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Expressions of MGMT and Survivin in Colorectal Carcinoma
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作者 祁晓莉 王发亮 +2 位作者 薄爱华 侯金超 牛书雷 《Chinese Journal of Cancer Research》 SCIE CAS CSCD 2008年第2期139-143,共5页
Objective: To investigate the expressions of O6-methyguanine-DNA methytransferase(MGMT) and Survivin in colorectal carcinoma and their clinical significance. Methods: Formalin-fixed, paraffin-embedded specimens fr... Objective: To investigate the expressions of O6-methyguanine-DNA methytransferase(MGMT) and Survivin in colorectal carcinoma and their clinical significance. Methods: Formalin-fixed, paraffin-embedded specimens from polypus and colorectal carcinoma were examined with streptavidin-biotin peroxidase(S-P) immunohistochemical technique for the expressions of MGMT and Survivin. Results: We found that there were significant differences in MGMT and Survivin between polypus and colorectal carcinoma. Expression of MGMT was correlated with ages and lymph node metastasis while Survivin was associated with lymph node metastasis only. Meanwhile, the expression of MGMT was correlated with Survivin (P〈0.01, r=0.65). But there was no significant difference between male and female and the different depth of infiltration. Conclusion: It is concluded that the abnormal expressions of MGMT and Survivin were associated with the degree of malignancy of colorectal tumor. They possibly could be useful indexes for the primary screening and prognosis of colorectal carcinoma. Examination of them may have an important guiding significance in the chemotherapy strategy. 展开更多
关键词 O6-methyguanine-DNA methytransferase (MGMT) SURVIVIN Colorectai carcinoma Polypus of largeintestine.
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VPA和As2O3对Molt-4细胞的协同作用及可能机制 被引量:2
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作者 叶宝国 林福安 +2 位作者 沈建箴 范丽萍 林聪猛 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第6期1288-1292,共5页
本研究探讨丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)单药或与亚砷酸(arsenie trioxide,As2O3)联用对人急性T细胞白血病细胞株Molt-4增殖活力的抑制、去甲基化作用及其可能机制。用MTT法检测药物对细胞增殖的抑制作用,利用金氏公式观察两药联用... 本研究探讨丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)单药或与亚砷酸(arsenie trioxide,As2O3)联用对人急性T细胞白血病细胞株Molt-4增殖活力的抑制、去甲基化作用及其可能机制。用MTT法检测药物对细胞增殖的抑制作用,利用金氏公式观察两药联用体外抗癌的协同作用。采用半巢式甲基化特异PCR(hnMS-PCR)检测p15INK4B基因甲基化,RT-PCR方法检测p15基因、DNA甲基转移酶DNMT-1、DNMT3A、DNMT3B的表达。结果表明:VPA和As2O3均可明显抑制细胞增殖,二者联用在体外有相加作用(Q值均大于0.85),在5mmol/L VPA与10μmol/L As2O3联用时抑制率达(70.31±2.54)%。Molt-4细胞p15基因因高甲基化而失表达,经VPA和As2O3联合作用后p15基因甲基化程度明显下降,p15基因表达增强,两药联用时DNMT-1、DNMT-3A、DNMT3BmRNA的表达都有下降。结论:VPA可能通过抑制DNA甲基转移酶DNMT-1和(或)DNMT3B使p15INK4B基因去甲基化,使p15基因表达上调,恢复其活性。VPA和As2O3均可明显抑制Mol-4细胞增殖,两药合用有协同相加作用,可减少砷剂的副作用。 展开更多
