消皮素B在人主动脉夹层组织中的表达变化及对主动脉平滑肌细胞焦亡、炎症反应的影响

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作者 沈小艳 谢孝平 +1 位作者 李博文 王志维 《山东医药》 CAS 2024年第11期6-10,共5页

目的观察人主动脉夹层组织消皮素B(GSDMB)表达变化,并探讨GSDMB对人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)焦亡和炎症反应的影响。方法收集主动脉夹层患者的主动脉夹层组织、器官捐献者的主动脉组织(正常对照组织)各8例份,采用Western blotting法检... 目的观察人主动脉夹层组织消皮素B(GSDMB)表达变化,并探讨GSDMB对人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)焦亡和炎症反应的影响。方法收集主动脉夹层患者的主动脉夹层组织、器官捐献者的主动脉组织(正常对照组织)各8例份,采用Western blotting法检测GSDMB蛋白表达。将对数生长期的HASMCs分为NC-siRNA组(转染NC-siRNA)、脂多糖(LPS)组(LPS作用)、GSDMB-siRNA组(转染GSDMB-siRNA)、GSDMB-siRNA+LPS组(LPS作用后转染GSDMB-siRNA),另将HASMCs分为空载质粒组(转染空载质粒)、LPS作用组(LPS作用)、GSDMB过表达组(转染GSDMB过表达质粒)、GSDMB过表达+LPS组(LPS作用后转染GSDMB过表达质粒),采用Western blotting法检测细胞GSDMB、半胱氨酸蛋白酶4(Caspase-4)、消皮素D(GSDMD)、N-消皮素D(N-GSDMD)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达,流式细胞术检测细胞焦亡率,ELISA法检测细胞上清液白细胞介素18(IL-18)、白细胞介素1β(IL-1β)水平。结果主动脉夹层组织与正常对照组织GSDMB蛋白相对表达量分别为0.88±0.16、0.62±0.15,二者比较P<0.05。与NC-siRNA组比较,LPS组GSDMB、Caspase-4、GSDMD、N-GSDMD、MMP-9、MMP-2蛋白相对表达量和细胞焦亡率及细胞上清液IL-18、IL-1β水平均升高,GSDMB-siRNA组仅GSDMB蛋白相对表达量降低(P均<0.05)。与LPS组比较,GSDMB-siRNA+LPS组GSDMB、Caspase-4、GSDMD、N-GSDMD、MMP-9、MMP-2蛋白相对表达量和细胞焦亡率及细胞上清液IL-18、IL-1β水平均降低(P均<0.05)。与空载质粒组比较,LPS作用组GSDMB、Caspase-4、GSDMD、N-GSDMD、MMP-9、MMP-2蛋白相对表达量和细胞焦亡率及细胞上清液IL-18、IL-1β水平均升高(P均<0.05),GSDMB过表达组仅GSDMB蛋白相对表达量升高(P<0.05)。与LPS作用组比较,GSDMB过表达+LPS组GSDMB、Caspase-4、GSDMD、N-GSDMD、MMP-9、MMP-2蛋白相对表达量和细胞焦亡率及细胞上清液IL-18、IL-1β水平均升高(P均<0.05)。结论人主动脉夹层组织GSDMB表� 展开更多

关键词 消皮素B 主动脉夹层 人主动脉平滑肌细胞 细胞焦亡 炎症反应 半胱氨酸蛋白酶4

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主动脉平滑肌原代细胞提取方法的改良与研究

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作者 徐心阳 林文锋 +4 位作者 姜烨凡 董志强 李钢 顾嘉玺 倪布清 《中华胸心血管外科杂志》 CSCD 2024年第4期222-227,共6页

目的改良人主动脉平滑肌细胞的原代提取培养方法。方法采用改良过的组织块贴壁法提取人主动脉平滑肌原代细胞,无多聚左旋赖氨酸(Poly-L-Lysine,PLL)包被为阴性对照组,PLL包被为实验组。采用免疫荧光技术鉴定细胞纯度;蛋白印迹法判断细... 目的改良人主动脉平滑肌细胞的原代提取培养方法。方法采用改良过的组织块贴壁法提取人主动脉平滑肌原代细胞,无多聚左旋赖氨酸(Poly-L-Lysine,PLL)包被为阴性对照组,PLL包被为实验组。采用免疫荧光技术鉴定细胞纯度;蛋白印迹法判断细胞表型变化;细胞计数仪计算传代后细胞的贴壁率;CCK8法鉴定两组细胞生长活力的差别。结果实验组细胞爬出率及成活率明显高于阴性对照组(P<0.05);倒置显微镜及免疫荧光显示两组细胞形态与标志蛋白表达差异无统计学意义;蛋白印迹法显示两组细胞表型改变差异无统计学意义;细胞贴壁率比较,实验组细胞明显高于阴性对照组(P<0.05);CCK8法显示实验组细胞于48、60、72 h时活性明显高于阴性对照组(P<0.05)。结论预包被PLL能够提高人主动脉平滑肌细胞的提取效率、贴壁效率和生长活力,同时不会改变细胞表型。 展开更多

关键词 原代细胞培养 人主动脉平滑肌细胞 多聚左旋赖氨酸 免疫荧光

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尿毒症患者血清通过ROS-NLRP3信号通路促进人主动脉平滑肌细胞增殖参与新生内膜增生

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作者 段琦 李亚峰 王振峰 《中国分子心脏病学杂志》 CAS 2024年第3期6110-6115,共6页

