烟草谷氧还蛋白基因NbGRX1的克隆与表达特性分析 被引量：3

1

作者 郭玉双 张建华 +2 位作者 张吉顺 史跃伟 陈静 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期47-52,共6页

采用同源克隆及cDNA末端快速扩增法(RACE),从烟草中克隆到1个谷氧还蛋白基因(Grx),命名为NbGRX1。该基因全长1021bp,编码298个氨基酸,具有典型的Grx基因结构域。Real-timeRT-PCR分析表明,该基因能在烟草的根、茎、叶中表达,并且受低温... 采用同源克隆及cDNA末端快速扩增法(RACE),从烟草中克隆到1个谷氧还蛋白基因(Grx),命名为NbGRX1。该基因全长1021bp,编码298个氨基酸,具有典型的Grx基因结构域。Real-timeRT-PCR分析表明,该基因能在烟草的根、茎、叶中表达,并且受低温、干旱和高盐诱导。 展开更多

关键词 本氏烟 谷氧还蛋白基因 荧光定量PCR

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西伯利亚蓼PsGRX基因的克隆及其在NaHCO_3胁迫下的表达 被引量：3

2

作者 那守海 王垠 刘关君 《植物生理学通讯》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期341-346,共6页

采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术从西伯利亚蓼叶cDNA文库中克隆到谷氧还蛋白基因(PsGRX)的完整编码区cDNA序列(GenBank注册号为GU139794),长度为465bp,编码106个氨基酸。根据与其他植物谷氧还蛋白的氨基酸序列的比对以及系统进化分析的... 采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术从西伯利亚蓼叶cDNA文库中克隆到谷氧还蛋白基因(PsGRX)的完整编码区cDNA序列(GenBank注册号为GU139794),长度为465bp,编码106个氨基酸。根据与其他植物谷氧还蛋白的氨基酸序列的比对以及系统进化分析的结果,初步确定此基因为谷氧还蛋白基因家族成员。实时定量PCR的结果显示,PsGRX在西伯利亚蓼的叶、茎、地下茎中均有表达,叶中表达量最高,地下茎和茎中较低。在NaHCO3胁迫的过程中,此基因在叶、茎和地下茎中的表达模式也有较明显的差异。 展开更多

关键词 西伯利亚蓼 谷氧还蛋白 基因克隆 实时定量PCR

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美洲商陆谷氧还蛋白基因PaGRXC13的克隆与生物信息学分析 被引量：3

3

作者 陈永坤 赵启红 +2 位作者 刘海珍 周天行 徐吉臣 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期2019-2024,共6页

谷氧还蛋白(Glutaredoxin,GRX)是一类小分子氧化还原酶,能够调节蛋白质的氧化还原状态,在逆境胁迫中发挥重要的作用。本研究从美洲商陆鉴定克隆了一个重金属镉诱导表达的谷氧还蛋白基因Pa GRXC13。该基因全长306 bp,编码101个氨基酸。Pa... 谷氧还蛋白(Glutaredoxin,GRX)是一类小分子氧化还原酶,能够调节蛋白质的氧化还原状态,在逆境胁迫中发挥重要的作用。本研究从美洲商陆鉴定克隆了一个重金属镉诱导表达的谷氧还蛋白基因Pa GRXC13。该基因全长306 bp,编码101个氨基酸。Pa GRXC13蛋白分子量约为11.189 k D,属于典型的CC型谷氧还蛋白。Pa GRXC13与不同来源CC型谷氧还蛋白的氨基酸序列保守性较高,一致率介于67.0~83.5%之间。系统进化分析显示,Pa GRXC13与菠菜(Spinacia oleracea)、中粒咖啡(Coffea canephora)和克莱门柑橘(Citrus clementina)的GRXC13处在同一个进化分支上。该基因在美洲商陆的叶和须根中具高转录水平,在块根和茎中表达量低。 展开更多

关键词 美洲商陆 谷氧还蛋白基因 克隆 表达 生物信息学

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烟草谷氧还蛋白NbGRX1的亚细胞定位及抗旱功能研究 被引量：2

4

作者 郭玉双 余婧 +7 位作者 蒲伟 邹颉 付强 余世洲 林世锋 张孝廉 赵杰宏 夏范讲 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期34-39,共6页