关键词 丙戊酸钠 AS2O3 MOLT-4细胞 甲基转移酶 P15基因甲基化
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巯嘌呤甲基转移酶基因多态性位点与酶活性的关系 被引量:10
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作者 马晓莉 吴敏媛 +2 位作者 胡亚美 朱平 李志刚 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期456-459,共4页
目的研究巯嘌呤甲基转移酶(TPMT)基因型与酶活性的关系,为根据不同基因型、酶活性对巯嘌呤类药物的反应而改进治疗方案提供依据。方法应用以PCR为基础的限制性内切酶消化、变性高效液相色谱分析和SNaPshot定点的序列分析等方法,并结合DN... 目的研究巯嘌呤甲基转移酶(TPMT)基因型与酶活性的关系,为根据不同基因型、酶活性对巯嘌呤类药物的反应而改进治疗方案提供依据。方法应用以PCR为基础的限制性内切酶消化、变性高效液相色谱分析和SNaPshot定点的序列分析等方法,并结合DNA直接测序,对250例健康献血员、100例脐血标本和280例急性白血病患者,检测TPMT基因第5外显子G238C、第7外显子G460A和第10外显子A719G的3个多态性位点。应用高效液相色谱分析技术,测定3组人群的红细胞内TPMT活性。结果本研究组人群TPMT基因外显子区3个位点的多态性频率均低,为3.5%。变异的位点为第10外显子A719G,且均为杂合变异。红细胞内TPMT活性波动范围为6~32 U,TPMT>12 U者占95.1%(599例),6~12 U者占4.9%(31例);未发现有TPMT活性缺乏者。健康献血员、脐血标本和急性白血病患者的TPMT杂合变异者,红细胞内平均TPMT活性分别为9.1 U、9.3 U和9.07 U,均分别低于其同组TPMT野生型者的17.6 U、17.67 U和18.6 U(P<0.01)。在16例健康献血员和脐血标本中,在15例急性白血病患者的红细胞内TPMT低活性者中,分别有4例和6例未发现所检测的TPMT外显子3个SNP位点的变化,提示红细胞内TPMT活性还受其他因素的影响。结论TPMT基因多态性影响酶的活性,即TPMT杂合变异者,其TPMT活性降低,从而影响巯嘌呤类药物的治疗效应。根据不同TPMT基因型、酶活性对巯嘌呤类药物的反应制定治疗方案,可进一步提高治疗的有效性和安全性。 展开更多
关键词 巯嘌呤甲基转移酶基因 巯嘌呤甲基转移酶基因型 巯嘌呤甲基转移酶活性 多态性 巯嘌呤类药物
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DNA甲基化在晶状体发育及白内障中的研究进展 被引量:9
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作者 王勇 管怀进 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期747-751,共5页
表观遗传学是指基因碱基序列在未发生改变的情况下调控基因表达的一门学科,其研究领域主要涉及DNA甲基化、组蛋白修饰和非编码RNA,其中DNA甲基化沉默基因的表达是表观遗传学重要的调控机制。DNA甲基化状态受环境因素的影响,而晶状体... 表观遗传学是指基因碱基序列在未发生改变的情况下调控基因表达的一门学科,其研究领域主要涉及DNA甲基化、组蛋白修饰和非编码RNA,其中DNA甲基化沉默基因的表达是表观遗传学重要的调控机制。DNA甲基化状态受环境因素的影响,而晶状体发育异常及白内障形成由多种致病因素决定,其中包括环境因素。因此,研究DNA甲基化在晶状体发育及白内障形成过程中的作用机制尤为重要。本文就近年来DNA甲基化在晶状体发育、年龄相关性白内障、并发性白内障、后发性白内障发病机制中的作用进行综述,通过对DNA甲基化在上述眼部疾病及晶状体发育过程中作用机制的认识及研究,有望在白内障临床治疗中开辟新的途径。 展开更多
关键词 DNA甲基化 表观遗传学 晶状体发育 白内障 DNA甲基化转移酶
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愤怒情志与儿茶酚胺氧位甲基转移酶基因多态性的关系 被引量:5
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作者 刘永 詹向红 +5 位作者 闫秀娟 李伟 侯俊林 闫国立 王友杰 杨丽萍 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期682-685,共4页
