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猪伪狂犬病病毒 gE-/gI-/TK-多基因缺失活疫苗对猪的安全性与免疫效力研究 被引量：19
1
作者 吕素芳 郭广君 +5 位作者 魏凤 王文秀 董炳梅 毕研丽 苗立中 沈志强 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第4期1-5,共5页
为了研制猪伪狂犬病病毒三基因缺失疫苗,本试验在前期工作的基础上,将TK基因缺失的质粒pBTK与gI-/gE-PRV SA738病毒基因组共转染BHK21细胞,通过蚀斑法进行筛选。用鉴定成功的重组病毒制备活疫苗,分别接种新生仔猪及妊娠母猪,观察仔猪、... 为了研制猪伪狂犬病病毒三基因缺失疫苗,本试验在前期工作的基础上,将TK基因缺失的质粒pBTK与gI-/gE-PRV SA738病毒基因组共转染BHK21细胞,通过蚀斑法进行筛选。用鉴定成功的重组病毒制备活疫苗,分别接种新生仔猪及妊娠母猪,观察仔猪、妊娠母猪产仔数及仔猪健康情况,并进行抗体中和试验和攻毒保护试验。同时与双基因缺失株gI-/gE-/PRV和PRV Bartha k61做对比,以生理盐水做对照。结果成功筛选到重组病毒,命名为gI-/gE-/TK-/PRV SA738,TCID50为5.75~6.125。重组病毒制备的活疫苗,对仔猪和妊娠母猪健康状况均无影响,安全性好,免疫保护率为100%(5/5),有效诱导了机体的保护性免疫应答。结果表明,gI-/gE-/TK-PRV SA738突变株适合作为疫苗毒株使用。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 gI- ge-基因 gI- ge- TK-基因 基因缺失 安全性 免疫效力
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猪伪狂犬病病毒山西分离株gE全基因的遗传变异多样性及流行特点分析 被引量：12
2
作者 孟帆 樊振华 +6 位作者 吴忻 姚敬明 韩一超 薛翼鹏 李红丽 米瑞娟 赵岳 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期873-881,共9页
为了研究当前山西省猪伪狂犬病(PR)的流行特点及遗传变异情况,对山西分离的3株猪伪狂犬病病毒(PRV)分离株(SXQX株、SXTG株和SXYP株)的gE全基因进行了扩增、克隆和测序(已被GenBank收录)。并将gE全基因序列和推导出的氨基酸序列与不同国... 为了研究当前山西省猪伪狂犬病(PR)的流行特点及遗传变异情况,对山西分离的3株猪伪狂犬病病毒(PRV)分离株(SXQX株、SXTG株和SXYP株)的gE全基因进行了扩增、克隆和测序(已被GenBank收录)。并将gE全基因序列和推导出的氨基酸序列与不同国家和地区的主要流行株进行了遗传变异多样性分析。结果显示,3株PRV分离株的gE全基因序列之间核苷酸及推导的氨基酸序列同源性分别为99.7%~100.0%和99.5%~100.%,与34株不同国家和地区的PRV参考株之间同源性分别为97.1%~100.0%和94.6%~100.0%,与欧美分离株的同源性分别为97.1%~97.6%和94.6%~95.7%,与2012年以来我国不同省份分离株的同源性分别为98.8%~100.0%和98.1%~100.0%,与2012年以前分离的经典毒株同源性分别为98.4%~99.7%和97.2%~99.3%。PRV gE全基因组序列的进化分析表明,3株PRV分离株属于亚洲基因群中2012年以来国内不同地区相继分离的PRV变异株群,而与2012年前分离的经典强毒株群亲缘关系较远,与欧美基因群亲缘关系最远。进一步进行核苷酸及氨基酸多序列比对分析发现,3株PRV分离株的gE基因均有一些位点发生了突变。本试验为近年来山西地区PRV的流行特点和PRV变异情况提供了依据。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 流行特点 ge全基因 遗传变异 多样性分析
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应用荧光定量PCR方法检测伪狂犬病病毒弱毒株在猪体组织中的分布
3
作者 许梦微 朱来旭 +7 位作者 陈赛赛 张传健 王志胜 郑亚婷 刘娅梅 童玲 曹瑞兵 王继春 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第1期83-87,共5页