[目的]本文旨在分析烟草NbGRX1基因的亚细胞定位及抗旱功能。[方法]在前期研究中,我们从烟草中克隆了1个谷氧还蛋白基因NbGRX1,并对其表达特性进行了研究。在此基础上,对NbGRX1蛋白的亚细胞定位及抗旱功能进行研究。利用病毒介导的基因... [目的]本文旨在分析烟草NbGRX1基因的亚细胞定位及抗旱功能。[方法]在前期研究中,我们从烟草中克隆了1个谷氧还蛋白基因NbGRX1,并对其表达特性进行了研究。在此基础上,对NbGRX1蛋白的亚细胞定位及抗旱功能进行研究。利用病毒介导的基因沉默,在烟草中沉默了该基因,并调查NbGRX1基因沉默后烟草对干旱的响应。同时采用农杆菌介导法,将NbGRX1基因转化至拟南芥中,筛选单拷贝插入的纯合转基因拟南芥进行后续研究,对转基因拟南芥及对照进行干旱处理,并分析其表型。[结果]亚细胞定位研究表明,空载体中的GFP(绿色荧光蛋白)定位在细胞质和细胞核中,GFP:NbGRX1的融合蛋白均匀分布在细胞质和细胞核中,因此可以推测NbGRX1蛋白能定位在植物的细胞核和细胞质中。病毒介导的基因沉默研究表明,NbGRX1基因沉默烟草与对照相比对干旱胁迫更为敏感,更容易出现黄化和萎蔫的症状,叶片相对含水量下降;NbGRX1基因超量表达的株系干旱能力明显高于对照。[结论]烟草NbGRX1基因能够提高植物的抗旱性。 展开更多

关键词 谷氧还蛋白基因 干旱 病毒介导的基因沉默 超量表达

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人谷氧还蛋白1基因克隆及真核表达载体的构建 被引量：1

5

作者 邹朝霞 张春晶 +3 位作者 吴丽芳 刘莹莹 房绍红 周宏博 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 北大核心 2006年第5期354-357,共4页

目的从ECV304细胞中克隆谷氧还蛋白1(glutaredoxin1,Grx1)的cDNA序列并构建真核表达载体pcD-NA3.1(+)-Grx1。方法利用Trizol一步法从ECV304细胞中提取总RNA,采用RT-PCR技术从中获得Grx1的cD-NA,将质粒pcDNA3.1(+)进行双酶切、CIP处理并... 目的从ECV304细胞中克隆谷氧还蛋白1(glutaredoxin1,Grx1)的cDNA序列并构建真核表达载体pcD-NA3.1(+)-Grx1。方法利用Trizol一步法从ECV304细胞中提取总RNA,采用RT-PCR技术从中获得Grx1的cD-NA,将质粒pcDNA3.1(+)进行双酶切、CIP处理并回收纯化,与纯化后的Grx1cDNA连接构成重组表达载体pcD-NA3.1(+)-Grx1,转化大肠杆菌JM109,筛选阳性克隆鉴定并进行测序分析。结果经RT-PCR和测序鉴定,成功地克隆了人Grx1cDNA。结论从ECV304细胞中获得Grx1的cDNA,成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-Grx1,对Grx1在体外表达、进一步研究其在氧化应激中的作用及其作用机制具有重要意义。 展开更多

关键词 谷氧还蛋白1 基因克隆 序列分析 真核表达

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蜡梅谷氧还蛋白基因CpGRX1的克隆与表达分析 被引量：1

6

作者 汤玲 赵敏 +3 位作者 张军 赵玉飞 李名扬 眭顺照 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期41-47,共7页

通过随机挑取克隆测序的方法从蜡梅花cDNA文库中获得了蜡梅谷氧还蛋白基因,命名为CpGRX1(GenBank登录号:JQ990126).该基因cDNA全长为491bp,其中包含的开放阅读框长为321bp,编码蛋白分子量约为11.18kD.生物信息学分析表明:CpGRX1蛋白属... 通过随机挑取克隆测序的方法从蜡梅花cDNA文库中获得了蜡梅谷氧还蛋白基因,命名为CpGRX1(GenBank登录号:JQ990126).该基因cDNA全长为491bp,其中包含的开放阅读框长为321bp,编码蛋白分子量约为11.18kD.生物信息学分析表明:CpGRX1蛋白属于典型的亚类I(即CPYC型)谷氧还蛋白.实时荧光定量PCR分析表明:CpGRX1基因在蜡梅的根、茎、叶、花等组织中均有表达,其在茎中的表达量显著高于其它组织;在开花过程中,CpGRX1基因在蕾期、盛开期和衰败期表达量较高,表明该基因可能与花的衰老过程相关. 展开更多

