人脐带间充质干细胞的异质性探讨及基于单细胞RNA测序结果的亚群分析

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作者 刘凯 祁雨心 +3 位作者 毕艺飞 张秉君 戴黎鸣 张晓玲 《中国临床新医学》 2024年第5期523-530,共8页

目的探讨人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)的异质性,并基于单细胞RNA测序结果进行亚群分析。方法选择两株由郑州奥博细胞医学实验室有限公司提供的hUCMSCs(分别命名为hUCMSCs-1和hUCMSCs-2),通过实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)进行干性基因... 目的探讨人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)的异质性,并基于单细胞RNA测序结果进行亚群分析。方法选择两株由郑州奥博细胞医学实验室有限公司提供的hUCMSCs(分别命名为hUCMSCs-1和hUCMSCs-2),通过实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)进行干性基因[性别决定区Y-box 2(Sox2)、Nanog]检测。对hUCMSCs进行成骨诱导,3 d后检测成骨基因碱性磷酸酶(Alp)的表达,7 d后进行碱性磷酸酶染色,14 d后进行茜素红染色。对两株hUCMSCs进行成软骨诱导,21 d后检测成软骨基因二型胶原(COL2A1)的表达。用10 ng/mL白细胞介素-1β(IL-1β)刺激大鼠软骨细胞24 h,与hUCMSCs-1和hUCMSCs-2共培养后,检测软骨细胞合成代谢基因蛋白聚糖(ACAN)和分解代谢基因基质金属蛋白酶3(MMP3)的表达。对hUCMSCs-1进行单细胞RNA测序,并根据功能进行亚群分组,通过生物信息学分析方法描绘各个亚群标志基因热图、富集的信号通路。结果两株hUCMSCs的Sox2、Nanog、Alp、COL2A1表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。在成骨诱导7 d后,hUCMSCs-1的碱性磷酸酶染色程度深于hUCMSCs-2。在成骨诱导14 d后,茜素红染色结果显示,hUCMSCs-1钙结节数量多于hUCMSCs-2。经IL-1β干预后,软骨细胞与两株hUCMSCs共培养后的MMP3表达水平差异有统计学意义(P<0.05),但ACAN表达水平差异不显著(P>0.05)。基于单细胞RNA测序结果,hUCMSCs-1可分为C1、C2、C3三个功能亚群。C1亚群的信号通路在细胞外基质受体相互作用上富集,与软骨细胞合成代谢相关;C2亚群信号通路在细胞衰老和凋亡上富集,与细胞的自我更新相关;C3亚群信号通路在DNA复制和减数分裂上富集,与细胞周期相关。结论不同个体来源的hUCMSCs存在异质性,其在成骨、成软骨和抗分解代谢能力方面可能存在差异。通过单细胞RNA测序可较好地根据hUCMSCs的功能特性对其进行分群,有助于提高间充质干细胞治疗的临床疗效。 展开更多

关键词 人脐带间充质干细胞 单细胞RNA测序 功能亚群

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人脐带间充质干细胞来源外泌体对脑瘫小鼠神经功能损伤的保护作用 被引量：2

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作者 陈星星 赛依帕 +3 位作者 胡筱霞 王三萍 罗璇 刘璟 《基础医学与临床》 2023年第8期1201-1207,共7页

