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基因Ⅰ、Ⅳ型戊型肝炎病毒高灵敏度通用引物的设计和初步应用 被引量:54
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作者 葛胜祥 郭清顺 +2 位作者 李少伟 张军 夏宁邵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期181-187,共7页
设计针对国内流行的戊型肝炎病毒(HEV)基因Ⅰ、Ⅳ型,在这两型序列的保守区域设计了一套RT-PCR引物--E引物,并将E引物与目前较常用的3对通用引物(Meng、ConORF1和ConORF2引物)比较了检测基因Ⅰ、Ⅳ型HEV的灵敏度.对基因Ⅰ型HEV,E引物能... 设计针对国内流行的戊型肝炎病毒(HEV)基因Ⅰ、Ⅳ型,在这两型序列的保守区域设计了一套RT-PCR引物--E引物,并将E引物与目前较常用的3对通用引物(Meng、ConORF1和ConORF2引物)比较了检测基因Ⅰ、Ⅳ型HEV的灵敏度.对基因Ⅰ型HEV,E引物能检出的稀释度为105,参考引物能检出的稀释度为102~104;对基因Ⅳ型HEV,E引物能检出的稀释度为102,参考引物能检出的稀释度为101~102.在17份HEV-IgM阳性血清中,E引物检出5份,检出率为29.4%;参考引物只能检出1份或2份,检出率最高为11.8%.E引物在33份HEV-IgM阳性的隐性感染血清中检出6份,阳性率18.2%;在79份HEV-IgM阳性的临床肝炎血清中检出36份,阳性率45.6%.以上结果初步表明,对于在国内流行的基因Ⅰ、Ⅳ型HEV,E引物的检测灵敏度要高于目前常用的通用引物. 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 基因Ⅰ型 基因Ⅳ型 聚合酶链反应 通用引物 设计 PCR
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猪源乙型脑炎病毒的分离鉴定及其E基因分析 被引量:14
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作者 郑浩 张建武 袁世山 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期476-482,共7页
采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测猪流产胎儿病料中的乙型脑炎病毒(JEV),并对阳性病料做病毒分离与纯化。通过空斑减数试验测定了分离株和JEV P3株的中和指数。对分离株的pr M-E基因进行克隆并测序,将推导的E蛋白序列与GenBan... 采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测猪流产胎儿病料中的乙型脑炎病毒(JEV),并对阳性病料做病毒分离与纯化。通过空斑减数试验测定了分离株和JEV P3株的中和指数。对分离株的pr M-E基因进行克隆并测序,将推导的E蛋白序列与GenBank中登录的JEV毒株的E蛋白序列做比较分析。以E基因序列为基础,绘制进化树。结果显示,在检测的9份病料中有3份呈JEV阳性,并分离出1株JEV,命名为HEN0701。经测定,P3株的中和指数为12,分离株的中和指数为2。pr M与E基因的序列分析表明,分离株与P3和Beijing-1株的同源性较低,最高仅为87.7%;而与JEV/sw/Mie/40/2004、KV1899、SH17 M-07和YN79-Bao83株的同源性较高,最低为96.6%。进化分析表明,分离株属基因Ⅰ型。E蛋白序列分析结果显示,分离株与基因Ⅰ型JEV的E蛋白序列高度同源,且与SH-53、JEV/sw/Mie/40/2004和VN22/Viet Nam/2002/swine blood株的E蛋白序列完全相同,而与基因Ⅲ型JEV的E蛋白序列存在4个共同的氨基酸变异位点。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 E基因 基因Ⅰ型
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2011-2012年安徽省哨点医院婴幼儿病毒性腹泻分子流行病学特征 被引量:11
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作者 史永林 查震球 +2 位作者 胡万富 吴家兵 王建军 《中华疾病控制杂志》 CAS 北大核心 2014年第6期508-511,共4页