关键词 蜡梅 谷氧还蛋白基因 克隆 组织表达分析

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Grx-1基因敲除鼠的繁殖及子代基因型鉴定

7

作者 刘秋彤 韩文莉 +1 位作者 郭春宝 邓春 《四川动物》 CSCD 北大核心 2014年第2期283-286,共4页

目的探讨glutaredoxin-1(Grx-1)基因敲除小鼠的优化繁殖及子代鼠的鉴定方法,为进一步研究Grx-1在支气管肺发育不良(BPD)中的作用奠定基础。方法将从美国哈佛医学院引进的纯合子Grx-1基因敲除小鼠与野生型小鼠进行交配后得到的子一代小... 目的探讨glutaredoxin-1(Grx-1)基因敲除小鼠的优化繁殖及子代鼠的鉴定方法,为进一步研究Grx-1在支气管肺发育不良(BPD)中的作用奠定基础。方法将从美国哈佛医学院引进的纯合子Grx-1基因敲除小鼠与野生型小鼠进行交配后得到的子一代小鼠同代间相互交配,繁殖出的子二代中将出现纯合子、杂合子以及野生型3种基因型。从出生起观察其生长发育情况,2周龄时剪尾提取基因组DNA,用PCR方法扩增目的基因片段,琼脂糖凝胶电泳结果判定基因型。结果 Grx-1纯合子小鼠的饲养繁殖取得成功,获得了一批Grx-1基因敲除纯合子小鼠。结论正确的饲养繁殖以及鉴定方法是获得Grx-1基因敲除纯合子小鼠的有效途径,为相关研究提供动物实验模型奠定了基础。 展开更多

关键词 谷氧还蛋白 基因敲除 基因型鉴定 氧化应激

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谷氧还蛋白(AbGrx-1)对水稻干尖线虫在氧化胁迫下的保护作用

8

作者 冯辉 范亚磊 +2 位作者 张金凤 朱红利 魏利辉 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期565-574,共10页

【目的】谷氧还蛋白(glutaredoxin, Grx)作为一种抗氧化酶,在通过清除多余活性氧来维持生物细胞氧化还原平衡、降低细胞膜损伤过程中发挥重要作用。水稻干尖线虫(Aphelenchoides besseyi)能在高温、渗透及氧化胁迫等多种逆境压力中存活... 【目的】谷氧还蛋白(glutaredoxin, Grx)作为一种抗氧化酶,在通过清除多余活性氧来维持生物细胞氧化还原平衡、降低细胞膜损伤过程中发挥重要作用。水稻干尖线虫(Aphelenchoides besseyi)能在高温、渗透及氧化胁迫等多种逆境压力中存活。本研究旨在探究Grx在水稻干尖线虫抗氧化胁迫中的作用。【方法】通过c DNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends, RACE),获得了一个水稻干尖线虫谷氧还蛋白基因AbGrx-1,进行了序列比对和遗传进化分析;通过q RT-PCR检测了AbGrx-1在线虫响应氧化和温度胁迫中的表达差异,通过原核表达获得了AbGrx-1的重组蛋白,并分析了Ab Grx-1蛋白浸泡对水稻干尖线虫在氧化和高温胁迫下存活的影响。【结果】AbGrx-1基因全长包括90 bp的5’非翻译区(UTR)、321 bp的编码区和97 bp的3’UTR,开发阅读框(横跨91至411位)编码106个氨基酸。Ab Grx-1蛋白的第24至27位点具有谷氧还蛋白催化残基(CPYC),分别在第69至第72和第83至第86位点存在保守的谷胱甘肽结合位点RSVP和GGDD,归为Ⅰ类谷氧还蛋白。遗传进化树显示Ab Grx-1与燕麦真滑刃线虫(Aphelenchus avenae)Grx亲缘关系最近,位于同一进化分支。AbGrx-1在H2O2处理和12℃下时显著上调表达,但在0℃, 4℃, 37℃和45℃极端温度中下调表达。高浓度H2O2和高温导致水稻干尖线虫死亡率增加,Ab Grx-1重组蛋白能显著提高暴露于高浓度H2O2中线虫的存活率,但不影响高温下线虫的存活率。【结论】Ab Grx-1参与调控水稻干尖线虫的抗氧化免疫反应,在抵抗氧化损伤、维持线虫生存方面具有重要功能。 展开更多