目的:探讨正常大学生愤怒情志特质与儿茶酚胺氧位甲基转移酶(COMT)基因多态性之间的关系。方法:根据状态特质愤怒表达量表2(STAXI-2)特质怒得分,选择225例高特质怒受试者和221例低特质怒受试者进行对照研究,应用连接酶特异检测技术(LDR... 目的:探讨正常大学生愤怒情志特质与儿茶酚胺氧位甲基转移酶(COMT)基因多态性之间的关系。方法:根据状态特质愤怒表达量表2(STAXI-2)特质怒得分,选择225例高特质怒受试者和221例低特质怒受试者进行对照研究,应用连接酶特异检测技术(LDR)测定研究对象COMT(V158M)G/A基因位点的等位基因和基因型。结果:COMT基因V158M位点的3种基因型(A/A,A/G和G/G)在高、低特质怒组正常大学生中的分布差异无统计学意义,且3种基因型受试者的愤怒表达及愤怒控制程度差异无统计学意义。结论:COMT基因V158M位点的多态性与愤怒情志特质无关联。 展开更多
关键词 愤怒特质 儿茶酚胺氧位甲基转移酶 单核苷酸多态性 状态特质愤怒表达量表
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苎麻COMT基因的克隆及序列分析 被引量:5
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作者 黄春琼 郭安平 +1 位作者 章霄云 刘国道 《中国农学通报》 CSCD 2008年第5期386-391,共6页
利用RT-PCR法结合cDNA末端快速扩增(RACE)法从苎麻中克隆了与木质素合成相关的COMT基因的全长cDNA序列。所获得的COMT基因全长1318bp,包含一个开放阅读框1098bp,编码365个氨基酸。序列相似性检索结果表明,苎麻COMT全长cDNA与杨树COMT基... 利用RT-PCR法结合cDNA末端快速扩增(RACE)法从苎麻中克隆了与木质素合成相关的COMT基因的全长cDNA序列。所获得的COMT基因全长1318bp,包含一个开放阅读框1098bp,编码365个氨基酸。序列相似性检索结果表明,苎麻COMT全长cDNA与杨树COMT基因的序列同源性达82%,其编码的氨基酸序列与杏的COMT氨基酸序列同源性最高,达93%。同时还检索到该氨基酸序列包含一个O-甲基转移酶的保守结构。 展开更多
关键词 苎麻 基因克隆 CDNA末端快速扩增 咖啡酸-O-甲基转移酶
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EGCG对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4增殖、细胞周期及DAPK1基因甲基化影响的研究 被引量:4
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作者 石雪 高宏宇 +2 位作者 燕玮 何晓薇 杨威 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期1288-1293,共6页
目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4增殖、细胞周期的影响及其作用机制。方法:应用EGCG 0、50、75、100及125μmol/L分别处理NB4细胞24、48、72、96 h后,使用CCK-8法... 目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4增殖、细胞周期的影响及其作用机制。方法:应用EGCG 0、50、75、100及125μmol/L分别处理NB4细胞24、48、72、96 h后,使用CCK-8法检测各时间点和浓度的细胞增殖水平,流式细胞术检测不同浓度EGCG处理NB4细胞48 h后的细胞周期情况,RT-PCR检测DNMT1、DNMT3a、DAPK1 mRNA的表达水平,甲基化特异性PCR检测DAPK1基因的甲基化状态,Western blot检测DAPK1蛋白的表达情况。结果:EGCG明显抑制NB4细胞增殖并诱导细胞阻滞于G_0/G_1期,且呈时间-浓度依赖性(r=0. 916)。EGCG呈浓度依赖性下调NB4细胞DNMT1、DNMT3a的表达,且对DNM T3a的作用更为明显。随EGCG浓度增加,DAPK1基因的甲基化程度减弱(r=-0. 813),DAPK1 mRNA和蛋白表达上调(r=0. 96,r=0. 991)。结论:EGCG通过抑制DNMT1和DNMT3a基因的表达,下调DAPK1S基因的甲基化程度,从而抑制NB4细胞增殖和诱导其细胞周期阻滞。 展开更多
关键词 表没食子儿茶素没食子酸酯 急性早幼粒细胞白血病 NB4细胞 DAPK1基因 甲基化转移酶
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METTL3通过IGF2BP2依赖性方式参与m6A修饰调控HBV复制的机制
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作者 余玲 张自力 +3 位作者 曾蓉 张节 王鹏 潘万龙 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期442-449,共8页
