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miRNA-326及N-ras基因在儿童急性淋巴细胞白血病中的研究 被引量：5
1
作者 王利霞 李素颜 《实验与检验医学》 CAS 2019年第6期1009-1011,1021,共4页
目的探讨儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)患者骨髓中miRNA-326的表达及其临床意义。研究N-ras基因在儿童ALL微小残留病(MRD)中的表达,以期为儿童ALL的复发提供生物学检测标志。方法本研究选取35例儿童ALL和35例非白血病儿童作为对照组,通... 目的探讨儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)患者骨髓中miRNA-326的表达及其临床意义。研究N-ras基因在儿童ALL微小残留病(MRD)中的表达,以期为儿童ALL的复发提供生物学检测标志。方法本研究选取35例儿童ALL和35例非白血病儿童作为对照组,通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测miRNA-326在儿童ALL中相对表达量,使用单链构象多态性PCR(PCR-SSCP)检测N-ras基因在治疗1年后的微小残留病(MRD)中的变化。结果miRNA-326在儿童ALL中的相对表达量(2.22±0.72)较对照组(6.35±1.23)明显下降;SSCP的电泳结果显示MRD组患者N-ras基因的电泳速度较对照组快,基因突变率为44.44%。结论miRNA-326和N-ras基因的检测可作为儿童ALL的诊断及复发生物学标志,也可为白血病的耐药性监测和治疗提供新的靶点。 展开更多
关键词 急性淋巴细胞白血病 mirna-326 N-RAS基因
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MiRNA-326抑制人椎间盘退变髓核细胞活力和凋亡的机制 被引量：1
2
作者 高笛 刘殿鹏 《临床与病理杂志》 2020年第4期814-822,共9页
目的:探讨过表达miRNA-326对椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IDD)髓核(nucleus pulposus,NP)细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:构建miRNA-326慢病毒表达载体,在293T细胞中获得重组慢病毒,经感染NP细胞得到稳定过表达细胞... 目的:探讨过表达miRNA-326对椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IDD)髓核(nucleus pulposus,NP)细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:构建miRNA-326慢病毒表达载体,在293T细胞中获得重组慢病毒,经感染NP细胞得到稳定过表达细胞系GV369-miRNA-326-NP,同时设置空载体GV369-NP组与空白组。荧光显微镜观察慢病毒载体的标签蛋白[绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)]的表达,实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)方法检测miRNA-326的表达,流式细胞术检测细胞凋亡,荧光素酶报告基因分析验证miRNA-326与FasL的靶向关系,蛋白质印迹法检测细胞中凋亡相关蛋白FADD,caspase-3,Bcl-2及Bax的表达,使用试剂盒检测细胞线粒体膜电势的变化情况。结果:荧光显微镜下示,经慢病毒感染的过表达细胞系和空载体细胞系均出现绿色荧光,而空白组未见绿色荧光。与空白组相比,GV369-miRNA-326-NP组中miRNA-326的表达水平、Bcl-2表达水平和线粒体膜电位明显升高,而细胞凋亡率,FADD,caspase-3和Bax的表达水平明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);GV369-NP组与空白组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。荧光素酶报告基因分析证实miRNA-326与FasL存在靶向关系。结论:MiRNA-326可抑制IDD NP细胞发生凋亡,既可通过靶向性调控外源性FasL/Fas通路参与caspase-3和FADD介导的细胞凋亡,也可通过线粒体途径对细胞凋亡发挥作用。 展开更多
关键词 mirna-326 椎间盘退变髓核细胞 细胞凋亡 实时荧光定量PCR 流式细胞术
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miRNA-326作用于其靶基因BCL-XL的研究
3
作者 谯铭铭 盖厦 +5 位作者 叶辉 姬艳博 于媛 陈元锋 徐慧聪 庄云龙 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 2020年第9期987-990,共4页
目的研究miRNA-326是否作用于其靶基因BCL-XL,探讨miRNA调控血小板凋亡的分子机制。方法利用萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶组成双荧光素酶报告基因实验系统,分别构建含有BCL-XL 3′端非翻译区(3′untranslated region,3′UTR)片段的野... 目的研究miRNA-326是否作用于其靶基因BCL-XL,探讨miRNA调控血小板凋亡的分子机制。方法利用萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶组成双荧光素酶报告基因实验系统,分别构建含有BCL-XL 3′端非翻译区(3′untranslated region,3′UTR)片段的野生型和变异型的双荧光素酶载体,设置对照组,转染细胞检测相对荧光强度。结果分别构建了PsiCHECK-BCL-XL-3′UTR-WT(野生型)和PsiCHECK-BCL-XL-3′UTR-MT(变异型)的双荧光素酶报告基因质粒载体;miRNA-326序列和PsiCHECK-BCL-XL-3′UTR-WT质粒共转染测定的相对荧光强度显著低于对照组(miRNA-326阴性对照序列和PsiCHECK-BCL-XL-3′UTR-WT质粒共转染组)(P=0.034);同时也显著低于miRNA-326序列和PsiCHECK-BCL-XL-3′UTR-MT质粒共转染的变异组(P=0.022)。结论miRNA-326作用于BCL-XL基因的3′UTR;这为研究miRNA调控血小板凋亡的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 mirna-326 BCL-XL基因 3′非翻译区 双荧光素酶报告基因系统
