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内蒙古绒山羊miRNA-1298-5p与TGF-βR1基因在绒毛生长周期中的表达规律研究 被引量:6
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作者 肖红梅 梁加越 +3 位作者 冯娟 胡小玉 樊晓娟 王笑冰 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2020年第12期73-78,共6页
为探究miRNA-1298-5p与TGF-βR1基因在内蒙古绒山羊绒毛生长周期中的差异表达对绒毛生长的影响,选取内蒙古优质品种阿尔巴斯白绒山羊绒毛生长的休止期、生长初期、生长旺盛期及退行期的体侧皮肤,提取总RNA,经DL2000紫外光度计和琼脂糖... 为探究miRNA-1298-5p与TGF-βR1基因在内蒙古绒山羊绒毛生长周期中的差异表达对绒毛生长的影响,选取内蒙古优质品种阿尔巴斯白绒山羊绒毛生长的休止期、生长初期、生长旺盛期及退行期的体侧皮肤,提取总RNA,经DL2000紫外光度计和琼脂糖凝胶检测其纯度和浓度后,选取S-18S基因为内参,利用Primer 5设计相应的引物序列,通过实时荧光定量的方法对非编码miR-1298-5p与其潜在靶向基因TGF-βR1在绒毛不同生长时期皮肤的表达进行检测并通过△△Ct值法计算。结果表明:miR-1298-5p及TGF-βR1基因在阿尔巴斯白绒山羊皮肤4个不同发育时期均有表达;miR-1298-5p、TGF-βR1基因由绒毛生长初期到旺盛期表达量均增高,miR-1298-5p由旺盛期到退行期表达量增高,退行期到休止期降低;TGF-βR1基因由旺盛期到退行期表达量降低,退行期到休止期增高,二者表达量呈相反趋势,推测miR-1298-5p可能通过负向调控TGF-βR1基因在皮肤不同发育时期的表达,从而调控内蒙古绒山羊绒毛的生长。 展开更多
关键词 内蒙古绒山羊 皮肤 mir-1298-5p TGF-ΒR1 调控
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miR-1298-5p通过靶向MSH2基因对非小细胞肺癌细胞生物学行为及肿瘤免疫微环境的影响
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作者 张要盛 杨秀丽 +3 位作者 任晓 王红丽 沈玲 黄国胜 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1889-1894,1901,共7页
目的:探究miR-1298-5p在非小细胞肺癌(NSCLC)中调节MSH2基因的潜在机制及对肿瘤细胞生物学行为和肿瘤免疫微环境的影响。方法:采用生物信息学手段确定NSCLC中涉及的关键基因和miRNA。采用CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞... 目的:探究miR-1298-5p在非小细胞肺癌(NSCLC)中调节MSH2基因的潜在机制及对肿瘤细胞生物学行为和肿瘤免疫微环境的影响。方法:采用生物信息学手段确定NSCLC中涉及的关键基因和miRNA。采用CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力。ELISA检测炎症因子的水平。Western blot测定细胞内中MSH2的表达情况,荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测NSCLC细胞中miR-1298-5p和MSH2基因表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-1298-5p与MSH2的靶向关系。Spearman相关性分析miR-1298-5p与肿瘤免疫微环境中免疫细胞和免疫因子的相关性。结果:与正常肺部组织细胞相比,NSCLC细胞中miR-1298-5p水平下调。miR-1298-5p过表达可抑制NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭。使用荧光素酶报告基因检测证实MSH2是miR-1298-5p的靶基因。此外,NSCLC细胞中miR-1298-5p的下调可通过沉默MSH2来逆转。miR-1298-5p的表达水平与Treg、IL-10和TGF-β水平呈负相关,与CD3^(+)T、CD4^(+)T、CD8^(+)T、NK细胞、IL-2和IFN-γ水平呈正相关。结论:miR-1298-5p负性调控MSH2抑制NSCLC细胞的增殖、侵袭及迁移,并改善肿瘤免疫微环境。 展开更多