为了解伪狂犬病病毒(PRV)TK/PK/gE三基因缺失弱毒株在猪体组织中的分布情况,针对PRV gB基因保守区设计并合成1对特异性引物,建立并优化了一种可快速、定量检测PRV的SYBR-GreenⅠ荧光定量PCR方法。该检测方法特异性强且敏感度高,最低检... 为了解伪狂犬病病毒(PRV)TK/PK/gE三基因缺失弱毒株在猪体组织中的分布情况,针对PRV gB基因保守区设计并合成1对特异性引物,建立并优化了一种可快速、定量检测PRV的SYBR-GreenⅠ荧光定量PCR方法。该检测方法特异性强且敏感度高,最低检测浓度为10^(1)拷贝/μL。PRV TK/PK/gE三基因缺失弱毒株免疫仔猪后可少量存在于大脑、小脑、肝脏、脾脏、肺脏、扁桃体和颌下淋巴结中,部分仔猪鼻甲骨病毒含量较高。应用本研究建立的荧光定量PCR方法阳性检出率为79.2%,而常规PCR方法阳性检出率仅为45.8%。结果表明,本研究建立的荧光定量PCR方法为了解弱毒株在猪体的分布提供了快速、敏感的检测手段。PRV TK/PK/gE三基因缺失弱毒株在猪组织中的分布情况为进一步揭示其组织嗜性、安全性和免疫机制提供了数据。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 TK/PK/ge三基因缺失弱毒株 荧光定量PCR 组织分布
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2012—2013年我国部分地区猪伪狂犬病流行病学调查 被引量：52
4
作者 邹敏 杨旭兵 +6 位作者 郑辉 王红 李陆梅 孙健 王福军 吴发兴 范根成 《中国动物检疫》 CAS 2015年第4期1-5,共5页
[目的]了解我国主要生猪养殖地区猪群中猪伪狂犬病毒感染情况。[方法]分别采用PCR和gEELISA检测方法,对2012-2013年采集/送检的1127份发病猪群组织样品、14801份猪血清样品进行了病原学、血清学检测。[结果]检出PRV野毒感染病原学样品98... [目的]了解我国主要生猪养殖地区猪群中猪伪狂犬病毒感染情况。[方法]分别采用PCR和gEELISA检测方法,对2012-2013年采集/送检的1127份发病猪群组织样品、14801份猪血清样品进行了病原学、血清学检测。[结果]检出PRV野毒感染病原学样品98份,总体检出率8.69%,猪场的PCR检出率为22.49%;共检测14801份血清样品,野毒感染抗体阳性样品2388份,总体阳性率为16.13%,场的阳性率为44.02%。对检测数据进行分类统计,发现华东、华中等生猪主产区猪群中均存在不同程度的PRV野毒感染,感染率呈逐年上升趋势;分析不同日龄猪群的野毒感染抗体检测数据,发现种猪的感染率较高,其次是哺乳仔猪、育肥猪。[结论]猪伪狂犬病在我国主要生猪养殖地区仍不同程度存在,提示应进一步提升猪伪狂犬病的免疫预防水平,定期进行病原学、血清学检测,做好综合防治工作。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病毒 ge基因 PCR ge-ELISA 流行病学调查
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用多重PCR鉴别猪伪狂犬病野毒与疫苗毒的研究 被引量：38
5
作者 刘丽娜 何启盖 +3 位作者 陈焕春 刘正飞 张松林 汪招雄 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第2期95-98,共4页
根据基因库中的猪伪狂犬病病毒(PRV)各基因的序列,设计了与PRV的 gB、gD、gE基因序列互补的3对引物。对样品中的PRV DNA模板进行了多重PCR扩增及反应条件的优化,结果同时得到与设计相符合的3条特异性条带,分别为549 bp(gB)、429 bp(gD)... 根据基因库中的猪伪狂犬病病毒(PRV)各基因的序列,设计了与PRV的 gB、gD、gE基因序列互补的3对引物。对样品中的PRV DNA模板进行了多重PCR扩增及反应条件的优化,结果同时得到与设计相符合的3条特异性条带,分别为549 bp(gB)、429 bp(gD)、366 bp(gE)。用这3对引物对三基因缺失疫苗毒的样品DNA模板进行多次多重 PCR扩增,均能稳定得到与设计相符合的2条特异性条带。敏感性试验结果表明,多重 PCR可以检测到 106 pg三基因缺失疫苗毒或756 pg PRV野毒的核酸模板量。特异性试验结果表明,以正常对照细胞及猪圆环病毒和猪细小病毒DNA为模板进行多重PCR扩增,均无任何条带。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病 基因缺失疫苗 多重PCR PRV 引物 ge基因 酸模 扩增 鉴别 特异性
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猪伪狂犬病病毒gE基因的研究进展 被引量：22
6
