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支原体巨噬细胞活化脂肽-2经PI3K/Nrf2诱导单核细胞表达HO-1和NQO1 被引量：5
1
作者 游晓星 马小华 +6 位作者 刘良专 曾焱华 朱翠明 何军 蒋传好 余敏君 吴移谋 《中南医学科学杂志》 CAS 2014年第1期6-10,共5页
目的 观察支原体巨噬细胞活化脂肽-2（MALP-2）对THP-1单核细胞血红素氧合酶-1（HO-1）和NAD（P）H：醌氧化还原酶-1（NQO1）表达的影响,以明确机体抵抗支原体感染所致炎性损伤的自我防御机制.方法 体外培养THP-1细胞并分为对照组和实验... 目的 观察支原体巨噬细胞活化脂肽-2（MALP-2）对THP-1单核细胞血红素氧合酶-1（HO-1）和NAD（P）H：醌氧化还原酶-1（NQO1）表达的影响,以明确机体抵抗支原体感染所致炎性损伤的自我防御机制.方法 体外培养THP-1细胞并分为对照组和实验组.其中对照组加入等体积培养基,实验组根据不同的实验目的 加入不同浓度的MALP-2作用5～120 min或12 h,Western blot 检测HO-1和NQO1表达以及Akt磷酸化水平.同时,采用PI3K抑制剂LY294002处理细胞,以证实PI3K参与HO-1表达.提取细胞核蛋白,凝胶迁移率实验和免疫荧光观察NF-E2相关因子2（Nrf2）的DNA结合活性和核转位情况,并采用特异性siRNA沉默Nrf2后,Western blot观察其对HO-1和NQO1表达的影响.结果 Western blot结果显示,MALP-2能诱导THP-1细胞表达HO-1和NQO1蛋白,且呈一定的剂量依赖性.此外,MALP-2能激活PI3K,且PI3K抑制剂能抑制HO-1和NQO1的表达;凝胶迁移率实验和激光共聚焦结果显示,MALP-2能增强Nrf2的DNA结合活性及核转位,而PI3K抑制剂处理后,Nrf2的DNA结合活性以及核转位水平进一步降低.RNA干扰Nrf2后,HO-1和NQO1表达显著降低.结论 MALP-2能诱导THP-1细胞表达HO-1和NQO1,其机制可能受PI3K/Nrf2调控. 展开更多
关键词 支原体巨噬细胞活化脂肽-2 血红素氧合酶-1 NAD(P)H∶ 醌氧化还原酶-1 NF-E2相关因子2
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支原体巨噬细胞活化脂肽2经MAPKs和Nrf2途径诱导人单核细胞血红素氧合酶－1产生 被引量：4
2
作者 马小华 游晓星 +5 位作者 曾焱华 刘良专 朱翠明 何军 蒋传好 吴移谋 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期289-293,共5页
目的：探讨支原体巨噬细胞活化脂肽2（ MALP-2）能否诱导人单核细胞系THP-1产生血红素氧合酶-1（HO-1），并探讨其可能的调控机制。方法体外培养THP-1细胞，根据实验目的，用不同浓度的MALP-2作用12 h，或一定浓度的MALP-2作用不同时间... 目的：探讨支原体巨噬细胞活化脂肽2（ MALP-2）能否诱导人单核细胞系THP-1产生血红素氧合酶-1（HO-1），并探讨其可能的调控机制。方法体外培养THP-1细胞，根据实验目的，用不同浓度的MALP-2作用12 h，或一定浓度的MALP-2作用不同时间后，real-time PCR和Western blot分别检测HO-1 mRNA和蛋白的表达；比色法分析 HO-1酶活性情况；采用丝裂原活化蛋白激酶（ MAPKs）特异性抑制剂（30μmol/L SB203580、PD98059和SP600125）预处理THP-1细胞30 min后加入5．0 ng/ml MALP-2共孵育细胞，Western blot检测HO-1的蛋白表达。提取MALP-2处理后的核蛋白及胞质蛋白，Western blot检测转录因子NF-E2相关因子2（NF-E2-related factor 2，Nrf2）在细胞核及胞质中的表达情况，并采用Nrf2 siRNA干扰Nrf2表达后，检测Nrf2和HO-1表达情况。