目的探讨人脐带间充质干细胞(HUCMSCs)外泌体对脑性瘫痪(简称脑瘫,CP)小鼠神经功能损伤的保护作用及其机制。方法HUCMSCs培养、鉴定后提取其外泌体。透射电镜(TEM)、纳米颗粒追踪分析仪(NTA)和Western blot鉴定外泌体;将小鼠随机分为假... 目的探讨人脐带间充质干细胞(HUCMSCs)外泌体对脑性瘫痪(简称脑瘫,CP)小鼠神经功能损伤的保护作用及其机制。方法HUCMSCs培养、鉴定后提取其外泌体。透射电镜(TEM)、纳米颗粒追踪分析仪(NTA)和Western blot鉴定外泌体;将小鼠随机分为假手术组(sham组,n=6)、模型组[CP组,n=8,单侧颈总动脉结扎联合脂多糖(LPS)感染后缺氧诱导的方法建立CP模型]、模型-外泌体组(CP-Exo组,n=8,尾静脉注射125μg外泌体)。Longa评分、网格试验和爬杆试验评估小鼠的神经运动功能、四肢抓握能力和平衡能力;苏木精-伊红(HE)染色光镜下观察脑组织病理损伤,透射电镜观察神经元突触结构,甲苯胺蓝染色检测神经元存活数目,Western blot检测突触相关蛋白突触后致密物95(PSD-95)、突触小泡蛋白(SYP)的表达。结果HUCMSCs外泌体为形态完整、球形、双层膜囊泡结构,平均粒径123 nm,外泌体TSG101蛋白表达阳性;Longa评分CP组小鼠得分较sham组显著增加(P<0.01);CP-Exo组评分显著低于CP组(P<0.05);与CP组相比,CP-Exo组未见斑片状坏死且白质区神经纤维脱髓鞘发生率明显减低(P<0.01);脑组织结构中sham组突触结构相对正常,另外两组样本均存在不同程度的病变,其病变的大致趋势为:CP组>CP-Exo组>sham组;CP组脑组织海马区锥体细胞尼氏小体数量显著低于sham组(P<0.01),CP-Exo组脑组织海马区锥体细胞尼氏小体数量显著高于CP组(P<0.01);而CP组PSD-95和SYP表达水平显著低于sham组(P<0.01),CP-Exo组PSD-95和SYP表达显著高于CP组(P<0.01)。结论HUCMSCs外泌体可促进脑瘫小鼠神经功能的恢复,可能通过增加PSD-95和SYP蛋白的表达减轻神经突触的损伤,保护神经元,从而达到改善脑瘫小鼠运动功能的目的。 展开更多

关键词 脑性瘫痪 外泌体 脐带间充质干细胞

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利用微载体悬浮培养人脐带间充质干细胞 被引量：5

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作者 李夏 滑慧娟 +2 位作者 郝捷 王柳 刘忠华 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1120-1128,共9页

随着干细胞研究的不断深入,干细胞功能分化研究和临床应用转化的需求日益提升。人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUCMSCs)来源广泛,不仅自我更新能力强、能够分化成多种类型的成体细胞,而且其自身具... 随着干细胞研究的不断深入,干细胞功能分化研究和临床应用转化的需求日益提升。人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUCMSCs)来源广泛,不仅自我更新能力强、能够分化成多种类型的成体细胞,而且其自身具有免疫调节能力,不易引发免疫排斥反应,在干细胞功能分化研究和临床应用中具有巨大应用前景和应用潜力。目前,传统的细胞培养方式培养效率低、细胞活性较差,不能满足日益增长的研究和应用需求。本研究利用微载体结合旋转瓶的悬浮培养方法,通过优化细胞接种量及转速等影响因素,快速获得大量高质量的人脐带间充质干细胞。经悬浮培养总细胞量可高达到7×10~8个细胞/L,而且细胞活性较高,MSC特异性标记物表达良好,在恢复平面培养后仍能维持MSC的正常细胞形态和增殖能力。高效脐带间充质干细胞悬浮培养体系的初步建立,为未来的干细胞功能分化研究和临床应用奠定了基础。 展开更多

关键词 人脐带间充质干细胞 3D悬浮培养体系 平面(2D)培养体系 微载体

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脐带间充质干细胞移植对卵巢早衰模型小鼠卵巢功能的影响 被引量：4

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作者 赵淑颖 郭广玲 +4 位作者 董斯睿 张超 龚琴琴 刘晨晨 计璐伟 《生物医学工程与临床》 CAS 2022年第1期15-21,共7页