作者 王勤 《畜牧与兽医》 北大核心 2002年第10期42-44,共3页
猪伪狂犬病是猪的重要疾病之一。近年来 ,随着分子生物学研究的深入 ,对伪狂犬病病毒的研究也取得了显著的进展。本文着重对毒力基因gE基因的特性 ,基因的结构特点 。
关键词 猪 伪狂犬病病毒 ge基因 综述
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猪伪狂犬病病毒PCR检测方法的建立与应用 被引量：20
7
作者 吴发兴 郑辉 +5 位作者 亓传德 高许雷 张志 刘爽 张燕霞 李晓成 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第5期5-9,共5页
参考GenBank中收录的猪伪狂犬病病毒gE基因序列,应用Primer5.0软件设计了一对引物,扩增目的片段为632 bp。进行PCR检测方法的特异性、敏感性、重复性及符合性试验,建立了PRV的PCR检测方法。应用该方法对临床疑似发病样品进行了检测,PRV... 参考GenBank中收录的猪伪狂犬病病毒gE基因序列,应用Primer5.0软件设计了一对引物,扩增目的片段为632 bp。进行PCR检测方法的特异性、敏感性、重复性及符合性试验,建立了PRV的PCR检测方法。应用该方法对临床疑似发病样品进行了检测,PRV检出率为14.6%。表明该方法具有快速、特异、敏感、重复性好等优点,可用于PRV的临床发病诊断及流行病学监测等。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 ge基因 聚合酶链式反应
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山东省免疫猪场猪伪狂犬病病毒分离鉴定及gE毒力基因的序列分析 被引量：18
8
作者 陈超 刘存 +7 位作者 李海娥 薛瑞雪 田野 孙圣福 张月 孙振 姜世金 田夫林 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期902-907,共6页
为了解山东省使用Bartha-K61疫苗免疫猪场猪伪狂犬病(PR)流行的原因,本研究对2013和2014年采自山东省免疫猪场的PR疑似病料进行了猪伪狂犬病病毒(PRV)的分离鉴定,并对分离毒株的毒力基因gE进行了序列测定与分析。结果表明,共分离到12株P... 为了解山东省使用Bartha-K61疫苗免疫猪场猪伪狂犬病(PR)流行的原因,本研究对2013和2014年采自山东省免疫猪场的PR疑似病料进行了猪伪狂犬病病毒(PRV)的分离鉴定,并对分离毒株的毒力基因gE进行了序列测定与分析。结果表明,共分离到12株PRV,TCID50介于10^(-7.1)/0.1mL与10^(-9.5)/0.1mL之间。12株PRV的核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为99.9%~100.0%和99.7%~100.0%;与亚洲毒株的核苷酸和氨基酸序列的同源性均高于欧美毒株。gE基因的氨基酸进化树分析表明,包括本研究分离的12株PRV在内的所有42株亚洲毒株属于GⅠ型,所有欧美毒株属于GⅡ型。这2个基因型之间分别在第58,105,148,178,180,214,215,470,500,505,518,522,569位氨基酸存在明显差异,可作为鉴别PRV欧美毒株与亚洲毒株的遗传标志。 展开更多
关键词 山东省 伪狂犬病病毒 TCID50 ge基因
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伪狂犬病毒GDSH株的分离鉴定及gE基因的序列分析 被引量：17
9
作者 白丽丽 王旭荣 +3 位作者 刘建营 陈德坤 张春红 宋长绪 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2008年第1期23-26,共4页
从广东四会某猪场分离到一株疑为猪伪狂犬病病毒(PRV)的病毒,病毒在猪肾细胞上出现细胞变圆、拉网、融合等典型病变,并具有细胞泛嗜性特点。在MDCK细胞上测得其TCID50值为10-8/0.1mL,能被伪狂犬病病毒标准阳性血清中和。将0.1mL病毒液... 从广东四会某猪场分离到一株疑为猪伪狂犬病病毒(PRV)的病毒,病毒在猪肾细胞上出现细胞变圆、拉网、融合等典型病变,并具有细胞泛嗜性特点。在MDCK细胞上测得其TCID50值为10-8/0.1mL,能被伪狂犬病病毒标准阳性血清中和。将0.1mL病毒液接种小鼠后发生奇痒并麻痹致死,接种猪3天后发病,7天死亡,从攻毒病死猪的脑组织病理切片上观察到典型的病毒性脑膜脑炎及血管套现象。通过PCR扩增到PRVgD基因,由此进一步证明所分离病毒为猪伪狂犬病毒,并命名为GDSH株。根据GenBank中发表的序列,设计一对扩增PRVgE基因的特异性引物,建立可以区分PRV野毒株与疫苗株的PCR诊断方法。以此方法对病毒的细胞培养液进行检测,结果证实所分毒株为PRV野毒株,经克隆测序后与GenBank收录的其它PRVgE基因序列进行比较,发现所测毒株的核苷酸序列与其它PRV毒株的同源性介于98.3%～99.9%之间,其中与PRVEa株的亲缘关系最近为99.9%。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒(PRV) 分离鉴定 ge基因 序列分析