目的通过在体外模拟慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)病理环境探讨ROS-NLRP3信号通路在CKD中对血管新生内膜增生的影响。方法体外培养人主动脉平滑肌细胞(human aortic smooth muscle cells,HASMCs),实验分为3组:正常血清对照组... 目的通过在体外模拟慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)病理环境探讨ROS-NLRP3信号通路在CKD中对血管新生内膜增生的影响。方法体外培养人主动脉平滑肌细胞(human aortic smooth muscle cells,HASMCs),实验分为3组:正常血清对照组(NC组)、尿毒症血清处理组(CKD组)、尿毒症血清+Mito-TEMPO处理组(CKD+Mito-TEMPO组)。采用Western blot、免疫荧光和ELISA实验方法观察尿毒症血清对HASMCs表型、氧化应激水平、炎症因子表达水平以及NLRP3炎症复合体表达的影响。结果与NC组相比,经尿毒症患者血清处理后,HASMCs增殖显著增强,平滑肌肌动蛋白α(smooth muscle actinα,α-SMA)和钙调理蛋白1的蛋白表达、线粒体活性氧(mitochondrial reactive oxygen species,mtROS)水平显著增加(P均<0.05),炎症因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-18和TNF-α的水平显著增加(P均<0.05),nod样受体蛋白3(nod-like receptor protein 3,NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,caspase-1)、剪切的caspase-1、IL-1β和IL-18的蛋白表达水平显著增加(P均<0.05),超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性降低显著降低(P<0.05);而加入mtROS抑制剂后,HASMCs增殖显著降低;α-SMA和钙调理蛋白1的蛋白表达,mtROS水平,炎症因子IL-6、IL-18、TNF-α水平,NLRP3、caspase-1、剪切的caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达水平均显著减少(P均<0.05);SOD活性降低显著增加(P<0.05)。结论尿毒症血清通过ROS-NLRP3信号通路促进HASMCs增殖、参与新生内膜增生。 展开更多

关键词 尿毒症 新生内膜增生 线粒体活性氧 人主动脉平滑肌细胞 NLRP3

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同型半胱氨酸通过PI3K/Akt信号通路诱导人主动脉平滑肌细胞增殖 被引量：6

4

作者 纪昕 郭玉楷 +3 位作者 岳晓乐 赵丹丹 张瑞 李永军 《中国卫生检验杂志》 CAS 2017年第1期1-4,共4页

目的探讨同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)促进人主动脉平滑肌细胞(HASMC)的增殖作用及其分子机制。方法透射电镜观察HASMC增殖的形态学变化;MTT法测定Hcy对HASMC的增殖作用;Western blot法和荧光定量反转录PCR法分别检测PI3K、p-Akt和Eg... 目的探讨同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)促进人主动脉平滑肌细胞(HASMC)的增殖作用及其分子机制。方法透射电镜观察HASMC增殖的形态学变化;MTT法测定Hcy对HASMC的增殖作用;Western blot法和荧光定量反转录PCR法分别检测PI3K、p-Akt和Egr-1蛋白及mRNA的表达水平。结果 Hcy处理HASMC 48 h后,细胞内均出现空泡增多、内质网扩张和线粒体固缩的现象,对照组细胞形态正常。随着Hcy浓度的增高,与对照组比较,OD值逐渐增高,当Hcy浓度固定时,48 h OD值较24 h升高,差异有统计学意义(P<0.05)。PI3K、p-Akt和Egr-1蛋白相对表达水平随着Hcy浓度的增加而逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05)。PI3K、p-Akt和Egr-1 mRNA表达水平较对照组均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),且PI3K和Akt mRNA表达水平的增加与Hcy呈浓度依赖性(P<0.05)。结论 Hcy可通过增强PI3K/Akt信号通路关键蛋白和分子表达,促进早期生长反应因子Egr-1的转录及翻译,诱导人主动脉平滑肌细胞迁移、增生,加速动脉粥样硬化发生。 展开更多

关键词 同型半胱氨酸 人主动脉平滑肌细胞 PI3K/AKT信号通路 增殖

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铁缺乏对主动脉中层退行性变小鼠主动脉壁和人主动脉血管平滑肌细胞骨架结构的影响及可能机制 被引量：1

