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环状芽孢杆菌胞壁溶解酶用于红发夫酵母虾青素提取的研究 被引量:10
1
作者 蹇华丽 朱明军 +4 位作者 吴振强 梁世中 姚朔影 梁淑娃 夏枫耿 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第1期147-151,共5页
采用单因素及均匀实验设计确定了将环状芽孢杆菌胞壁溶解酶用于红发夫酵母破壁提取虾青素的最佳酶作用条件,即粗酶液pH值为5.0,体积为33mL(酶量1603.8U·g-1干酵母),温度37℃,100r·min-1振荡反应16.5h,虾青素的提取率可达到98... 采用单因素及均匀实验设计确定了将环状芽孢杆菌胞壁溶解酶用于红发夫酵母破壁提取虾青素的最佳酶作用条件,即粗酶液pH值为5.0,体积为33mL(酶量1603.8U·g-1干酵母),温度37℃,100r·min-1振荡反应16.5h,虾青素的提取率可达到98%以上。通过对不同方法提取所得虾青素的光、热稳定性进行测试,发现酶法提取的虾青素不论是在光照还是在加热条件下均比机械法及酸法破壁提取所得的虾青素稳定。 展开更多
关键词 胞壁溶解酶 环状芽孢杆菌 虾青素 提取 稳定性
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环状芽孢杆菌A1.383产酵母胞壁溶解酶发酵条件的研究 被引量:6
2
作者 蹇华丽 朱明军 +2 位作者 吴振强 梁世中 宋光均 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期21-25,31,共6页
环状芽孢杆菌A 1 3 83产细胞壁溶解酶的适宜的碳源为酵母葡聚糖 ,氮源采用蛋白胨与(NH4 ) 2 SO4 混合氮源 ,接种量 6%~ 1 0 % ,2 5 0mL三角瓶装液量为 40mL ,发酵温度为 3 0~ 3 5℃ ,培养基初始pH 6 5~ 7 0。在此条件下发酵 5 4h后... 环状芽孢杆菌A 1 3 83产细胞壁溶解酶的适宜的碳源为酵母葡聚糖 ,氮源采用蛋白胨与(NH4 ) 2 SO4 混合氮源 ,接种量 6%~ 1 0 % ,2 5 0mL三角瓶装液量为 40mL ,发酵温度为 3 0~ 3 5℃ ,培养基初始pH 6 5~ 7 0。在此条件下发酵 5 4h后可达到最高酶活 74 6u/mL ,比条件优化前的酶活提高了 3 8 7%。将所得的发酵液用于红法夫酵母虾青素的酶法提取 ,总类胡萝卜素的提取率达到 96%以上。 展开更多
关键词 红法夫酵母 发酵条件 溶解 环状芽孢杆菌 发酵液 (NH4)2SO4 混合 酶法提取 酶活 瓶装
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稻瘟病菌原生质体制备和再生的研究 被引量:4
3
作者 王金霞 黄大年 +4 位作者 杨炜 沈瑛 邹勤 范在丰 邱德文 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 1992年第1期33-38,共6页
为建立稻瘟病菌转化体系,选用稻瘟病菌2539B_1为受体,用Novozyme—234或国产裂解酶分别消化该菌细胞壁,都获得了足够数量的原生质体,并具再生菌的能力,其效率大体相近。上述两种裂解酶按1g鲜重菌丝加50mg酶量,消化2h即可获得4.65×1... 为建立稻瘟病菌转化体系,选用稻瘟病菌2539B_1为受体,用Novozyme—234或国产裂解酶分别消化该菌细胞壁,都获得了足够数量的原生质体,并具再生菌的能力,其效率大体相近。上述两种裂解酶按1g鲜重菌丝加50mg酶量,消化2h即可获得4.65×10~8细胞/ml密度的原生质体,制备的原生质体和稻瘟病菌分生孢子具有相似的习性。 展开更多
关键词 稻瘟病 袭解酶 原生质体 制备 水稻