关键词 mir-1298-5p MSH2 非小细胞肺癌
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辽宁绒山羊皮肤毛囊miR-1298-5p靶基因预测及验证 被引量:4
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作者 张桂山 徐晶 +3 位作者 孙丽敏 白曼 项露杰 姜怀志 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1988-1992,共5页
以辽宁绒山羊不同发育时期皮肤毛囊组织为材料,用生物信息学方法预测miR-1298-5p的靶基因,采用RTPCR对miR-1298-5p与其潜在靶基因TGF-βR1进行核酸水平表达检测,利用Weston blot对潜在靶基因TGF-βR1进行蛋白水平表达检测。生物信息学... 以辽宁绒山羊不同发育时期皮肤毛囊组织为材料,用生物信息学方法预测miR-1298-5p的靶基因,采用RTPCR对miR-1298-5p与其潜在靶基因TGF-βR1进行核酸水平表达检测,利用Weston blot对潜在靶基因TGF-βR1进行蛋白水平表达检测。生物信息学预测结果表明TGF-βR1的3′UTR存在miR-1298-5p种子区结合位点;miR-1298-5p在皮肤毛囊不同发育时期呈现差异性表达;TGF-βR1在皮肤毛囊不同发育时期无论在核酸水平还是蛋白水平均呈现差异性表达;miR-1298-5p与其潜在靶基因之间呈现一种负调控趋势,说明miR-1298-5p可能通过负调控TGF-βR1,从而对毛囊周期性发育起到调节作用。结合靶基因预测结果、miR-1298-5p在核酸水平表达规律及TGFβR1在核酸水平表达规律和蛋白水平表达规律初步确定TGF-βR1为miR-1298-5p的靶基因。本实验旨在探讨辽宁绒山羊皮肤毛囊不同发育时期miR-1298-5p与其靶基因的调控作用及其与靶基因的潜在关系,为miR-1298-5p与其靶基因对皮肤毛囊发育作用提供理论研究数据。 展开更多
关键词 辽宁绒山羊 皮肤毛囊 mir-1298-5p TGF-ΒR1 靶基因预测 验证
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不同品种羊miR-1298-5p及其潜在靶基因TGF-βR1表达的比较研究 被引量:2
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作者 张桂山 徐晶 +3 位作者 孙丽敏 白曼 项露杰 姜怀志 《中国农学通报》 2017年第27期49-54,共6页
旨在探讨miR-1298-5p与TGF-βR1在不同品种羊皮肤毛囊不同发育时期的潜在关系,为研究miR-1298-5p与TGF-βR1对皮肤毛囊发育作用提供理论研究数据。以绒山羊和细毛羊皮肤毛囊组织为材料,通过生物信息学方法预测miR-1298-5p的靶基因,采用q... 旨在探讨miR-1298-5p与TGF-βR1在不同品种羊皮肤毛囊不同发育时期的潜在关系,为研究miR-1298-5p与TGF-βR1对皮肤毛囊发育作用提供理论研究数据。以绒山羊和细毛羊皮肤毛囊组织为材料,通过生物信息学方法预测miR-1298-5p的靶基因,采用qRT-PCR对miR-1298-5p与其潜在靶基因TGF-βR1进行核酸水平表达检测,利用Western blot对潜在靶基因TGF-βR1进行蛋白水平表达检测。生物信息学预测结果表明TGF-βR1的3'UTR存在miR-1298-5p种子区结合位点。miR-1298-5p在绒山羊和细毛羊皮肤毛囊发育的生长期到退行期相对表达量上调而退行期到休止期相对表达量下调,miR-1298-5p在不同品种羊皮肤毛囊不同发育时期呈现差异性表达。