关键词 水稻干尖线虫 谷氧还蛋白 基因克隆 重组蛋白 抗氧化

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谷氧还蛋白在眼病中的作用研究进展 被引量：1

9

作者 付奕豪(综述) 徐逸轩(综述) +1 位作者 严宏(审校) 张婕(审校) 《山东大学耳鼻喉眼学报》 CAS 2021年第3期125-130,共6页

谷氧还蛋白(Grx)是巯基-二硫化物氧化还原酶家族的重要一员,其主要功能是还原蛋白质和谷胱甘肽形成的二硫化物,从而维持细胞的氧化还原平衡。Grx存在于全身许多组织中。近年来,Grx在眼部疾病中发挥的保护功能和与其他抗氧化酶的协同作... 谷氧还蛋白(Grx)是巯基-二硫化物氧化还原酶家族的重要一员,其主要功能是还原蛋白质和谷胱甘肽形成的二硫化物,从而维持细胞的氧化还原平衡。Grx存在于全身许多组织中。近年来,Grx在眼部疾病中发挥的保护功能和与其他抗氧化酶的协同作用不断被阐明,对于Grx有了更加深入的认识。综述主要总结了Grx在治疗眼病研究中所取得的最新进展。 展开更多

关键词 谷氧还蛋白 氧化应激 抗氧化酶 白内障 眼病 基因敲除小鼠

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文心兰‘南茜’谷氧还蛋白基因克隆定位及表达 被引量：1

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作者 高玉莹 白玉 +5 位作者 时欢 陈晓慧 郝向阳 林玉玲 叶开温 赖钟雄 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期533-540,共8页

为研究文心兰谷氧还蛋白超家族基因ROXY在花药发育中的功能,以文心兰‘南茜’（Oncidium Gower Ramsey）为试验材料,从‘南茜’的转录组网站选取一条与拟南芥At ROXY1/2相似度最高的基因序列（命名为OnROXY1）,以该序列的cDNA为模版设... 为研究文心兰谷氧还蛋白超家族基因ROXY在花药发育中的功能,以文心兰‘南茜’（Oncidium Gower Ramsey）为试验材料,从‘南茜’的转录组网站选取一条与拟南芥At ROXY1/2相似度最高的基因序列（命名为OnROXY1）,以该序列的cDNA为模版设计引物,用RT-PCR从‘南茜’花器官中扩增该基因,并对扩增产物进行测序和保守结构域分析.结果表明,OnROXY1基因编码区402 bp,编码133个氨基酸,与‘南茜’转录组网站中的预测序列只有一个碱基差异,但与该预测序列的氨基酸序列和保守结构域完全一致（GenBank登录号：MF696154）.OnROXY1基因具有典型的谷氧还蛋白（Glutaredoxin,GRX）基因家族的结构域和CMCC活性位点,因此该基因属于GRX基因家族,并且属于亚类CC型的GRX基因.进化树分析表明,OnROXY1与水稻的Os ROXY1、Os ROXY2和拟南芥的At ROXY1、At ROXY2蛋白序列的一致性最高,进化距离最近.亚细胞定位结果显示,OnROXY1主要定位于细胞核中,少量定位在细胞质中.RT-PCR检测发现,在不同组织部位中,OnROXY1在假鳞茎中的表达量最高,唇瓣中的表达量最低;不同花期的定量结果显示,OnROXY1在脱落干枯期时的表达量最高,盛开期时的表达量最低.本研究推测谷氧还蛋白基因OnROXY1可能在文心兰假鳞茎与根的发育、消除植物体内过多的活性氧以及延缓文心兰花器官的衰老等方面具有重要作用. 展开更多

关键词 文心兰 谷氧还蛋白基因OnROXY1 qPCR RT-PCR

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利用CRISPR/Cas9技术构建GLRX3基因敲除的HEK293细胞系 被引量：1

11

作者 代鑫 赵俊丽 +1 位作者 杨沛艳 夏海滨 《陕西师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期71-77,共7页

为了构建GLRX3(Glutaredoxin 3)敲除的HEK293细胞系,根据该蛋白结构特性设计了靶向于GLRX3基因Exon5的4个sgRNA,并通过T7E1检测确认了所设计sgRNA的有效性。将携带Cas9及靶向hGLRX3-Exon5的sgRNA1的打靶载体转染HEK293,通过药物Puromyci... 为了构建GLRX3(Glutaredoxin 3)敲除的HEK293细胞系,根据该蛋白结构特性设计了靶向于GLRX3基因Exon5的4个sgRNA,并通过T7E1检测确认了所设计sgRNA的有效性。将携带Cas9及靶向hGLRX3-Exon5的sgRNA1的打靶载体转染HEK293,通过药物Puromycin和细胞克隆化筛选出稳定GLRX3基因敲除的HEK293细胞株,并通过测序确定GLRX3两个等位基因均发生移码突变。通过免疫印迹在蛋白表达水平确认了该基因的敲除。利用CRISPR/Cas9技术成功构建了GLRX3敲除的HEK293细胞株,其为探索GLRX3的功能和作用机制提供了有效的细胞模型。 展开更多