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解淀粉芽孢杆菌黄曲霉毒素B_1裂解酶的分离纯化及鉴定 被引量:5
4
作者 蔡国林 徐铭乾 +3 位作者 李秋 王珊珊 杜祖波 陆健 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期26-30,35,共6页
解淀粉芽孢杆菌CGMCC-9021能够高效降解黄曲霉毒素B_1(Aflatoxin B_1,AFB_1),确定其降解AFB_1的活性蛋白及其机理是今后工业化生产应用的重要基础。通过硫酸铵分级沉淀、DEAE FF阴离子交换层析和Superdux 75凝胶过滤层析对解淀粉芽孢杆... 解淀粉芽孢杆菌CGMCC-9021能够高效降解黄曲霉毒素B_1(Aflatoxin B_1,AFB_1),确定其降解AFB_1的活性蛋白及其机理是今后工业化生产应用的重要基础。通过硫酸铵分级沉淀、DEAE FF阴离子交换层析和Superdux 75凝胶过滤层析对解淀粉芽孢杆菌CGMCC-9021发酵液中降解AFB_1的活性物质进行分离纯化,通过Tricine-SDS-PAGE和质谱鉴定初步分析该活性蛋白为裂解酶(分子质量约27 ku)。同时,采用荧光色谱技术初步分析了裂解酶对AFB_1的降解机理可能是破坏AFB_1的内酯环结构。 展开更多
关键词 解淀粉芽孢杆菌 黄曲霉毒素B1 纯化 裂解酶
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红法夫酵母与环状芽孢杆菌混合培养破壁提取虾青素的研究 被引量:3
5
作者 蹇华丽 梁世中 宋光均 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期6-9,共4页
环状芽孢杆菌能以红法夫酵母细胞壁为唯一碳源进行发酵产胞壁溶解酶,将红法夫酵母与环状芽孢杆菌混合培养,可使环状芽孢杆菌在生长的同时产酶并逐渐溶解酵母细胞壁,从而提取虾青素。通过对红法夫酵母与环状芽孢杆菌两阶段混合培养条件... 环状芽孢杆菌能以红法夫酵母细胞壁为唯一碳源进行发酵产胞壁溶解酶,将红法夫酵母与环状芽孢杆菌混合培养,可使环状芽孢杆菌在生长的同时产酶并逐渐溶解酵母细胞壁,从而提取虾青素。通过对红法夫酵母与环状芽孢杆菌两阶段混合培养条件的优化,总结出红法夫酵母产虾青素及酶法破壁提取的适宜工艺为:培养基初始糖浓度为30g/L,环状芽孢杆菌的最佳接种时间为红法夫酵母培养60~72h,接种量为10mL/L(1010个细胞/mL),接种后最适培养温度为30℃,pH为6.5,总发酵时间为120h,在此条件下,红法夫酵母虾青素产量可达到8960.2μg/L,虾青素最终提取率可达到96.8%。 展开更多
关键词 红法夫酵母 虾青素 环状芽孢杆菌 胞壁溶解酶 提取
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关于皮状丝孢酵母(Trichosporon cutaneum)ST851破壁条件的研究 被引量:1
6
作者 刘稳 马桂荣 《生物技术》 CAS CSCD 1994年第3期36-38,22,共4页
用脱壁酶(纤维素酶、半纤维素酶和蜗牛酶)作用于皮状丝孢酵母ST851制备原生质体。本文就酶的种类、酶液浓度、酶作用时间与温度、酶混合时间、混酶作用效果、酵母细胞的不同生长期诸因素对ST851原生质体形成的影响,进行了... 用脱壁酶(纤维素酶、半纤维素酶和蜗牛酶)作用于皮状丝孢酵母ST851制备原生质体。本文就酶的种类、酶液浓度、酶作用时间与温度、酶混合时间、混酶作用效果、酵母细胞的不同生长期诸因素对ST851原生质体形成的影响,进行了较为详尽的探讨。结果表明采用混酶作用(即先用纤维素酶和半纤维素酶预处理后再用蜗牛酶作用)是较理想的破壁条件,在pH5.8、37℃条件下作用3.5-4hr,破壁率最高可达95-98%。 展开更多
关键词 皮状丝孢酵母 脱壁酶 原生质体