5

作者 王苏 刘敏 +3 位作者 李博文 刘恒娟 闵心平 赵博 《中华实用诊断与治疗杂志》 2023年第9期880-885,共6页

目的观察铁缺乏(ID)对主动脉中层退行性变(AMD)小鼠主动脉壁、人主动脉血管平滑肌细胞(HASMCs)骨架结构的影响,探讨其可能机制。方法(1)ApoE^(-/-)小鼠48只随机分为AMD组、ID组、ID+AMD组和对照组各12只。AMD组皮下泵注血管紧张素Ⅱ(Ang... 目的观察铁缺乏(ID)对主动脉中层退行性变(AMD)小鼠主动脉壁、人主动脉血管平滑肌细胞(HASMCs)骨架结构的影响,探讨其可能机制。方法(1)ApoE^(-/-)小鼠48只随机分为AMD组、ID组、ID+AMD组和对照组各12只。AMD组皮下泵注血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1μg/(kg·min)连续24 d制备AMD模型,同时饲喂正常铁含量饲料;ID组饲喂低铁含量饲料构建ID模型;ID+AMD组AMD模型制备同AMD组,ID模型制备同ID组;对照组饲喂正常铁含量饲料。造模第4天测量4组小鼠收缩压(SBP);造模第24天处死小鼠,应用血清铁检测试剂盒检测铁含量,采用免疫组织化学SP法检测主动脉转铁蛋白(TF)、转铁蛋白受体1(TFR1)、磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)、细胞分裂周期因子42(Cdc42)、Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)表达。(2)取对数生长期HASMCs分为AngⅡ组(0.1μmol/L AngⅡ)、ID细胞组(20μmol/L去铁胺)、ID+AngⅡ组(0.1μmol/L AngⅡ+20μmol/L去铁胺)和对照细胞组(正常培养基)。处理48 h取4组细胞,采用Western blot法检测TF、TFR1、p-MLC、Cdc42、Rac1蛋白相对表达量。结果(1)造模第4天AMD组、ID+AMD组小鼠SBP[(171.17±7.73)、(168.00±3.41)mmHg]高于ID组[(115.00±2.00)mmHg]和对照组[(105.17±10.57)mmHg](P<0.05),对照组与ID组,AMD组与ID+AMD组SBP比较差异均无统计学意义(P>0.05)。(2)4组小鼠血清铁含量及主动脉TF、TFR1、p-MLC、Cdc42、Rac1表达量比较差异均有统计学意义(P<0.05)。ID组小鼠血清铁含量[(3.67±1.37)μmol/L]及主动脉TF(3.17±0.75)、p-MLC(3.83±1.17)、Cdc42(4.00±1.27)表达量均低于AMD组[(7.67±1.37)μmol/L、8.50±0.55、8.17±2.23、8.83±1.94]和对照组[(9.83±1.72)μmol/L、10.33±1.86、9.83±1.72、9.67±1.75](P<0.05),TFR1(9.67±1.86)及Rac1(6.17±2.04)表达量均高于AMD组(6.00±1.79、3.83±1.84)和对照组(4.50±1.23、2.50±1.05)(P<0.05);AMD组小鼠血清铁含量及主动脉TF、p-MLC、Cdc42表达量均高于ID+AMD组[(3.17±1.60)μmol/L、2.83±0.75、3.67±1.21、3.8 展开更多

关键词 主动脉中层退行性变 铁缺乏 人主动脉平滑肌细胞 细胞骨架 小鼠

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Notch2高表达可使人主动脉平滑肌细胞骨形态发生蛋白4表达增加促进钙化 被引量：4

6

作者 顾秀莲 敬梅 +4 位作者 樊济海 巢胜吾 李博 王玲 凌秋洋 《心血管病学进展》 CAS 2020年第9期962-966,971,共6页

目的观察并验证人主动脉平滑肌细胞(HASMC)Notch2蛋白表达的变化对其细胞钙化的影响,并探讨其机制。方法体外培养HASMC,将其分为两组,分别为正常对照组与诱导钙化组。前者常规培养,后者在常规培养的基础上加用钙化诱导剂β-甘油磷酸(5 m... 目的观察并验证人主动脉平滑肌细胞(HASMC)Notch2蛋白表达的变化对其细胞钙化的影响,并探讨其机制。方法体外培养HASMC,将其分为两组,分别为正常对照组与诱导钙化组。前者常规培养,后者在常规培养的基础上加用钙化诱导剂β-甘油磷酸(5 mmol/L)、抗坏血酸(50μg/mL)和地塞米松(100 nmol/L),两组细胞均培养7 d。另取上述方法诱导钙化的HASMC为钙化对照组,再设钙化抑制组,即在钙化对照组的基础上加入Notch特异性抑制剂γ-内分泌酶抑制剂(50μmol/L),两组细胞均培养7 d。四组均用白介素-6诱导细胞的炎症反应。采用免疫印迹法检测各组细胞内Notch2、磷酸化核转录因子STAT3(p-STAT3)和骨形态发生蛋白4(BMP-4)的蛋白表达水平;酶联免疫法测定各组细胞培养上清液中BMP-4蛋白的含量;逆转录-聚合酶链反应检测诱导钙化组和正常对照组中HASMC Notch2 mRNA的表达;免疫荧光染色法观察钙化对照组与钙化抑制组中HASMC BMP-4蛋白的表达。结果(1)诱导钙化组中HASMC Notch2、p-STAT3和BMP-4蛋白表达水平明显高于正常对照组(P<0.05);诱导钙化组的培养液上清中BMP-4蛋白含量为(66.42±2.89)pg/mL,明显高于正常对照组的(22.35±2.68)pg/mL(P<0.05);诱导钙化组中HASMC Notch2 mRNA的表达明显高于正常对照组(P<0.05)。(2)钙化抑制组中HASMC Notch2、p-STAT3和BMP-4蛋白的表达水平明显低于钙化对照组(P<0.05);钙化抑制组培养液上清中BMP-4蛋白的含量为(22.34±3.82)pg/mL,明显低于钙化对照组的(62.89±3.26)pg/mL(P<0.05)。免疫荧光染色显示钙化抑制组中HASMC BMP-4蛋白表达明显低于钙化对照组。结论钙化的HASMC Notch2蛋白表达增高,促进了BMP-4蛋白表达增加,从而使HASMC发生成骨样改变,使血管发生钙化,这一机制可能与JAK-STAT3的活化有关。 展开更多

关键词 人主动脉平滑肌细胞 NOTCH2 JAK-STAT3 骨形态发生蛋白4

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MiR-425对血管平滑肌细胞增殖迁移的作用及分子机制 被引量：4

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作者 万正英 李双兰 马锐 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2018年第4期327-333,共7页

