不同方法提取酿酒酵母总RNA的比较 被引量：2

1

作者 安佳星 伍时华 +4 位作者 曾令杰 黄锦翔 丰丕雪 梁天林 易弋 《中国酿造》 CAS 北大核心 2021年第11期82-86,共5页

选择试剂盒法、总核糖核酸(RNA)提取试剂(Trizol)法、热酚法3种方法提取酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)总RNA,根据提取效果,选用酵母破壁酶辅助破壁并进行不同菌体量优化,通过对总RNA进行浓度和纯度的分析,比较不同方法对酿酒酵母... 选择试剂盒法、总核糖核酸(RNA)提取试剂(Trizol)法、热酚法3种方法提取酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)总RNA,根据提取效果,选用酵母破壁酶辅助破壁并进行不同菌体量优化,通过对总RNA进行浓度和纯度的分析,比较不同方法对酿酒酵母总RNA提取的影响。结果表明,试剂盒法和Trizol法不适合提取酿酒酵母总RNA,但通过添加酵母破壁酶,可以提高提取效果。热酚法适合提取酿酒酵母总RNA,但添加酵母破壁酶反而会导致RNA降解。因此,使用热酚法提取酿酒酵母总RNA是较为有效且简便的方法。 展开更多

关键词 试剂盒法 TRIZOL法 热酚法 酵母破壁酶 酿酒酵母 RNA提取

下载PDF 职称材料

一种改良的热酚法高效快速提取酿酒酵母总RNA 被引量：3

2

作者 李维维 顿宝庆 +1 位作者 王智 曲娟娟 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期163-166,共4页

以酿酒酵母单倍体CE N.PK1与双倍体CEN.PK2为研究对象,利用改良热酚法,快速高效地提取酿酒酵母总RNA。结果显示应用该方法提取的酿酒酵母CEN.PK1和CEN.PK2的总RNA经分光光度计测定浓度为7.63μg/μL和3.77μg/μL,OD_(260/280)分别为2.1... 以酿酒酵母单倍体CE N.PK1与双倍体CEN.PK2为研究对象,利用改良热酚法,快速高效地提取酿酒酵母总RNA。结果显示应用该方法提取的酿酒酵母CEN.PK1和CEN.PK2的总RNA经分光光度计测定浓度为7.63μg/μL和3.77μg/μL,OD_(260/280)分别为2.10和2.04,OD_(260/230)分别为2.32和2.24,浓度与纯度均能达到后续分子生物学试验的要求。经PCR与荧光定量PCR检测,该方法提取的RNA无DNA污染,可作为PCR反应的模板,与Trizol方法提取RNA相比,该方法不仅浓度高并且可将提取时间由常规的2.5 h缩短为1.5 h,具有操作简单、高质、高效等优点,经多次试验证明,此方法同样适用于酿酒酵母总RNA的大量提取试验,有较高的实用价值。 展开更多

关键词 RNA分离 酿酒酵母 热酚法 CDNA 荧光定量PCR

下载PDF 职称材料

十字花科黑腐病菌RNA提取与质量鉴定 被引量：2

3

作者 曹金如 廖洁 +3 位作者 廖青 梁晓夏 何勇强 唐纪良 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 2008年第4期456-460,476,共6页

十字花科黑腐病菌,学名野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Xanthomonas campestris pv. campestris,简称Xcc),是一类γ-变形菌纲的革兰氏阴性细菌,能在世界范围内侵染十字花科植物,给农业生产造成重大损失。RNA是分子生物学的主要研究对象之... 十字花科黑腐病菌,学名野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Xanthomonas campestris pv. campestris,简称Xcc),是一类γ-变形菌纲的革兰氏阴性细菌,能在世界范围内侵染十字花科植物,给农业生产造成重大损失。RNA是分子生物学的主要研究对象之一,提取高质量的RNA是研究十字花科黑腐病菌基因表达调控机理的基础。由于Xcc能产生大量胞外多糖及黄单胞色素,且细菌RNA半衰期较短,目前尚缺少一种大量提取Xcc高质量RNA的有效方法。该研究在参考多种RNA提取方法的基础上,建立了一种简单、有效的适合十字花科黑腐病菌RNA的提取方法。得到的RNA样品经过紫外分光光度法和甲醛变性凝胶电泳检测,证实为完整、均一的总RNA,达到了表达谱分析及cDNA文库构建的要求。 展开更多