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蛇毒纤维蛋白(原)溶解酶的研究进展 被引量:27
7
作者 符民桂 管锦霞 《蛇志》 1996年第4期33-36,共4页
蛇毒纤溶酶能直接溶解纤维蛋白(原),具有作为强力溶栓剂的潜在价值。对蛇毒纤溶酶的深入研究,不仅有助于阐明蛇伤中毒患者的凝血病理机制,而且为其开发应用提供了理论基础。文章综述蛇毒纤溶酶的研究进展及应用前景,重点阐述其分... 蛇毒纤溶酶能直接溶解纤维蛋白(原),具有作为强力溶栓剂的潜在价值。对蛇毒纤溶酶的深入研究,不仅有助于阐明蛇伤中毒患者的凝血病理机制,而且为其开发应用提供了理论基础。文章综述蛇毒纤溶酶的研究进展及应用前景,重点阐述其分子结构。 展开更多
关键词 蛇毒 纤维蛋白 溶解酶
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裂解多糖单加氧酶在植物病害中的研究进展
8
作者 陈进银 张莉 郭秀娜 《安徽农业科学》 CAS 2024年第3期11-14,23,共5页
植物病原真菌在侵染植物的过程中会分泌细胞壁降解酶来破坏植物细胞壁,以达到成功入侵寄主的目的。研究表明,病原菌分泌的细胞壁降解酶中的纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶、几丁质酶、酯酶均参与了植物细胞壁的降解和病原菌致病的过程,但... 植物病原真菌在侵染植物的过程中会分泌细胞壁降解酶来破坏植物细胞壁,以达到成功入侵寄主的目的。研究表明,病原菌分泌的细胞壁降解酶中的纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶、几丁质酶、酯酶均参与了植物细胞壁的降解和病原菌致病的过程,但是对于细胞壁降解酶中的裂解多糖单加氧酶在病原菌侵染植物过程中的功能研究较少。根据近年来辅助活性酶类以及属于辅助活性酶类中的裂解多糖单加氧酶的研究进展,综述了辅助活性酶的分布、种类、功能以及裂解多糖单加氧酶植物病害中的作用研究,旨在为辅助活性酶类在植物病害中的功能研究和病害防控提供参考和依据。 展开更多
关键词 裂解多糖单加氧酶 细胞壁降解酶 辅助活性酶 真菌病害
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产酶溶杆菌OH11菌株胞外酶调控相关基因ctp的克隆及功能的初步分析 被引量:5
9
作者 蒋淑贞 钱国良 +3 位作者 刘轶儒 范加勤 胡白石 刘凤权 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2011年第1期68-75,共8页
利用mariner转座子对产酶溶杆菌Lysobacterenzymogenes OH11进行转座诱变,构建菌株OH11的突变体文库。筛选到1株4种胞外酶(蛋白酶、纤维素酶、几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶)产生均减少的突变株D-11。通过亚克隆,鉴定转座子的插入位点,涉及... 利用mariner转座子对产酶溶杆菌Lysobacterenzymogenes OH11进行转座诱变,构建菌株OH11的突变体文库。筛选到1株4种胞外酶(蛋白酶、纤维素酶、几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶)产生均减少的突变株D-11。通过亚克隆,鉴定转座子的插入位点,涉及1个羧基末端蛋白酶(carboxy-terminal protease)编码基因ctp。通过同源重组的方法对该基因进行敲除,对缺失突变体Δctp表型分析发现:(1)Δctp与野生型OH11在营养丰富型(2YT)与营养缺陷型(MMX)培养基中生长速率基本一致;(2)Δctp降低了蛋白酶、纤维素酶和β-1,3-葡聚糖酶的产生,但不影响几丁质酶的产生;(3)Δctp生物膜的产生量明显减少。研究还表明,突变体基本不改变其对油菜菌核病菌Sclerotinia sclerotiorum、水稻纹枯病菌Rhizoctonia solani和辣椒疫霉病菌Phytophthora capsici的拮抗能力。互补菌株均恢复了野生型的相关功能。 展开更多