目的探讨miR-425对人主动脉平滑肌细胞增殖迁移的作用及潜在的分子机制。方法实时定量RT-PCR(qRT-PCR)检测人主动脉平滑肌细胞(human aortic smooth muscle cells, HASMCs)中miR-425的表达水平。转染miR-342inhibitor改变HASMCs中内源性... 目的探讨miR-425对人主动脉平滑肌细胞增殖迁移的作用及潜在的分子机制。方法实时定量RT-PCR(qRT-PCR)检测人主动脉平滑肌细胞(human aortic smooth muscle cells, HASMCs)中miR-425的表达水平。转染miR-342inhibitor改变HASMCs中内源性miR-425的表达,采用CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖及周期的变化,Transwell检测细胞迁移能力;Western blot检测PTEN、PI3K、p-AKT/AKT、MMP-9的蛋白表达水平。结果血管紧张素Ⅱ(angiotensionⅡ,AngⅡ)可时间及剂量依赖性地促进HASMCs中miR-425的表达。转染miR-425 inhibitor可抑制AngⅡ对HASMCs的促增殖作用,并抑制细胞迁移,同时细胞中PI3K、p-AKT/AKT及MMP-9的蛋白水平显著降低,PTEN水平显著升高。结论沉默miR-425可通过调控PTEN/PI3K/AKT信号通路抑制人主动脉平滑肌细胞的增殖及迁移,提示miR-425可作为血管重构的一个潜在诊疗靶点。 展开更多

关键词 miR-425 人主动脉平滑肌细胞 增殖及迁移 PTEN/PI3K/AKT信号通路

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人主动脉平滑肌细胞表型转化的ceRNA网络研究

8

作者 刘丹 任晓晓 +4 位作者 吴佳妮 李之凡 杨彬 吴娜琼 王来元 《中国分子心脏病学杂志》 CAS 2023年第1期5205-5213,共9页

目的基于全转录组测序数据,构建人主动脉平滑肌细胞(human aortic smooth muscle cells,HASMCs)表型转化模型的竞争性内源RNA(competitive endogenous RNA,ceRNA)调控网络,筛选HASMCs表型转化的关键ceRNA调控轴。方法使用血小板源性生... 目的基于全转录组测序数据,构建人主动脉平滑肌细胞(human aortic smooth muscle cells,HASMCs)表型转化模型的竞争性内源RNA(competitive endogenous RNA,ceRNA)调控网络,筛选HASMCs表型转化的关键ceRNA调控轴。方法使用血小板源性生长因子-BB(platelet derived growth factor-BB,PDGF-BB)处理构建HASMCs表型转化模型。定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)验证模型构建成功后进行全转录组测序,筛选出差异表达的信使RNA(messenger RNAs,mRNAs)、微小RNA(microRNAs,miRNAs)以及长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)。对差异表达mRNAs进行基因功能分析和信号通路注释,通过生信分析及数据库预测,构建基于lncRNA-miRNA-mRNA的ceRNA网络。结果HASMCs表型转化模型全转录组测序共筛选出326个差异表达的lncRNAs、34个差异表达的miRNAs、1785个差异表达的mRNAs。差异表达的mRNA涉及TGF-β信号通路、Ras信号通路。ceRNA网络包含4个lncRNA节点、4个miRNA节点和83个mRNA节点,其中由NONHSAT253669.1介导的ceRNA调控轴在HASMCs的表型转化中可能发挥重要调控作用。结论成功绘制HASMCs表型转化的ceRNA网络,筛选关键ceRNA调控轴,有望为HASMCs表型转化异常所致心血管疾病的防治提供新的线索和策略。 展开更多

关键词 人主动脉平滑肌细胞 表型转化 长链非编码RNA 竞争性内源RNA

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p38 MAPK信号通路调控人主动脉平滑肌细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达 被引量：4

9

作者 王晓琳 周元丽 +1 位作者 孙伟 李莉 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2016年第8期12-16,共5页

目的探讨p38 MAPK对人主动脉平滑肌细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达的影响。方法分别使用药理学抑制剂和siRNA干预细胞。药理学抑制剂试验细胞分为:1正常对照组,平滑肌细胞完全培养基正常培养;2 DMSO(p38 MAPK抑制剂溶剂)对照组,0.01%DMSO处理;3... 目的探讨p38 MAPK对人主动脉平滑肌细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达的影响。方法分别使用药理学抑制剂和siRNA干预细胞。药理学抑制剂试验细胞分为:1正常对照组,平滑肌细胞完全培养基正常培养;2 DMSO(p38 MAPK抑制剂溶剂)对照组,0.01%DMSO处理;3 p38 MAPK抑制剂组,0.01%p38 MAPK抑制剂(20 mg/m L)处理。基因沉默试验细胞分为:1静态对照组,平滑肌细胞完全培养基正常培养;2阴性对照siRNA组,M ACSfectin试剂转染阴性对照siRNA 48 h;3 p38 M APK siRNA组,M ACSfectin试剂转染p38 M APK siRNA 48 h。采用qRT-PCR法检测Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA表达;采用Western blotting法检测Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达以及p38 MAPK转染效率;荧光显微镜观察siRNA转染效率。结果与正常对照组相比,DMSO对照组细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达无明显变化(P>0.05),p38 MAPK抑制剂组细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05)。与静态对照组相比,阴性对照siRNA组细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达无明显变化(P>0.05),p38 MAPK siRNA组细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论 p38 MAPK信号通路调控人主动脉平滑肌细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达。 展开更多

关键词 P38 MAPK Ⅰ型胶原 Ⅲ型胶原 人主动脉平滑肌细胞

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白藜芦醇抑制甲状旁腺激素诱导的人主动脉平滑肌细胞凋亡 被引量：3