关键词 十字花科黑腐病菌 总RNA提取 热酸性酚法

下载PDF 职称材料

棉花幼苗根总RNA提取的改进热酚法 被引量：29

4

作者 王友华 卢孟柱 段留生 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期723-726,共4页

获得高质量的植物总RNA比较困难,RNA的提取方法会因植物材料的不同而又有较大差异.棉花幼根含有大量多酚、多糖、单宁和其它多种次生代谢物,因此RNA提取难度较大.本文报道了棉花根样的高效获取方法和经研究改进的棉根RNA热酚提取法,该... 获得高质量的植物总RNA比较困难,RNA的提取方法会因植物材料的不同而又有较大差异.棉花幼根含有大量多酚、多糖、单宁和其它多种次生代谢物,因此RNA提取难度较大.本文报道了棉花根样的高效获取方法和经研究改进的棉根RNA热酚提取法,该法可获得高质量棉根总RNA,并能成功进行反转录,制备cDNA. 展开更多

关键词 棉花 根 RNA提取 热酚法 改进

下载PDF 职称材料

3种方法提取大肠杆菌E.coli脂多糖的比较 被引量：12

5

作者 康洁 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2010年第21期12-15,共4页

寻找大肠杆菌E.coli脂多糖的最佳提取方法。分别用改良热酚法、超声波处理法、煮沸法从大肠杆菌细胞壁中提取脂多糖,经纯化后分别在721分光光度仪上测其吸光值;再用3种方法提取的脂多糖分别免疫草鱼,计数法测受试草鱼血液中白细胞的数量... 寻找大肠杆菌E.coli脂多糖的最佳提取方法。分别用改良热酚法、超声波处理法、煮沸法从大肠杆菌细胞壁中提取脂多糖,经纯化后分别在721分光光度仪上测其吸光值;再用3种方法提取的脂多糖分别免疫草鱼,计数法测受试草鱼血液中白细胞的数量,愈创木酚法测受试鱼不同组织中过氧化氢酶的活力(用OD值表示)。改良热酚法、超声波处理法、煮沸法提取的脂多糖在稀释15倍时,其吸光值分别是1.973、1.003和1.153;改良热酚法、超声波处理法、煮沸法提取的脂多糖在稀释15倍时,免疫草鱼测得受试鱼的白细胞数量分别为159个/μL、160个/μL和135个/μL,测得受试鱼血液中的过氧化氢酶活力分别是0.09、0.083、0.078,测得脾脏中的过氧化氢酶活力分别是0.083、0.078、0.06。改良热酚法提取的大肠杆菌脂多糖浓度高、免疫活性强,是相对比较好的一种提取方法。 展开更多

关键词 脂多糖 热酚提取法 超声波提取法 煮沸提取法 过氧化氢酶

下载PDF 职称材料

南方红豆杉不同组织总RNA提取方法研究 被引量：8

6

作者 陶倩 范慧艳 +3 位作者 张水利 陈如兵 楼柯浪 张春椿 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期3336-3341,共6页

