热休克蛋白40在肺癌中的研究进展 被引量：8

1

作者 李雨轩 包勇 《生命的化学》 CAS CSCD 2016年第4期487-490,共4页

肺癌是常见的恶性肿瘤,对全世界造成巨大的社会负担。目前对肺癌的早期诊断和治疗仍较为困难,发现新的特异性肿瘤标志物至关重要。热休克蛋白40,即HSP40是跨物种存在的高度保守的蛋白质家族,其在人类许多肿瘤包括肺癌中呈异常表达,在细... 肺癌是常见的恶性肿瘤,对全世界造成巨大的社会负担。目前对肺癌的早期诊断和治疗仍较为困难,发现新的特异性肿瘤标志物至关重要。热休克蛋白40,即HSP40是跨物种存在的高度保守的蛋白质家族,其在人类许多肿瘤包括肺癌中呈异常表达,在细胞应激保护、蛋白质折叠、重折叠或聚集与降解,以及蛋白质移位等方面有重要作用。本文综述了近年来关于HSP40蛋白的结构、功能以及其与肺癌的关系,为该领域的研究提供一定的参考。 展开更多

关键词 热休克蛋白40 肺癌 诊断 治疗 研究进展

原文传递

血清HSP70、PKD1、YKL-40对绝经后早期子宫内膜癌淋巴结转移的预测效能 被引量：1

2

作者 丁祺 杨红玉 +1 位作者 孙亚楠 刘丽爽 《广西医科大学学报》 CAS 2024年第1期92-97,共6页

目的:探讨血清热休克蛋白70(HSP70)、蛋白激酶D1(PKD1)、甲壳质酶蛋白40(YKL-40)与绝经后早期子宫内膜癌淋巴结转移的关系及预测效能。方法:选取2021年3月至2023年3月中国人民解放军联勤保障部队第九八〇医院收治的126例绝经后早期子宫... 目的:探讨血清热休克蛋白70(HSP70)、蛋白激酶D1(PKD1)、甲壳质酶蛋白40(YKL-40)与绝经后早期子宫内膜癌淋巴结转移的关系及预测效能。方法:选取2021年3月至2023年3月中国人民解放军联勤保障部队第九八〇医院收治的126例绝经后早期子宫内膜癌患者(研究组),根据术后病理诊断结果分为淋巴结转移组(n=22)和非淋巴结转移组(n=104)。另选取114例健康体检者作为对照组。比较各组血清HSP70、PKD1和YKL-40水平。采用多因素logistic回归分析方法分析影响患者发生淋巴结转移的因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清HSP70、PKD1和YKL-40水平对患者淋巴结转移的预测价值。结果:研究组血清HSP70、PKD1和YKL-40水平均高于对照组(P<0.05)。淋巴结转移组患者低分化、子宫肌层浸润≥50%及血清CA125、HE4、HSP70、PKD1和YKL-40水平高于非淋巴结转移组(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,血清HE4、HSP70、PKD1和YKL-40水平及子宫肌层浸润≥50%均为绝经后早期子宫内膜癌患者发生淋巴结转移的独立危险因素(均P<0.05)。血清HSP70、PKD1和YKL-40水平预测绝经后早期子宫内膜癌患者发生淋巴结转移的最佳截断点分别为90.82μg/L、132.23μg/L、75.32μg/L,三者联合预测的灵敏度、特异度和ROC曲线下面积(AUC)分别为81.82%、96.15%、0.940。结论:早期子宫内膜癌患者血清HSP70、PKD1、YKL-40水平可作为预测淋巴结转移的敏感指标,且三者联合预测的预测效能更高。 展开更多

