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基于H6蛋白禽流感抗体间接ELISA检测方法建立与应用
被引量：
3
1
作者
王微
张霞
+4 位作者
张人俊
胡安东
杨颖
温贵兰
文明
《山地农业生物学报》
2022年第1期21-27,共7页
为临床H6亚型禽流感抗体检测提供技术支撑,通过克隆得到的H6亚型禽流感病毒H6基因并与原核表达载体pET-32α连接,经PCR、酶切和测序鉴定后,转化大肠杆菌进行诱导表达和Western blotting鉴定,以纯化的表达产物为包被抗原,通过反应条件优...
为临床H6亚型禽流感抗体检测提供技术支撑,通过克隆得到的H6亚型禽流感病毒H6基因并与原核表达载体pET-32α连接,经PCR、酶切和测序鉴定后,转化大肠杆菌进行诱导表达和Western blotting鉴定,以纯化的表达产物为包被抗原,通过反应条件优化,建立检测禽流感病毒H6抗体的间接ELISA方法并对临床鸡血清样本检测评价。结果表明:该方法最佳反应条件是,包被抗原浓度为10μg/mL,4℃过夜;5%脱脂奶粉37℃封闭2 h;血清稀释度为1∶20,37℃孵育30 min;酶标二抗稀释度为1∶5000,37℃作用30 min;显色时间为37℃10 min。该ELISA方法可特异性检测H6亚型禽流感抗体,阳性血清稀释至1∶320仍可检出,与其他禽病阳性血清均无交叉反应,检测变异系数均小于10%。以该ELISA方法检测2017年至2019年收集的1837份家禽临床血清样本,H6亚型禽流感抗体阳性率为10.45%。这些结果表明,建立的基于H6蛋白禽流感抗体间接ELISA检测方法,具有良好的特异性、敏感性、重复性和可靠性,能为H6亚型禽流感血清流行病学调查提供技术手段。
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关键词
h
6
亚型禽流感
h
6
蛋白
间接ELISA方法
建立
应用
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职称材料
花生中致敏蛋白Ara h6的分离纯化实验研究
被引量：
2
2
作者
夏潇潇
付岩
+2 位作者
王飞
孙季
张鹏
《粮食与油脂》
北大核心
2019年第6期12-14,共3页
以天然花生为原料,冷榨去油并粉碎之后,通过浸提获得Ara h6粗蛋白液,再采用阴离子交换柱层析和分子筛凝胶过滤法进一步纯化,使用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和飞行时间串联质谱对Ara h6蛋白进行鉴定。结果表明:分离纯化出的Ara h6蛋白纯度达...
以天然花生为原料,冷榨去油并粉碎之后,通过浸提获得Ara h6粗蛋白液,再采用阴离子交换柱层析和分子筛凝胶过滤法进一步纯化,使用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和飞行时间串联质谱对Ara h6蛋白进行鉴定。结果表明:分离纯化出的Ara h6蛋白纯度达到95%以上。
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关键词
花生
ARA
h
6
蛋白
粗提
纯化
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职称材料
题名
基于H6蛋白禽流感抗体间接ELISA检测方法建立与应用
被引量：
3
1
作者
王微
张霞
张人俊
胡安东
杨颖
温贵兰
文明
机构
贵州大学动物科学学院
贵州省动物疫病预防控制中心
贵州农业职业学院
贵州省动物生物制品工程技术研究中心
出处
《山地农业生物学报》
2022年第1期21-27,共7页
基金
贵州省科技支撑计划项目(黔科合支撑[2020]1Y043)
贵州省科技支撑计划项目(黔科合支撑[2019]2286)
贵州省科技平台建设项目(黔科合平台人才[2018]5253)。
文摘
为临床H6亚型禽流感抗体检测提供技术支撑,通过克隆得到的H6亚型禽流感病毒H6基因并与原核表达载体pET-32α连接,经PCR、酶切和测序鉴定后,转化大肠杆菌进行诱导表达和Western blotting鉴定,以纯化的表达产物为包被抗原,通过反应条件优化,建立检测禽流感病毒H6抗体的间接ELISA方法并对临床鸡血清样本检测评价。结果表明:该方法最佳反应条件是,包被抗原浓度为10μg/mL,4℃过夜;5%脱脂奶粉37℃封闭2 h;血清稀释度为1∶20,37℃孵育30 min;酶标二抗稀释度为1∶5000,37℃作用30 min;显色时间为37℃10 min。该ELISA方法可特异性检测H6亚型禽流感抗体,阳性血清稀释至1∶320仍可检出,与其他禽病阳性血清均无交叉反应,检测变异系数均小于10%。以该ELISA方法检测2017年至2019年收集的1837份家禽临床血清样本,H6亚型禽流感抗体阳性率为10.45%。这些结果表明,建立的基于H6蛋白禽流感抗体间接ELISA检测方法,具有良好的特异性、敏感性、重复性和可靠性,能为H6亚型禽流感血清流行病学调查提供技术手段。
关键词
h
6
亚型禽流感
h
6
蛋白
间接ELISA方法
建立
应用
Keywords
avian influenza type
h
6
h
6
protein
indirect ELISA
establis
h
ment
application
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
花生中致敏蛋白Ara h6的分离纯化实验研究
被引量：
2
2
作者
夏潇潇
付岩
王飞
孙季
张鹏
机构
合肥学院生物与环境工程系
安徽徽之润食品股份有限公司
出处
《粮食与油脂》
北大核心
2019年第6期12-14,共3页
基金
安徽高校自然科学研究重点项目(KJ2017A546)
安徽省2019年重点研究与开发计划项目(201904a06020003)
文摘
以天然花生为原料,冷榨去油并粉碎之后,通过浸提获得Ara h6粗蛋白液,再采用阴离子交换柱层析和分子筛凝胶过滤法进一步纯化,使用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和飞行时间串联质谱对Ara h6蛋白进行鉴定。结果表明:分离纯化出的Ara h6蛋白纯度达到95%以上。
关键词
花生
ARA
h
6
蛋白
粗提
纯化
Keywords
peanut
Ara
h
6
protein
crude extraction
puri fication
分类号
TS201.21 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于H6蛋白禽流感抗体间接ELISA检测方法建立与应用
王微
张霞
张人俊
胡安东
杨颖
温贵兰
文明
《山地农业生物学报》
2022
3
下载PDF
职称材料
2
花生中致敏蛋白Ara h6的分离纯化实验研究
夏潇潇
付岩
王飞
孙季
张鹏
《粮食与油脂》
北大核心
2019
2
下载PDF
职称材料
已选择
0
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参考文献
引证文献
统计分析
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