目的了解安徽省哨点医院腹泻患儿中病毒性病原体感染状况和分子流行病学特征。方法收集安徽省两哨点医院2011年1月-2012年12月住院腹泻患儿粪便标本549份,采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测轮状... 目的了解安徽省哨点医院腹泻患儿中病毒性病原体感染状况和分子流行病学特征。方法收集安徽省两哨点医院2011年1月-2012年12月住院腹泻患儿粪便标本549份,采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测轮状病毒(rotavirus,RV)抗原,采用聚合酶连锁反应(polymerase chain reaction,PCR)或反转录聚合酶连锁反应(reverse transcription-PCR,RT-PCR)检测RV、诺如病毒(norovirus,NoV)、星状病毒(astrovirus,AstV)和肠道腺病毒(adenovirus,AdV)并分型鉴定。结果 549份粪便标本中RV检出率为22.40%(123/549),NoV为12.02%(66/549),AstV为1.82%(10/549),AdV为1.28%(7/549),混合感染1.15%(4/549)。对RV G/P分型结果显示G9P[8]为主要流行株,NoV以GII-4为主要流行株。结论安徽哨点医院婴幼儿病毒性腹泻的病原以RV为主,秋冬季高发,存在混合感染。 展开更多
关键词 腹泻 婴儿 流行病学方法 基因型
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鸡呼肠孤病毒基因Ⅰ型变异株的分离鉴定和致病性分析
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作者 许明清 汪建华 +10 位作者 马芹 刘丹丹 张中波 赵杰 石艳红 唐代萍 王胜 郭明 胡峰 于可响 李玉峰 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第8期54-61,共8页
为探究导致山东省某肉种鸡场种鸡出现腿病的病原并进行致病性分析,本试验从该肉种鸡场收集病料,进行鸡胚分离、细胞传代、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测、序列分析、商品肉鸡的致病性试验和免疫攻毒保护试验。结果显示,分离获得1株... 为探究导致山东省某肉种鸡场种鸡出现腿病的病原并进行致病性分析,本试验从该肉种鸡场收集病料,进行鸡胚分离、细胞传代、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测、序列分析、商品肉鸡的致病性试验和免疫攻毒保护试验。结果显示,分离获得1株鸡呼肠孤病毒(ARV),命名为ARV-LL-2020,该病毒对鸡胚的致死率为100%,在鸡肝癌细胞系(LMH)上具有较强的适应性。ARV-LL-2020毒株与经典的S1133疫苗株同属基因Ⅰ型,但两者的主要抗原σC基因的核苷酸同源性为73.6%,氨基酸同源性为59.1%。ARV-LL-2020毒株回归商品肉鸡能复制出与实际生产中完全一致的发病症状。S1133株商品化弱毒活疫苗对ARV-LL-2020毒株的保护率仅有50%。结果表明,导致种鸡腿病的ARV-LL-2020毒株是1株ARV基因I型变异株,目前S1133株商品化弱毒活疫苗无法对其提供完全保护。 展开更多
关键词 鸡呼肠孤病毒 基因Ⅰ型 分离鉴定 致病性
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基因Ⅰ型草鱼呼肠孤病毒TaqMan Real-Time PCR检测方法的建立及应用 被引量:5
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作者 殷亮 王庆 +6 位作者 曾伟伟 李永刚 王英英 刘春 梁红茹 石存斌 吴淑勤 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期570-576,共7页
为了建立和应用可检测基因I型草鱼呼肠孤病毒(GCRV)的荧光定量检测方法,实验根据基因I型GCRV的s6保守序列,分别设计扩增目的条带661bp普通引物(P1、P2)、扩增目的条带159bp荧光定量引物(F1、F2)和一条探针;同时构建含有目的片... 为了建立和应用可检测基因I型草鱼呼肠孤病毒(GCRV)的荧光定量检测方法,实验根据基因I型GCRV的s6保守序列,分别设计扩增目的条带661bp普通引物(P1、P2)、扩增目的条带159bp荧光定量引物(F1、F2)和一条探针;同时构建含有目的片段的PVAX1-S6作为标准质粒,10倍梯度稀释构建质粒拷贝数与Ct值的标准曲线(Y=-3.389X+38.076)。结果表明,此方法在3.9×10^7~3.9×10^1拷贝/uL之间相关性较好,R2为0.992,最小检测量为4拷贝/uL;且与基因Ⅱ型、Ⅲ型GCRV以及其他病原核酸无交叉反应。运用该方法检测16份草鱼出血病疑似样品,阳性结果为4份;而普通PCR检测仅2份显示阳性。本研究建立了针对基因I型GCRV的荧光定量检测方法,具有高效、特异、灵敏、可重复性强的优点,适合于目前基因I型GCRV的临床快速检测和病毒定量分析。 展开更多