绒山羊皮肤毛囊发育生长期TGF-βR1基因m RNA的相对表达量高于细毛羊,而退行期和休止期低于细毛羊;从表达趋势上看,TGF-βR1与miR-1298-5p表达趋势相反,呈现负调控趋势,说明TGF-βR1可能为miR-1298-5p的靶基因。TGF-βR1蛋白在绒山羊皮肤毛囊发育生长期的相对表达量高于细毛羊,而退行期和休止期则低于细毛羊,与核酸水平相对表达量趋势相同,但都与miR-1298-5p表达趋势相反,更进一步说明TGF-βR1可能为miR-1298-5p的靶基因。 展开更多
关键词 mir-1298-5p 细毛羊 绒山羊 靶基因 毛囊发育
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绒山羊皮肤毛囊miR-1298-5P靶基因预测及表达载体构建 被引量:1
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作者 张桂山 徐晶 +2 位作者 孙丽敏 白曼 姜怀志 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2017年第1期28-32,共5页
探讨辽宁绒山羊皮肤毛囊不同发育时期miR-1298-5P的调控作用及其与靶基因的潜在关系,为miR-1298-5P与其靶基因对皮肤毛囊发育作用提供理论依据。以辽宁绒山羊皮肤毛囊组织为材料,通过miRNA的分离、表达、靶基因预测筛选表达及靶位点3... 探讨辽宁绒山羊皮肤毛囊不同发育时期miR-1298-5P的调控作用及其与靶基因的潜在关系,为miR-1298-5P与其靶基因对皮肤毛囊发育作用提供理论依据。以辽宁绒山羊皮肤毛囊组织为材料,通过miRNA的分离、表达、靶基因预测筛选表达及靶位点3'UTR表达载体构建,采用RT-PCR进行表达检测,用生物信息学方法预测miR-1298-5P的靶基因,并对其靶基因Fg F2的靶位点进行克隆测序、缺失突变。miR-1298-5P及其靶基因在皮肤毛囊不同发育时期均呈现差异性表达,二者之间呈现一种负调控趋势,其可能对皮肤毛囊周期性发育起到一定的调控作用。靶基因预测发现Fg F2的3'UTR存在mi R-1298-5P种子区结合位点,并成功构建了Fg F2 3'UTR表达载体,该载体的成功构建为后期过表达转染体系的建立和功能基因的验证奠定了基础。 展开更多
关键词 辽宁绒山羊 皮肤毛囊 mir-1298-5p FGF2 靶基因预测 表达载体构建
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细毛羊皮肤毛囊miR-1298-5p的靶基因预测及验证 被引量:1
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作者 徐晶 姜怀志 +3 位作者 张桂山 孙丽敏 白曼 项露杰 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2018年第4期79-82,共4页
为探讨miR-1298-5p及其靶基因与细毛羊毛囊生长发育的关系,本实验以乾华肉用美利奴羊不同发育时期皮肤毛囊组织为材料,通过生物信息学方法预测miR-1298-5p的靶基因,采用RT-PCR和Western Blot对miR-1298-5p及其靶基因进行定量检测;扩增... 为探讨miR-1298-5p及其靶基因与细毛羊毛囊生长发育的关系,本实验以乾华肉用美利奴羊不同发育时期皮肤毛囊组织为材料,通过生物信息学方法预测miR-1298-5p的靶基因,采用RT-PCR和Western Blot对miR-1298-5p及其靶基因进行定量检测;扩增靶基因3'UTR区,构建野生型和突变型靶基因表达载体后与miR-1298-5p mimics共同转染到HEK293T/17细胞中,利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-1298-5p与靶基因的靶向关系。结果表明:FGF_2基因3'UTR区含有miR-1298-5p结合位点,FGF_2为miR-1298-5p潜在靶基因,通过核酸水平和蛋白水平定量表达规律发现miR-1298-5p与靶基因FGF_2呈负相关,初步确定FGF_2为miR-1298-5p的靶基因。双荧光素酶报告基因实验显示,miR-1298-5p mimics能够抑制野生型FGF_2的靶位点报告载体的荧光素酶活性;但当靶基因结合位点突变后,FGF_2被抑制的荧光素酶活性能够得到恢复。综上,miR-1298-5p与FGF_2有靶向关系,miR-1298-5p能通过负调控FGF_2的表达调控羊毛囊发育。 展开更多
