甘肃葡萄扇叶病毒和卷叶病毒的检测 被引量：3

1

作者 谭雪莲 马静芳 曹孜义 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2005年第1期65-68,共4页

采用 DAS-ELISA 检测方法对甘肃地区的葡萄主要品种进行扇叶病毒和卷叶病毒的调查和测定。结果表明,这两种病毒病在甘肃地区的主要葡萄产区均有发生。兰州地区和一些老的葡萄产区葡萄带病毒病较严重。通过对比植株下部枝条的幼叶、幼茎... 采用 DAS-ELISA 检测方法对甘肃地区的葡萄主要品种进行扇叶病毒和卷叶病毒的调查和测定。结果表明,这两种病毒病在甘肃地区的主要葡萄产区均有发生。兰州地区和一些老的葡萄产区葡萄带病毒病较严重。通过对比植株下部枝条的幼叶、幼茎、老叶和老茎病原的检测结果,说明植株下部幼嫩组织是卷叶病毒最适的检测部位。 展开更多

关键词 葡萄 扇叶病毒 卷叶病毒 DAS—ELISA

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葡萄卷叶伴随病毒Ⅲ外壳蛋白基因的克隆

2

作者 赵冬兰 朱水芳 +1 位作者 黄文胜 张满良 《中国病毒学》 CSCD 2000年第4期357-360,共4页

根据美国报道的葡萄卷叶伴随病毒Ⅲ (GLRaV 3)CP基因序列 ,设计并合成一对引物 ,用IC RT PCR对GLRaV 3进行检测 ,琼脂糖凝胶电泳表明其大小与预计相符。将其CP基因克隆到pGEM 3zf( +)中 ,经双酶切和序列分析表明所克隆的是GLRaV 3CP基... 根据美国报道的葡萄卷叶伴随病毒Ⅲ (GLRaV 3)CP基因序列 ,设计并合成一对引物 ,用IC RT PCR对GLRaV 3进行检测 ,琼脂糖凝胶电泳表明其大小与预计相符。将其CP基因克隆到pGEM 3zf( +)中 ,经双酶切和序列分析表明所克隆的是GLRaV 3CP基因 ,它与美国分离物相应序列同源性为 94 .1%。 展开更多

关键词 葡萄卷叶病毒 GLRaV-3 IC-RT-PCR CP 克隆

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葡萄4种病毒多重RT-PCR检测体系的建立 被引量：20

3

作者 范旭东 董雅凤 +2 位作者 张尊平 任芳 李亚惠 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期949-956,共8页

以复合感染4种病毒的‘红地球’(Red Globe)葡萄样品为试材,对影响多重PCR的dNTPS浓度、Taq酶浓度、引物浓度、退火温度及模板量进行了调整和优化,建立了能同时检测葡萄卷叶伴随病毒3(Grapevine leafroll-associated virus-3,GLRaV-3)... 以复合感染4种病毒的‘红地球’(Red Globe)葡萄样品为试材,对影响多重PCR的dNTPS浓度、Taq酶浓度、引物浓度、退火温度及模板量进行了调整和优化,建立了能同时检测葡萄卷叶伴随病毒3(Grapevine leafroll-associated virus-3,GLRaV-3)、沙地葡萄茎痘相关病毒(Grapevine rupestris stem pitting associated virus,GRSPaV)、葡萄病毒B(Grapevine virusB,GVB)和葡萄病毒A(Grapevine virusA,GVA)的多重RT-PCR方法。灵敏度测验结果显示,多重RT-PCR与单一RT-PCR检测灵敏度基本一致。多重RT-PCR获得的特异性片段大小分别为905、546、460和196bp,经过克隆、测序及序列比对,表明其序列与已报道的病毒序列具有较高的同源性。对7个已知带病毒的葡萄样品进行检测验证的结果表明,所建立的多重RT-PCR技术可用于大量田间样品中这些病毒的检测。 展开更多

关键词 多重RT-PCR 检测 葡萄卷叶伴随病毒3 沙地葡萄茎痘病毒 葡萄病毒B 葡萄病毒A

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葡萄病毒病多重RT-PCR检测技术体系优化分析 被引量：16