目的探讨人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)移植小鼠卵巢修复化学治疗药物诱导的卵巢早衰(POF)。方法选择雌性ICR小鼠40只,鼠龄8周,体质量25~30 g。将ICR小鼠采用SPSS生成随机数字分为空白对照组、POF组、h UCMSCs组。空白对照组不做任何处理... 目的探讨人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)移植小鼠卵巢修复化学治疗药物诱导的卵巢早衰(POF)。方法选择雌性ICR小鼠40只,鼠龄8周,体质量25~30 g。将ICR小鼠采用SPSS生成随机数字分为空白对照组、POF组、h UCMSCs组。空白对照组不做任何处理,POF组与hUCMSCs组每天腹腔注射环磷酰胺(CTX)70 mg/mL,连续15 d,建立POF模型。建模成功后hUCMSCs组小鼠经尾静脉注射hUCMSCs进行治疗,POF组注射同等剂量的0.9%氯化钠溶液(生理盐水)。观察小鼠一般情况及体质量,并在移植后的7 d、14 d测定血清中雌激素(E2)、卵泡刺激素(FSH)、抗苗勒管激素(AMH)含量及观察卵巢组织形态改变。结果建模完成后,与空白对照组比较,POF组和hUCMSCs组血清E2、AMH均都降低,血清FSH升高,其差异均有统计学意义(P <0.05);hUCMSCs移植后7 d,与POF组比较[(94.39±14.99) mIU/mL、(60.92±14.60) pg/mL、(2 870.00±801.74) pg/mL],hUCMSCs组血清FSH[(80.15±13.36) mIU/mL]、血清E2[(72.38±8.12) pg/mL]差异均无统计学意义(P> 0.05),血清AMH[(3 514.50±833.93) pg/mL]差异也无统计学意义(P> 0.05)。hUCMSCs移植后14 d,与POF组比较[(2 224.50±117.08) pg/mL、(90.00±10.48) mIU/mL、(53.77±7.61) pg/mL],hUCMSCs组血清AMH[(2 934.16±210.62) pg/mL]升高,血清FSH[(77.52±6.477) mIU/mL]降低,差异均有统计学意义(P <0.05);而血清E2[(60.73±3.79) pg/mL]比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。苏木精-伊红(HE)染色结果显示:hUCMSCs移植后,与POF组比较,hUCMSCs组原始卵泡、初始卵泡、次级卵泡均有所上升,闭锁卵泡减少,差异有统计学意义(P <0.05)。POF组小鼠子宫内膜发育不良,间质血管较少、腺体数量少及结构混乱,移植后血管数量明显改善。结论 hUCMSCs移植治疗POF可改善小鼠血清E2、AMH的水平,降低血清FSH的水平,促进卵泡的生长,修复卵巢内分泌功能。 展开更多

关键词 人脐带间充质干细胞 小鼠 卵巢早衰 环磷酰胺

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人脐带间充质干细胞对实验性自身免疫性葡萄膜炎的治疗作用研究 被引量：3

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作者 秦力维 张宁坤 +7 位作者 郭建巍 高原 王桂琴 曹利群 田春雨 崔蓓 王静 陈洁 《转化医学杂志》 2017年第3期142-146,共5页

目的观察体外培养的人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs)对实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)的治疗作用。方法组织块贴壁法培养HUCMSCs、流式细胞术鉴定。用视网... 目的观察体外培养的人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs)对实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)的治疗作用。方法组织块贴壁法培养HUCMSCs、流式细胞术鉴定。用视网膜光感受器间维生素A类结合蛋白(interphotoreceptor retinoid-binding protein,IRBP)诱导EAU模型。C57BL/6小鼠尾静脉注射HUCMSCs,每日用裂隙灯显微镜对小鼠眼前节的炎症情况进行观察。流式细胞术检测实验小鼠脾脏淋巴细胞CD11c、CD86表型。结果建模后的C57BL/6小鼠于注射IRBP后7~9 d开始发病,12~14 d发病达高峰,16~20 d眼前节炎症自限性减轻,21 d后眼内炎症逐渐消退、自愈。HUCMSCs治疗后,建模小鼠EAU发病时间延长,炎症程度减轻,实验组与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。建模后的小鼠脾脏CD11c+CD86-细胞数量增加非常明显,经HUCMSCs治疗后第9天CD11c^+CD86^-细胞数量接近治疗前水平。建模后小鼠脾脏中CD86+CD11c+/CD11c比值下降,经HUCMSCs治疗后有所回升,但在第15天时仍未恢复至正常水平。结论 HUCMSCs对IRBP诱导的小鼠EAU有治疗作用,HUCMSCs作用于树突状细胞等抗原呈递细胞,抑制了EAU的进展。 展开更多

关键词 人脐带间充质干细胞 实验性自身免疫性葡萄膜炎 树突状细胞

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人脐带间充质干细胞培养上清对M1型巨噬细胞的影响及作用机制 被引量：2

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作者 廖威 张昌林 李田 《新医学》 2021年第2期109-115,共7页