关键词 子宫内膜癌 淋巴结转移 绝经 热休克蛋白70 蛋白激酶D1 甲壳质酶蛋白40

下载PDF 职称材料

血清趋化因子CXC配体16 热休克蛋白70 高迁移率族蛋白B1及可溶性CD40配体与高血压合并脑梗死病灶 神经功能的关系 被引量：5

3

作者 贾建波 《中国实用神经疾病杂志》 2020年第10期880-884,共5页

目的探讨血清趋化因子CXC配体16(CXCL16)、热休克蛋白70(HSP70)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、可溶性CD40配体(sCD40L)在高血压合并脑梗死患者急性期病情变化中的意义。方法选取郑州市第三人民医院确诊的110例高血压合并脑梗死患者为脑梗... 目的探讨血清趋化因子CXC配体16(CXCL16)、热休克蛋白70(HSP70)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、可溶性CD40配体(sCD40L)在高血压合并脑梗死患者急性期病情变化中的意义。方法选取郑州市第三人民医院确诊的110例高血压合并脑梗死患者为脑梗组,单纯高血压患者110例为对照组,检测2组血清CXCL16、HSP70、HMGB1及sCD40L水平及一般生化资料;按照脑梗死病灶大小、NIHSS评分分为小梗死组、中梗死组、大梗死组及轻度组、中度组及重度组,并进行分析。结果脑梗组血清CXCL16、HSP70、HMGB1及sCD40L高于对照组(P<0.05);小梗死组、中梗死组、大梗死组血清CXCL16、HSP70、HMGB1及sCD40L呈递增趋势,组间对比差异有统计学意义(P<0.05);轻度组、中度组及重度组血清CXCL16、HSP70、HMGB1及sCD40L呈递增趋势,组间对比差异有统计学意义(P<0.05)。结论高血压合并脑梗死患者CXCL16、HSP70、HMGB1及sCD40L较单纯高血压患者显著升高,并与脑梗死病灶大小、神经功能受损程度有关。 展开更多

关键词 急性脑梗死 高血压 趋化因子CXC配体16 热休克蛋白70 高迁移率族蛋白B1 可溶性CD40配体

下载PDF 职称材料

松墨天牛热激蛋白MaltHSP40s基因的克隆及表达特性分析

4

作者 杨华磊 李慧 +3 位作者 赵培渊 许丹雯仪 李长燕 郝德君 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2024年第4期930-940,共11页

松墨天牛Monochamus alternatus是我国南方林区重要的蛀干害虫,也是我国重大林业外来入侵物种松材线虫Bursaphelenchus xylophilus的主要传播媒介。为探究热激蛋白HSP40在松墨天牛抵御高温胁迫中的功能,基于松墨天牛转录组数据(GenBank... 松墨天牛Monochamus alternatus是我国南方林区重要的蛀干害虫,也是我国重大林业外来入侵物种松材线虫Bursaphelenchus xylophilus的主要传播媒介。为探究热激蛋白HSP40在松墨天牛抵御高温胁迫中的功能,基于松墨天牛转录组数据(GenBank登录号:PRJNA548205),通过RT-PCR技术克隆两条松墨天牛HSP40基因,并对其进行生物信息学分析;使用MEGA 7.0软件构建松墨天牛HSP40系统进化树;利用RT-qPCR技术检测16日龄松墨天牛雌雄成虫各组织HSP40基因在不同温度与时间处理条件(35℃、37℃、40℃、42.5℃和45℃;0 h、1 h、2 h和3 h)下和高温42.5℃处理3 h后的组织表达特性。结果表明:克隆获得松墨天牛两条HSP40基因MaltHSP40-1(GenBank登录号:MW690168)和MaltHSP40-2(GenBank登录号:MW690169),其ORF长度分别为1206 bp和1059 bp,分别编码401个和352个氨基酸,分子质量分别约为45.24 kDa和39.25 kDa,等电点分别为6.73和9.07;两条序列中均存在含有保守的HPD基序以及DNA-J结构域;蛋白三维结构中均由N端的4个α螺旋和C端的底物结合域构成。系统进化树显示:MaltHSP40-1和MaltHSP40-2分别与光肩星天牛Anoplophora glabripennis的AglaHSP40-1和AglaHSP40-2遗传距离最近。RT-qPCR结果显示,高温胁迫可诱导松墨天牛HSP40基因的转录表达,雌雄成虫的MaltHSP40-1和MaltHSP40-2分别在35℃和37.5℃的条件下开始表达上调,在40℃或42.5℃时到达峰值,雄虫HSP40的相对表达量和上调倍数均高于雌虫;MaltHSP40-1及MaltHSP40-2在松墨天牛雌雄成虫的各组织中均有表达,42.5℃处理3 h后,MaltHSP40-1及MaltHSP40-2在各组织中的相对表达量均显著上调,精巢和卵巢中相对表达量最高。本研究表明MaltHSP40-1和MaltHSP40-2作为辅助分子伴侣,参与松墨天牛抵御高温胁迫。研究结果有助于深入探究热激蛋白在松墨天牛应对高温胁迫中的作用,也为揭示气候变暖背景下松墨天牛及松材线虫病的流行成灾机理提供� 展开更多