目的:从南方红豆杉不同组织中提取高质量的总RNA。方法:以南方红豆杉幼叶、嫩茎和种子为材料,采用Trizol法、CTAB法、热酚法、改良热酚法和天根RNAprep Pure多糖多酚植物总RNA提取试剂盒法5种方法进行比较分析。结果:Trizol法基本未提... 目的:从南方红豆杉不同组织中提取高质量的总RNA。方法:以南方红豆杉幼叶、嫩茎和种子为材料,采用Trizol法、CTAB法、热酚法、改良热酚法和天根RNAprep Pure多糖多酚植物总RNA提取试剂盒法5种方法进行比较分析。结果:Trizol法基本未提取到南方红豆杉不同组织的RNA;CTAB法提取的RNA浓度较高,但OD_(260)/OD_(280)大于2.1,RNA降解严重;热酚法提取的RNA浓度较高,OD_(260)/OD_(280)均小于1.8,蛋白质和酚类物质等残留严重,质量较低;改良热酚法和试剂盒法28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA条带清晰,完整性好,OD_(260)/OD_(280)均在1.8~2.1范围内,纯度高。结论:Trizol法、CTAB法和热酚法均不适用于南方红豆杉总RNA提取,而改良热酚法和试剂盒法可提取到质量较好的南方红豆杉总RNA。 展开更多

关键词 南方红豆杉 总RNA提取 改良热酚法 试剂盒法

原文传递

肠出血性大肠杆菌O157∶H7脂多糖抗原的提取鉴定及间接ELISA法的建立 被引量：8

7

作者 刘红亮 陈学忠 +6 位作者 李克生 杜惠芬 陈应泰 连晓雯 鲁学萍 袁明 叶文华 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期637-640,644,共5页

目的提取并纯化具有强免疫反应性和高特异性的肠出血性大肠杆菌O157∶H7(E.coliO157∶H7)脂多糖(LPS)抗原,并研究其在E.coliO157∶H7 LPS抗体检测中的应用。方法应用热酚水法提取E.coliO157∶H7 LPS抗原,同时收集水相和酚相LPS,并对其... 目的提取并纯化具有强免疫反应性和高特异性的肠出血性大肠杆菌O157∶H7(E.coliO157∶H7)脂多糖(LPS)抗原,并研究其在E.coliO157∶H7 LPS抗体检测中的应用。方法应用热酚水法提取E.coliO157∶H7 LPS抗原,同时收集水相和酚相LPS,并对其产率、纯度及免疫反应性进行分析比较,用酸解法制备O-特异性多糖(O-SP),并以不同的LPS为包被抗原,建立间接ELISA法检测E.coliO157∶H7 LPS抗体。结果大分子量的E.coliO157∶H7 LPS优先溶于酚相,而水相中含有更多的小分子量LPS,与水相LPS相比酚相LPS具有更高的免疫反应性和纯度,酚相LPS经酸解去脂得到的O-SP具有更高的反应特异性。结论酚相LPS和O-SP都可用于E.coliO157∶H7 LPS抗体的ELISA检测,O-SP具有更高的特异性,是检测E.coliO157∶H7 LPS特异性抗体的理想材料。 展开更多

关键词 大肠杆菌O157∶H7 热酚水法 脂多糖 O-SP 间接ELISA

下载PDF 职称材料

丙型副伤寒沙门氏菌脂多糖提取纯化及活性分析 被引量：6

8

作者 杨成兰 罗薇 +1 位作者 刘内生 杨阳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第4期75-78,共4页

为了提取、纯化天鹅源丙型副伤寒沙门氏菌脂多糖（LPS）并检测其活性，试验通过热酚水法提取丙型副伤寒沙门氏菌LPS，采用DNaseI、RNaseA和蛋白酶K及醇沉法纯化LPS，测定LPS提取物中多糖、蛋白及核酸的含量，鲎试剂检测凝集活性，显色... 为了提取、纯化天鹅源丙型副伤寒沙门氏菌脂多糖（LPS）并检测其活性，试验通过热酚水法提取丙型副伤寒沙门氏菌LPS，采用DNaseI、RNaseA和蛋白酶K及醇沉法纯化LPS，测定LPS提取物中多糖、蛋白及核酸的含量，鲎试剂检测凝集活性，显色基质法测定其活性。结果显示，纯化的丙型副伤寒沙门氏菌LPS平均产率为1．48％，多糖含量为3．84％，蛋白含量为1．49％，核酸含量为5．45％，且核酸片段低于100bp，SDS-PAGE电泳和银染结果显示条带主要集中在10～15ku范围内，与2EU／mL鲎试剂的最小凝集浓度是10．99ng／mL，显色基质法测定其活性为9．82×10^5EU／mg。该试验提取、纯化的丙型副伤寒沙门氏菌LPS纯度较高，生物活性良好。 展开更多