目的通过研究人脐带间充质干细胞(hucMSCs)培养上清对M1型巨噬细胞的影响,探讨其作用机制。方法选择小鼠单核巨噬细胞白血病细胞系(RAW264.7)巨噬细胞,将其种植于6孔板中,待汇合度约70%时进行处理。配制含50%hucMSCs培养上清的高糖DMEM... 目的通过研究人脐带间充质干细胞(hucMSCs)培养上清对M1型巨噬细胞的影响,探讨其作用机制。方法选择小鼠单核巨噬细胞白血病细胞系(RAW264.7)巨噬细胞,将其种植于6孔板中,待汇合度约70%时进行处理。配制含50%hucMSCs培养上清的高糖DMEM条件培养基(CM)。巨噬细胞分成3组,blank组用2 ml高糖DMEM培养基培养24 h后更换2 ml高糖DMEM培养基培养24 h,DMEM组用2 ml含200 ng/ml脂多糖(LPS)的高糖DMEM培养基刺激24 h后更换2 ml高糖DMEM培养基培养24 h,CM组用2 ml含200 ng/ml LPS的高糖DMEM培养基刺激24 h后更换2 ml CM培养24 h。收集各组培养上清和巨噬细胞进行后续实验。利用PKH67染色剂进行CM中含细胞膜的成分染色(绿),DAPI染色剂进行巨噬细胞胞核染色(蓝),通过荧光显微镜观察巨噬细胞吞噬hucMSCs-CM中含细胞膜成分的情况。应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和流式细胞多因子分析技术分析促炎因子TNF-α和抗炎因子IL-10表达水平的改变。应用流式细胞术鉴定经处理后巨噬细胞表型。结果在hucMSCs上清中,荧光显微镜下观察到RAW264.7吞噬CM中膜性成分且数量随时间增加而增加。在巨噬细胞极化实验中,RT-qPCR结果提示CM组抗炎因子IL-10 mRNA相对表达量低于DMEM组,且促炎因子TNF-αmRNA相对表达量低于blank组和DMEM组(P均<0.05)。流式细胞术多因子分析结果中,CM组抗炎因子IL-10水平低于DMEM组,促炎因子TNF-α水平低于blank组和DMEM组(P均<0.05)。流式细胞术鉴定结果中,CM处理的RAW264.7中的F4/80+CD206+CD86-巨噬细胞即M2型巨噬细胞比例高于DMEM组。结论巨噬细胞可能通过吞噬hucMSCs培养上清中膜性成分诱导M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞极化,从而促进抗炎反应。 展开更多

关键词 人脐带间充质干细胞 巨噬细胞极化 炎症 肿瘤坏死因子-Α 白介素-10

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维生素A对体外培养人脐带间充质干细胞生长的影响 被引量：1

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作者 刘丹 余树民 +9 位作者 刘欢欢 宋品 曹随忠 沈留红 张坤 左之才 邓俊良 任志华 王娅 马晓平 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期810-817,共8页

该实验以人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)为研究对象,探讨维生素A对其体外培养的影响。结果显示,添加维生素A培养后,hUCMSCs仍维持其本身生物学特性,表达其标记基因CD29、CD44和干细胞标记基... 该实验以人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)为研究对象,探讨维生素A对其体外培养的影响。结果显示,添加维生素A培养后,hUCMSCs仍维持其本身生物学特性,表达其标记基因CD29、CD44和干细胞标记基因Oct4、Sox2、Nanog。维生素A促进hUCMSCs的体外增殖,上调增殖基因PCNA、C-myc和干细胞标记基因Nanog的表达,下调凋亡基因Bcl-x的表达。该研究证明了维生素A具有促进hUCMSCs增殖和维持其干细胞特性的作用,对继续探索hUCMSCs的体外快速增殖和维生素A对hUCMSCs增殖调控的机理具有重要意义。 展开更多

关键词 人脐带间充质干细胞(hucmscs) 维生素A 增殖

原文传递

共培养环境中大鼠胚胎中脑细胞诱导人脐带间充质干细胞分化 被引量：1

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作者 张蕾 谭雪锋 +2 位作者 田美玲 张新化 金国华 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期449-454,共6页