关键词 松墨天牛 高温胁迫 热激蛋白40 耐热性 辅助分子伴侣

下载PDF 职称材料

血清CA125、CD147、HSP40与上皮性卵巢癌患者临床病理特征及术后复发的关系研究 被引量：3

5

作者 郑春梅 向慧敏 +2 位作者 李筱 王思繁 饶琴琴 《检验医学与临床》 CAS 2023年第12期1710-1715,共6页

目的探讨血清糖类抗原125(CA125)、细胞外基质金属蛋白诱导子(CD147)、热休克蛋白40(HSP40)与上皮性卵巢癌(EOC)患者临床病理特征及术后复发的关系。方法选取2017年5月至2018年12月于汉中市中心医院接受全子宫和双侧附件切除术治疗的EO... 目的探讨血清糖类抗原125(CA125)、细胞外基质金属蛋白诱导子(CD147)、热休克蛋白40(HSP40)与上皮性卵巢癌(EOC)患者临床病理特征及术后复发的关系。方法选取2017年5月至2018年12月于汉中市中心医院接受全子宫和双侧附件切除术治疗的EOC患者68例作为卵巢癌组,72例卵巢上皮良性肿瘤患者作为卵巢良性肿瘤组,同期体检健康女性60例作为对照组,比较3组血清CA125、CD147、HSP40水平,分析其与EOC患者临床病理特征的关系。根据术后是否复发将卵巢癌组患者分为复发组和未复发组,比较两组血清CA125、CD147、HSP40水平,并应用多因素Logistic回归分析EOC患者术后复发的影响因素。结果卵巢癌组血清CA125、CD147、HSP40水平明显高于卵巢良性肿瘤组与对照组(P<0.05)。组织学低分化、FIGO分期Ⅲ期、有淋巴结转移以及未进行淋巴结清扫的EOC患者血清CA125、CD147、HSP40水平均显著高于组织学中高分化、FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移以及进行淋巴结清扫的EOC患者(P<0.05)。复发组血清CA125、CD147、HSP40水平均明显高于未复发组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示:组织学低分化、FIGO分期Ⅲ期、有淋巴结转移、血清CA125≥234.83 ng/mL、血清CD147≥127.41 pg/mL、血清HSP40≥253.59 ng/L是EOC患者术后复发的危险因素(P<0.05),进行淋巴结清扫是EOC患者术后复发的保护因素(P<0.05)。结论术后复发与未复发EOC患者的血清CA125、CD147、HSP40水平有明显差异,血清CA125≥234.83 ng/mL、血清CD147≥127.41 pg/mL、血清HSP40≥253.59 ng/L是EOC患者术后复发的危险因素,进行淋巴结清扫是EOC患者术后复发的保护因素。 展开更多

关键词 上皮性卵巢癌 糖类抗原125 细胞外基质金属蛋白诱导子 热休克蛋白40 术后复发

下载PDF 职称材料

稻瘟病菌热激蛋白(HSP)40编码基因MoMHF6的鉴定及功能研究 被引量：2

6

作者 童琪 王春燕 +2 位作者 阙亚伟 肖宇 王政逸 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期563-576,共14页