目的探究胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2(insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 2,IGF2BP2)协助甲基转移酶样3(methytransferase like 3,METTL3)通过N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)修饰调控HBV复制的分子机制。... 目的探究胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2(insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 2,IGF2BP2)协助甲基转移酶样3(methytransferase like 3,METTL3)通过N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)修饰调控HBV复制的分子机制。方法以HBV稳定复制细胞系HepG2.2.15及其亲本细胞HepG2为模型,斑点杂交分析m6A修饰水平,RT-qPCR和Western blot检测METTL3、IGF2BP2表达。生物信息学及免疫共沉淀分析METTL3与m6A阅读蛋白及其相互作用。将METTL3质粒、METTL3 siRNA和(或)IGF2BP2 siRNA转染至HepG2.2.15细胞,分别记为OE-METTL3、si-METTL3、si-IGF2BP2、OE-METTL3+si-IGF2BP2、si-METTL3+si-IGF2BP2、Control组;qPCR检测HBV DNA、HBV rcDNA、HBV cccDNA拷贝数,RT-qPCR或Western blot检测HBV pgRNA、METTL3、IGF2BP2表达。结果与HepG2细胞相比,在HepG2.2.15细胞中m6A修饰富集,METTL3、IGF2BP2表达水平升高(P<0.05)。与Control组相比,在OE-METTL3组中m6A修饰富集增强,IGF2BP2表达水平升高(P<0.05),HBV复制相关指标(HBV DNA、HBV rcDNA、HBV cccDNA、HBV pgRNA)升高(P<0.01);在si-METTL3组中则相反。生物信息学分析及免疫共沉淀显示METTL3与IGF2BP2为互作蛋白。与Control组相比,在si-IGF2BP2组中m6A修饰富集减弱,METTL3表达水平降低(P<0.01),HBV复制相关指标降低(P<0.01)。在OE-METTL3+si-IGF2BP2组中,HBV复制相关指标较OE-METTL3组降低(P<0.001)。在si-METTL3+si-IGF2BP2组中,HBV复制相关指标较si-METTL3组、si-IGF2BP2组降低(P<0.05)。结论METTL3依赖IGF2BP2富集m6A通过增强HBV rcDNA转化为cccDNA,进而增强pgRNA逆转录复制病毒。 展开更多
关键词 甲基转移酶样3 胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2 N6-甲基腺苷 乙型肝炎病毒
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DNA甲基转移酶1与3B在子宫内膜异位症血与腹腔液的表达及相关性研究 被引量:3
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作者 胡启彩 曾荔苹 +2 位作者 汤惠茹 何芳 吴瑞芳 《中国妇产科临床杂志》 2014年第5期405-408,共4页
目的测定不同期别子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)患者血液及腹腔液中DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)1及DNMT 3B的表达水平,探讨EMS DNMT 1及DNMT 3B的表达水平与发病的关系。方法采用酶联免疫吸附方法 (ELISA)测定56例... 目的测定不同期别子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)患者血液及腹腔液中DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)1及DNMT 3B的表达水平,探讨EMS DNMT 1及DNMT 3B的表达水平与发病的关系。方法采用酶联免疫吸附方法 (ELISA)测定56例EMS患者(35例Ⅰ~Ⅱ期、21例Ⅲ~Ⅳ期)及25例非内异症对照者血及腹腔液中DNMT 1、DNMT 3B的水平,分析其改变与疾病的关系及其二者在两样本中的相关关系。结果 EMS组血中DNMT1、3B及腹腔液DNMT 3B水平明显高于对照组(P<0.05)。血DNMT1、DNMT3B的表达水平在EMSⅢ~Ⅳ期高于Ⅰ~Ⅱ期与对照组,Ⅰ~Ⅱ期DNMT 3B亦较对照组高,差异有统计学意义(P<0.05);腹腔液中DNMT 1、3B的表达水平在EMSⅠ~Ⅱ期高于Ⅲ~Ⅳ期与对照组,其中DNMT 3B在三组之间差异有统计学意义(P<0.05),而DNMT 1的组间差异无统计学意义(P>0.05)。增殖期腹腔液中DNMT 1水平高于分泌期(P<0.05)。血中DNMT 1与DNMT 3B表达呈现正相关关系,腹腔液中的二者亦为正相关(r血清=0.252,P血清=0.023;r腹腔液=0.379,P腹腔液=0.000);DNMT 3B水平在血与腹腔液中呈正相关,DNMT 1在两样本中无相关性。结论 EMS患者DNMT1及DNMT3B表达水平的升高,及不同期别EMS血与腹腔局部DNMT的差异性变化,提示甲基化改变在EMS发生发展中起重要作用。 展开更多
关键词 子宫内膜异位症 DNA甲基转移酶 血液 腹腔液 酶联免疫吸附实验
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慢性阻塞性肺疾病患者肺组织中蛋白精氨酸甲基转移酶6的表达及意义 被引量:3