4

作者 牛建新 陈萍 马兵钢 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期120-123,共4页

在确立葡萄卷叶病毒Ⅲ和扇叶病毒RT-PCR优化体系基础上,研究了多重PCR的主要成分:dNTPS、TaqDNA聚合酶、MgCl2对PCR反应的影响,从而确立了GLRaVⅢ、GFLV的多重RT-PCR检测体系。研究结果表明,多重PCR反应体系中TaqDNA聚合酶的用量较单重... 在确立葡萄卷叶病毒Ⅲ和扇叶病毒RT-PCR优化体系基础上,研究了多重PCR的主要成分:dNTPS、TaqDNA聚合酶、MgCl2对PCR反应的影响,从而确立了GLRaVⅢ、GFLV的多重RT-PCR检测体系。研究结果表明,多重PCR反应体系中TaqDNA聚合酶的用量较单重PCR反应体系要低,而且可降低成本和缩短检测时间。 展开更多

关键词 葡萄卷叶病毒Ⅲ(GLRaV Ⅲ) 葡萄扇叶病毒(GFLV) 多重RT-PCR检测体系

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葡萄卷叶病毒Ⅲ RT-PCR检测技术研究 被引量：11

5

作者 刘三军 郭卫东 +3 位作者 张秋叶 何水涛 周厚成 张亚冰 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期15-18,共4页

利用ＲＴ－ＰＣＲ技术,对葡萄卷叶病毒株系Ⅲ进行了检测。采用的技术流程为:通过提取葡萄叶片或韧皮部总ＲＮＡ,获得病毒的ＲＮＡ,反转录合成ｃＤＮＡ,经ＰＣＲ扩增,获得病毒ｃＤＮＡ的特征片段,并进行了序列分析。对提取的总ＲＮＡ进... 利用ＲＴ－ＰＣＲ技术,对葡萄卷叶病毒株系Ⅲ进行了检测。采用的技术流程为:通过提取葡萄叶片或韧皮部总ＲＮＡ,获得病毒的ＲＮＡ,反转录合成ｃＤＮＡ,经ＰＣＲ扩增,获得病毒ｃＤＮＡ的特征片段,并进行了序列分析。对提取的总ＲＮＡ进行了完整性和纯度检测,确定了良好的ＲＮＡ获得方法。结果表明,通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增的片段序列与病毒源序列的同源性高达９９．３%,说明采用本研究确定的方法检测葡萄卷叶病毒株系Ⅲ结果可靠。 展开更多

关键词 葡萄 卷叶病毒Ⅲ RT-PCR 检测 克隆 序列分析

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基于重组酶聚合酶扩增技术(RPA)的葡萄卷叶伴随病毒3号检测方法 被引量：17

6

作者 张娜 乾义柯 +6 位作者 魏霜 胡白石 陆平 赛铁尔汗 刘中勇 张永江 张祥林 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期302-308,共7页

【目的】建立一种快速、灵敏的重组酶聚合酶扩增技术(RPA)检测葡萄卷叶伴随病毒3(Grapevine leafroll-associated virus 3,GLRaV-3)方法。【方法】根据GLRaV-3已测序和已报道的HSP70基因(Heat shock protein 70)保守序列,设计用于RPA检... 【目的】建立一种快速、灵敏的重组酶聚合酶扩增技术(RPA)检测葡萄卷叶伴随病毒3(Grapevine leafroll-associated virus 3,GLRaV-3)方法。【方法】根据GLRaV-3已测序和已报道的HSP70基因(Heat shock protein 70)保守序列,设计用于RPA检测的特异性引物,建立GLRaV-3的RPA检测方法,并对其特异性和灵敏度进行验证。【结果】建立RPA检测方法能够从GLRaV-3带毒株中检测到约380 bp的特异性条带,仅需在37℃下恒温反应40 min,无需特殊的仪器设备,经特异性评价特异性好,且该方法与普通PCR检测灵敏度基本一致。【结论】建立的RPA检测方法特异性强、灵敏度高,无需特殊的仪器设备,适合GLRaV-3的快速检测方法。 展开更多

关键词 葡萄卷叶伴随病毒3 RPA 检测方法

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三种葡萄病毒的RT-PCR检测和系统进化分析 被引量：12

7

作者 王建辉 刘建军 +3 位作者 陈克玲 李洪雯 何建 关斌 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期197-201,共5页

