计相符的202bp(鸭Ⅰ型肝炎病毒),351bp(鸭圆环病毒)和474bp(番鸭细小病毒)的特异性扩增条带,对小鸭温病毒、鸭副粘病毒、鸭瘟病毒和禽流感病毒等病原体的检测全为阴性。敏感性试验结果表明,该方法最低能检测到1pg的鸭Ⅰ型肝炎病毒RNA、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒DNA。建立的鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒及番鸭细小病毒的三重RT-PCR方法,具有快速、敏感、特异、定量和重复性好等优点,可用于临床鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒及番鸭细小病毒感染的检测。 展开更多
关键词 鸭Ⅰ型肝炎病毒 鸭圆环病毒 番鸭细小病毒 三重RT-PCR
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2008年-2009年广东番鸭细小病毒分子流行病学研究 被引量:9
15
作者 宋永峰 吴发兴 +4 位作者 宋延华 黎敏 周全 周丽 温纳相 《中国动物检疫》 CAS 2010年第1期39-40,46,共3页
VP2基因是番鸭细小病毒(MDPV)的主要免疫原性基因,其编码的VP2蛋白能够诱导机体产生中和抗体。本文对2008年~2009年从广东各县市分离、鉴定的11个MDPV野毒株VP2基因进行克隆测序,并对获得的VP2基因序列进行比较和分析。结果表明:11个... VP2基因是番鸭细小病毒(MDPV)的主要免疫原性基因,其编码的VP2蛋白能够诱导机体产生中和抗体。本文对2008年~2009年从广东各县市分离、鉴定的11个MDPV野毒株VP2基因进行克隆测序,并对获得的VP2基因序列进行比较和分析。结果表明:11个不同分离株之间核苷酸序列同源性为98.7%-100%;与6个国内外参考毒株同源性为97.7%-99.6%;所有毒株都含有4个完全相同的潜在糖基化位点;说明该病毒保守度高,仅有个别的点突变。将分离株SL2连续传70代获得致弱毒株SL-70,动物实验结果表明SL70株对雏鸭无致病力;经测序发现SL-70与其祖代分离株SL2的VP2基因序列同源性高达99.9%,仅发生了18个碱基的点突变。 展开更多
关键词 番鸭细小病毒 VP2基因 分子流行病学
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鸭坦布苏病毒、鸭肠炎病毒和番鸭细小病毒TaqMan三重实时荧光定量PCR检测方法的建立与临床应用 被引量:7
16
作者 吴双 姜勇 +6 位作者 徐建生 吴植 谢军 宋海港 魏若瑶 高悦 朱善元 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第3期626-633,共8页
本研究旨在建立一种快速、敏感和高特异性检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)、鸭肠炎病毒(DEV)和番鸭细小病毒(MDPV)的TaqMan三重实时荧光定量PCR(q-PCR)的诊断方法并应用于临床疑似样品检测。根据DTMUV的E基因、DEV的UL2基因和MDPV的VP3基因保... 本研究旨在建立一种快速、敏感和高特异性检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)、鸭肠炎病毒(DEV)和番鸭细小病毒(MDPV)的TaqMan三重实时荧光定量PCR(q-PCR)的诊断方法并应用于临床疑似样品检测。根据DTMUV的E基因、DEV的UL2基因和MDPV的VP3基因保守区域,分别设计合成了3对特异性引物和探针,在建立单重q-PCR方法的基础上建立了三重q-PCR方法。运用三重q-PCR方法对198份来自江苏和安徽的鸭组织疑似病料进行检测,结果表明,建立的TaqMan三重q-PCR可同时检测这3种病毒,检测灵敏度至少达100个拷贝,相关系数(R2)均在0.99以上,扩增效率为90%~110%。同时,该方法对H9亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)、鸭甲肝病毒Ⅰ型(DHAV-1)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV)、鸭呼肠孤病毒(DRV)、新城疫病毒(NDV)、鹅细小病毒(GPV)的检测均为阴性,表明该方法具备特异性强、灵敏度高、重复性好和快速等优点。与常规PCR检测方法相比,三重q-PCR方法灵敏度大约高100倍。临床疑似样品检测结果表明DTMUV的检出率最高,3种病毒混合感染亦常见。建立的TaqMan三重q-PCR检测方法为DTMUV、DEV和MDPV的临床样品检测提供了快速、有效、特异和灵敏的工具,也为临床分子流行病学调查及定量分析奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 鸭肠炎病毒 番鸭细小病毒 TaqMan实时荧光定量PCR
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番鸭细小病毒荧光定量PCR方法的建立及初步应用 被引量:8
17
作者 谢丽基 谢芝勋 +4 位作者 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢志勤 范晴 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期218-221,共4页