关键词 草鱼呼肠孤病毒 基因i TAQMAN Real—Time PCR 定量分析
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云南省景洪市2015年蚊虫感染病毒状况调查 被引量:5
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作者 潘虹 高阳 +7 位作者 冯云 韩茜 张婧 朱进 李卫平 李鸿斌 范建华 张海林 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS 2018年第4期331-335,共5页
目的调查云南省西双版纳傣族自治州(西双版纳州)景洪市蚊虫自然感染登革热病毒(DENV)和流行性乙型脑炎(乙脑)病毒(JEV)状况,为相关疾病防控提供科学依据。方法 2015年8-9月在景洪市城区采集蚊虫标本,利用RT-PCR法检测DENV和JEV核酸,阳... 目的调查云南省西双版纳傣族自治州(西双版纳州)景洪市蚊虫自然感染登革热病毒(DENV)和流行性乙型脑炎(乙脑)病毒(JEV)状况,为相关疾病防控提供科学依据。方法 2015年8-9月在景洪市城区采集蚊虫标本,利用RT-PCR法检测DENV和JEV核酸,阳性标本进行C/Pr M基因序列测定以及同源性和系统进化分析。结果共捕获蚊虫4种2 009只,其中白纹伊蚊、埃及伊蚊、库蚊(未鉴定种类)和刺扰伊蚊分别为896、477、634和2只;从一批库蚊和一批白纹伊蚊中均检测到JEV核酸,并获得这2株JEV的C/Pr M基因核酸序列;进化分析结果表明,2株JEV与基因Ⅰ型JEV同处于一个进化分支,并与2009年红河哈尼族彝族自治州、2010年德宏傣族景颇族自治州和2008年甘肃省流行株亲缘关系较近。DENV检测结果均为阴性。结论 2015年景洪市存在基因Ⅰ型JEV流行,为西双版纳州首次从蚊虫中检出。今后仍需加强该地区乙脑病例及其媒介蚊虫的监测和防控,防止乙脑大范围流行。 展开更多
关键词 蚊虫 虫媒病毒 流行性乙型脑炎病毒 基因Ⅰ型 C/PrM基因
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基因Ⅰ型草鱼呼肠孤病毒VP7蛋白合成肽抗体的制备及应用 被引量:4
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作者 刘世旭 王庆 +3 位作者 常藕琴 周文礼 曾伟伟 王英英 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1849-1857,共9页
【目的】制备基因I型草鱼呼肠孤病毒(GCRV)VP7蛋白合成肽抗体并验证其特异性,为研究VP7外衣壳蛋白在基因I型GCRV病毒与宿主间的相互作用及研制基因工程疫苗提供参考依据。【方法】以GCRV GZ1208株为模板进行RT-PCR扩增,运用在线生物信... 【目的】制备基因I型草鱼呼肠孤病毒(GCRV)VP7蛋白合成肽抗体并验证其特异性,为研究VP7外衣壳蛋白在基因I型GCRV病毒与宿主间的相互作用及研制基因工程疫苗提供参考依据。【方法】以GCRV GZ1208株为模板进行RT-PCR扩增,运用在线生物信息学分析软件对VP7蛋白B细胞表位进行功能预测,选择位于VP7蛋白第26~39位氨基酸的多肽序列进行人工合成,与钥孔血蓝蛋白载体蛋白偶联后免疫新西兰白兔以获得VP7蛋白合成肽抗体,然后采用Western blotting和间接免疫荧光试验验证VP7蛋白合成肽抗体对基因I型GCRV的特异性识别能力。【结果】VP7蛋白氨基酸序列在基因I型GCRV中高度保守,其合成肽抗体效价约1∶256000。Western blotting分析结果显示,融合蛋白VP7约在55 kD处出现单一的特异性条带,而GZ1208株和JX0901株样品约在30 kD处出现对应的特异性条带,与预期结果基本一致;间接免疫荧光试验结果表明,VP7蛋白合成肽抗体可特异性识别感染基因I型GCRV的草鱼脑细胞(GCB),感染细胞中出现特异性绿色荧光信号,而感染其他基因型GCRV及正常未感染病毒的GCB细胞中均无特异性绿色荧光出现。【结论】制备获得的VP7蛋白合成肽抗体能特异性识别基因I型GCRV,而不识别其他基因型毒株,可用于草鱼出血病的临床诊断和基因I型GCRV的病原学研究。 展开更多
关键词 草鱼呼肠孤病毒(GCRV) 基因i VP7蛋白 原核表达 合成肽抗体
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中国首次分离的二株基因Ⅰ型流行性乙型脑炎病毒全基因组序列分析(英文) 被引量:4