【目的】为了研究不同葡萄病毒病快速检测方法和四川分离株系统进化,【方法】比较3种葡萄总RNA提取方法,还优化了葡萄病毒病的RT-PCR检测方法。分别克隆了3种病毒四川分离株的部分基因组区域,并开展了系统进化分析。【结果】结果表明,... 【目的】为了研究不同葡萄病毒病快速检测方法和四川分离株系统进化,【方法】比较3种葡萄总RNA提取方法,还优化了葡萄病毒病的RT-PCR检测方法。分别克隆了3种病毒四川分离株的部分基因组区域,并开展了系统进化分析。【结果】结果表明,改进硅胶颗粒吸附法快速从葡萄枝条的韧皮组织中提取了总RNA,并以葡萄18SRNA为内参基因,RT-PCR分别成功扩增出3种病毒的目的片段。把16个地理起源的GLRaV-2分离株的外壳蛋白基因(Coat protein,CP)分成5个系统进化组。而7个地理起源的GVB分离株CP同源性为79.1%～98.7%。此外,5个GVA四川分离株分别位于系统进化树的4个聚类群。【结论】GLRaV-2、GVB和GVA不同地理起源的分离株在核酸水平上具有变异性,其中GVA四川分离株之间具有显著的遗传差异,可能包括4种株系。 展开更多

关键词 葡萄卷叶伴随2型病毒 葡萄B病毒 葡萄A病毒 病毒外壳蛋白基因 病毒沉默抑制子基因

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葡萄卷叶伴随3型病毒和葡萄A病毒的多重检测及其系统进化分析 被引量：12

8

作者 王建辉 刘建军 +3 位作者 陈克玲 李洪雯 席德慧 林宏辉 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期2401-2410,共10页

葡萄卷叶伴随3型病毒(Grapevine leafroll associated virus-3,GLRaV-3)和葡萄A病毒(Grapevine virus A,GVA)常常复合侵染部分主栽欧美杂交葡萄品种。以半定量RT-PCR与qRT-PCR方法研究了‘希姆劳特’葡萄(Vitis vinifera L.×V.labr... 葡萄卷叶伴随3型病毒(Grapevine leafroll associated virus-3,GLRaV-3)和葡萄A病毒(Grapevine virus A,GVA)常常复合侵染部分主栽欧美杂交葡萄品种。以半定量RT-PCR与qRT-PCR方法研究了‘希姆劳特’葡萄(Vitis vinifera L.×V.labrusca L.‘Himrod’)中不同组织内病毒的相对积累量,结果表明叶脉和韧皮部内的病毒相对积累量显著高于其他组织。以成熟枝条韧皮部组织的cDNA为模板,优化了RT-PCR多重扩增体系,可以同时扩增待测样本中两种病毒的目标基因。从一株复合感染GLRaV-3与GVA的‘藤稔’葡萄(Vitis vinifera L.×V.labrusca L.‘Fujiminori’)中,分别克隆了GLRaV-3外壳蛋白(coat protein,CP)基因全长序列和GVA部分基因组区域序列,后者包括CP基因的部分序列与病毒RNA沉默抑制子(viral suppressor of RNA silencing,VSR)基因全长序列。病毒核酸同源性分析与系统进化研究表明,不同GLRaV-3分离物的CP高度保守;而‘藤稔’葡萄的GVA分离物包含多种变异株,具有准种病毒的特点。 展开更多

关键词 葡萄 葡萄卷叶伴随3型病毒 葡萄A病毒 病毒外壳蛋白基因 病毒RNA沉默抑制子基因 RT-PCR多重检测 病毒变异株

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葡萄卷叶病毒RT-PCR检测技术研究 被引量：9

9

作者 牛建新 陈萍 +2 位作者 李西平 马兵钢 鲁晓燕 《西北农业学报》 CAS CSCD 2004年第1期28-32,共5页

以葡萄叶片和皮层为材料,对植物总RNA和dsRNA提取方法进行了研究,从中筛选出了提取葡萄总RNA和dsRNA的适合方法。建立了GLRaV RT-PCR的有效体系,在有效体系基础上,通过研究RT-PCR主要成分对RT-PCR的影响,确立了GLRaVRT-PCR的优化体系。