关键词 产酶溶杆菌 胞外酶调控 基因克隆 敲除 功能分析
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中温结合乙醇处理对枯草芽孢杆菌芽孢皮层裂解酶活性及结构的影响 被引量:5
10
作者 陈翔 曾朝玮 +2 位作者 申瑾 郭家俊 章中 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第23期37-42,共6页
以枯草芽孢杆菌芽孢皮层裂解酶为研究对象,研究中温结合乙醇处理对其活性及结构的影响。采用紫外可见分光光度法测定酶活性,荧光光谱和傅立叶变换红外光谱法(fourier transform infrared spectroscopy,FTIR)分析处理前后酶二三级结构的... 以枯草芽孢杆菌芽孢皮层裂解酶为研究对象,研究中温结合乙醇处理对其活性及结构的影响。采用紫外可见分光光度法测定酶活性,荧光光谱和傅立叶变换红外光谱法(fourier transform infrared spectroscopy,FTIR)分析处理前后酶二三级结构的变化。结果表明,80℃结合体积分数为30%、75%乙醇处理20 min时,杀灭芽孢效果最佳,皮层裂解酶活性最弱,仅为(24.3±2.73)、(20.42±2.17)U/L。中温结合乙醇处理使皮层裂解酶荧光强度下降,80℃时红移3 nm,三级结构发生变化。随着温度和乙醇体积分数逐渐增加,二级结构发生变化,α-螺旋及β-折叠含量减少、无规卷曲含量显著增加,75%(体积分数)乙醇80℃处理时变化最显著,含量分别为(10.98±0.03)%、(25.41±0.03)%、(48.24±0.06)%、(15.37±0.02)%。中温结合乙醇处理后皮层裂解酶结构发生变化,从而导致酶活力的改变。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 皮层裂解酶 中温结合乙醇处理 灭活芽孢
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肺炎链球菌噬菌体裂解酶CPL-1的克隆表达、纯化和抑菌活性鉴定 被引量:3
11
作者 陆海荣 黄晋江 +3 位作者 李斌宾 吴宏宇 陆敏 黄青山 《中国感染与化疗杂志》 CAS 2010年第2期139-142,共4页
目的利用基因工程方法制备肺炎链球菌噬菌体裂解酶CPL-1。方法根据大肠埃希菌密码子偏爱性合成一段编码cpl-1的基因序列,克隆到表达载体pET28a中,构建出表达质粒pET28a-cpl-1,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中进行表达。结果重组CPL-1在大... 目的利用基因工程方法制备肺炎链球菌噬菌体裂解酶CPL-1。方法根据大肠埃希菌密码子偏爱性合成一段编码cpl-1的基因序列,克隆到表达载体pET28a中,构建出表达质粒pET28a-cpl-1,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中进行表达。结果重组CPL-1在大肠埃希菌中以可溶形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%。经胆碱类似物DEAE亲和纯化后,重组CPL-1的纯度大于97%。经体外抑菌活性试验证明其对肺炎链球菌具有明显的抑菌效果。结论噬菌体裂解酶CPL-1的开发利用为预防和治疗肺炎链球菌感染提供了新的方法。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 噬菌体裂解酶 大肠埃希菌