关键词 脂多糖 丙型副伤寒沙门氏菌 热酚水法 鲎试剂 显色基质法

下载PDF 职称材料

副猪嗜血杆菌SC096株荚膜多糖及其抗血清的制备 被引量：4

9

作者 周琪 贺现辉 +2 位作者 杜雅萍 樊惠英 廖明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第12期81-84,共4页

为获得副猪嗜血杆菌荚膜多糖及其抗血清,本试验采用热酚法提取副猪嗜血杆菌SC096株荚膜多糖,并进行SDS-PAGE及银染检测,然后用荚膜多糖制备的油乳疫苗免疫家兔制备抗血清,并进行琼脂扩散试验及间接血凝试验检测。试验结果显示,热酚法可... 为获得副猪嗜血杆菌荚膜多糖及其抗血清,本试验采用热酚法提取副猪嗜血杆菌SC096株荚膜多糖,并进行SDS-PAGE及银染检测,然后用荚膜多糖制备的油乳疫苗免疫家兔制备抗血清,并进行琼脂扩散试验及间接血凝试验检测。试验结果显示,热酚法可制备高浓度的荚膜多糖;SDS-PAGE电泳及银染结果显示条带呈弥散性分布,荚膜多糖分子质量55ku左右;琼脂扩散试验结果呈阳性;间接血凝试验中红细胞发生高达10孔滴度的凝集现象。副猪嗜血杆菌SC096株荚膜多糖的提取及其抗血清的制备,为其他含荚膜的细菌抗血清的制备提供了方法和理论依据,也为细菌荚膜多糖抗原性及其疫苗研究奠定了基础。 展开更多

关键词 副猪嗜血杆菌 荚膜多糖 热酚法 抗血清

下载PDF 职称材料

一种快速大量提取禾谷类作物幼苗期总RNA的方法 被引量：3

10

作者 刘颖慧 王天宇 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期226-228,240,共4页

为探索一种快速、大量提取禾谷类作物总RNA的方法,利用改良的热酚法提取禾谷类作物(玉米、水稻和小麦)幼苗期不同组织的总RNA,该方法在2.5 mL的离心管中进行,在提取缓冲液中增加了巯基乙醇,对传统的操作步骤进行了优化。提取的RNA质量较... 为探索一种快速、大量提取禾谷类作物总RNA的方法,利用改良的热酚法提取禾谷类作物(玉米、水稻和小麦)幼苗期不同组织的总RNA,该方法在2.5 mL的离心管中进行,在提取缓冲液中增加了巯基乙醇,对传统的操作步骤进行了优化。提取的RNA质量较高,纯度检测表明RNA样品OD260/OD280在1.8-2.1之间,含量约为10μg/μL。RT-PCR和Northern杂交结果表明RNA可以满足进一步分子操作的需要。 展开更多

关键词 禾谷类作物 总RNA提取 热酚法

下载PDF 职称材料

一种用于黄曲霉高质量总RNA提取方法与应用 被引量：2

11

作者 林剑青 王成成 +2 位作者 肖春华 陈国华 贺竹梅 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期107-111,共5页