目的:检测人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)在与大鼠胚胎中脑细胞共培养环境中酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)和多巴胺转运蛋白(dopamine transporter,DAT)表达的变化。方法:(1)植块... 目的:检测人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)在与大鼠胚胎中脑细胞共培养环境中酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)和多巴胺转运蛋白(dopamine transporter,DAT)表达的变化。方法:(1)植块法分离培养hUCMSCs,以细胞免疫化学法鉴定其表面特异性标记物的表达;(2)无菌条件下分离E15大鼠胚胎中脑组织,制成单细胞悬液及中脑组织提取液;(3)用大鼠胚胎中脑组织提取液做培养液,将5-溴脱氧尿嘧啶核苷(bromodeoxyuridine,BrdU)标记的hUCMSCs与大鼠胚胎中脑细胞共培养14 d,细胞免疫化学法检测hUCMSCs中TH和DAT的表达。结果:HUCMSCs高表达CD29、CD44、CD73、CD90和CD105,极低表达CD31和CD45。在与大鼠胚胎中脑细胞共培养14 d后,hUCMSCs中TH阳性表达率为(18.06±2.29)%,DAT阳性表达率为(11.14±2.10)%。结论:用植块法可成功分离并体外培养hUCMSCs,其免疫表型符合间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的特征。在以大鼠胚胎中脑组织提取液作为培养液,并与大鼠胚胎中脑细胞共培养的诱导条件下,hUCMSCs可部分向多巴胺能神经元分化。 展开更多

关键词 人脐带间充质干细胞 胚胎中脑细胞 胚胎中脑组织提取液 共培养 多巴胺能神经元 分化 大鼠

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人脐带间充质干细胞细胞外囊泡四种分离方法的比较 被引量：1

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作者 贺静 邓陶然 +3 位作者 李长勇 李豫峰 武栋成 吴明富 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期897-902,共6页

目的比较四种方法所提取的人脐带间充质干细胞细胞外囊泡(EV)的效率。方法收集人脐带间充质干细胞的培养基上清液,通过差速离心法(方法A)、超滤结合差速离心法(方法B)、超滤结合聚乙二醇沉淀法(方法C)、超滤结合水两相系统法(方法D)提... 目的比较四种方法所提取的人脐带间充质干细胞细胞外囊泡(EV)的效率。方法收集人脐带间充质干细胞的培养基上清液,通过差速离心法(方法A)、超滤结合差速离心法(方法B)、超滤结合聚乙二醇沉淀法(方法C)、超滤结合水两相系统法(方法D)提取EV。利用二辛可宁酸(BCA)蛋白浓度测定试剂盒检测各组EV的总蛋白浓度,Western blot法检测EV表面标志物凋亡关联基因2相互作用蛋白X(Alix)、CD9与阴性对照钙连蛋白(calnexin),透射电镜检测EV的形态,纳米颗粒跟踪分析检测EV的粒径分布与颗粒数。结果以上四种方法提取的EV蛋白含量分别为(1.92±1.77)μg/μL、(18.10±1.07)μg/μL、(6.33±1.02)μg/μL、(36.48±23.13)μg/μL。A、B、C三种方法所分离的EV的CD9、Alix均呈阳性,其中方法C的表达量最低;阴性蛋白calnexin均呈阴性。方法D所得EV检测CD9、Alix、calnexin均呈现阴性。A、B、C三种方法提取的EV颗粒数分别为0.85×10^11/mL、0.63×10^11/mL、1.83×10^11/mL,且粒径分布均符合细胞外囊泡的粒径范围。透射电镜检测A、B、C三种方法所提EV均有典型的杯托状膜结构。结论超滤结合差速离心法可应用于对EV需求量大的实验。若EV需求量小,则建议直接使用差速离心法,降低EV破碎的风险。 展开更多

关键词 人脐带间充质干细胞 细胞外囊泡 超速离心

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山羊胎肝内人脐带间充质干细胞的存活与分化研究

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作者 鄢东海 黄小昆 +6 位作者 向雪萍 卿德科 方伟 李自安 王强 王金祥 庞荣清 《实验动物与比较医学》 CAS 2019年第5期364-370,共7页