结果 MALP-2能以浓度依赖性方式诱导人单核细胞系THP-1表达HO-1 mRNA和蛋白质，同时，HO-1的酶活性也随着MALP-2浓度的递增而增强；30μmol/L MAPK特异性抑制剂SB203580、PD98059和SP600125处理THP-1细胞后，MALP-2诱导HO-1的表达量随之降低；5．0 ng/ml MALP-2能降低细胞质内Nrf2的表达水平，同时增加其细胞核内含量；且转染Nrf2 siRNA 后，HO-1的表达显著降低。结论 MALP-2诱导的HO-1表达受MAPK和Nrf2的调控。 展开更多
关键词 巨噬细胞活化脂肽2 血红素氧合酶-1 MAPKS 转录因子NF-E2相关因子2
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支原体脂肽经TLR2,6/c-Src/PI3K通路诱导单核细胞表达血红素氧合酶-1 被引量：3
3
作者 游晓星 马小华 +5 位作者 刘良专 曾焱华 朱翠明 何军 蒋传好 吴移谋 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期587-590,共4页
目的:观察支原体巨噬细胞活化脂肽2(Macrophage-activating lipopeptide-2,MALP-2)诱导人单核细胞系THP-1表达血红素氧合酶-1(Hemeoxygenase,HO-1)的分子机制。方法:体外培养THP-1细胞,用不同浓度的MALP-2作用12 h,Western blot检测HO-... 目的:观察支原体巨噬细胞活化脂肽2(Macrophage-activating lipopeptide-2,MALP-2)诱导人单核细胞系THP-1表达血红素氧合酶-1(Hemeoxygenase,HO-1)的分子机制。方法:体外培养THP-1细胞,用不同浓度的MALP-2作用12 h,Western blot检测HO-1的表达。THP-1细胞经TLR2和TLR6中和抗体孵育,或构建TLR2和TLR6负显性突变体转染细胞,以明确TLR2和TLR6在介导HO-1表达中的作用;Western blot检测c-Src和Akt磷酸化情况,同时,分别采用c-Src siRNA或PI3K抑制剂LY294002处理细胞,观察c-Src及PI3K在HO-1表达中的作用。结果:MALP-2处理后可磷酸化c-Src,而TLR2和TLR6中和抗体以及其负显性突变体转染后,c-Src磷酸化水平显著降低;同时,c-Src siRNA可降低Akt磷酸化水平,而PI3K抑制剂LY294002处理后可明显降低HO-1的表达。结论:MALP-2能诱导THP-1细胞表达HO-1,其机制可能受TLR2,6/c-Src/PI3K通路调控。 展开更多
关键词 支原体巨噬细胞活化脂肽2 血红素氧合酶-1 单核细胞
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支原体脂肽经EGFR/MMP-9诱导气道上皮细胞分泌MUC5AC 被引量：1
4
作者 文道林 余敏君 +5 位作者 游晓星 李冉辉 陈列松 朱翠明 李媛媛 曾焱华 《当代医学》 2015年第28期1-3,共3页
目的观察支原体巨噬细胞活化脂肽-2（MALP-2）诱导人气道上皮细胞分泌粘蛋白MUC5AC的分子机制。方法体外培养人气道上皮细胞NCI-H292,分别采用0、0.1、1.0和5.0μg/m L MALP-2刺激NCI-H292细胞24 h,采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测... 目的观察支原体巨噬细胞活化脂肽-2（MALP-2）诱导人气道上皮细胞分泌粘蛋白MUC5AC的分子机制。