【目的】探明稻瘟病菌热激蛋白(HSP)40在形态分化和致病过程中的作用。【方法】利用DNA同源重组方法敲除了稻瘟病菌HSP40编码基因MoMHF6,获得ΔMomhf6突变体,并通过表型分析、基因回补、RNA-seq分析等对MoMHF6的生物学功能进行较系统的... 【目的】探明稻瘟病菌热激蛋白(HSP)40在形态分化和致病过程中的作用。【方法】利用DNA同源重组方法敲除了稻瘟病菌HSP40编码基因MoMHF6,获得ΔMomhf6突变体,并通过表型分析、基因回补、RNA-seq分析等对MoMHF6的生物学功能进行较系统的研究。【结果】敲除MoMHF6基因导致稻瘟病菌气生菌丝生长、无性产孢、孢子萌发、子囊壳产生和附着胞形成均显著下降,但与野生菌株相比,ΔMomhf6突变体在CM培养基上的径向生长没有显著差异,在子囊壳中仍可形成子囊和子囊孢子。在1、2和3 mol/L甘油溶液处理条件下,ΔMomhf6突变体附着胞塌陷率显著升高,说明MoMHF6与附着胞膨压形成有关。ΔMomhf6突变体对洋葱内表皮的穿透能力和对感病寄主的致病性完全丧失,甚至在划伤大麦叶片表皮组织中的扩展也受明显限制。而且,ΔMomhf6突变体对氧化胁迫的敏感性增强,附着胞发育过程中糖原的转运和降解缓慢,说明MoMHF6参与氧化胁迫反应和附着胞的糖原代谢。将完整的MoMHF6基因重新导入ΔMomhf6突变体可回补突变体的所有表型缺陷。另外,RNA-seq分析显示,部分已知的稻瘟病菌致病相关基因表达可能受MoMHF6调控,如MoATG4、MoPL1、MoVPR和GAS1等。【结论】综上所述,稻瘟病菌HSP40编码基因MoMHF6在产孢、附着胞形成、穿透寄主、氧化胁迫应答、致病等过程中起重要作用,研究结果对进一步阐明MoMHF6调控稻瘟病菌形态分化和致病过程的基因网络和分子机制具有重要意义。 展开更多

关键词 稻瘟病菌 MoMHF6 热激蛋白40 功能分析 RNA-SEQ

下载PDF 职称材料

拟南芥Hsp40蛋白AtDjA5在大肠杆菌中的功能分析 被引量：2

7

作者 陈鹏 徐西兵 +1 位作者 胡屹玲 杨毅 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期1117-1122,共6页

通过分析大肠杆菌dnaJ缺失菌株在43℃下的生长表型,发现AtDjA5及其J-Domain能够功能性地替换DnaJ及其J-Domain.免疫共沉淀实验结果表明AtDjA5与DnaK存在相互作用.由Western blot检测推测AtDjA5能够稳定大肠杆菌热激转录因子σ32并下调... 通过分析大肠杆菌dnaJ缺失菌株在43℃下的生长表型,发现AtDjA5及其J-Domain能够功能性地替换DnaJ及其J-Domain.免疫共沉淀实验结果表明AtDjA5与DnaK存在相互作用.由Western blot检测推测AtDjA5能够稳定大肠杆菌热激转录因子σ32并下调热激蛋白DnaK表达量.这些发现说明AtDjA5在大肠杆菌中具有与DnaJ相似的功能. 展开更多