目的观察人脐带间充质干细胞(hUCMSC)在胎羊肝脏内的存活与分化。方法妊娠2个月时在胎羊肝脏实质区注射绿色荧光蛋白(GFP)转染标记的hUCMSC(GFP-hUCMSC),出生1月龄时取羔羊肝脏组织,制作切片后在荧光显微镜下观察GFP阳性细胞的分布,采用... 目的观察人脐带间充质干细胞(hUCMSC)在胎羊肝脏内的存活与分化。方法妊娠2个月时在胎羊肝脏实质区注射绿色荧光蛋白(GFP)转染标记的hUCMSC(GFP-hUCMSC),出生1月龄时取羔羊肝脏组织,制作切片后在荧光显微镜下观察GFP阳性细胞的分布,采用PCR方法检测人雄性性别决定基因(SRY)的存在;RT-PCR方法检测人肝细胞特异基因的表达;免疫组织化学染色检测人肝细胞特异蛋白的表达。注射同体积生理盐水的同月龄羔羊为对照。结果在注射了GFP-hUCMSC的1月龄羔羊肝脏组织中可观察到绿色荧光的规则或散在分布,并可检测到人SRY基因的存在。RT-PCR方法可检测到人肝细胞核因子4α(HNF4α)、肝细胞核因子3β(HNF3β)和白蛋白(ALB)基因的阳性表达;免疫组织化学染色可检测到人ALB和HNF4α蛋白的阳性表达,而对照羔羊肝脏检测不到绿色荧光阳性细胞和人SRY基因以及人肝细胞特异基因和蛋白的表达。结论hUCMSC可以在胎羊肝脏内存活并分化为人肝细胞样细胞,并可在胎羊出生后至少持续一个月。 展开更多

关键词 人脐带间充质干细胞(hucmsc) 山羊 肝细胞 分化

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人脐带间充质干细胞分化为心肌细胞过程中CaN-NFATc信号通路表达的变化

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作者 阮中宝 张瑞 +2 位作者 陈各才 王飞 朱莉 《临床医学研究与实践》 2018年第23期1-3,16,共4页

目的探讨钙调神经磷酸酶(CaN)-活化T细胞核因子(NFATc)信号通路在5-氮杂胞苷(5-aza)诱导人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)分化为心肌细胞过程中的作用。方法收集足月顺产健康产妇的脐带,于无菌条件下剪碎后体外分离、培养hUCMSCs,采用10μmo... 目的探讨钙调神经磷酸酶(CaN)-活化T细胞核因子(NFATc)信号通路在5-氮杂胞苷(5-aza)诱导人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)分化为心肌细胞过程中的作用。方法收集足月顺产健康产妇的脐带,于无菌条件下剪碎后体外分离、培养hUCMSCs,采用10μmol/L或20μmol/L5-aza对P3代hUCMSCs诱导24h后继续培养4周。采用RT-PCR和WesternBlot检测诱导前、后CalcineurinA、GATA4和NFATc2表达。结果与诱导前和对照组比较,10μmol/L和20μmol/L浓度诱导4周hUCMSCs的CalcineurinA、GATA4和NFATc2表达均明显上调(P<0.05或P<0.01)。10μmol/L浓度的5-aza诱导效果效果明显优于20μmol/L(P<0.05或P<0.01)。对照组4周后CalcineurinA、GATA4和NFATc2表达水平较诱导前无明显变化(P>0.05)。结论 CaN-NFATc信号通路参与hUCMSCs心肌细胞分化的调控,10μmol/L的浓度是5-aza诱导hUCMSCs心肌细胞分化的最佳浓度。 展开更多

关键词 CaN-NFATc 人脐带间充质干细胞(hucmscs) 5-氮杂胞苷(5-aza) 心肌细胞

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人脐带间充质干细胞的抗疲劳作用及机制研究

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作者 刘爱兵 吴婷芳 +4 位作者 李红梅 崔辉 周立冬 徐静 曾独娟 《中国急救复苏与灾害医学杂志》 2014年第11期1001-1003,共3页