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作者 冯云 李灿委 +2 位作者 章域震 杨卫红 张海林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期829-835,共7页
目的分析中国首次分离的基因Ⅰ型流行性乙型脑炎病毒(JEV)全基因组的基因组特征。方法设计JEV全基因组扩增引物,RT-PCR扩增片断,PCR产物直接测序,拼接后获得全基因组序列。采用生物学软件进行同源性和系统进化分析。结果 1977和1982年... 目的分析中国首次分离的基因Ⅰ型流行性乙型脑炎病毒(JEV)全基因组的基因组特征。方法设计JEV全基因组扩增引物,RT-PCR扩增片断,PCR产物直接测序,拼接后获得全基因组序列。采用生物学软件进行同源性和系统进化分析。结果 1977和1982年分离自云南蚊虫的M28和BN82215病毒株基因组全长分别为10 969bp和10 970bp,5′非编码区均含有96个核苷酸,3′非编码区含有573和574个核苷酸。它们的开放阅读框(ORF)都从97到10 396位,共10 299个核苷酸,编码3 433个氨基酸。M28和BN82215株与来自GenBank的5个基因型JEV株的全基因组核苷酸和氨基酸同源性分别为78.4%~96.3%和91.4%~99.6%,与近几年国内外基因Ⅰ型流行株的同源性最高,进化关系最接近,都属于基因Ⅰ型。这两株病毒与JEV疫苗株SA14-14-2相比,有56个氨基酸差异,其中E基因有11个氨基酸差异,但都不属抗原关键位点。结论本研究阐明了中国首次分离的基因Ⅰ型JEV的全基因组分子特征,决定病毒抗原和毒力的E蛋白关键位点无明显变化。证实20世纪70和80年代云南省就有基因Ⅰ型JEV流行。 展开更多
关键词 流行性乙型脑炎病毒 基因Ⅰ型 全基因组 同源性分析 系统进化分析
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云南省澜沧江流域蚊虫流行性乙型脑炎病毒分子特征分析 被引量:3
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作者 郭晓芳 王丕玉 +8 位作者 曾旭灿 赵秋敏 周传玲 龚道方 李佳 王海波 董利民 周红宁 张久松 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS CSCD 2012年第5期391-394,共4页
目的确定2007-2009年从云南省澜沧江流域采集蚊虫中分离的13株流行性乙型脑炎病毒(JEV)基因型及其E基因序列特征。方法用反转录-聚合酶链反应(RTPCR)扩增E蛋白核苷酸序列,测序后用DNAStar软件包中的MegAlign程序完成核苷酸相似性和氨基... 目的确定2007-2009年从云南省澜沧江流域采集蚊虫中分离的13株流行性乙型脑炎病毒(JEV)基因型及其E基因序列特征。方法用反转录-聚合酶链反应(RTPCR)扩增E蛋白核苷酸序列,测序后用DNAStar软件包中的MegAlign程序完成核苷酸相似性和氨基酸同源性分析;用ClustalX1.83软件进行碱基配对后采用Mega5.0软件做进化树分析。结果 13株JEVE基因的核苷酸相似性为98.0%~100%,氨基酸的同源性为99.8%~100%,与我国乙脑减毒活疫苗株SA14-14-2的核苷酸相似性为86.1%~86.9%,氨基酸同源性为96.8%~97.2%;进化树分析发现,13株JEV均属于基因Ⅰ型。结论 2007-2009年从云南省澜沧江流域采集蚊虫中分离的13株病毒属于JEV基因Ⅰ型。 展开更多
关键词 澜沧江流域 流行性乙型脑炎病毒 基因Ⅰ型
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2006年河南省南阳市流行性乙型脑炎病毒的分离与分子特征分析 被引量:3
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作者 付士红 翟友刚 +11 位作者 郝宗宇 张彦平 王焕琴 何英 李铭华 李幸乐 唐晓燕 曹玉玺 高晓艳 王环宇 冯云 梁国栋 《疾病监测》 CAS 2010年第5期346-350,共5页
目的在河南省南阳市采集蚊虫标本,进行西尼罗病毒基因检测,分离流行性乙型脑炎(乙脑)病毒并分析分离株的分子生物学特征。方法 2006年从南阳市采集蚊虫标本,将标本研磨处理后进行巢式PCR检测西尼罗病毒核酸,用细胞培养法对标本进行病毒... 目的在河南省南阳市采集蚊虫标本,进行西尼罗病毒基因检测,分离流行性乙型脑炎(乙脑)病毒并分析分离株的分子生物学特征。方法 2006年从南阳市采集蚊虫标本,将标本研磨处理后进行巢式PCR检测西尼罗病毒核酸,用细胞培养法对标本进行病毒分离,通过血清学与分子生物学方法鉴定新分离到的乙脑病毒,扩增分离株PrM和E基因区,使用生物学软件进行序列和系统发生分析。结果共采集蚊虫标本6231只,巢式PCR检测西尼罗病毒结果均为阴性。从标本中分离到7株病毒,经鉴定均为乙脑病毒。基因分型显示7株病毒均为基因Ⅰ型,新分离株在E基因之间的核苷酸同源性为98.5%~100%,氨基酸同源性为98.4%~100%。新分离株与P3株和SA14-14-2的E基因核苷酸同源性分别为87.7%~88.2%和87.3%~87.9%。新分离株与P3株相比存在10个共同氨基酸差异位点,但在决定毒力的关键位点不同于SA14-14-2。结论河南省南阳市2006年乙脑病毒流行株为基因Ⅰ型,毒株的毒力基因没有明显改变,所有标本均未检测到西尼罗病毒阳性。 展开更多