关键词 葡萄卷叶病毒Ⅲ RT-PCR检测

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宁夏贺兰山东麓地区葡萄卷叶病发病与危害调查 被引量：7

10

作者 徐美隆 陈春伶 +1 位作者 谢军 张子龙 《北方园艺》 CAS 北大核心 2015年第22期118-121,共4页

以贺兰山东麓地区种植和繁育的"赤霞珠"、"蛇龙珠"、"梅鹿辄"等主要酿酒葡萄品种为试材,采用田间调查和实验室测量的方法,研究了宁夏贺兰山东麓地区葡萄树及葡萄种苗卷叶病的发病情况及葡萄卷叶病对葡萄... 以贺兰山东麓地区种植和繁育的"赤霞珠"、"蛇龙珠"、"梅鹿辄"等主要酿酒葡萄品种为试材,采用田间调查和实验室测量的方法,研究了宁夏贺兰山东麓地区葡萄树及葡萄种苗卷叶病的发病情况及葡萄卷叶病对葡萄树的影响。结果表明:葡萄树卷叶病平均感病率为4.66%,葡萄卷叶病使得葡萄的产量下降,品质降低,SPAD值和光合速率下降;2012—2014年,宁夏主栽的酿酒葡萄品种种苗卷叶病的带毒率逐年降低。 展开更多

关键词 葡萄卷叶病 带毒率 产量 品质 生理指标

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葡萄卷叶伴随病毒2号和3号辽宁分离物部分基因组的序列分析 被引量：8

11

作者 王萌 费菲 +2 位作者 周涛 程玉琴 范在丰 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期458-465,共8页

将采自辽宁兴城地区在生长期间具典型卷叶病症状的金星无核（Venus Seedless）葡萄品种休眠枝条,用RT-PCR检测4种葡萄卷叶伴随病毒（Grapevine leafroll-associated viruses,GLRaVs）,扩增得到了葡萄卷叶伴随病毒2号（GLRaV-2）和葡萄... 将采自辽宁兴城地区在生长期间具典型卷叶病症状的金星无核（Venus Seedless）葡萄品种休眠枝条,用RT-PCR检测4种葡萄卷叶伴随病毒（Grapevine leafroll-associated viruses,GLRaVs）,扩增得到了葡萄卷叶伴随病毒2号（GLRaV-2）和葡萄卷叶伴随病毒3号（GLRaV-3）两种病毒的主要外壳蛋白（major coat protein,CP）基因的完整序列（GenBank登录号分别为FJ786017和FJ786016）。这表明该葡萄植株受到了GLRaV-2和GLRaV-3辽宁分离物（GLRaV-2-LN和GLRaV-3-LN）的复合侵染。根据检测结果,克隆了GLRaV-2-LN基因组3′端CPm（minor capsid protein）、p19（19-kDa protein）和p24（24-kDa protein）基因（GenBank登录号分别为FJ786018、FJ786019和FJ786018）。序列分析表明,GLRaV-3-LN的CP基因全长942 nt,与已报道的国内外其它分离物CP基因全序列相比,核苷酸序列同源性为89.8%~91.8%,由此推导的氨基酸序列同源性为94.9%~97.4%。GLRaV-2-LN的CP、CPm、p19和p24基因全长分别为597 nt、672 nt、486 nt和618 nt。与国外报道的几个分离物的相应蛋白基因全序列相比,核苷酸序列同源性分别为88.3%~100.0%、78.7%~99.9%、75.1%~99.4%和87.5%~99.5%;由此推导的氨基酸序列同源性分别为92.9%~100.0%、89.2%~100.0%、73.9%~99.4%和89.3%~99.0%。 展开更多

关键词 葡萄卷叶伴随病毒 RT-PCR 克隆 序列分析

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葡萄卷叶病的研究进展 被引量：6

12

作者 顾沛雯 张军翔 《宁夏农学院学报》 2003年第1期73-75,87,共4页

葡萄卷叶病 (Grapevineleafrolldisease)是葡萄上的一种重要的病毒病 ,现已研究表明 ,引起该病的病毒不止一种 ,目前国际上承认的已有 5种 (GLRaVI-III) ,其中葡萄卷叶伴随病毒III(GLRaV -III)是最主要的一种 ,它分布最广 ,造成的经济... 葡萄卷叶病 (Grapevineleafrolldisease)是葡萄上的一种重要的病毒病 ,现已研究表明 ,引起该病的病毒不止一种 ,目前国际上承认的已有 5种 (GLRaVI-III) ,其中葡萄卷叶伴随病毒III(GLRaV -III)是最主要的一种 ,它分布最广 ,造成的经济损失最大 ,而且也是这几种病毒中唯一具有自然介体的病毒。本文根据生产实际 ,系统阐述了目前关于葡萄卷叶病毒病原。 展开更多