为建立一种快速检测番鸭细小病毒(MDPV)的方法,本研究根据GenBank中MDPV的REP基因序列,设计一对特异性引物和一条TaqMan探针。对反应条件和试剂浓度进行优化,建立了检测MDPV的荧光定量PCR方法。检测结果表明,该方法检测敏感性达到20 cop... 为建立一种快速检测番鸭细小病毒(MDPV)的方法,本研究根据GenBank中MDPV的REP基因序列,设计一对特异性引物和一条TaqMan探针。对反应条件和试剂浓度进行优化,建立了检测MDPV的荧光定量PCR方法。检测结果表明,该方法检测敏感性达到20 copies,比常规PCR灵敏度高100倍;而且该方法对鸭I型肝炎病毒、鸭圆环病毒、鹅细小病毒、鸭副粘病毒、鸭瘟病毒和禽流感病毒等的检测均为阴性,具有良好的特异性;该方法的批内和批间的检测变异系数均小于2%。对广西地区鸭群收集的118份病料进行检测,其MDPV阳性率为11.02%。结果提示广西地区的鸭群中MDPV的感染比较普遍,建立的荧光定量PCR方法可以用于MDPV的临床快速检测。 展开更多
关键词 番鸭细小病毒 荧光定量PCR 建立
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番鸭细小病毒MDPV-Q株VP2蛋白基因的克隆与序列测定 被引量:7
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作者 娄华 白挨泉 +3 位作者 顾万军 杨德威 贺东升 刘福安 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期4-7,共4页
根据genebank中番鸭细小病毒 (MDPV)的基因序列 ,设计了一对引物LHMP7/LHMP8,同时在这 2条引物中分别加入 2种限制性核酸内切酶SacII和KpnI的酶切位点 ,使扩增后的DNA片段的两端 ,分别含有这 2种酶的酶切位点。应用PCR技术扩增了MDPV_Q... 根据genebank中番鸭细小病毒 (MDPV)的基因序列 ,设计了一对引物LHMP7/LHMP8,同时在这 2条引物中分别加入 2种限制性核酸内切酶SacII和KpnI的酶切位点 ,使扩增后的DNA片段的两端 ,分别含有这 2种酶的酶切位点。应用PCR技术扩增了MDPV_Q株的VP2蛋白基因片段。将扩增后的VP2蛋白基因重组到pMD18_T质粒载体上 ,并对插入片段进行序列测定。测序结果表明 ,我国分离的MDPV_Q株基VP2蛋白基因序列与国外分离株的同源性达 97.9%。 展开更多
关键词 番鸭细胞小病毒 序列测定 VP2蛋白 基因克隆
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番鸭细小病毒浙江分离株VP基因的克隆与序列分析 被引量:8
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作者 万春和 陈红梅 +5 位作者 傅秋玲 施少华 傅光华 程龙飞 黄瑜 胡开辉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第10期2600-2605,共6页
为明确番鸭细小病毒结构蛋白VP的特征,本研究运用PCR从已分离鉴定的番鸭细小病毒浙江分离株(MDPV-ZJ)中分段扩增出VP基因,并对其进行克隆测序和分析。结果表明,番鸭细小病毒浙江分离株VP基因全长为2 199bp,编码732个氨基酸。所编码的包... 为明确番鸭细小病毒结构蛋白VP的特征,本研究运用PCR从已分离鉴定的番鸭细小病毒浙江分离株(MDPV-ZJ)中分段扩增出VP基因,并对其进行克隆测序和分析。结果表明,番鸭细小病毒浙江分离株VP基因全长为2 199bp,编码732个氨基酸。所编码的包膜蛋白大小为81.32ku、理论等电点为6.59、不稳定系数为37.49、亲水性平均系数为-0.667,属于亲水性稳定类蛋白,该编码的结构蛋白没有信号肽,为非分泌蛋白。根据VP基因特征从遗传进化上可将MDPV分为2个大的基因型:经典型和基因重组型,经典型MDPV可以进一步划分为台湾亚群、大陆亚群和欧洲群,MDPV各分离株在遗传进化上存在明显的地域性。本试验中MDPV浙江分离株株处于MDPV大陆亚群。 展开更多
关键词 番鸭细小病毒 VP基因 克隆 序列分析
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雏番鸭细小病毒和传染性法氏囊病病毒混合感染的检测 被引量:6
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作者 王威威 石梦雅 +6 位作者 张远琴 梁竞臻 陈果 赵增志 黄宇 何秀苗 韦平 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第4期74-78,共5页
2017年12月,广西某番鸭养殖场的鸭群出现生长缓慢,临床表现软脚,拉白色粪便的腹泻并伴有一定的神经症状等;剖检可见肝脏肿大出血、腹腔有纤维素性渗出物、肠黏膜有不同程度的充血,法氏囊萎缩等病变;于20日龄开始发病,30日龄送检时发病率... 2017年12月,广西某番鸭养殖场的鸭群出现生长缓慢,临床表现软脚,拉白色粪便的腹泻并伴有一定的神经症状等;剖检可见肝脏肿大出血、腹腔有纤维素性渗出物、肠黏膜有不同程度的充血,法氏囊萎缩等病变;于20日龄开始发病,30日龄送检时发病率20%、死亡率10%。无菌取番鸭的病变组织,分别进行番鸭细小病毒(MDPV)和传染性法氏囊病病毒(IBDV)的核酸特异性检测,结果均呈阳性,并成功分离到一株番鸭细小病毒(命名为MDPV GX1712)和一株传染性法氏囊病病毒(命名为GL1712);基因序列分析结果显示,分离株GX1712与GX5、P 1988、 SAASSHNH等MDPV参考株的亲缘性最近,相似性高达98.5%~99.1%,在进化树中处同一个分支,并且与疫苗株FZ91-30亲缘性相距较远,表明该分离株为MDPV野毒株;基于VP1-b序列分析IBDV分离株GL1712与中国新型超强毒株HLJ0504同属HLJ0504-like cluster,而基于vVP2序列则与中等偏强毒力参考株同属C2-intermediate IBDV genotype,为基因重排毒株。根据发病日龄、临床症状、病理剖检和实验室诊断,确诊该临床发病番鸭群混合感染了番鸭细小病毒和传染性法氏囊病病毒。 展开更多
关键词 雏番鸭 番鸭细小病毒 传染性法氏囊病病毒 混合感染 序列分析
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