关键词 流行性乙型脑炎病毒 西尼罗病毒 基因Ⅰ型 E基因
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乙型脑炎病毒致弱株的筛选及其生长特性 被引量:1
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作者 郑浩 郑旭晨 +5 位作者 郭亦非 童武 刘飞 张青占 单同领 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 2013年第5期21-26,共6页
本文将乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)基因I型HEN0701株在BHK-21细胞上传代,并通过空斑纯化和接种小鼠来筛选弱毒株。通过空斑试验和一步生长曲线,比较弱毒株和其亲本强毒株的生长特性。结果显示,JEV HEN0701株经过在BH... 本文将乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)基因I型HEN0701株在BHK-21细胞上传代,并通过空斑纯化和接种小鼠来筛选弱毒株。通过空斑试验和一步生长曲线,比较弱毒株和其亲本强毒株的生长特性。结果显示,JEV HEN0701株经过在BHK-21细胞上传代100代和10轮空斑纯化,挑选获得6株克隆株。将6株克隆株经脑内和皮下接种小鼠,筛选获得一株致弱株10S3。与HEN0701相比,10S3的空斑形态比较一致;而生长曲线显示,HEN0701在BHK-21上生长速度比10S3快。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 基因i 致弱
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云南省保山市蚊虫中检测到基因Ⅰ型流行性乙型脑炎病毒 被引量:1
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作者 张婧 李加全 +5 位作者 冯云 韩茜 潘虹 杨和仙 张海林 宋志忠 《疾病监测》 CAS 2018年第2期150-154,共5页
目的调查云南省保山市蚊虫及其自然感染虫媒病毒状况,为蚊媒病毒病防控提供参考依据。方法 2015年9月采用诱蚊灯法在保山市隆阳区农村人房和畜圈采集蚊虫标本,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)用于检测蚊虫标本中黄病毒属、甲病毒属、布尼亚... 目的调查云南省保山市蚊虫及其自然感染虫媒病毒状况,为蚊媒病毒病防控提供参考依据。方法 2015年9月采用诱蚊灯法在保山市隆阳区农村人房和畜圈采集蚊虫标本,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)用于检测蚊虫标本中黄病毒属、甲病毒属、布尼亚病毒属和流行性乙型脑炎病毒(乙脑病毒)等相关病毒核酸,阳性者进行C/pr M基因序列测定、同源性和系统进化分析。结果共捕获蚊虫3种8 202只,三带喙库蚊(Culex tritaeniorhynchus)、中华按蚊(Anopheles sinensis)和骚扰阿蚊(Armigeres subalbatus)构成比依次为88.50%(7 259只)、11.43%(937只)和0.07%(6只)。蚊虫标本分30批进行RT-PCR检测,14批三带喙库蚊中检测到乙脑病毒核酸,并获得14株乙脑病毒C/pr M基因核苷酸序列。同源性和进化分析表明,14株乙脑病毒与基因Ⅰ型乙脑病毒同在一个进化分支,并与2007年保山市腾冲县和2010年德宏傣族景颇族自治州(芒市和瑞丽市)的基因Ⅰ型乙脑病毒具有较近的进化关系。结论三带喙库蚊为保山市的优势蚊种和乙脑病毒主要传播媒介,当地存在基因Ⅰ型乙脑病毒流行,此为近10年保山市首次检测到基因Ⅰ型乙脑病毒。 展开更多
关键词 蚊虫 虫媒病毒 流行性乙型脑炎病毒 基因i
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湖南地区Ⅰ型乙型脑炎病毒的分离鉴定及E基因序列分析 被引量:1