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闽西地区猪伪狂犬病病毒变异株gE基因新变异序列鉴定 被引量：17
10
作者 范克伟 杨小燕 +4 位作者 杨守深 吴德峰 江丹丹 闫娜娜 戴爱玲 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1903-1910,共8页
为了解2013-2014年我国闽西地区猪伪狂犬病病毒（PRV）流行株的现状、分子生物学特征和遗传演化规律，收集闽西不同地区的15株PRV分离株，并对其gE基因进行遗传变异分析。结果表明，15株PRV分离株与2012年以来国内不同省份分离的14株PR... 为了解2013-2014年我国闽西地区猪伪狂犬病病毒（PRV）流行株的现状、分子生物学特征和遗传演化规律，收集闽西不同地区的15株PRV分离株，并对其gE基因进行遗传变异分析。结果表明，15株PRV分离株与2012年以来国内不同省份分离的14株PRV变异株核苷酸及氨基酸序列的同源性较高，分别为98．7％-99．9％和97．1％-99．8％；而与15株PRV经典株的核苷酸及氨基酸序列的同源性相对较低，分别为97．0％-99．6％和94．6％-99．3％。氨基酸多序列比对发现，gE氨基酸序列最具特征性的变化是第48位和第496位各有1个天冬氨酸（D）的插入，该插入特征为PRV变异毒株的重要标志。同时，抗原性分析发现这2个位点还位于gE蛋白的抗原表位区内。遗传进化树分析结果表明，15株PRV分离株与近3年国内不同省份分离的PRV株位于一个相对独立的分支中，而与经典毒株处于不同的分支中，亲缘关系相时较远。以上结果表明PRV变异毒株已成为我国闽西地区主要的流行毒株。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 ge基因 变异
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伪狂犬病病毒gE基因的原核表达及间接ELISA方法的建立 被引量：15
11
作者 王云龙 王国强 +2 位作者 李智涛 朱永喜 李玉林 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第7期38-42,共5页
以质粒pBV222/gE为模板,经PCR扩增出750 bp的伪狂犬病病毒(PRV)gE基因片段,克隆入pET-41b质粒中并转化大肠埃希菌TG1。经PCR、酶切鉴定,筛选出阳性重组质粒pET41b/gE后,转化表达菌Balgold,IPTG诱导,目的蛋白经镍柱亲和层析纯化,SDS-PAG... 以质粒pBV222/gE为模板,经PCR扩增出750 bp的伪狂犬病病毒(PRV)gE基因片段,克隆入pET-41b质粒中并转化大肠埃希菌TG1。经PCR、酶切鉴定,筛选出阳性重组质粒pET41b/gE后,转化表达菌Balgold,IPTG诱导,目的蛋白经镍柱亲和层析纯化,SDS-PAGE凝胶电泳和Western blot分析检测。以纯化后的目的蛋白作包被原,建立间接gE-ELISA检测方法。结果表明,目的基因在30℃,0.025mmol/LIPTG诱导条件下,可在Balgold中高效表达,目的蛋白大部分以可溶性形式存在,并能被PRV阳性血清所识别,方阵滴定法确定了间接ELISA方法的抗血清最佳稀释度(800倍)和包被抗原的最佳工作浓度(1 mg/L)。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 ge基因 原核表达
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伪狂犬病病毒BJ/YT株毒力相关基因gE和TK序列分析 被引量：15
12
作者 钟承 刘蕾 +5 位作者 张乐天 王巨实 王安琦 陆宝生 杨万莲 吕艳丽 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第11期73-79,共7页