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芽孢皮层裂解酶的提取与SDS-PAGE分析 被引量:3
12
作者 孙静 贺晓光 +2 位作者 张津瑜 杜文斌 章中 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2018年第4期14-19,共6页
使用2,6-吡啶二羧酸(DPA)、L-丙氨酸、肌苷等诱导芽孢萌发,从萌发液中提取芽孢皮层裂解酶。提取的芽孢皮层裂解酶经超滤浓缩后进行SDS-PAGE垂直板电泳分析。研究发现:DPA、L-丙氨酸、肌苷以及L-丙氨酸结合肌苷对枯草芽孢杆菌芽孢均有诱... 使用2,6-吡啶二羧酸(DPA)、L-丙氨酸、肌苷等诱导芽孢萌发,从萌发液中提取芽孢皮层裂解酶。提取的芽孢皮层裂解酶经超滤浓缩后进行SDS-PAGE垂直板电泳分析。研究发现:DPA、L-丙氨酸、肌苷以及L-丙氨酸结合肌苷对枯草芽孢杆菌芽孢均有诱导萌发的作用,且DPA诱导枯草芽孢杆菌芽孢萌发效果最好。进行SDS-PAGE电泳时,进样量为15μL,分离胶浓度为10%的凝胶板跑出的蛋白条带分离的较好,凝胶板上有4条蛋白条带,通过蛋白质分子量标准曲线可得出,目标蛋白分子量大约分别为:61.10、48.64、43.25、31.28 k Da。本研究初步提取纯化了皮层裂解酶,为后继进一步提纯皮层裂解酶、研究HPTS对该酶活性和结构的影响提供试验材料,有助于阐明高压热处理下芽孢死亡的机理,推动HPTS技术在食品工业中的应用。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 芽孢 皮层裂解酶 提取 SDS-PAGE
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枯草杆菌芽孢皮层裂解酶的分离纯化以及酶学结构分析 被引量:1
13
作者 曾朝玮 孙静 +3 位作者 马慧娇 郭家俊 郭洪伟 章中 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第9期160-165,223,共7页
本文采用硫酸铵分级沉淀、离子交换层析和凝胶过滤的方法对皮层裂解酶粗酶液进行分离纯化。结果表明:当硫酸铵的饱和度为60%时,大部分皮层裂解酶被聚集沉淀下来,总蛋白及皮层裂解酶活力较高,酶的比活力为158.22 U/mg,回收率为84.17%,进... 本文采用硫酸铵分级沉淀、离子交换层析和凝胶过滤的方法对皮层裂解酶粗酶液进行分离纯化。结果表明:当硫酸铵的饱和度为60%时,大部分皮层裂解酶被聚集沉淀下来,总蛋白及皮层裂解酶活力较高,酶的比活力为158.22 U/mg,回收率为84.17%,进一步经SP-sephadex C-25离子交换层析法纯化后该酶的比活力为218.31 U/mg,回收率为68.43%,最后使用Superdex 75凝胶过滤进行分离纯化,得到了电泳纯的皮层裂解酶,并且酶的比活力为1690.75 U/mg,回收率为19.45%。纯度为粗酶液的14.98倍,纯化出的皮层裂解酶分子量为61.1 kDa。运用傅里叶光谱(FTIR)对枯草杆菌芽孢皮层裂解酶酶学结构分析,枯草杆菌皮层裂解酶在3415、1665、1080、528 cm^(-1)波数处均有吸收峰,其中在1665 cm^(-1)处有明显的酰胺I带,应用二阶导数和曲线拟合的方法研究枯草杆菌芽孢皮层裂解酶的二级结构,发现枯草杆菌皮层裂解酶中含12.80%的α-螺旋、31.56%的β-折叠、44.97%的β-转角、以及10.68%的无规卷曲。本文为研究HPTS杀灭芽孢的机理提供了实验材料。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 芽孢 皮层裂解酶 分离纯化 二级结构
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蛇毒纤维蛋白(原)溶解酶的研究现状及其应用 被引量:1
14