不断发展的研究技术对黄曲霉RNA的提取质量提出更高的要求,而真菌的细胞壁结构及其内源性RNase活性常是达到这一目标的主要障碍。以黄曲霉菌丝为材料,探讨了采用TES热酚法获得高质量总RNA的方法,并通过RT-PCR(反转录聚合酶链式反应)和RN... 不断发展的研究技术对黄曲霉RNA的提取质量提出更高的要求,而真菌的细胞壁结构及其内源性RNase活性常是达到这一目标的主要障碍。以黄曲霉菌丝为材料,探讨了采用TES热酚法获得高质量总RNA的方法,并通过RT-PCR(反转录聚合酶链式反应)和RNA-Sequencing(转录组测序)对获得的RNA进行了质量验证。结果显示,TES热酚法不但所用试剂价格低廉,该法所提取的RNA质量较高,其浓度、纯度和完整性均可满足RT-PCR、转录组测序的文库构建和高通量测序等对RNA要求较高的分子生物学实验。 展开更多

关键词 黄曲霉 RNA提取 TES热酚法 RT—PCR 转录组测序

下载PDF 职称材料

白茶与茶树非绿色器官的总RNA提取 被引量：1

12

作者 杜颖颖 梁月荣 +1 位作者 张广辉 陆建良 《茶叶》 2007年第1期15-18,共4页

常规TRIzol法适用于一般茶树品种绿色叶片和芽的总RNA提取,但对于白茶品种芽叶和茶树非绿色组织的多糖和其它次生代谢物质含量高,常规TRIzol法提取总RNA存在一定困难。本文尝试利用改良热酚法提取白茶和非绿色组织的总RNA。结果表明,该... 常规TRIzol法适用于一般茶树品种绿色叶片和芽的总RNA提取,但对于白茶品种芽叶和茶树非绿色组织的多糖和其它次生代谢物质含量高,常规TRIzol法提取总RNA存在一定困难。本文尝试利用改良热酚法提取白茶和非绿色组织的总RNA。结果表明,该法对于白茶、胚根和胚芽总RNA提取效果良好,可以用于cDNA的制备和RT-PCR反应的研究。 展开更多

关键词 茶树 改良热酚法 总RNA提取 白茶

下载PDF 职称材料

改良盐酸胍法提取水稻纹枯病菌RNA的效果分析 被引量：1

13

作者 冯典兴 李平 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期86-88,共3页

为了选出一种适合水稻纹枯病菌RNA的提取方法,比较了改良的盐酸胍法同热酚法、Trizol法提取水稻纹枯病菌RNA的效果。结果表明:3种方法中,改良的盐酸胍法和Trizol法可以提取到高质量的RNA,热酚法的提取效果不理想。改良的盐酸胍法提取的... 为了选出一种适合水稻纹枯病菌RNA的提取方法,比较了改良的盐酸胍法同热酚法、Trizol法提取水稻纹枯病菌RNA的效果。结果表明:3种方法中,改良的盐酸胍法和Trizol法可以提取到高质量的RNA,热酚法的提取效果不理想。改良的盐酸胍法提取的RNA进行mRNA差异显示的结果表明,没有多糖对后继反应的干扰,是一种经济有效的水稻纹枯病菌RNA的提取方法。用该法提取RNA,可以满足分子克隆与基因表达分析等分子生物学后继试验。 展开更多

关键词 RNA 提取方法 水稻纹枯病菌 TRIZOL 盐酸胍法 热酚法

下载PDF 职称材料

多花黄精不同组织总RNA提取方法的比较和改良 被引量：1

14

作者 张颖 罗晓朦 +4 位作者 罗兴菊 张水利 汪红 张春椿 范慧艳 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2021年第12期3990-3998,共9页