方法体外培养人气道上皮细胞NCI-H292,分别采用0、0.1、1.0和5.0μg/m L MALP-2刺激NCI-H292细胞24 h,采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测培养上清中MUC5AC和基质金属蛋白酶9（MMP-9）的含量;Western blot检测表皮生长因子受体（EGFR）磷酸化水平。同时采用EGFR抑制剂AG-1478或MMP-9抑制剂（MMP-9 Inhibitor I）处理细胞,观察其对MUC5AC分泌的影响。结果 NCI-H 292细胞未刺激时,MUC 5 AC以及MMP-9分泌水平极低。当给予0.1~5μg/m L MALP-2作用18 h后,MUC 5 AC的分泌水平显著增高。此外,5μg/m L MALP-2作用NCI-H 292细胞1 h后可诱导EGFR磷酸化。采用AG-1478预处理细胞1 h后,MMP-9及MUC 5 AC分泌水平明显减少,同时,采用10 nmol/L MMP-9抑制剂处理后也能下调MUC 5 AC水平。结论支原体MALP-2经EGFR/MMP-9诱导气道上皮细胞分泌MUC5AC。 展开更多
关键词 支原体巨噬细胞活化脂肽2 基质金属蛋白酶9 MUC 5 AC
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支原体巨噬细胞活化脂肽2诱导单核细胞系THP-1表达血红素氧合酶1及其机制研究 被引量：1
5
作者 游晓星 马小华 +6 位作者 刘良专 曾焱华 余敏君 朱翠明 何军 蒋传好 吴移谋 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期453-458,共6页
目的：观察支原体巨噬细胞活化脂肽2（macrophage-activating lipopeptide-2， MALP-2）能否诱导人单核细胞系THP-1表达血红素氧合酶-1（hemeoxygenase，HO-1），并探讨其相应的调控机制，以明确机体抵抗支原体感染所致炎性损伤的自我... 目的：观察支原体巨噬细胞活化脂肽2（macrophage-activating lipopeptide-2， MALP-2）能否诱导人单核细胞系THP-1表达血红素氧合酶-1（hemeoxygenase，HO-1），并探讨其相应的调控机制，以明确机体抵抗支原体感染所致炎性损伤的自我防御机制。方法体外培养THP-1细胞，用不同浓度的MALP-2作用12 h， Western blot检测HO-1的表达；THP-1细胞经TLR2和TLR6中和抗体孵育，或构建TLR2和TLR6负显性突变体转染细胞，以明确TLR2和TLR6在介导HO-1表达中的作用；Western blot检测Akt磷酸化情况，并采用PI3K抑制剂LY294002处理细胞，以证实PI3K参与HO-1表达。同时，分别采用EMSA和免疫荧光观察核转录因子Nrf2的DNA结合活性和核转位，并采用Nrf2 siRNA干扰其表达后，Western blot检测HO-1表达。最后，采用siRNA干扰HO-1表达，或采用HO-1的激动剂钴原卟啉（ cobalt protoporphyrin ，CoPP）处理THP-1细胞，ELISA检测细胞因子TNF-α和IL-1β的分泌。结果 MALP-2能诱导THP-1细胞表达HO-1。且TLR2和TLR6中和抗体以及其负显性突变体转染后，HO-1表达水平显著降低；此外，MALP-2能激活PI3K，PI3K抑制剂能抑制HO-1表达；MALP-2能增强Nrf2的DNA结合活性及核转位，PI3K抑制剂处理后，Nrf2的DNA结合活性以及核转位水平进一步降低。 RNA干扰Nrf2后，HO-1表达显著降低。沉默HO-1表达后，TNF-α和IL-1β分泌增高，而CoPP处理能进一步降低TNF-α和IL-1β水平。结论 MALP-2能诱导THP-1细胞表达HO-1，其机制可能受TLR2、6/PI3K/Nrf2通路调控。 HO-1的表达可在一定程度上负调控细胞因子过度分泌。 展开更多
关键词 支原体巨噬细胞活化脂肽2 血红素氧合酶-1 单核细胞