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作者 梁彦超 陈哲 +1 位作者 王倩 陈燕 《中国呼吸与危重监护杂志》 CAS 2014年第4期334-337,共4页
目的观察慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)患者肺组织中蛋白精氨酸甲基转移酶6(PRMT6)的mRNA及组蛋白H3R2位点非对称双甲基化(H3R2me2a)和H3K4位点三甲基化(H3K4me3)信号水平情况,探讨PRMT6是否通过调控组蛋白甲基化而参与慢阻肺的发病。... 目的观察慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)患者肺组织中蛋白精氨酸甲基转移酶6(PRMT6)的mRNA及组蛋白H3R2位点非对称双甲基化(H3R2me2a)和H3K4位点三甲基化(H3K4me3)信号水平情况,探讨PRMT6是否通过调控组蛋白甲基化而参与慢阻肺的发病。方法选取胸外科因肺癌行肺叶切除术的患者31例,据术前肺功能、吸烟史及慢阻肺诊断标准将患者分成对照组(非吸烟非慢阻肺,n=10)、吸烟组(吸烟非慢阻肺,n=10)和吸烟慢阻肺组(n=11)。选取远离原发病灶5 cm以上、肉眼观察无肺癌浸润的外周肺组织,采用QRT-PCR检测PRMT6、白细胞介素13(IL-13)、环氧酶2(COX-2)的mRNA表达,同时Western-Blotting检测PRMT6蛋白表达及组蛋白H3R2me2a和H3K4me3信号水平。结果吸烟慢阻肺组FEV1%pred、FEV1/FVC及PEF%pred较对照组和吸烟组明显降低(P<0.05)。与对照组比较,吸烟组及吸烟慢阻肺组PRMT6 mRNA表达、PRMT6蛋白表达及组蛋白H3R2me2a信号水平均显著降低(P<0.01),而IL-13、COX-2的mRNA表达及H3K4me3信号水平均显著增高(P<0.01)。结论慢阻肺患者肺组织中PRMT6表达下降,可能通过下调组蛋白H3R2me2a信号水平而上调组蛋白H3K4me3的信号水平参与慢阻肺的形成。 展开更多
关键词 慢性阻塞性肺疾病 蛋白精氨酸甲基转移酶6 组蛋白H3R2位点非对称双甲 基化 H3K4位点三甲基化
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核转录因子-κB抑制剂逆转胶质瘤细胞株对替莫唑胺的耐药性 被引量:3
11
作者 杜国良 赵宗茂 +4 位作者 宋建抢 刘彬 杜凯旋 刘力强 南成睿 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1476-1478,共3页
目的通过抑制核转录因子-κB(NF-κB)的表达,逆转胶质母细胞瘤(GBM)细胞对替莫唑胺(TMZ)抗药性,探讨TMZ耐药细胞株中NF-κB通路和O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转化酶(MGMT)表达之间的关系。方法建立U251细胞株抗TMZ模型TR-U251,采... 目的通过抑制核转录因子-κB(NF-κB)的表达,逆转胶质母细胞瘤(GBM)细胞对替莫唑胺(TMZ)抗药性,探讨TMZ耐药细胞株中NF-κB通路和O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转化酶(MGMT)表达之间的关系。方法建立U251细胞株抗TMZ模型TR-U251,采用Western blot方法测定两种细胞株中NF-κB亚结构p65和MGMT的表达,并且通过抑制NF-κB的表达观察细胞存活率及耐TMZ的水平变化,应用χ^2检验。结果TR-U251细胞株模型构建成功,MGMT在TR-U251细胞中呈高表达,但是在亲代U251细胞中则几乎测不到或者很低,同样,磷酸化的p65呈现同样的表达趋势;与亲代U251细胞株比较,TR-U251细胞中NF-κB的亚结构p65的表达是亲代细胞的5.4倍,当暴露于80 μmol/L TMZ 24~96 h,TR-U251细胞存活率从(97.6±1.4)%缓慢下降到(78.3±3.6)%,而暴露于50 μmol/L bay11-7082,存活率从(97.9±4.4)%下降到(64.2±2.3)%。而当暴露在80 μmol/L TMZ联合50 μmol/L bay11-7082细胞存活率则从(91.6±1.9)%降至(27.8±5.7)%(P=0.004),TMZ与BAY11-7082联合治疗与单独应用TMZ或者BAY11-7082 TMZ比较细胞存活率明显下降。结论脑胶质瘤中NF-κB的活化程度与MGMT的表达明显相关,NF-κB和MGMT参与脑胶质瘤细胞株TMZ抗药性的调节,抑制NF-κB可降低MGMT活性。 展开更多
关键词 胶质瘤 核转录因子-ΚB O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转化酶 替莫唑胺 耐药性
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MGMT和HSP70在大肠癌中的表达及临床意义 被引量:2
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作者 吉艳荣 薄爱华 +3 位作者 吉彦丽 张彦 牛书雷 冯丹 《现代肿瘤医学》 CAS 2009年第5期886-887,共2页