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作者 向卫军 杨涛涛 +1 位作者 李润成 余兴龙 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期195-199,共5页
为探寻湖南汨罗地区猪场蚊子携带乙型脑炎病毒(JEV)的情况,对该地区3个猪场蚊子开展JEV的病原学调查研究。从该地区3个种猪场采集约3 900只蚊子,用RT–PCR方法扩增JEV NS5基因,结果从40份样品中检出17份样品呈阳性。将阳性样品研磨液接... 为探寻湖南汨罗地区猪场蚊子携带乙型脑炎病毒(JEV)的情况,对该地区3个猪场蚊子开展JEV的病原学调查研究。从该地区3个种猪场采集约3 900只蚊子,用RT–PCR方法扩增JEV NS5基因,结果从40份样品中检出17份样品呈阳性。将阳性样品研磨液接种BHK–21细胞分离病毒,经3次传代后获得了1株JEV,将新分离株命名为HNML1株。根据JEV的E基因序列设计1对引物,用RT–PCR方法扩增HNML1株的E基因,并进行序列测定和同源性分析,结果表明,该E基因的核苷酸序列与减毒活疫苗株SA14–14–2相应序列的同源性为86.9%;该E基因的氨基酸序列与减毒活疫苗株SA14–14–2相应序列的同源性为97.0%,二者存在15个氨基酸的差异(其中包括8个与关键毒力相关的氨基酸)。基因同源性分析结果表明,HNML1株为基因Ⅰ型JEV毒株。 展开更多
关键词 猪场 蚊子 基因i 乙型脑炎病毒 湖南汨罗
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Mechanism of Japanese encephalitis virus genotypes replacement based on human,porcine and mosquito-originated cell lines model 被引量:6
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作者 Loan Phuong Do Trang Minh Bui Nga Thi Phan 《Asian Pacific Journal of Tropical Medicine》 SCIE CAS 2016年第4期325-328,共4页
Objective:To examine the multiplication efficiency Japanese encephalitis virus(JEV)genotype Ⅰ(G Ⅰ) and genotype Ⅲ(GⅢ) of different cell lines which originated from human,porcine,mosquitoes in order to prove mechan... Objective:To examine the multiplication efficiency Japanese encephalitis virus(JEV)genotype Ⅰ(G Ⅰ) and genotype Ⅲ(GⅢ) of different cell lines which originated from human,porcine,mosquitoes in order to prove mechanism of JEV G Ⅰ replacement JEV GⅢ since it emerging in nature recent decades.Methods:The mixture of Gi and GⅢ JEV isolates was inoculated on human rhabdomyosarcoma(RD).pig kidney epithelial(PS) and Aedes albopictus C6/36 clone(C6/36) which originated from human,porcine and mosquitoes,respectively.Plaque assays were performed to calculate virus titer and real-time RT-PCR with GⅠand GⅢspecific primer sets to quantify the number of GⅠ and GUI RNA copies.Results:The highest virus titer reached at the 3rd day of post infection when G Ⅰand GⅢ mixture was inoculated on RD and PS and that of C636 was at the 4^(th)day.JEVs were amplified and maintained by C6/36 cells after 