目的研究人脐带间充质干细胞Humanumbilical cord mesenchymal stem cells，HUCMSC）的抗疲劳作用及可能机制，为脐带间充质干细胞的临床应用提供科学数据和理论依据。方法采用植块法分离培养HUCMSC，获取第三代并设置高浓度细胞组（5&#... 目的研究人脐带间充质干细胞Humanumbilical cord mesenchymal stem cells，HUCMSC）的抗疲劳作用及可能机制，为脐带间充质干细胞的临床应用提供科学数据和理论依据。方法采用植块法分离培养HUCMSC，获取第三代并设置高浓度细胞组（5×10^5）和低浓度细胞组（S×10^4），红景天作阳性对照组。分别取32只ICR小鼠和32只SD大鼠，将大鼠、小鼠各随机均分为4组：纯水阴性对照组，红景天阳性对照组，高浓度细胞组和低浓度细胞组。用Morris水迷宫游泳实验，分析ICR小鼠的游泳时间。用全自动生化分析仪检测强迫游泳后SD大鼠的血乳酸、血尿素氮等生化指标。结果各组动物在30min内均无死亡；ICR小鼠红景天组，高浓度细胞组和低浓度细胞组的游泳时间显著长于纯水阴性对照组。SD大鼠红景天组、高浓度细胞组游泳后血清中乳酸、尿素氮和血氨的含量均显著低于纯水阴性对照组，而红景天组和高、低浓度细胞组对于乳酸脱氢酶的升高没有影响。结论HUCMSC能延长小鼠的游泳时间，降低大鼠游泳后血乳酸、血尿素氮、血氨水平，具有抗疲劳作用。 展开更多

关键词 人脐带间充质干细胞 抗疲劳 抗缺氧

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不同分离方法及培养条件对人脐带间充质干细胞生物活性的影响

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作者 徐斌 刘毅 《中国美容医学》 CAS 2020年第2期71-74,共4页

目的:观察不同分离方法及培养条件对人脐带间充质干细胞(Human umbilical cord-mesenchymal stem cells,hUCMSCs)生物活性的影响。方法:分别用组织块贴壁法、酶消化法获取hUCMSCs,进行原代培养,记录各组首次传代时间,相差显微镜观察细... 目的:观察不同分离方法及培养条件对人脐带间充质干细胞(Human umbilical cord-mesenchymal stem cells,hUCMSCs)生物活性的影响。方法:分别用组织块贴壁法、酶消化法获取hUCMSCs,进行原代培养,记录各组首次传代时间,相差显微镜观察细胞的形态,流式细胞仪鉴定其CD29、CD44、HLA-ABC、CD34、CD45、HLA-DR抗原表达。分别用DMEM-LG、DMEM-HG和DMEM-F123种培养基培养第3代、第7代细胞,MTT法比较不同时间点3种培养基培养细胞的生长情况。结果:两种分离方法均能得到较均一的梭形或者多角形贴壁细胞,胞核大胞浆丰富,CD29、CD44、HLA-ABC抗原表达阳性,CD34、CD45、HLA-DR抗原表达阴性。用DMEM-F12培养的细胞活力更好,细胞生长更迅速。结论:两种分离方法均能得到hUCMSCs,DMEM-F12培养基更能够促进细胞的增殖,较适合于培养hUCMSCs。 展开更多

关键词 组织块贴壁法 酶消化法 人脐带间充质干细胞 培养基 生物活性

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人脐带间充质干细胞外泌体的鉴定及其作用于肺动脉高压的生物信息学分析

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作者 吴璐瑶 黎伟文 +2 位作者 肖梦媛 邓少东 陈建英 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期433-442,共10页

目的探讨人脐带间充质干细胞外泌体(human umbilical cord mesenchymal stem cell exosomes,hUCMSC-Exo)缓解肺动脉高压(pulmonary hypertension,PH)的潜在分子作用机制。方法对hUCMSC-Exo进行提取、鉴定及高通量测序。利用GeneCards搜... 目的探讨人脐带间充质干细胞外泌体(human umbilical cord mesenchymal stem cell exosomes,hUCMSC-Exo)缓解肺动脉高压(pulmonary hypertension,PH)的潜在分子作用机制。方法对hUCMSC-Exo进行提取、鉴定及高通量测序。利用GeneCards搜索PH作用靶点,在GEO数据库下载PH相关芯片(GSE53408、GSE113439),经过批次校正后筛选出差异基因。GeneCards和GEO数据库以及hUCMSC-Exo所含miRNAs预测的靶向调控的mRNAs取交集,构建蛋白互作网络筛选出hUCMSC-Exo作用于PH的关键靶点,并进行GO和KEGG富集分析。结果测序得到hUCMSC-Exo中43个高表达的miRNAs,其中17个miRNAs可作用于PH,发现其作用机制可能与前列腺癌、HIF-1信号通路、PI3K-Akt信号通路、癌症的蛋白多糖和癌症通路等相关。结论本研究可为hUCMSC-Exo防治PH的临床研究提供新思路。 展开更多

关键词 肺动脉高压 人脐带间充质干细胞外泌体 外泌体测序 生物信息学

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