目的:探讨热休克蛋白(HSP)70和DNA修复酶O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methygua-nine-DNA methytransferase,MGMT)在大肠癌中的表达及临床意义。方法:采用免疫组织化学SABC法检测61例大肠癌组织中MGMT与HSP70的表达情况。结果:MGMT与... 目的:探讨热休克蛋白(HSP)70和DNA修复酶O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methygua-nine-DNA methytransferase,MGMT)在大肠癌中的表达及临床意义。方法:采用免疫组织化学SABC法检测61例大肠癌组织中MGMT与HSP70的表达情况。结果:MGMT与HSP70在大肠癌中表达的阳性率分别为50.82%和62.30%。其中,二者都与性别及分化程度相关性不明显(P>0.05);而与年龄和浸润深度有相关性(P<0.05),且二者呈正相关(P<0.05;r=0.32)。结论:MGMT与HSP70在大肠癌的发生发展中可能起重要作用,检测它们对大肠癌的防治有重要的临床指导意义。 展开更多
关键词 大肠癌 热休克蛋白70 O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶 免疫组织化学
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变性高效液相色谱分析巯嘌呤甲基转移酶基因多态性位点 被引量:2
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作者 马晓莉 朱平 +3 位作者 胡亚美 吴敏媛 李志刚 卜定方 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第18期1428-1430,共3页
目的 应用变性高效液相色谱技术(DHPLC)分析巯嘌呤甲基转移酶(TPMT)基因多态性位点.方法 用以PCR为基础的DHPLC,检测健康成人和脐血以及急性白血病病人,TPMT基因第5外显子G238C、第7外显子G460A和第10外显子A719G的3个多态性位点.结... 目的 应用变性高效液相色谱技术(DHPLC)分析巯嘌呤甲基转移酶(TPMT)基因多态性位点.方法 用以PCR为基础的DHPLC,检测健康成人和脐血以及急性白血病病人,TPMT基因第5外显子G238C、第7外显子G460A和第10外显子A719G的3个多态性位点.结果 健康成人、脐血和急性白血病病人全部DNA样本,TPMT基因外显子区的3个位点的多态性频率为3.49%,远低于白种人和非洲人.变异的位点仅为第10外显子A719G,且均为杂合变异.TPMT第5外显子630例标本的色谱峰均为单峰.第7外显子有316例为单峰,214(34%)为杂合峰.将单峰标本进行1:1混合后重新进样也有杂合峰出现.经DNA测序分析,证实此区无序列变异;杂合峰标本在54和60℃为单峰,55~59℃均为杂合峰.而单峰标本峰形未随温度发生变化.说明DHPLC的检测误差并不是柱箱温度不合适引起的.第10外显子有608例为单峰,杂合峰为22例,其中10/22例标本进行DNA直接测序,证实为杂合变异.结论 DHPLC技术能快速筛选出TPMT第5和第10外显子区的多态性位点,但不能检测出第7外显子的多态性位点.因此,DHPLC不能作为单一方法进行TPMT基因多态性位点的检测. 展开更多
关键词 变性高效液相色谱分析 巯嘌呤甲基转移酶基因 多态性
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基于成簇的规律性间隔的短回文重复序列关联的失活核酸酶9-脱氧核糖核酸甲基转移酶3A基因复合体的O-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因启动子区甲基化修饰对胶质瘤细胞替莫唑胺耐药性影响 被引量:1
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作者 陈勤 孙炜 +1 位作者 张所军 李朝曦 《中华实验外科杂志》 CAS 北大核心 2023年第7期1343-1346,共4页
目的探讨成簇的规律性间隔的短回文重复序列关联的失活核酸酶9-脱氧核糖核酸甲基转移酶3A基因复合体(CRISPR-dcas9-DNMT3A)介导的O-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因(MGMT)基因启动子区域DNA甲基化修饰对胶质瘤细胞替莫唑胺(TMZ)耐药性... 目的探讨成簇的规律性间隔的短回文重复序列关联的失活核酸酶9-脱氧核糖核酸甲基转移酶3A基因复合体(CRISPR-dcas9-DNMT3A)介导的O-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因(MGMT)基因启动子区域DNA甲基化修饰对胶质瘤细胞替莫唑胺(TMZ)耐药性的影响。方法 CRISPR-dcas9-DNMT3A表达载体通过慢病毒包装感染TMZ耐药细胞系U251-R[U251(中国医学科院基础医学研究所)通过替莫唑胺高浓度反复间歇诱导法诱导产生], 验证其对MGMT启动子区域DNA甲基化程度, MGMT表达水平以及TMZ药物敏感性影响。结果慢病毒感染成功的U251-R细胞, MGMT启动子区域甲基化水平增高[44.7%(17/38)、63.2%(24/38)、77.1%(27/38)比7.9%(3/38), P<0.05], MGMT蛋白表达减少, 细胞对TMZ化疗的敏感性增加(P<0.05)。结论 CRISPR-dcas9-DNMT3A慢病毒感染的U251-R细胞可通过增加其MGMT基因启动子区域甲基化水平减少MGMT蛋白表达从而增加化疗敏感性。 展开更多