分离提取出高质量的RNA是研究多花黄精基因表达、调控与基因工程的基础。为了筛选多花黄精不同组织总RNA最佳提取方法,本研究以多花黄精根茎、茎、叶和花为材料,应用隶属函数法对Trizol法、CTAB-异丙醇法、植物总RNA提取试剂盒、CTAB-L... 分离提取出高质量的RNA是研究多花黄精基因表达、调控与基因工程的基础。为了筛选多花黄精不同组织总RNA最佳提取方法,本研究以多花黄精根茎、茎、叶和花为材料,应用隶属函数法对Trizol法、CTAB-异丙醇法、植物总RNA提取试剂盒、CTAB-LiCl法、热酚法和改良热酚法6种方法不同的提取结果进行了浓度和质量的综合比较。结果表明,6种RNA提取方法中改良热酚法的效果最理想,提取多花黄精不同组织的RNA均能得到完整清晰的RNA条带,RNA的OD_(260)/OD_(280)和OD_(260)/OD_(230)值均在1.8~2.1之间,提取浓度在77.16~185.72μg/g之间。本研究对提取高质量的多花黄精总RNA具有一定的参考价值。 展开更多

关键词 多花黄精(Polygonatum cyrtonema Hua.) RNA提取 改良热酚法 隶属函数法

原文传递

第七批细菌内毒素国家标准品原料制备方法的研究 被引量：1

15

作者 于婷 蔡彤 +2 位作者 张国来 高华 李波 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期382-385,共4页

目的进行第七批细菌内毒素国家标准品原料制备方法的研究。方法采用4种方法制备内毒素,对得到的内毒素原料进行理化分析后,选取其中最好的制备方法,再采用正交法对其实验条件进行优化。结果最终方法确定为:复苏、培养和收获大肠杆菌;热... 目的进行第七批细菌内毒素国家标准品原料制备方法的研究。方法采用4种方法制备内毒素,对得到的内毒素原料进行理化分析后,选取其中最好的制备方法,再采用正交法对其实验条件进行优化。结果最终方法确定为:复苏、培养和收获大肠杆菌;热酚水法粗提;超速离心(4℃,105000×g,4h)纯化;冻干得到原料。结论确立了第七批细菌内毒素国家标准品原料的制备方法。 展开更多

关键词 内毒素 细菌内毒素国家标准品 热酚水法

原文传递

猪痢疾密螺旋体水相抗原的提取及鉴定

16

作者 程国富 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第1期76-79,共4页

本试验应用热水酚法提取了猪痢疾密螺旋体菌壁的水相抗原，并用琼扩法、火箭电泳法以及被动血凝法测定了该抗原的特异性。结果表明，该抗原能特异性地与兔抗猪痢疾密螺旋体的抗血清和单克隆抗体６Ｈ结合，而与抗非致病性密螺旋体抗血清... 本试验应用热水酚法提取了猪痢疾密螺旋体菌壁的水相抗原，并用琼扩法、火箭电泳法以及被动血凝法测定了该抗原的特异性。结果表明，该抗原能特异性地与兔抗猪痢疾密螺旋体的抗血清和单克隆抗体６Ｈ结合，而与抗非致病性密螺旋体抗血清不发生反应。 展开更多

关键词 水相抗原 猪病 痢疾 密螺旋体

下载PDF 职称材料

改良热酚水法制备大肠杆菌O157:H7脂多糖抗原的研究 被引量：19

17

作者 宋宏新 刘晓阳 李宏 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第10期273-275,共3页

采用热酚水法提取肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7的脂多糖(LPS),经浓缩酶解,离心分离得纯化LPS,酸解制得O-特异性侧链(O-PS),能有效去除核酸及杂蛋白,抗原具有鲎试剂凝集活性及对产蛋鸡有较强的免疫原性,建立了一种改良热酚水法提取制备... 采用热酚水法提取肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7的脂多糖(LPS),经浓缩酶解,离心分离得纯化LPS,酸解制得O-特异性侧链(O-PS),能有效去除核酸及杂蛋白,抗原具有鲎试剂凝集活性及对产蛋鸡有较强的免疫原性,建立了一种改良热酚水法提取制备O157:H7特异性脂多糖抗原的方法。 展开更多

关键词 EHEC O157∶H7 热酚水法 脂多糖抗原制备

下载PDF 职称材料