目的:迄今为止,帕金森病(PD)发生的分子机制尚未完全阐明,本研究旨在体外细胞模型中寻找PD新型表观遗传标志物,探索其发病机制。方法:本次研究使用的细胞为神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y。首先,我们用CCK-8检测细胞活力,选取合适浓度的MPP...目的:迄今为止,帕金森病(PD)发生的分子机制尚未完全阐明,本研究旨在体外细胞模型中寻找PD新型表观遗传标志物,探索其发病机制。方法:本次研究使用的细胞为神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y。首先,我们用CCK-8检测细胞活力,选取合适浓度的MPP+构建PD细胞损伤模型。再用PBS和MPP+分别处理SH-SY5Y细胞,用RT-qPCR检测了几个甲基化酶与去甲基化酶DNMT1,DNMT3A,DNMT3B及TET1, TET2, TET3的mRNA的表达水平,并用蛋白印迹检测TET2蛋白水平,免疫荧光检测了TET2蛋白定位。进一步用慢病毒转染SH-SY5Y细胞敲低TET2后,检测细胞增殖。结果:本研究发现,MPP+对SH-SY5Y细胞增殖的抑制具有时间与浓度依赖性,我们最终选择2.5 mM MPP+作为后续的细胞处理浓度。与对照组相比,MPP+处理细胞TET2的mRNA及蛋白水平表达均增加,且蛋白进入细胞核增加;同时发现,敲低TET2表达可以延缓MPP+对SH-SY5Y细胞增殖的抑制作用。结论:在当前的研究中,我们报道了TET2蛋白可能是PD新型的表观遗传学标志物,提示我们将来也许可以使用TET2抑制剂来治疗PD,因此本研究有可能为PD提供新的治疗方向和靶点。展开更多
文摘目的:迄今为止,帕金森病(PD)发生的分子机制尚未完全阐明,本研究旨在体外细胞模型中寻找PD新型表观遗传标志物,探索其发病机制。方法:本次研究使用的细胞为神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y。首先,我们用CCK-8检测细胞活力,选取合适浓度的MPP+构建PD细胞损伤模型。再用PBS和MPP+分别处理SH-SY5Y细胞,用RT-qPCR检测了几个甲基化酶与去甲基化酶DNMT1,DNMT3A,DNMT3B及TET1, TET2, TET3的mRNA的表达水平,并用蛋白印迹检测TET2蛋白水平,免疫荧光检测了TET2蛋白定位。进一步用慢病毒转染SH-SY5Y细胞敲低TET2后,检测细胞增殖。结果:本研究发现,MPP+对SH-SY5Y细胞增殖的抑制具有时间与浓度依赖性,我们最终选择2.5 mM MPP+作为后续的细胞处理浓度。与对照组相比,MPP+处理细胞TET2的mRNA及蛋白水平表达均增加,且蛋白进入细胞核增加;同时发现,敲低TET2表达可以延缓MPP+对SH-SY5Y细胞增殖的抑制作用。结论:在当前的研究中,我们报道了TET2蛋白可能是PD新型的表观遗传学标志物,提示我们将来也许可以使用TET2抑制剂来治疗PD,因此本研究有可能为PD提供新的治疗方向和靶点。