本试验对2012年从北京地区约克夏犬体内分离得到的伪狂犬病病毒（PRV）BJ/YT株主要毒力基因gE和TK的分子特征和进化关系进行了分析。结果显示,BJ/YT株gE基因与参考序列的核苷酸和氨基酸同源性分别为98.9%～100.0%和98.3%～100.0%;TK基... 本试验对2012年从北京地区约克夏犬体内分离得到的伪狂犬病病毒（PRV）BJ/YT株主要毒力基因gE和TK的分子特征和进化关系进行了分析。结果显示,BJ/YT株gE基因与参考序列的核苷酸和氨基酸同源性分别为98.9%～100.0%和98.3%～100.0%;TK基因核苷酸和氨基酸同源性分别为99.2%～99.9%和99.0%～100.0%。BJ/YT株与同期河北猪源分离株进化关系较近,各毒株之间同源性高,并且存在一致的核苷酸突变位点;与其他参考序列比对分析结果显示,BJ/YT株主要毒力基因存在变异位点,但这些位点均不在已知的主要功能区和抗原表位区内。因此,从分子流行病学角度来看,BJ/YT毒株是近年北京及其周边地区PRV流行毒株,但gE和TK基因的变异对流行毒株的毒力无明显影响。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 BJ/YT株 ge基因 TK基因 序列分析
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2013-2018年广西地区猪伪狂犬病病毒gB、gE与TK基因遗传变异分析 被引量：14
13
作者 赵硕 王若木 +7 位作者 党佳佳 许力士 秦树英 薛辉 韦祖樟 陈樱 欧阳康 黄伟坚 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期810-819,共10页
为了解广西近年猪伪狂犬病(PR)流行情况及猪伪狂犬病病毒(PRV)流行株gB、gE、TK基因的遗传变异特点,于2013-2018年采集广西各地区疑似PR发病猪靶组织714份,进行PRV的PCR检测及病毒分离鉴定,并运用DNAStar、MEGA 6.0等生物学软件对分离毒... 为了解广西近年猪伪狂犬病(PR)流行情况及猪伪狂犬病病毒(PRV)流行株gB、gE、TK基因的遗传变异特点,于2013-2018年采集广西各地区疑似PR发病猪靶组织714份,进行PRV的PCR检测及病毒分离鉴定,并运用DNAStar、MEGA 6.0等生物学软件对分离毒株gB、gE、TK基因进行遗传变异分析。结果显示:样品检测阳性率为24.5%(175/714),共分离获得PRV流行株38株。受检猪群普遍存在PRV感染,经典毒株及变异毒株并存,而且以变异毒株为主。广西流行株不同亚群PRV在gB、gE、TK基因上均存在相同的氨基酸变异特点,与国内变异株亲缘关系较近。推测广西流行株存在两种不同重组变异形式产生的PRV重组毒株,分别为疫苗株gB基因和变异株gE基因重组产生的重组毒株,以及经典株的TK基因被疫苗株(HB98)的TK基因替换而产生的重组毒株。近年广西受检猪场较普遍存在PRV感染,而且PRV流行株以变异毒株为主,可能存在两种不同重组变异形式产生的重组毒株,猪场需重视及实施针对性PR免疫防控计划。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒(PRV) GB基因 ge基因 TK基因 序列分析 遗传变异
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用地高辛标记的核酸探针检测猪伪狂犬病毒野毒感染的研究 被引量：12
14
作者 刘志杰 任慧英 +4 位作者 温建新 刘文华 邹玲 韩先杰 魏笑笑 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1621-1624,共4页
利用PCR技术从带有伪狂犬病毒(PRV)gE基因的重组质粒pMD18-T-gE中扩增回收约304 bp大小的片段,并制备出地高辛标记的gE基因核酸探针。特异性检测结果表明,该探针能与重组质粒DNA发生特异性杂交,而与对照的PRV Bartha-k61株疫苗毒DNA、... 利用PCR技术从带有伪狂犬病毒(PRV)gE基因的重组质粒pMD18-T-gE中扩增回收约304 bp大小的片段,并制备出地高辛标记的gE基因核酸探针。特异性检测结果表明,该探针能与重组质粒DNA发生特异性杂交,而与对照的PRV Bartha-k61株疫苗毒DNA、猪细小病毒(PPV)DNA、猪圆环病毒(PCV)DNA、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)cDNA、猪瘟病毒(CSFV)cDNA的杂交反应均为阴性;敏感性检测结果表明,该探针对PRV野毒的最低检出量为4 pg。应用该探针对11份繁殖障碍病料进行了杂交检测,共检出4份阳性病料,该结果与PCR检测结果一致,表明该核酸探针可用于猪伪狂犬病野毒感染的临床诊断。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 ge基因 地高辛标记探针 斑点杂交 野毒株