10

作者 刘英杰 郭维康 +1 位作者 陈欣攀 刘文虎 《临床和实验医学杂志》 2019年第5期454-457,共4页

目的探讨甲状旁腺激素(PTH)对人主动脉平滑肌细胞凋亡的作用,及白藜芦醇(Resveratrol,RES)在其中的作用。方法实验一:体外培养人主动脉平滑肌细胞,用不同浓度甲状旁腺激素(阴性对照组、10^(-6)mol/L、10^(-8)mol/L、10^(-10)mol/L)刺激7... 目的探讨甲状旁腺激素(PTH)对人主动脉平滑肌细胞凋亡的作用,及白藜芦醇(Resveratrol,RES)在其中的作用。方法实验一:体外培养人主动脉平滑肌细胞,用不同浓度甲状旁腺激素(阴性对照组、10^(-6)mol/L、10^(-8)mol/L、10^(-10)mol/L)刺激72 h,用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,寻找可引起细胞凋亡的最适PTH浓度。实验二:用该浓度PTH及不同浓度白藜芦醇(阴性对照组、10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)共刺激人主动脉平滑肌细胞72h,用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。结果实验一:相较于对照组,不同浓度PTH刺激下,各组均产生了明显的细胞凋亡,差异具有统计学意义(P <0. 05)。确定10^(-10)mol/L PTH为可诱导细胞凋亡的较低浓度PTH。实验二:用10^(-10)mol/L PTH及不同浓度白藜芦醇(阴性对照组、10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)共刺激人主动脉平滑肌细胞72h,发现相较于对照组,各浓度白藜芦醇(10、50、100μmol/L)均可以减少细胞凋亡,差异具有统计学意义(P <0. 05)。结论一定浓度的甲状旁腺激素可以诱导人主动脉平滑肌细胞凋亡,白藜芦醇对其有抑制作用。 展开更多

关键词 人主动脉平滑肌细胞 甲状旁腺激素 白藜芦醇 细胞凋亡

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人主动脉硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养的人血管壁细胞生长的作用

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作者 杨国君 张琪 丁金凤 《生物化学杂志》 CSCD 1996年第4期470-475,共6页

通过培养的人主动脉平滑肌细胞（ｈＡＳＭＣ）及脐静脉内皮细胞（ｈＵＶＥＣ），应用３Ｈ－ＴｄＲ参入、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析、逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）、放射免疫分析（ＲＩＡ）、和紫外比色法等技术观察了人主动... 通过培养的人主动脉平滑肌细胞（ｈＡＳＭＣ）及脐静脉内皮细胞（ｈＵＶＥＣ），应用３Ｈ－ＴｄＲ参入、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析、逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）、放射免疫分析（ＲＩＡ）、和紫外比色法等技术观察了人主动脉中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（ＨＳＰＧ）对ｈＡＳＭＣ和ｈＵＶＥＣＤＮＡ合成的作用及对血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）、ＰＤＧＦ受体、转化生长因子β（ＴＧＦ－β）、内皮素－１（ＥＴ－１）或碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达和肾素－血管紧张系统（ＲＡＳ）的影响，结果显示，ＨＳＰＧ明显抑制培养的ｈＡＳＭＣ基础的ＤＮＡ合成（ｃｐｍ值为：１０３８５±３２６３ｖｓ，２５５４１±６４２１，Ｐ＜０．０１）及外源性ＰＤＧＦ诱导的ＤＮＡ合成（ｃｐｍ值为：９８７８±１９４７ｖｓ．１３４８１±４４ｌ０，Ｐ＜０．０５）；抑制ＰＤＧＦＡ链、ＴＧＦ－Ｂｐ和ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达，提高ＰＤＧＦａ和β受体ｍＲＮＡ的表达；显著降低ｈＡＳＭＣ培养液中血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）的浓度和血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）的活性，推测ＨＳＰＧ抑制ＰＤＧＦＡ链、ＴＧＦ－β及ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达，降低ＡＣＥ活性及ＡｎｇⅡ浓度是其抑制ｈＡＳＭＣ增殖的重要机? 展开更多

关键词 动脉粥样硬化 硫酸乙酰肝素 蛋白聚糖 血管细胞

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穹窿主体蛋白对血管平滑肌细胞增殖的影响 被引量：1

12

作者 童星 江斌 +1 位作者 柏惠 陈琪 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期539-543,共5页

目的 :探讨穹窿主体蛋白(major vault protein,MVP)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖的影响。方法:分离培养野生型小鼠VSMCs,用血小板源性生长因子(PDGF-BB)或15%胎牛血清(FBS)刺激VSMCs增殖,Western blot检测... 目的 :探讨穹窿主体蛋白(major vault protein,MVP)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖的影响。方法:分离培养野生型小鼠VSMCs,用血小板源性生长因子(PDGF-BB)或15%胎牛血清(FBS)刺激VSMCs增殖,Western blot检测VSMCs的MVP表达水平,同时检测特异性分化标记物α-SMA和SM22α表达水平。然后用PDGF-BB刺激人主动脉平滑肌细胞(HAo SMCs),检测MVP的表达差异。再分别分离培养野生型小鼠和MVP敲除型小鼠的VSMCs,通过CCK8细胞增殖实验检测两者的增殖能力;同时用si RNA干扰的方法,使HAo SMCs中MVP低表达,检测其增殖能力的变化。结果:用PDGFBB或15%FBS刺激VSMCs后,MVP表达水平呈浓度和时间依赖性下降,α-SMA和SM22α表达水平也相应降低。MVP缺失或低表达情况下,VSMCs的增殖能力均下降。结论:MVP在VSMCs增殖中起了重要作用。 展开更多