关键词 热激蛋白 Hsp40 DNAJ AtDjA5 免疫共沉淀

原文传递

热休克蛋白40和热休克蛋白70抑制N2a细胞内突变亨廷顿蛋白聚积和毒性

8

作者 叶翠芳 李和 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期517-521,共5页

目的研究热休克蛋白40（HSP40）和热休克蛋白70（HSP70）对N2a细胞内突变亨廷顿蛋白（htt）聚集物形成和毒性的影响。方法应用荧光显微镜术和免疫印迹技术检测单独或共同过表达HSP40和HSP70对N2a细胞内转染的突变htt（含有150个谷氨酰... 目的研究热休克蛋白40（HSP40）和热休克蛋白70（HSP70）对N2a细胞内突变亨廷顿蛋白（htt）聚集物形成和毒性的影响。方法应用荧光显微镜术和免疫印迹技术检测单独或共同过表达HSP40和HSP70对N2a细胞内转染的突变htt（含有150个谷氨酰胺重复数,150Q）聚集物形成的影响;应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法分析细胞活力和比色法检测细胞内活性氧（ROS）含量。结果单独过表达HSP40或HSP70,尤其是共同过表达HSP40和HSP70显著减少150Q htt在N2a细胞内的聚积,各组含有聚集物的细胞为（n=1 000）：仅表达150Q htt组约50%,过表达HSP40组约12%,过表达HSP70组约15%,共同过表达HSP40和HSP70组约5%。MTT分析结果显示,单独尤其是共同过表达HSP40和HSP70能显著增加150Q细胞的活力（P＆lt;0.01,n=3）,同时减少ROS产生（P＆lt;0.01,n=3）。结论HSP40和HSP70通过抑制细胞内突变htt聚积以及减少氧化应激而增加150Q N2a细胞活力。 展开更多

关键词 亨廷顿蛋白 热休克蛋白40 热休克蛋白70 活性氧 检测 免疫印迹 四甲基偶氮唑盐 N2A细胞

下载PDF 职称材料

术前三叶因子3、热休克蛋白40、中性粒细胞/淋巴细胞比值与上皮性卵巢癌患者肿瘤细胞减灭术后复发的关系

9

作者 吴凯华 葛丽丽 +2 位作者 吴春雷 张永男 余敏敏 《现代生物医学进展》 CAS 2023年第23期4521-4526,共6页

目的:探讨术前三叶因子3(TFF3)、热休克蛋白40(HSP40)、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)与上皮性卵巢癌(EOC)患者肿瘤细胞减灭术(CRS)后复发的关系。方法:选取2016年1月~2017年5月南京市第二医院妇科收治的140例接受CRS治疗的EOC患者,根据... 目的:探讨术前三叶因子3(TFF3)、热休克蛋白40(HSP40)、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)与上皮性卵巢癌(EOC)患者肿瘤细胞减灭术(CRS)后复发的关系。方法:选取2016年1月~2017年5月南京市第二医院妇科收治的140例接受CRS治疗的EOC患者,根据CRS后是否复发分为复发组和未复发组。检测和计算血清TFF3、HSP40、NLR。采用单因素和多因素Logistic回归分析EOC患者CRS后复发的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析EOC患者CRS后复发的预测价值。结果:随访5年,失访2例,138例EOC患者CRS后复发率为52.90%(73/138)。与未复发组比较,复发组国际妇产科联盟(FIGO)分期Ⅳ期、化疗疗程≥6个、术后残留灶为最大残留肿瘤直径≤1 cm(R1)比例更大,术前血清糖类抗原(CA)125、TFF3、HSP40、NLR升高(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,肿瘤直径≥3 cm、低分化、FIGO分期Ⅳ期、术后残留灶为R1和TFF3、HSP40、NLR升高为EOC患者CRS后复发的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,术前血清TFF3、HSP40、NLR单独与联合预测EOC患者CRS后复发的曲线下面积(AUC)分别为0.766、0.763、0.765、0.911,术前血清TFF3、HSP40、NLR联合预测EOC患者CRS后复发的AUC最大。结论:术前血清TFF3、HSP40、NLR升高与EOC患者CRS后复发独立相关,可能成为EOC患者CRS后复发的辅助预测指标,且三指标联合应用预测价值更高。 展开更多