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伪狂犬病病毒Fa株gE基因的克隆与序列的比较分析 被引量：11
15
作者 王勤 郭万柱 +2 位作者 徐志文 汪铭书 王小玉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期389-393,共5页
根据已发表的伪狂犬病病毒(PRV)的基因序列,设计合成一对引物PCL1和PCL2,以PRVFa株的DNA为模板成功地扩增得到预期的长约1 7kb的特异片段,经酶切鉴定,初步确定为gE基因。将扩增产物经KpnⅠ、EcoRⅠ消化形成粘末端克隆到pUC18质粒,得到... 根据已发表的伪狂犬病病毒(PRV)的基因序列,设计合成一对引物PCL1和PCL2,以PRVFa株的DNA为模板成功地扩增得到预期的长约1 7kb的特异片段,经酶切鉴定,初步确定为gE基因。将扩增产物经KpnⅠ、EcoRⅠ消化形成粘末端克隆到pUC18质粒,得到了明显大于载体的重组质粒PpgE。重组质粒PpgE经酶切鉴定为含有PRV的gE基因,测序PpgE得到完整的gE基因片段,并与4株不同来源的毒株进行了比较分析。5毒株的gE同源性比较分析发现毒株间同源性最低也高达97%,这体现了gE基因的保守性。分析还表明Fa与TNL同源。同时99%的高同源性也显示Fa、Ea、SH可能是同一毒株。gE序列在1040-1410碱基的高同源性区域作为PRV的PCR检测或作为核酸探针是非常重要的。 展开更多
关键词 猪 伪狂犬病 病毒 Fa株 ge基因 克隆 序列分析 PCR扩增
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2012-2014年河南省猪伪狂犬病病毒gE基因和TK基因的遗传变异分析 被引量：13
16
作者 李宁 吴志明 +6 位作者 闫若潜 赵雪丽 王淑娟 马震原 周兵强 刘毅 张珂 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1653-1657,共5页
为了解河南地区猪伪狂犬病病毒(PRV)流行株的遗传变异情况,本研究对2012-2014年14株河南PRV分离株的2个主要毒力基因gE和TK进行扩增、克隆测序和遗传进化分析。结果显示:14株河南分离株的gE基因氨基酸同源性为95.7%~99.8%,与2012年之前... 为了解河南地区猪伪狂犬病病毒(PRV)流行株的遗传变异情况,本研究对2012-2014年14株河南PRV分离株的2个主要毒力基因gE和TK进行扩增、克隆测序和遗传进化分析。结果显示:14株河南分离株的gE基因氨基酸同源性为95.7%~99.8%,与2012年之前国内分离的毒株同源性较低(96.6%~98.9%),并在多个部位存在碱基的插入与替换,与2012年之后中国流行的毒株的同源性较高(除XX1外同源性为98.7%~99.5%);14株TK基因的氨基酸同源性为98.1%~100.0%,与疫苗株Bartha株同源性为98.1%~99.4%,与2012年之后流行株的氨基酸同源性为98.4%~99.7%。进化树分析显示:PRV流行毒株gE基因和TK基因均可分为3个群,与国内分离的大多数毒株同处于基因1群。分析结果表明:14个分离株与ZJ-01株、TJ株亲缘关系较近,与Ea株、Min-A株、LA株次之,与Becker株、Kaplan株和P-Prv株亲缘关系较远。TK基因较为保守,gE基因存在很多点突变,提示可能是当前流行毒株毒力增强从而导致当前疫苗免疫保护力下降的主要原因。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 ge基因 TK基因 遗传变异分析
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应用Cre-loxP系统构建伪狂犬病病毒gE/TK双缺失株 被引量：12
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作者 梁苑燕 胡艳芬 +3 位作者 张小荣 陈素娟 彭大新 刘秀梵 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1802-1809,共8页