作者 冬黎黎 刘玉芬 +1 位作者 张竹 赵文阁 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2010年第24期71-74,共4页
蛇毒纤维蛋白(原)溶解酶(简称纤溶酶)是一类能直接溶解纤维蛋白(原)的酶,广泛存在于多种蛇毒中。利用蛋白质分离技术从蛇毒中高度纯化而得的蛇毒纤溶酶在心脑血管疾病的治疗方面具有潜在的应用价值。笔者对蛇毒纤溶酶的理化性质和酶学... 蛇毒纤维蛋白(原)溶解酶(简称纤溶酶)是一类能直接溶解纤维蛋白(原)的酶,广泛存在于多种蛇毒中。利用蛋白质分离技术从蛇毒中高度纯化而得的蛇毒纤溶酶在心脑血管疾病的治疗方面具有潜在的应用价值。笔者对蛇毒纤溶酶的理化性质和酶学特性做了简要概述,并对蛇毒纤溶酶分子生物学的相关研究及作为抗栓剂的开发应用进行了展望。 展开更多
关键词 蛇毒 纤溶酶 纤溶活性 溶栓剂
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枯草芽孢杆菌芽孢皮层裂解酶CwlJ基因的克隆及酶生物信息学分析
15
作者 马慧娇 曾朝玮 +2 位作者 郭洪伟 郭家俊 章中 《中国酿造》 CAS 北大核心 2019年第2期164-168,共5页
高压热杀菌(HPTS)技术是一种重要的食品杀菌技术,能有效杀灭细菌芽孢。分离纯化出芽孢皮层裂解酶CwlJ可用于研究HPTS杀灭芽孢的机理。通过基因克隆得到了皮层裂解酶基因CwlJ,并构建了表达载体pET-28a(+)-CwlJ。结果表明,CwlJ基因大小为4... 高压热杀菌(HPTS)技术是一种重要的食品杀菌技术,能有效杀灭细菌芽孢。分离纯化出芽孢皮层裂解酶CwlJ可用于研究HPTS杀灭芽孢的机理。通过基因克隆得到了皮层裂解酶基因CwlJ,并构建了表达载体pET-28a(+)-CwlJ。结果表明,CwlJ基因大小为440 bp,编码142个氨基酸;生物信息学分析表明,皮层裂解酶CwlJ为亲水性的碱性不稳定蛋白;皮层裂解酶CwlJ中α-螺旋占26.06%,β-延伸链占21.83%,β-转角占4.93%,无规则卷曲占47.18%;不是分泌性蛋白,形成包涵体的可能性为68.11%;与苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)、苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)Bt18247的同类酶CwlJ亲缘关系最近。该研究为后续皮层裂解酶CwlJ基因的表达、分离纯化以及阐明HPTS下皮层肽聚糖水解机制奠定了理论基础。 展开更多
关键词 高压热杀菌 芽孢 皮层裂解酶 CwlJ基因 克隆 生物信息学分析
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2-脱氧葡萄糖对酵母虾青素积累及酶法提取的影响(英文)
16
作者 蹇华丽 朱明军 +1 位作者 吴振强 梁世中 《贵州大学学报(自然科学版)》 2005年第3期301-304,共4页
2-脱氧葡萄糖是一种酵母细胞壁合成抑制剂,红发夫酵母培养中添加0.0005%-0.002%(w/v)的2-脱氧葡萄糖可使生物量基本保持不变,但能促进虾青素积累,在增加虾青素产量的同时缩短酶法提取的时间。当添加浓度为0.002%时,虾青素含量可提高到... 2-脱氧葡萄糖是一种酵母细胞壁合成抑制剂,红发夫酵母培养中添加0.0005%-0.002%(w/v)的2-脱氧葡萄糖可使生物量基本保持不变,但能促进虾青素积累,在增加虾青素产量的同时缩短酶法提取的时间。当添加浓度为0.002%时,虾青素含量可提高到对照组的113.7%,若采用胞壁溶解酶对红发夫酵母破壁提取虾青素,作用12h提取率可达94.7%。同时,2-脱氧葡萄糖应在红发夫酵母培养的前36h添加。 展开更多
关键词 2-脱氧葡萄糖 红发夫酵母 虾青素 胞壁溶解酶
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