关键词 上皮性卵巢癌 术前三叶因子3 热休克蛋白40 中性粒细胞/淋巴细胞比值 肿瘤细胞减灭术 复发

原文传递

肺炎链球菌热休克蛋白40在诱导树突细胞成熟中的作用

10

作者 刘敬敬 陈雷 《吉林医学》 CAS 2022年第12期3173-3176,共4页

目的:探讨肺炎链球菌热休克蛋白40在诱导树突细胞成熟中的作用。方法:采集0~18岁健康儿童外周血,提取并培养外周血单个核细胞,肺炎链球菌热休克蛋白40进行刺激,流式细胞术检测刺激后的细胞表面分子CD11c、HLADR、CD80及CD86表达。结果:... 目的:探讨肺炎链球菌热休克蛋白40在诱导树突细胞成熟中的作用。方法:采集0~18岁健康儿童外周血,提取并培养外周血单个核细胞,肺炎链球菌热休克蛋白40进行刺激,流式细胞术检测刺激后的细胞表面分子CD11c、HLADR、CD80及CD86表达。结果:(1)完成肺炎链球菌热休克蛋白40基因的合成与表达载体的构建及蛋白的表达与纯化。(2)最终获得内毒素水平小于1 EU/μg的肺炎链球菌热休克蛋白40。(3)肺炎链球菌热休克蛋白40刺激后的细胞表面分子CD11c、HLADR、CD80及CD86高表达。结论:肺炎链球菌热休克蛋白40可诱导树突细胞成熟。 展开更多

关键词 肺炎链球菌 热休克蛋白40 树突细胞 成熟

下载PDF 职称材料

云南切梢小蠹热激蛋白40基因的克隆与序列分析

11

作者 樊晓红 《安徽农业科学》 CAS 2017年第5期147-150,共4页

[目的]克隆云南切梢小蠹(Tomicus yunnanensis)热激蛋白40基因,并进行序列分析,得到该基因的特征。[方法]采用RACE克隆技术,获得云南切梢小蠹热激蛋白40基因,并对该基因进行分析。[结果]试验获得的基因序列长为1 205 bp,开放阅读框1173 ... [目的]克隆云南切梢小蠹(Tomicus yunnanensis)热激蛋白40基因,并进行序列分析,得到该基因的特征。[方法]采用RACE克隆技术,获得云南切梢小蠹热激蛋白40基因,并对该基因进行分析。[结果]试验获得的基因序列长为1 205 bp,开放阅读框1173 bp,编码氨基酸序列390个,编码蛋白质的预测分子量为43.56 ku,等电点为7.35。该基因蛋白序列具有1个Amidation位点,2个天冬酰胺N末端糖基化位点,2个CAMP和CGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点,3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,7个N末端十四烷基化位点,4个蛋白激酶C磷酸化位点,1个RGD细胞附着序列,1个DNAJ-1结构域等热激蛋白40所具有的典型特征。[结论]通过同源性比对分析发现,云南切梢小蠹热激蛋白40基因与家蚕(Bombyx mori)、赤拟谷盗(Tribolium castaneum)、美洲斑潜蝇(Liriomyza sativae)和东亚飞蝗(Locusta migratoria)的热激蛋白40基因在氨基酸水平上一致性为20%~30%,它们的相似性均不高。虽然不同昆虫Hsp40在进化过程中具有高度的保守性,编码序列变异比较低,但是结构域差异与生物体适应外界环境有一定的关系。 展开更多

关键词 云南切梢小蠹 热激蛋白40 序列分析

下载PDF 职称材料

猪热休克蛋白40(Hsp40)的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备 被引量：6

12

作者 吕其壮 刘畅 +4 位作者 颜秋 陈艳 章烨雯 陈旭健 邓旭 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期728-734,共7页