关键词 穹窿主体蛋白 小鼠主动脉平滑肌细胞 人主动脉平滑肌细胞 增殖

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比较替米沙坦与缬沙坦对人动脉平滑肌细胞增殖及血管紧张素Ⅱ受体表达的影响 被引量：2

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作者 章岱 王雷 +3 位作者 赵林 南芳 王翠英 李敏 《中国心血管病研究》 CAS 2013年第6期459-462,共4页

目的比较缬沙坦与替米沙坦对离体人主动脉平滑肌细胞（HASMCs）增殖及对血管紧张素受体表达的影响。方法HASMCs复苏、传代后，分别用不同浓度及条件的血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、缬沙坦（Val）、替米沙坦（Tel）、GW9662干预HASMCs，采用CC... 目的比较缬沙坦与替米沙坦对离体人主动脉平滑肌细胞（HASMCs）增殖及对血管紧张素受体表达的影响。方法HASMCs复苏、传代后，分别用不同浓度及条件的血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、缬沙坦（Val）、替米沙坦（Tel）、GW9662干预HASMCs，采用CCK-8检测细胞增殖能力，Westernblot方法检测细胞血管紧张素Ⅱ受体（AT）蛋白表达。结果25μmol／LTel与25μmol／L Val相比可更强地抑制1μmol／LAngⅡ诱导的HASMCs增殖。Tel可抑制无AngⅡ刺激的HASMCs增殖，且呈剂量依赖性，而Val无此作用。25μmol／LTel及Val抑制HASMCs上AT1受体表达相同（8．6％比17．0％，P〉0．05），但Tel促进AT2受体表达作用更强（29．9％比10．5％，P〈0．05）。氧化物酶体增殖体激活受体-γ（PPAR-γ）抑制剂GW9662能抑制吡格列酮对HASMCs抑制增殖的作用，但不能影响Tel对HASMCs抑制增殖作用。结论替米沙坦比缬沙坦具有更强的抑制HASMCs增殖及促进AT2受体表达上调的作用。 展开更多

关键词 人主动脉平滑肌 血管紧张素Ⅱ 缬沙坦 替米沙坦 氧化物酶体增殖体激活受体-γ

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miR-181a-5p对人主动脉平滑肌细胞成骨样分化的影响 被引量：1

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作者 张帆 程乃萱 +3 位作者 韩迎春 张海波 杜杰 张聪聪 《中国动脉硬化杂志》 CAS 2021年第1期24-29,共6页

目的观察miR-181a-5p对动脉钙化细胞模型的影响,探讨其可能的作用机制。方法培养人主动脉平滑肌细胞(HASMC),经成骨样分化诱导后使用茜红素染色检测细胞成骨样分化的程度,采用real-time PCR检测成骨样分化标志基因骨钙素(OCN)、Runt相... 目的观察miR-181a-5p对动脉钙化细胞模型的影响,探讨其可能的作用机制。方法培养人主动脉平滑肌细胞(HASMC),经成骨样分化诱导后使用茜红素染色检测细胞成骨样分化的程度,采用real-time PCR检测成骨样分化标志基因骨钙素(OCN)、Runt相关转录因子2(RUNX2)和碱性磷酸酶(ALP)的mRNA表达变化,以及miR-181a-5p的表达变化,分析miR-181a-5p与成骨样分化相关基因表达水平的相关性。miR-181a-5p mimic转染用于上调HASMC内miR-181a-5p的表达。使用TargetScan数据库预测miR-181a-5p发挥作用的靶基因。使用real-time PCR检测miR-181a-5p过表达后对靶基因表达的影响。结果HASMC经诱导成骨样分化后,茜红素染色阳性区域和细胞内钙含量逐渐增加,细胞中成骨样分化相关基因OCN、RUNX2和ALP的表达随时间延长逐渐升高,而miR-181a-5p的表达逐渐下降(P<0.05)。相关性分析显示miR-181a-5p的表达与OCN、RUNX2和ALP的表达均呈负相关(P<0.05)。使用miR-181a-5p mimic转染HASMC后细胞内miR-181a-5p的表达高于对照mimic组,细胞内钙含量及RUNX2和OCN的表达均低于对照mimic组(P<0.05)。TargetScan数据库预测结果显示miR-181a-5p可与促成骨样分化基因丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)和丝裂原活化蛋白激酶8(MAPK8)的3′UTR区结合,miR-181a-5p mimic组HASMC中靶基因MAPK1和MAPK8的表达显著下调(P<0.05)。结论血管平滑肌细胞成骨样分化时下降的miR-181a-5p可抑制成骨样分化,其可能的机制是抑制促钙化信号转导分子MAPK1和MAPK8的表达。 展开更多

关键词 人主动脉平滑肌细胞 成骨样分化 miR-181a-5p 血管钙化

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他汀类药物对高磷介导血管平滑肌细胞成骨细胞转分化和钙化的影响 被引量：1

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作者 郑曼韬 薛骏 +2 位作者 游怀舟 包福祥 周士铿 《中国血液净化》 2008年第2期81-84,共4页