关键词 成簇的规律性间隔的短回文重复序列关联的失活核酸酶9-脱氧核糖核酸甲基转移酶3A基因复合体 DNA甲基化 O-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶 胶质瘤 替莫唑胺
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5-脱氧杂氮胞苷抑制肝癌细胞DNA甲基转移酶转录 被引量:1
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作者 肖文华 刘丽华 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 2001年第4期294-295,共2页
目的 明确 5- Aza- cd R对 DNA MTase转录水平的抑制作用。方法 用 5× 1 0 -7M的5- AZa- cd R处理肝癌细胞株 SMMC- 772 1和 H2和 Hep G2 ,就用 RT- PCR技术检测经药物处理前后 2株肝癌细胞 DNA MTase m RNA表达水平。结果 经 5... 目的 明确 5- Aza- cd R对 DNA MTase转录水平的抑制作用。方法 用 5× 1 0 -7M的5- AZa- cd R处理肝癌细胞株 SMMC- 772 1和 H2和 Hep G2 ,就用 RT- PCR技术检测经药物处理前后 2株肝癌细胞 DNA MTase m RNA表达水平。结果 经 5- Aza- cd R处理后 ,2株肝癌细胞 DNAMTase m RNA表达量显著下降。结论  5- Aza- cd R能抑制肝细胞 DNA MTase转录 。 展开更多
关键词 肝癌细胞 5-脱氧杂氮胞苷 DNA甲基转移酶 肝癌 抑制作用
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rhEPO对缺糖缺氧大鼠星形胶质细胞的保护作用及对其DNA甲基转移酶的影响 被引量:1
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作者 杨静 贾建新 庞一强 《右江民族医学院学报》 2016年第6期570-573,共4页
目的 研究重组人促红细胞生成素(rhEPO)对氧糖剥夺(OGD)条件下大鼠星形胶质细胞DNA甲基转移酶(DNMT)水平的影响。方法 用不同浓度rhEPO与星形胶质细胞在OGD条件下共培养6h,用台盼蓝拒染法测定细胞损伤程度,RT-PCR测定DNMT1、DNMT3... 目的 研究重组人促红细胞生成素(rhEPO)对氧糖剥夺(OGD)条件下大鼠星形胶质细胞DNA甲基转移酶(DNMT)水平的影响。方法 用不同浓度rhEPO与星形胶质细胞在OGD条件下共培养6h,用台盼蓝拒染法测定细胞损伤程度,RT-PCR测定DNMT1、DNMT3A/3BmRNA的表达变化。结果 在缺糖缺氧培养组,星形胶质细胞在OGD培养后1h出现死亡并持续加重,至5~6h时死亡率达到高峰;20U/ml rhEPO组和100U/ml rhEPO组细胞死亡率,星形胶质细胞DNMT1、DNMT3A/3BmRNA水平均低于OGD对照组(P〈0.05或P〈0.001),但不同浓度rhEPO对DNMT3A/3B影响差异无统计学意义(P〉0.05)。结论 rhEPO可以对缺糖缺氧培养大鼠星形胶质细胞起到保护作用,其作用机制可能与其改变DNMT1、DNMT3A/3BmRNA水平有关。 展开更多
关键词 重组人促红细胞生成素 星形胶质细胞 DNA甲基转移酶 缺糖缺氧
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PRMT5与JAKs/STATs通路的相互作用及其机制的研究进展 被引量:1
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作者 李慧 申徐良 左烨 《医学综述》 2017年第9期1696-1701,1706,共7页
蛋白精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)属于Ⅱ型甲基转移酶,主要催化组蛋白和非组蛋白物质的精氨酸残基的对称二甲基化修饰。PRMT5通过表观遗传学调控靶基因的表达或信号分子的翻译后修饰,从而参与多种细胞进程。PRMT5可能是一种癌基因,并且通... 蛋白精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)属于Ⅱ型甲基转移酶,主要催化组蛋白和非组蛋白物质的精氨酸残基的对称二甲基化修饰。PRMT5通过表观遗传学调控靶基因的表达或信号分子的翻译后修饰,从而参与多种细胞进程。PRMT5可能是一种癌基因,并且通过多种肿瘤抑制基因或者信号分子的修饰导致肿瘤的发生。骨髓增殖性肿瘤(MPN)中普遍存在JAK2基因的突变并且导致Janus激酶(JAKs)/信号转导和转录激活因子(STATs)信号通路的激活,JAKs/STATs在MPN的发病机制中起着重要的作用,而且有证据表明PRMT5在MPN发展中有重要作用。 展开更多
关键词 蛋白精氨酸甲基转移酶5 骨髓增殖性肿瘤 JAKs/STATs信号通路
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O^6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶、SFN基因启动子区甲基化异常与皮肤鳞癌关系的研究 被引量:1