关键词 葡萄 卷叶病 病原 症状 寄主范围 传播方式 诊断 防治

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葡萄卷叶相关病毒13在我国葡萄上的首次报道 被引量：7

13

作者 范旭东 张尊平 +2 位作者 任芳 胡国君 董雅凤 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期141-144,共4页

我国葡萄品种资源丰富,栽培面积逐年增加。葡萄感染病毒后,便终生带毒,持续危害,造成生长发育迟缓,树势衰退,严重影响葡萄的产量和品质。山葡萄(Vitis amurensis Rupr.)是我国重要的野生果树资源,其抗病能力较强,是培育抗病、抗寒优良... 我国葡萄品种资源丰富,栽培面积逐年增加。葡萄感染病毒后,便终生带毒,持续危害,造成生长发育迟缓,树势衰退,严重影响葡萄的产量和品质。山葡萄(Vitis amurensis Rupr.)是我国重要的野生果树资源,其抗病能力较强,是培育抗病、抗寒优良品种的珍贵种质。 展开更多

关键词 病毒 葡萄 卷叶 抗病 资源 树势 种质

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宁夏贺兰山东麓酿酒葡萄病毒病田间自然发病率调查及检测 被引量：5

14

作者 吕苗苗 纳莹 +2 位作者 孙牧笛 徐全智 顾沛雯 《北方园艺》 CAS 北大核心 2017年第13期55-62,共8页

对宁夏贺兰山东麓8个酿酒葡萄种植地区8个葡萄品种的病毒病田间自然发病情况进行调查,采用RT-PCR方法,检测了40份样品中GLRaV-1~5这5种葡萄卷叶伴随病毒的感染率。结果表明:宁夏贺兰山东麓酿酒葡萄主要病毒病有葡萄卷叶病、扇叶病和栓皮... 对宁夏贺兰山东麓8个酿酒葡萄种植地区8个葡萄品种的病毒病田间自然发病情况进行调查,采用RT-PCR方法,检测了40份样品中GLRaV-1~5这5种葡萄卷叶伴随病毒的感染率。结果表明:宁夏贺兰山东麓酿酒葡萄主要病毒病有葡萄卷叶病、扇叶病和栓皮病,其中葡萄卷叶病尤为严重;不同酿酒葡萄种植区和品种间葡萄卷叶病的感染存在着差异,老葡萄种植区中品种间葡萄卷叶病发病率明显高于新葡萄种植区的品种;"蛇龙珠"和"黑比诺"是感染葡萄卷叶病毒的主要品种,发病率高达85.1%和52.7%;利用5种葡萄卷叶伴随病毒引物进行RT-PCR检测,检出3种病毒类型,且GLRaV-3的检出率最高,为87.5%。 展开更多