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发酵支原体MALP-2生物学作用研究进展
6
作者 梁珂莹 刘君 +1 位作者 曾焱华 何军 《中南医学科学杂志》 CAS 2020年第5期449-453,共5页
巨噬细胞活化脂肽-2(MALP-2)是发酵支原体(Mf)上极具代表性的外膜脂肽,N端为特殊的二酰化半胱氨酸残基结构。MALP-2是一把"双刃剑",在致炎与抗炎、细胞凋亡与抗凋亡、免疫佐剂、生物协同与抑制、血管损伤和血管修复等方面发... 巨噬细胞活化脂肽-2(MALP-2)是发酵支原体(Mf)上极具代表性的外膜脂肽,N端为特殊的二酰化半胱氨酸残基结构。MALP-2是一把"双刃剑",在致炎与抗炎、细胞凋亡与抗凋亡、免疫佐剂、生物协同与抑制、血管损伤和血管修复等方面发挥重要作用。因此,了解MALP-2复杂的生物学作用能为理解Mf的致病机制及其临床治疗方案提供依据,同时也为MALP-2的临床应用提供理论基础。 展开更多
关键词 发酵支原体 巨噬细胞活化脂肽-2 生物学作用 致病机制
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支原体巨噬细胞活化脂肽-2经Btk/PI3K/Nrf2通路诱导单核细胞表达HO-1 被引量：4
7
作者 游晓星 曾焱华 +7 位作者 刘良专 马小华 朱翠明 何军 邓仲良 蒋传好 冯安贵 吴移谋 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期677-680,共4页
目的观察支原体巨噬细胞活化脂肽2(macrophage-activating lipopeptide-2,MALP-2)诱导人单核细胞系THP-1表达血红素氧合酶-1(hemeoxygenase,HO-1)的分子机制。方法体外培养THP-1细胞,用5 ng/ml的MALP-2刺激12 h。Real-time PCR检测HO-1 ... 目的观察支原体巨噬细胞活化脂肽2(macrophage-activating lipopeptide-2,MALP-2)诱导人单核细胞系THP-1表达血红素氧合酶-1(hemeoxygenase,HO-1)的分子机制。方法体外培养THP-1细胞,用5 ng/ml的MALP-2刺激12 h。Real-time PCR检测HO-1 mRNA的表达,Western blot检测其蛋白水平及Akt磷酸化;THP-1细胞与不同浓度的Bruton’酪氨酸激酶(Bruton’s tyrosine kinase,Btk)抑制剂LFM-A13作用1 h,随后用MALP-2刺激12 h,Western blot观察其对HO-1表达以及Akt磷酸化的影响;分别采用EMSA和免疫荧光检测核转录因子Nrf2的DNA结合活性和核转位,并观察PI3K抑制剂LY294002对Nrf2的激活和DNA结合活性的改变情况;siRNA干扰Nrf2表达,以证实其在HO-1表达中的作用;最后,采用LFM-A13和血红素处理THP-1细胞,MTT法检测细胞的存活率。结果 MALP-2处理可显著诱导THP-1细胞表达HO-1蛋白和mRNA,LFM-A13处理后,HO-1表达水平随其浓度的增高而降低;同时,LFM-A13也能抑制MALP-2诱导PI3K的激活(Akt磷酸化)。MALP-2能促进Nrf2的核转位并增强其DNA结合活性,而PI3K抑制剂LY294002处理后可抑制Nrf2的激活;RNA干扰Nrf2表达后,HO-1表达显著降低;此外,LFM-A13也可降低血红素处理后THP-1细胞的存活率。而采用HO-1激动剂CoPP诱导后,THP-1细胞的存活率有所增高。结论 MALP-2通过Btk/PI3k/Nrf2诱导THP-1细胞表达HO-1,从而发挥对细胞的保护作用。 展开更多
关键词 支原体巨噬细胞活化脂肽-2 Bruton’酪氨酸激酶 血红素氧合酶-1 单核细胞
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