关键词 乾华肉用美利奴 羊皮肤毛囊 mir-1298-5p FGF2 双荧光素酶报告基因实验
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辽宁绒山羊皮肤毛囊mir-1298-5p靶基因预测及表达载体构建 被引量:1
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作者 徐晶 张桂山 +3 位作者 孙丽敏 白曼 项露杰 姜怀志 《中国农学通报》 2018年第5期123-128,共6页
探讨辽宁绒山羊皮肤毛囊不同发育时期mir-1298-5p的调控作用及其与靶基因的潜在关系,为mir-1298-5p与其靶基因对皮肤毛囊发育作用提供理论依据。以辽宁绒山羊皮肤毛囊组织为材料,通过mi RNA的分离、表达、靶基因预测筛选及靶位点3'... 探讨辽宁绒山羊皮肤毛囊不同发育时期mir-1298-5p的调控作用及其与靶基因的潜在关系,为mir-1298-5p与其靶基因对皮肤毛囊发育作用提供理论依据。以辽宁绒山羊皮肤毛囊组织为材料,通过mi RNA的分离、表达、靶基因预测筛选及靶位点3'UTR表达载体构建,采用RT-PCR进行表达检测,在线靶基因预测软件预测mir-1298-5p的靶基因,并对其靶基因TGF-βR1的靶位点进行克隆测序、缺失突变。结果表明:靶基因预测发现TGF-βR1的3'UTR存在mir-1298-5p种子区结合位点,且mir-1298-5p及其靶基因TGF-βR1均在皮肤毛囊不同发育时期呈现差异性表达。mir-1298-5p对皮肤毛囊周期性发育可能起到一定的调控作用,并成功构建了TGF-βR1 3'UTR表达载体,为后期过表达转染体系的建立和功能基因的验证奠定了基础。 展开更多
关键词 辽宁绒山羊 皮肤毛囊 mir-1298-5p TGF-ΒR1 靶基因预测 表达载体构建
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细毛羊皮肤毛囊不同发育时期miR-1298-5p靶基因预测及验证
8
作者 徐晶 姜怀志 +4 位作者 张桂山 孙丽敏 白曼 项露杰 娄玉杰 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2017年第4期20-22,26,共4页
为了探讨miR-1298-5p及其靶基因与细毛羊毛囊生长发育的关系,以细毛羊不同发育时期皮肤毛囊组织为材料,通过生物信息学方法预测miR-1298-5p的靶基因,采用RT-PCR对miR-1298-5p与其潜在靶基因FGF_2进行核酸水平相对定量检测,利用Western B... 为了探讨miR-1298-5p及其靶基因与细毛羊毛囊生长发育的关系,以细毛羊不同发育时期皮肤毛囊组织为材料,通过生物信息学方法预测miR-1298-5p的靶基因,采用RT-PCR对miR-1298-5p与其潜在靶基因FGF_2进行核酸水平相对定量检测,利用Western Blot对潜在靶基因FGF_2进行蛋白相对定量检测。生物信息学预测结果表明,FGF_2的3'UTR存在miR-1298-5p种子区结合位点;miR-1298-5p在皮肤毛囊不同发育时期呈现差异性表达;miR-1298-5p与其潜在靶基因之间呈现一种负调控趋势,说明miR-1298-5p可能通过负调控FGF_2从而调控皮肤毛囊生长发育。表明结合靶基因预测结果、miR-1298-5p在核酸水平表达规律及FGF_2在核酸水平表达规律和蛋白表达水平表达规律初步确定FGF_2为miR-1298-5p的靶基因。 展开更多
关键词 细毛羊 皮肤毛囊 mir-1298-5p FGF2
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