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作者 王亮 王伟 +3 位作者 杨宏凤 孙然 孙鸿燕 丛宪玲 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期2065-2066,共2页
目的探讨O^6_甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)、SFN基因启动子区甲基化异常与皮肤鳞癌发生的关系及临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测40例皮肤鳞癌和20例正常皮肤组织中MGMT... 目的探讨O^6_甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)、SFN基因启动子区甲基化异常与皮肤鳞癌发生的关系及临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测40例皮肤鳞癌和20例正常皮肤组织中MGMT、SFN两组基因甲基化状态及mRNA的表达。结果鳞癌组织中的MGMT、SFN基因启动子附近甲基化频率分别为42.5%、35.0%,明显高于正常皮肤组织的10.0%和5.0%,差异有统计学意义(P〈0.05),而鳞癌组织中MGMT和SFN的mRNA表达则低于正常皮肤组织(P〈0.05)。结论皮肤鳞癌组织中MGMT、SFN基因启动子区附近高甲基化与该肿瘤的发生密切相关。 展开更多
关键词 皮肤鳞癌 O^6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶 甲基化
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DNA修复酶和拓朴异构酶Ⅱα在乳腺癌中的表达及临床意义
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作者 王金科 张辉 +2 位作者 董建峰 赵秋振 薄爱华 《河北北方学院学报(医学版)》 2006年第4期31-33,共3页
目的:探讨乳腺癌中拓朴异构酶Ⅱα(TopoⅡα)和DNA修复酶(MGMT)表达的相关性及临床意义。方法:采用SABC免疫组织化学方法,检测76例乳腺癌标本中TopoⅡα和MGMT的表达率。结果:乳腺癌中MGMT阳性率为59.21%(45/76),TopoⅡα阳性率为68.42%... 目的:探讨乳腺癌中拓朴异构酶Ⅱα(TopoⅡα)和DNA修复酶(MGMT)表达的相关性及临床意义。方法:采用SABC免疫组织化学方法,检测76例乳腺癌标本中TopoⅡα和MGMT的表达率。结果:乳腺癌中MGMT阳性率为59.21%(45/76),TopoⅡα阳性率为68.42%(52/76)。TopoⅡα和MGMT有低度相关性(γ=0.234),61岁以上老年组TopoⅡα和MGMT阳性率均低于60岁以下组,有淋巴结转移组阳性率高于无转移组。结论:TopoⅡα和MGMT过表达率与乳癌患者年龄及有否淋巴结癌转移有关。检测乳腺癌中TopoⅡα和MGMT对提示预后和临床选择化学治疗方案有指导意义。 展开更多
关键词 乳腺癌 DNA修复酶 拓朴异构酶Ⅱα
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PELP1、SETDB1在卵巢癌组织中的表达及意义
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作者 黄吉仁 李长江 +4 位作者 毛艳华 张文文 王佳 谢乐乐 张应凤 《重庆医学》 CAS 2023年第20期3099-3103,3109,共6页
目的探讨脯氨酸-谷氨酸-亮氨酸富集蛋白1(PELP1)及SET结构域分支型组蛋白赖氨酸甲基转移酶1(SETDB1)在卵巢癌组织中的表达及意义。方法收集2016年7月至2022年5月该院妇产科行手术治疗且临床病理资料完整的35例卵巢癌患者组织标本,另选... 目的探讨脯氨酸-谷氨酸-亮氨酸富集蛋白1(PELP1)及SET结构域分支型组蛋白赖氨酸甲基转移酶1(SETDB1)在卵巢癌组织中的表达及意义。方法收集2016年7月至2022年5月该院妇产科行手术治疗且临床病理资料完整的35例卵巢癌患者组织标本,另选取同期收治因子宫肌瘤行子宫及双侧附件切除术的17例患者的正常卵巢组织作为对照。采用实时荧光定量逆转录PCR检测PELP1、SETDB1 mRNA在卵巢癌细胞系(A2780、OVCAR3、SKOV3)及人正常卵巢上皮细胞系(IOSE80)中的相对表达水平,免疫组织化学检测PELP1、SETDB1蛋白的表达水平,分析PELP1、SETDB1蛋白表达情况与患者临床病理特征的关系。结果卵巢癌细胞系A2780、OVCAR3、SKOV3中PELP1、SETDB1 mRNA相对表达水平均明显高于正常卵巢上皮细胞系IOSE80(P<0.05)。与正常卵巢组织比较,卵巢癌组织PELP1蛋白表达水平明显增高(P<0.05),但SETDB1蛋白表达无明显差异(P>0.05)。不同国际妇产科联盟(FIGO)分期、淋巴结转移情况的PELP1蛋白阳性表达比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PELP1在卵巢癌组织中表达水平异常升高,PELP1可能对SETDB1有一定的调控作用。 展开更多
关键词 SET结构域分支型组蛋白赖氨酸甲基转移酶1 脯氨酸-谷氨酸-亮氨酸富集蛋白1 卵巢癌 免疫组织化学 靶向治疗
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