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逍遥散加味通过miRNA326靶向调节ADAM17对自身免疫性甲状腺炎肝郁脾虚大鼠的抗炎机制研究
4
作者 李祎楠 沈静雪 +11 位作者 史哲 徐和平 冯颖岚 马业明 马小芹 马国强 裴海燕 张文彦 罗川 热娜古力·阿布力孜 刘静 洪欣 《四川中医》 2023年第11期67-74,共8页
目的:考察逍遥散加味通过小分子核糖核酸326(miR326)靶向调节肿瘤坏死因子转化酶17(ADAM17)对自身免疫性甲状腺炎肝郁脾虚大鼠抗炎机制的影响。方法:采用高碘水联合甲状腺球蛋白皮下注射对大鼠进行免疫干预建立自身免疫性甲状腺炎,采用... 目的:考察逍遥散加味通过小分子核糖核酸326(miR326)靶向调节肿瘤坏死因子转化酶17(ADAM17)对自身免疫性甲状腺炎肝郁脾虚大鼠抗炎机制的影响。方法:采用高碘水联合甲状腺球蛋白皮下注射对大鼠进行免疫干预建立自身免疫性甲状腺炎,采用慢性束缚应激+过度疲劳+饮食失节的方法复制大鼠肝郁脾虚证模型。随机将33只大鼠按随机数字表法分为模型组、逍遥散加味组、金水宝片组,另12只作为正常组。连续给药8周后,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清游离三碘甲状腺原(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、超敏促甲状腺激素(TSH)、甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化酶抗体(TPOAb)水平;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测甲状腺组织miR-326、白细胞介素-17信使核糖核酸(IL-17mRNA)、白细胞介素-4信使核糖核酸(IL-4mRNA)、干扰素γ核糖核酸(IFN-γmRNA)水平,全自动超微量样品蛋白质表达定量分析(Wes)检测甲状腺组织ADAM17蛋白表达,流式细胞法检测CD4^(+)IFN-γ^(+)T细胞、CD4^(+)IL-4+T细胞和CD4^(+)IL-17^(+)T细胞比例,苏木素-伊红染色(HE)染色法检测各组大鼠甲状腺组织病理形态。结果:与模型组比较,逍遥散组大鼠血清TSH水平升高(P<0.01),TGAb和TPOAb水平降低(P<0.01),CD4^(+)IFN-γ^(+)T细胞、CD4^(+)IL-17^(+)T细胞比例降低(P<0.01);甲状腺组织miR326、IL-17 mRNA水平降低(P<0.01);ADAM17蛋白表达升高(P<0.01),甲状腺组织病理学明显改变。结论:逍遥散加味可能通过下调肝郁脾虚型实验性身免疫性甲状腺炎大鼠(EAT)甲状腺组织中的miR-326的表达,从而上调靶蛋白ADAM17的表达,抑制Th17细胞分化,进一步减少IL-17 mRNA的表达,最终产生抗炎作用。 展开更多
关键词 甲状腺炎 自身免疫性 逍遥散加味 肝郁脾虚 mirna326 ADAM17
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紫甘蓝提取物提高人非小细胞肺癌细胞系放射敏感性的研究 被引量：2
5
作者 曾慈梅 王蕾 齐见旭 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第14期1700-1704,共5页
目的:探讨紫甘蓝提取物(PCE)对人非小细胞肺癌A549细胞放射敏感性的影响及机制。方法:用CCK-8试验检测不同浓度PCE对细胞活力的影响,确定最佳剂量浓度。将对数生长期的A549细胞在6孔板中(每孔1×105个/ml)接种并分为6组∶对照组(CO... 目的:探讨紫甘蓝提取物(PCE)对人非小细胞肺癌A549细胞放射敏感性的影响及机制。方法:用CCK-8试验检测不同浓度PCE对细胞活力的影响,确定最佳剂量浓度。将对数生长期的A549细胞在6孔板中(每孔1×105个/ml)接种并分为6组∶对照组(CON,A组),10μmol/L PCE组(PCE-10μmol/L,B组)、50μmol/L PCE组(PCE-50μmol/L,C组)、照射组(IR,D组)、照射加10μmol/L PCE组(IR+PCE-10μmol/L,E组)、照射加50μmol/L PCE组(IR+PCE-50μmo/L,F组)。照射后,检测PCE对A549细胞增殖的影响。流式细胞术检测PCE对照射后A549细胞凋亡的影响。Western blot检测照射后PCE对A549细胞凋亡途径中关键蛋白表达的影响。用qRT-PCR检测不同浓度PCE照射前后miRNA326的表达。结果:CCK-8结果显示,PCE能明显抑制A549细胞的增殖,且随着药物浓度的增加,其增殖抑制率增加。流式细胞术结果显示,D组细胞凋亡率为7.63%±0.27%,E组为9.62%±0.42%,F组为17.50%±0.37%,相对于D组,PCE显著提高了E组和F组照射后A549细胞的凋亡率(P<0.01)。qRT-PCR结果显示,E组、F组miRNA326的表达显著上调(P<0.01),PCE能显著上调照射后A549细胞miRNA326的表达,且药物浓度越高,上调越明显。Western blot结果显示,PCE能显著降低Bcl-2的表达,增强Caspase-3和Caspase-9的活化,提高细胞凋亡水平。结论:PCE可通过上调miRNA326的表达和促进细胞凋亡来增强人非小细胞肺癌A549细胞的放射敏感性,且随着药物剂量的增加,其放射敏感性效应增强。 展开更多
关键词 紫甘蓝提取物 非小细胞肺癌 放射敏感性 细胞凋亡 mirna326
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