关键词 宁夏贺兰山东麓 酿酒葡萄病毒病 田间自然发病率 葡萄卷叶伴随病毒(GLRaVs) RT-PCR检测

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山东省葡萄几种主要病毒病调查及检测研究 被引量：4

15

作者 王升吉 赵玖华 +4 位作者 尚佑芬 吕志华 张加魁 赵亚 戴争 《北方园艺》 CAS 北大核心 2011年第7期20-23,共4页

对采自山东省不同葡萄园类别的葡萄样品,采用PTA-ELISA法和Dot-ELISA法对葡萄茎痘相关病毒(GRSPaV)进行了检测,采用DAS-ELISA法对葡萄卷叶病的3个毒原(GL-RaV-1-、2-、3)进行了检测。GRSPaV检测结果表明:检测的61个品种518个样品,阳性... 对采自山东省不同葡萄园类别的葡萄样品,采用PTA-ELISA法和Dot-ELISA法对葡萄茎痘相关病毒(GRSPaV)进行了检测,采用DAS-ELISA法对葡萄卷叶病的3个毒原(GL-RaV-1-、2-、3)进行了检测。GRSPaV检测结果表明:检测的61个品种518个样品,阳性样品率33.6%,阳性品种率73.8%,其中资源圃样品阳性率32.7%,生产园样品阳性率34.0%。对检测到阳性样品辅以RT-PCR法验证,2对引物均扩增出了预期片段,分别为解旋酶基因340 bp片段、CP基因842 bp片段。GLRaV-1-、2-、3的检测结果表明:鲜食品种3种病原的阳性样品率分别为33.7%、7.1%、62.2%,酿酒品种阳性样品率分别为35.1%、16.2%、54.1%,综合3种病毒的阳性样品率为76.3%,品种感染率87.7%。通过该类研究对推动国内葡萄无毒化生产有重要意义。 展开更多

关键词 葡萄茎痘相关病毒(GRSPaV) 葡萄卷叶病毒-1■2■3(GLRaV-1■2■3) 检测 山东

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宁夏地区葡萄卷叶伴随病毒遗传变异的PCR-SSCP分析 被引量：5

16

作者 李文学 吕苗苗 +3 位作者 胡丽杰 闫思远 孙牧笛 顾沛雯 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1-10,共10页

宁夏贺兰山东麓酿酒葡萄卷叶病病株率较高,严重影响了酿酒葡萄产业的健康发展,但有关其病原葡萄卷叶伴随病毒(Grapevine leafroll-associated virus,GLRaVs)的遗传变异情况则鲜有报道.利用RT-PCR技术对宁夏酿酒葡萄不同种植区的7个主栽... 宁夏贺兰山东麓酿酒葡萄卷叶病病株率较高,严重影响了酿酒葡萄产业的健康发展,但有关其病原葡萄卷叶伴随病毒(Grapevine leafroll-associated virus,GLRaVs)的遗传变异情况则鲜有报道.利用RT-PCR技术对宁夏酿酒葡萄不同种植区的7个主栽品种的GLRaV-1和GLRaV-3进行分子检测,利用SSCP技术对扩增片段进行遗传变异分析.试验结果共获得8个GLRaV-1和13个GLRaV-3的阳性样本.8个GLRaV-1分离物基于CP基因分析差异明显,可分为3类;13个GLRaV-3分离物基于RdRp基因分析差异明显,可分为3类,而基于CP和HSP70基因分析可分为2类.说明宁夏酿酒葡萄不同种植区、不同品种的GLRaV-1和GLRaV-3种群分子特性存在差异且遗传变异明显.这有助于宁夏地区酿酒葡萄GLRaVs流行学调查和分子诊断分析,为该病害的防控提供理论依据. 展开更多

关键词 葡萄卷叶伴随病毒 遗传变异 RT-PCR检测 SSCP 宁夏贺兰山东麓

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葡萄卷叶伴随病毒-3 RT-LAMP检测体系的建立与应用 被引量：1

17

作者 张强强 王雯雯 +3 位作者 闫思远 李玲 王若彤 顾沛雯 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期2166-2174,共9页

为实现葡萄生产中对葡萄卷叶伴随病毒-3(GLRaV-3)的快速检测。本研究以GLRaV-3的CP基因序列(GenBank登录号:KC477128.1)为靶序列设计并合成了3对逆转录环介导恒温扩增技术(RTLAMP)引物,建立并优化GLRaV-3的RT-LAMP检测方法。结果表明,... 为实现葡萄生产中对葡萄卷叶伴随病毒-3(GLRaV-3)的快速检测。本研究以GLRaV-3的CP基因序列(GenBank登录号:KC477128.1)为靶序列设计并合成了3对逆转录环介导恒温扩增技术(RTLAMP)引物,建立并优化GLRaV-3的RT-LAMP检测方法。结果表明,该方法能够实现在恒温64℃下反应1 h完成对GLRaV-3的检测,引物GLRaV3-LAMP-Ⅰ特异性高,不与GLRaV-1~2、葡萄扇叶病毒、沙地葡萄茎痘相关病毒、葡萄病毒A、灰皮诺葡萄病毒和葡萄浆果内坏死病毒等7种葡萄常见病毒发生交叉反应;RNA最低检测限为10 pg·μL^(-1),灵敏度是逆转录PCR(RT-PCR)的10倍。田间样品检测验证结果表明,该方法与常规RT-PCR法检测一致率为100%。综上,本研究建立的GLRaV-3 RT-LAMP检测体系具有高特异性、高灵敏度和实用性强等特点,可应用于田间葡萄卷叶病样的检测。 展开更多