关键词 GLRX3 CRISPR/Cas9系统 基因敲除 基因编辑

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粉尘螨谷氧还蛋白-1样蛋白基因原核表达质粒的构建及结构分析

12

作者 任雅宁 周鹰 +5 位作者 袁存银 周冬梅 廖媛芬 强士豪 罗金丹 崔玉宝 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2023年第6期672-676,682,共6页

目的获得粉尘螨谷氧还蛋白-1样蛋白(Glutaredoxin-1,Grx1)的编码基因并构建表达质粒,对该基因及其编码蛋白质进行结构预测。方法以粉尘螨总RNA为模板,RT-PCR扩增获得编码基因后插入原核表达载体pET28a(+),构建的重组质粒转化入E.coil BL... 目的获得粉尘螨谷氧还蛋白-1样蛋白(Glutaredoxin-1,Grx1)的编码基因并构建表达质粒,对该基因及其编码蛋白质进行结构预测。方法以粉尘螨总RNA为模板,RT-PCR扩增获得编码基因后插入原核表达载体pET28a(+),构建的重组质粒转化入E.coil BL21(DE3)感受态细胞中,用异丙基-b-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-Dthiogalactoside,IPTG)诱导表达,SDS-PAGE分析表达产物。采用生物信息学软件分析该基因及其编码蛋白的结构等生物学特征。结果获得的粉尘螨Grx1编码基因全长315bp,构建的原核表达质粒pET28a(+)-Grx1转化入大肠埃希菌感受态细胞后经IPTG诱导,表达相对分子质量为25.9×10^(3)的重组蛋白。生物信息学分析该基因编码的蛋白质由104个氨基酸组成,主要分布于细胞核(占87.0%)。该蛋白含有11个潜在磷酸化位点(4个苏氨酸,6个丝氨酸和1个酪氨酸),二级结构为α-螺旋(45.19%)、无规则卷曲(31.73%)、延伸链(14.42%)和β-转角(8.65%)。将该基因推导出的编码氨基酸序列进行Blast获得同源基因与屋尘螨谷胱甘肽样C8样蛋白(Dermatophagoides pteronyssinus glutaredoxin-C8-like)同源性最高(83.52%)。结论获得了粉尘螨Grx1的编码基因及其原核表达质粒,生物信息学分析该蛋白含有潜在的磷酸化位点且主要分布于细胞核,可为该基因的生理功能研究及粉尘螨的防制提供参考。 展开更多

关键词 粉尘螨 谷氧还蛋白-1样蛋白 生物信息学 基因克隆

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菲律宾蛤仔两种谷氧还蛋白基因对微生物侵染和重金属胁迫的应答 被引量：1

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作者 张林宝 孙伟 +1 位作者 蔡文贵 贾晓平 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1253-1259,共7页

研究了菲律宾蛤仔(Venerupis philippinarum)两种谷氧还蛋白Vp Grx1和Vp Grx2 m RNA在鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)和重金属镉(Cd)作用下的表达调控规律。结果表明,正常菲律宾蛤仔Vp Grx1和Vp Grx2在所... 研究了菲律宾蛤仔(Venerupis philippinarum)两种谷氧还蛋白Vp Grx1和Vp Grx2 m RNA在鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)和重金属镉(Cd)作用下的表达调控规律。结果表明,正常菲律宾蛤仔Vp Grx1和Vp Grx2在所检测组织中均有表达,其中Vp Grx1在鳃中的表达量最高,而Vp Grx2在蛤仔血淋巴细胞、鳃和肝胰腺中的表达量均较高。鳗弧菌和藤黄微球菌侵染在某些时段可显著诱导Vp Grx1和Vp Grx2基因的表达水平(P<0.05)。另外,0.8μg/L、8μg/L和80μg/L Cd处理30 d后,菲律宾蛤仔肝胰腺中Vp Grx1和Vp Grx2基因转录水平显著升高(P<0.05),血淋巴细胞中Vp Grx1基因表达被显著抑制(P<0.05)而Vp Grx2基因表达被显著诱导(P<0.05)。以上结果表明,Vp Grx1和Vp Grx2在菲律宾蛤仔的固有免疫反应和抗氧化胁迫中发挥着重要作用。 展开更多

关键词 菲律宾蛤仔 谷氧还蛋白 微生物侵染 CD 基因表达

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