目的探讨他汀类药物对高磷介导血管平滑肌细胞成骨细胞转分化和钙化的影响。方法将体外培养的人主动脉平滑肌细胞(HASMC)分成对照组(常规Medium 231培养基)、正常磷浓度组(Pi1.5mmol/L)和高磷组(Pi2.5mmmol/L)。Real-time PCR测定干预72... 目的探讨他汀类药物对高磷介导血管平滑肌细胞成骨细胞转分化和钙化的影响。方法将体外培养的人主动脉平滑肌细胞(HASMC)分成对照组(常规Medium 231培养基)、正常磷浓度组(Pi1.5mmol/L)和高磷组(Pi2.5mmmol/L)。Real-time PCR测定干预72h后细胞的核结合因子α(cbf α)和骨桥蛋白(OPN)水平,测定干预14d后上清液的钙浓度。HASMC在浓度为0.1umol/L的阿托伐他汀和2.5mmol/L的Pi培养基中共同孵育14d后,检测HASMC的钙含量。结果培养72h后,cbf-α在Pi 2.5mmol/L组的mRNA表达明显高于对照组[(50.02±0.38)vs(1.02±0.35),P<0.001],而Pi 1.5mmol/L组与对照组无明显差别[(1.07±0.15)vs(1.02±0.35),P>0.05]。Pi 2.5mmol/L组的OPN表达亦明显高于对照组[(14.62±0.35)vs(1.05±0.16)],而Pi 1.5mmol/L组与对照组无明显差别[(0.99±0.10)vs(1.05±0.16)]。高磷组钙含量明显高于对照组[(115±2.43)vs(4.08±0.32),P<0.001],而Pi 1.5mmol/L组与对照组相比无明显变化[(5.01±0.21)vs(4.08±0.32),P>0.05]。阿托伐他汀能使高磷诱导HASMC的钙沉积明显减少[(115±2.43)vs(58±2.65)ug/mg蛋白,P<0.01]。结论高磷作用能明显增加HASMC的cbfα-1的表达,明显增加HASMC成骨细胞标志性蛋白OPN的表达,使HASMC向成骨细胞转分化,进而促进HASMC钙化;阿托伐他汀能抑制高磷诱导的HASMC的钙化作用。 展开更多

关键词 高磷 阿托伐他汀 人主动脉平滑肌细胞 成骨细胞 转分化 钙化

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klotho通过Wnt/β-catenin通路抑制高磷诱导的人主动脉平滑肌钙化 被引量：1

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作者 刘海军 解修花 +2 位作者 杨秀芹 王莹 李延国 《山东医学高等专科学校学报》 2020年第3期161-164,F0002,共5页

目的探讨klotho对高磷诱导的HASMCs钙化的作用机制。方法建立HASMCs钙化模型,将其分4组:正常磷浓度组(I)、高磷浓度培养组(Ⅱ)、正常磷浓度+klotho基因转染组(Ⅲ)、高磷浓度+klotho基因转染组(Ⅳ)。培养9 d后用茜素红染色观察细胞钙化程... 目的探讨klotho对高磷诱导的HASMCs钙化的作用机制。方法建立HASMCs钙化模型,将其分4组:正常磷浓度组(I)、高磷浓度培养组(Ⅱ)、正常磷浓度+klotho基因转染组(Ⅲ)、高磷浓度+klotho基因转染组(Ⅳ)。培养9 d后用茜素红染色观察细胞钙化程度,测定细胞外基质钙含量。检测各组细胞ALP、OPG、OPN、Runx2、β-catenin等蛋白的表达。结果Ⅱ组钙盐沉积明显,细胞外基质钙含量、ALP、Runx2及β-catenin蛋白表达明显高于其他各组(P<0.05),OPG及OPN蛋白表达明显低于其他各组(P<0.05)。结论klotho通过下调Wnt/β-catenin信号通路可抑制高磷诱导的HASMCs钙化。 展开更多

关键词 克洛索 血管钙化 人主动脉平滑肌细胞

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木犀草素通过调控内质网应激抑制平滑肌细胞的迁移

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作者 张黎 王清岑 +2 位作者 周罗慧 杨娟 王红 《昆明医科大学学报》 CAS 2022年第5期12-17,共6页

目的 研究木犀草素对人主动脉平滑肌细胞迁移的调控作用,并探讨其调控作用是否通过激活内质网应激途径实现。方法 体外培养人主动脉平滑肌细胞,分为空白对照组(不做任何处理,BC)、阴性对照组(加等量无关试剂,NC)、木犀草素组(25μmol/L... 目的 研究木犀草素对人主动脉平滑肌细胞迁移的调控作用,并探讨其调控作用是否通过激活内质网应激途径实现。方法 体外培养人主动脉平滑肌细胞,分为空白对照组(不做任何处理,BC)、阴性对照组(加等量无关试剂,NC)、木犀草素组(25μmol/L处理)、木犀草素+4-苯基丁酸钠共处理组(4-苯基丁酸钠预处理后加入等量木犀草素),于12h小时后细胞划痕实验法检测人主动脉平滑肌细胞迁移情况,Western blot和RTqPCR检测BIP、CHOP蛋白及RNA表达水平。结果 (1)与空白对照组和阴性对照组相比,木犀草素组细胞迁移水平明显降低,BIP、CHOP表达水平明显增高;(2)与木犀草素组相比,木犀草素+4-苯基丁酸钠共处理组细胞迁移水平增强,同时BIP、CHOP表达水平降低。结论 木犀草素通过上调内质网应激抑制人主动脉平滑肌细胞的迁移。 展开更多

关键词 木犀草素 内质网应激 人主动脉平滑肌细胞 迁移

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人主动脉夹层组织Myc associated factor X的表达及其生物学功能

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作者 谈梦伟 廖威麟 +3 位作者 唐昊 陆方林 韩林 徐志云 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期943-946,共4页