关键词 葡萄卷叶伴随病毒3 RT-LAMP 引物筛选 反应条件优化 田间检测

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葡萄卷叶病毒主要检测技术比较 被引量：4

18

作者 王升吉 尚佑芬 +3 位作者 赵玖华 杨崇良 路兴波 孙红炜 《山东农业科学》 2008年第3期95-98,共4页

葡萄卷叶病(GLRaV)是葡萄上的一种重要病毒病害。本文主要阐述了该病的病原、分布及近些年来各种检测技术在该病检测中的应用情况,分析了各种检测技术的优势和不足及如何在该病检测中对各种方法做合理的搭配应用,优势互补,提高效率。

关键词 葡萄 葡萄卷叶病毒(GLRaV) 检测技术 检测方法

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葡萄卷叶伴随病毒Ⅲ宁夏分离物外壳蛋白基因的克隆及序列分析 被引量：5

19

作者 顾沛雯 《宁夏大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2009年第4期383-386,共4页

用酶联免疫吸附法对宁夏贺兰山东麓地区不同葡萄品种进行卷叶伴随病毒Ⅲ(GLRaVⅢ)的测定,检测率为37.1%,与田间自然发病率调查结果基本一致.设计GLRaVⅢ外壳蛋白(CP)基因序列引物对,进行RT-PCR扩增,获得1.1 kb的特异片段.其中,CP基因长9... 用酶联免疫吸附法对宁夏贺兰山东麓地区不同葡萄品种进行卷叶伴随病毒Ⅲ(GLRaVⅢ)的测定,检测率为37.1%,与田间自然发病率调查结果基本一致.设计GLRaVⅢ外壳蛋白(CP)基因序列引物对,进行RT-PCR扩增,获得1.1 kb的特异片段.其中,CP基因长942 bp,推导的编码蛋白含有313个氨基酸.通过对GLRaVⅢCP基因同源性比较,结果表明,GLRaVⅢ宁夏分离物的CP基因与四川分离物SL-10 CP基因的亲缘关系最近,核苷酸和所编码的氨基酸序列同源性分别为98.8%和98.1%;与巴西分离物PET-4和智利分离物C1-817 CP基因亲缘关系较远,核苷酸序列同源性低于95.0%,所编码的氨基酸序列同源性低于97.0%,认为GLRaVⅢ株系间的CP基因存在差异. 展开更多

关键词 葡萄卷叶伴随病毒Ⅲ(GLRaVⅢ) 宁夏分离物 CP基因 克隆和序列分析

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微量植物组织直接RT-PCR反应检测4种植物病毒的方法建立与优化 被引量：2

20

作者 李姣 任秋蓉 +2 位作者 古蕾 朱晓换 王亚男 《四川师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2021年第1期111-117,共7页

建立并优化微量植物组织直接RT-PCR反应检测病毒的方法:在立体显微镜下,用26 G无菌注射器针头刺入植物茎、叶柄或根中,将沾有组织液的针头直接浸入RT反应液中,通过PCR反应产生病毒特异性DNA条带.该方法在葡萄、苹果、马铃薯和百合中有... 建立并优化微量植物组织直接RT-PCR反应检测病毒的方法:在立体显微镜下,用26 G无菌注射器针头刺入植物茎、叶柄或根中,将沾有组织液的针头直接浸入RT反应液中,通过PCR反应产生病毒特异性DNA条带.该方法在葡萄、苹果、马铃薯和百合中有效检测了葡萄卷叶相关病毒3(GLRav-3)、苹果茎沟病毒(ASGV)、马铃薯卷叶病毒(PLRV)和黄瓜花叶病毒(CMV);消除了传统RT-PCR制备RNA模板复杂耗时的缺点. 展开更多

关键词 微量植物组织直接RT-PCR反应 葡萄卷叶相关病毒3(GLRav-3) 苹果茎沟病毒(AS-GV) 马铃薯卷叶病毒(PLRV) 黄瓜花叶病毒(CMV)

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