克隆猪热休克蛋白40 (heat shock protein 40,Hsp40)基因并构建其原核表达载体,以纯化的猪Hsp40蛋白为抗原免疫兔制备抗猪Hsp40多克隆抗体。参照GenBank收录的猪Hsp40全基因序列,设计1对特异性扩增其CDS区全序列的引物,利用RT-PCR方法... 克隆猪热休克蛋白40 (heat shock protein 40,Hsp40)基因并构建其原核表达载体,以纯化的猪Hsp40蛋白为抗原免疫兔制备抗猪Hsp40多克隆抗体。参照GenBank收录的猪Hsp40全基因序列,设计1对特异性扩增其CDS区全序列的引物,利用RT-PCR方法扩增猪Hsp40基因;扩增产物经双酶切后定向克隆至原核表达载体pCzn1-His,测序无误后转化Arctic Express (DE3) RP感受态高效表达宿主菌,优化其表达条件(时间、IPTG浓度、温度)后,将可溶性的猪Hsp40重组蛋白用His-Band Ni^+层析柱进行纯化,用纯化的His-Hsp40重组蛋白免疫兔以制备多克隆抗体。采用抗原亲和纯化法对制备的多抗进行纯化,并采用间接ELISA法检测抗体效价。利用Western blot检测重组蛋白的免疫原性和反应原性,以及抗体的特异性。结果显示,克隆得到的猪Hsp40基因片段长度为1 485 bp,表达出的可溶性His-Hsp40重组蛋白相对分子质量约为57 800,制备出的猪Hsp40蛋白多克隆抗体效价为1∶512 000,且该多抗能够特异性识别His-Hsp40重组蛋白和猪肺泡巨噬细胞中的Hsp40蛋白。结果表明,成功克隆了猪Hsp40基因,表达并纯化了猪Hsp40蛋白,制备的兔抗猪Hsp40蛋白多克隆抗体能够有效地应用于猪Hsp40蛋白抗原的检测。 展开更多

关键词 猪Hsp40蛋白 原核表达与纯化 多克隆抗体 猪圆环病毒2型

原文传递

日本血吸虫热休克蛋白40 kDa免疫学功能研究 被引量：3

13

作者 余艳雄 李莎莎 +5 位作者 朱继峰 陈晓军 徐志鹏 李娅琳 周莎 苏川 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期262-267,272,共7页

目的探索日本血吸虫热休克蛋白40 k Da(Sj HSP40)免疫学功能。方法采用生物信息学方法分析Sj HSP40蛋白序列同源性,并预测其B细胞及T细胞表位。应用PCR技术扩增全长Sj HSP40基因,将其克隆入原核表达质粒p GEX-6P-1,再转入大肠埃希菌BL21... 目的探索日本血吸虫热休克蛋白40 k Da(Sj HSP40)免疫学功能。方法采用生物信息学方法分析Sj HSP40蛋白序列同源性,并预测其B细胞及T细胞表位。应用PCR技术扩增全长Sj HSP40基因,将其克隆入原核表达质粒p GEX-6P-1,再转入大肠埃希菌BL21中;以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,再经亲和柱分离纯化获得谷胱甘肽巯基转移酶(GST)-Sj HSP40融合蛋白,分别采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western blotting进行鉴定。以GST-Sj HSP40免疫BALB/c小鼠后,以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中抗Sj HSP40特异性Ig G抗体及其亚型Ig G1、Ig G2a抗体,采用流式检测术观察Sj HSP40对CD4+T细胞亚群分化的影响。结果 Sj HSP40含有7个潜在B细胞表位及多个T细胞表位(CTL表位和Th表位)。成功构建了原核表达重组质粒p GEX-6P-1-Sj HSP40,并通过诱导表达和蛋白纯化获得GST-Sj HSP40融合蛋白。与其他组相比,GST-Sj HSP40免疫小鼠血清中抗Sj HSP40特异性Ig G抗体及其亚型Ig G1和Ig G2a水平均显著升高,但Sj HSP40对CD4+T淋巴细胞分化无显著影响。结论 Sj HSP40可诱导小鼠产生特异性体液免疫应答,但不影响小鼠体内各类Th免疫反应平衡,可作为潜在疫苗候选分子。 展开更多

关键词 日本血吸虫 热休克蛋白40 kDa 免疫学功能 体液免疫

原文传递