10 passages whereas that by RD and PS only limited within 8 and 6 passages,respectively.GⅠ strain amplified and maintained more efficiently on C6/36 and PS but not RD.whereas GⅢ strain amplified and maintained more efficiently on RD.Conclusions:There is a correlation between the multiplication efficiency of GⅠ and GⅢ JEV strains when these two genotype strains co-infected on different cell lines with the predominance of GⅠstrains in C6/36 and PS and the limited detection of G 1 strains in RD cells proving a possible mechanism of shift JEV genotypes in nature recent decades since GⅠ emerging. 展开更多
关键词 Japanese ENCEPHALiTiS virus genotype i genotype MULTiPLiCATiON Shift genotype
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非洲猪瘟病毒基因Ⅰ型的双重实时荧光定量PCR检测方法建立 被引量:2
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作者 常昊 邱英武 +10 位作者 彭杰 高琦 宋泽布 陈洋 李薇 林丽苗 曹雪珍 周庆丰 张桂红 李群辉 郑泽中 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期4428-4432,共5页
随着基因Ⅰ型非洲猪瘟(GenotypeⅠASFV)在我国开始流行,使我国对ASF的诊断、预防和控制更具挑战性。本研究使用中国动物疾病预防控制中心(CADC)推荐使用的B646L引物与探针,结合针对GenotypeⅠASFV EP402R基因保守特异性区域设计引物与探... 随着基因Ⅰ型非洲猪瘟(GenotypeⅠASFV)在我国开始流行,使我国对ASF的诊断、预防和控制更具挑战性。本研究使用中国动物疾病预防控制中心(CADC)推荐使用的B646L引物与探针,结合针对GenotypeⅠASFV EP402R基因保守特异性区域设计引物与探针,建立了一种在诊断ASF的同时可对ASFV进行GenotypeⅠASFV鉴别的快速检测方法,并对其灵敏性、特异性进行检测。结果显示,该方法具有良好的灵敏性以及特异性,可有效用于ASFV的临床诊断以及GenotypeⅠASFV的监测。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 基因Ⅰ型ASFV 实时荧光定量PCR EP402R B646 L
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乙型肝炎病毒新基因型I与肝脏疾病关系的研究 被引量:4
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作者 陈钦艳 李生 +1 位作者 杨进业 方钟燎 《广西医学》 CAS 2014年第1期1-4,共4页
目的了解乙型肝炎病毒(HBV)新基因型I与肝脏疾病的关系,为乙肝防治提供科学依据。方法按病例对照研究的原理,采集97例慢性乙型肝炎、72例肝硬化、104例原发性肝癌患者和117例HBV无症状携带者血清标本,用套式聚合酶链反应进行HBV DNA扩... 目的了解乙型肝炎病毒(HBV)新基因型I与肝脏疾病的关系,为乙肝防治提供科学依据。方法按病例对照研究的原理,采集97例慢性乙型肝炎、72例肝硬化、104例原发性肝癌患者和117例HBV无症状携带者血清标本,用套式聚合酶链反应进行HBV DNA扩增和序列分析。用STAR软件和NCBI基因分型工具进行基因分型,分析HBV新基因型I及其他基因型在各类肝脏疾病中的比例。结果共采集标本390份,HBV基因型I占5.90%,基因型A占0.77%,基因型B占32.05%,基因型C占61.03%,基因型G占0.26%;HBV基因型I在HBV无症状携带者、慢性肝炎、肝硬化、原发性肝癌组中比例比较差异无统计学意义(P>0.05)。基因型I的丙氨酸氨基转移酶、异常检出率与其他基因型比较差异无统计学意义(P>0.05),基因型I、C高病毒量率均高于基因型B(P<0.01)。基因型B在HBV无症状携带者、慢性肝炎、肝硬化、原发性肝癌的检出率呈减少趋势(P<0.01);基因型C的检出率则呈增加趋势(P<0.01)。基因型I在慢性肝炎、肝硬化、原发性肝癌的危险度均高于基因型B,基因型C在肝硬化、原发性肝癌的危险度均高于基因型B。结论HBV新基因型I与肝脏疾病有关;基因型C与肝硬化、原发性肝癌的发生有关。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 新基因型i 肝脏疾病