目的观察人主动脉夹层组织中Myc associated factor X(MAX)的表达情况,并探讨其相关生物学功能。方法采用荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹检测MAX在15例主动脉夹层组织中的表达情况。通过腺病毒载体转染人主动脉平滑肌细胞使其过表达MAX,采... 目的观察人主动脉夹层组织中Myc associated factor X(MAX)的表达情况,并探讨其相关生物学功能。方法采用荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹检测MAX在15例主动脉夹层组织中的表达情况。通过腺病毒载体转染人主动脉平滑肌细胞使其过表达MAX,采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)、流式细胞仪等技术明确过表达MAX对主动脉平滑肌细胞增殖、凋亡的影响。结果夹层主动脉组织中MAX的mRNA和蛋白表达水平均高于正常主动脉组织。过表达MAX可以抑制主动脉平滑肌细胞增殖,并促进其凋亡(P<0.05)。结论 MAX可能通过调控主动脉平滑肌细胞增殖、凋亡诱导其丢失,进而参与主动脉夹层的发生、发展。 展开更多

关键词 主动脉瘤 夹层动脉瘤 Myc基因相关X因子 人主动脉平滑肌细胞 细胞增殖 细胞凋亡

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红景天苷抑制动脉平滑肌细胞增殖、迁移、分泌表型的分子机制研究

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作者 张永杰 闫志刚 +2 位作者 林飞 刘慧兵 赵国安 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期3356-3364,共9页

探讨红景天苷(salidroside, SAL)抗血小板源性生长因子-BB(platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB)诱导人主动脉平滑肌细胞(human aortic smooth muscle cells, HASMC)表型转化,并对其药理机制进行探析。应用乳酸脱氢酶释放实验筛... 探讨红景天苷(salidroside, SAL)抗血小板源性生长因子-BB(platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB)诱导人主动脉平滑肌细胞(human aortic smooth muscle cells, HASMC)表型转化,并对其药理机制进行探析。应用乳酸脱氢酶释放实验筛选SAL的安全有效浓度。应用PDGF-BB诱导HASMC建立细胞表型转化体外模型。分为对照组、模型组、SAL组。应用CCK-8法检测细胞增殖率,Transwell检测细胞迁移,荧光标记的鬼笔环肽对F-肌动蛋白(fibrous actin, F-actin)染色观察细胞骨架结构,Western blot检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、迁移相关蛋白基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein 9,MMP-9)、纤维粘连蛋白(Fibronectin)、表型转换标志物α-肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、骨桥蛋白(osteopontin, OPN)。由结果可知造模使HASMC增殖明显、迁移增加并促使HASMC由收缩表型转变成分泌表型,使其细胞骨架结构排列紊乱。加入SAL后HASMC增殖、迁移能力减弱,“收缩表型标志物”α-SMA表达增加,“分泌表型标志物”OPN表达减少、细胞骨架结构排列紊乱改善。机制研究细胞信号相关通路Akt、mTOR,以及Akt/mTOR信号通路上下游相关蛋白磷酸酶和张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homologue, PTEN)、血小板源性生长因子受体β(platelet-derived growth factor receptor β,PDGFR-β)及缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的表达。模型组HASMC信号通路Akt、mTOR蛋白磷酸增加,PTEN、HIF-1α、PDGFR-β相对表达量显著增高。SAL组磷酸化Akt、mTOR表达减少,PTEN、PDGFR-β、HIF-1α蛋白的表达降低。综上所述,SAL对PDGF-BB诱导的HASMC具有保护作用,可能与HASMC的PDGFR-β/Akt/mTOR/HIF-1α信号通路相关。 展开更多

关键词 红景天苷 血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB) 人主动脉血管平滑肌细胞 细胞表型转化 支架内再狭窄

原文传递

油酸调节人血管平滑肌细胞TLR4的增殖活性及炎性因子的表达 被引量：6

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作者 杨海静 陈卫 +3 位作者 权金星 李伟华 刘静 邱明才 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2013年第1期44-48,共5页

目的探讨油酸对人主动脉血管平滑肌细胞TLR4及炎性因子表达的调节作用。方法 MTT法检测细胞增殖活性;实时荧光定量PCR法检测TLR4及炎性因子mRNA的表达;Western blot法检测细胞TLR4蛋白表达,ELISA法检测炎性因子蛋白含量。结果油酸促进... 目的探讨油酸对人主动脉血管平滑肌细胞TLR4及炎性因子表达的调节作用。方法 MTT法检测细胞增殖活性;实时荧光定量PCR法检测TLR4及炎性因子mRNA的表达;Western blot法检测细胞TLR4蛋白表达,ELISA法检测炎性因子蛋白含量。结果油酸促进人主动脉血管平滑肌细胞增殖活性,增加油酸浓度,抑制细胞增殖。油酸上调TLR4、IL-6、IL-8和MCP-1 mRNA表达最大幅度为6.5、7.4、7.4和7.1倍。IL-6、IL-8和MCP-1蛋白表达最大上调幅度为2.16、1.93和2.06倍。200μmol/L组TLR4蛋白表达的吸光度值为(1.70±0.62),与对照组(0.29±0.22)比较P<0.05。LPS组TLR4、IL-6、IL-8和MCP-1的表达明显增加(P<0.05)。结论油酸促进人主动脉血管平滑肌细胞TLR4及炎性因子mRNA及蛋白表达。 展开更多

关键词 人主动脉血管平滑肌细胞 油酸 果蝇样受体4 细胞因子 基因表达

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