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牛精液中基因I型牛病毒性腹泻病毒荧光探针定量RT-PCR检测方法的建立 被引量:3
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作者 季新成 黄玲 +5 位作者 段晓东 员丽娟 牛国辉 于学辉 曾新强 张彦明 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期45-49,共5页
为建立牛精液中基因I型牛病毒性腹泻病毒(BVDV-1)的快速检测方法,本研究采用Sephycral S-400凝胶对牛精液过滤处理后提取病毒核酸,根据BVDV-1 5'UTR保守区基因序列,设计特异性引物和荧光探针,通过反应条件的优化,建立了牛精液中BVD... 为建立牛精液中基因I型牛病毒性腹泻病毒(BVDV-1)的快速检测方法,本研究采用Sephycral S-400凝胶对牛精液过滤处理后提取病毒核酸,根据BVDV-1 5'UTR保守区基因序列,设计特异性引物和荧光探针,通过反应条件的优化,建立了牛精液中BVDV-1荧光定量RT-PCR检测方法。该方法可以检测到牛精液中含量为0.0125 TCID50的病毒,灵敏度比病毒分离方法高200倍~2 000倍,比常规RT-PCR方法高10倍。对从同一个牛场6个月内采集的120份新鲜牛精液和40份冷冻牛精液用该荧光RT-PCR方法检测,没有检测到BVDV-1阳性样品。对其中的10头牛定期检测精液中病毒的同时,并同步检测了全血中的病毒和血清抗体,结果血清抗体阳性牛精液中没有检测到病毒,本研究结果表明,不能以血清抗体阴阳性做为精液是否带毒的依据。 展开更多
关键词 牛精液 基因i型BVDV 荧光定量RT-PCR检测 血清抗体检测
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台湾基因Ⅰ型鸡传染性支气管炎病毒SCTW株的分离鉴定及致病性研究 被引量:1
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作者 郭明萍 王富妍 +3 位作者 吴瑞婷 邹年莉 赵扬 黄勇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期613-617,共5页
为分离鉴定鸡传染性支气管炎病毒(IBV)及其致病性,本研究通过病料鸡胚接种和鸡胚尿囊液的RT-PCR检测,从四川某养鸡场的发病鸡群中分离出一株IBV。其S1基因测序分析表明,该病毒分离株属于台湾基因Ⅰ型(TWⅠ)IBV,命名为SCTW株,这是中国大... 为分离鉴定鸡传染性支气管炎病毒(IBV)及其致病性,本研究通过病料鸡胚接种和鸡胚尿囊液的RT-PCR检测,从四川某养鸡场的发病鸡群中分离出一株IBV。其S1基因测序分析表明,该病毒分离株属于台湾基因Ⅰ型(TWⅠ)IBV,命名为SCTW株,这是中国大陆地区首次分离的TWⅠ型IBV。将该分离株与禽源致病性大肠杆菌(E.coli)分别或混合感染15日龄白羽肉鸡以鉴定其致病性,结果显示:SCTW分离株具有较强的致病性;而且E.coli的混合感染可明显增加SCTW的发病率和病死率,使其组织病理变化更加严重。因此,加强IBV的流行病学调查,做好E.coli的防治,对鸡传染性支气管炎(IB)的防制有重要的意义。 展开更多
关键词 鸡传染性支气管炎 禽源大肠杆菌 台湾基因Ⅰ型 协同致病
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基因I型HCV感染患者的治疗进展
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作者 毛维武 张文杰 杜鹏 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2015年第7期883-886,共4页
慢性丙型病毒性肝炎仍为世界性的问题,其中基因I型HCV感染的患者即使给予标准方案抗病毒治疗,疗效仍不理想,本文主要对近10年来有关基因I型HCV感染患者的治疗情况及最新进展作一概述。
关键词 基因i型HCV 持续病毒学应答率 蛋白酶抑制剂 聚合酶抑制剂 耐药突变
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