为了构建无报告基因的猪伪狂犬病病毒(PRV)gE/TK双缺失株,以PRV-JSZ株为亲本毒株,增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,先构建出带有loxP位点的rPRV-gE-/GFP,通过Cre重组酶处理后,获得剔除EG-FP的gE单缺失株rPRV-gE-;再以rPRV-gE-为母本... 为了构建无报告基因的猪伪狂犬病病毒(PRV)gE/TK双缺失株,以PRV-JSZ株为亲本毒株,增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,先构建出带有loxP位点的rPRV-gE-/GFP,通过Cre重组酶处理后,获得剔除EG-FP的gE单缺失株rPRV-gE-;再以rPRV-gE-为母本,以相同方法构建gE/TK双缺失株rPRV-gE-/TK-。荧光检测和PCR结果显示成功构建了gE单缺失株和gE/TK双缺失株;病毒生长曲线测定可见rPRV-gE-在PK15细胞上的增殖速度与野生株相似,而rPRV-gE-/TK-较为缓慢;rPRV-gE-/TK-对小鼠的半数致死量大于1×105 TCID50,显著高于rPRV-gE-和野生株;缺失株免疫小鼠强毒攻击后能提供80%的保护。这些结果表明以Cre/loxP系统可重复使用构建伪狂犬病病毒多基因缺失株,为研制伪狂犬病病毒基因缺失苗和载体疫苗提供了快速筛选的技术平台。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 ge基因 TK基因 重组病毒
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牛传染性鼻气管炎病毒gE基因的截短克隆与表达 被引量：11
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作者 王海燕 朱远茂 +4 位作者 薛飞 童光志 赵立平 相文华 韩文瑜 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期289-293,共5页
以牛传染性鼻气管炎病毒BarthaNu/67株的DNA作为模板,用PCR扩增gE基因并克隆至pGEM-TEasy载体,再以此质粒作为模板将gE基因分成6个片段,分别插入原核表达载体pET32a并在大肠杆菌中进行了表达。蛋白电泳结果表明6个片段中有2个片段以可... 以牛传染性鼻气管炎病毒BarthaNu/67株的DNA作为模板,用PCR扩增gE基因并克隆至pGEM-TEasy载体,再以此质粒作为模板将gE基因分成6个片段,分别插入原核表达载体pET32a并在大肠杆菌中进行了表达。蛋白电泳结果表明6个片段中有2个片段以可溶形式表达,1个片段以包涵体形式表达,另外3个片段没有表达。采用固定化金属离子亲和层析法在非变性条件下对两个可溶性片段进行了纯化。经免疫印迹试验,间接ELISA和交叉试验证明,两个纯化的重组蛋白均与牛传染性鼻气管炎阳性血清样品发生反应,而与牛传染性鼻气管炎阴性血清无任何反应,显示其具有良好的抗原性和特异性,可用于牛传染性鼻气管炎gE-ELISA诊断方法的建立。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 ge基因 克隆 表达
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山东省部分地区猪伪狂犬病病毒分离鉴定及其gE基因遗传变异分析 被引量：12
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作者 古金元 马梓承 +4 位作者 彭涛 刘照虎 孟凡亮 王玉超 刘思当 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期21-24,30,共5页
自2011年下半年以来全国多个省份使用Bartha-K61疫苗(gE/gI双缺失)免疫的猪场陆续出现了母猪繁殖障碍、仔猪神经症状及死亡、伪狂犬gE抗体阴性猪群突然转阳的问题。同时有的猪场内出现犬、猫、鼠等死亡的现象,经检测都是由变异伪狂犬病... 自2011年下半年以来全国多个省份使用Bartha-K61疫苗(gE/gI双缺失)免疫的猪场陆续出现了母猪繁殖障碍、仔猪神经症状及死亡、伪狂犬gE抗体阴性猪群突然转阳的问题。同时有的猪场内出现犬、猫、鼠等死亡的现象,经检测都是由变异伪狂犬病病毒(vPRV)引起。为了解山东省猪伪狂犬病病毒(PRV)近期流行特征,本试验对2017年上半年来自山东省不同地区的12份伪狂犬疑似病料进行了PRV的分离鉴定,并对分离株的gE基因进行了序列测定及遗传变异分析。结果表明,共分离到9株PRV,其核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为97.5%～99.4%和97.2%～99.1%,与参考毒株其核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为97.5%～99.8%和96.8%～99.2%,并且9株分离株与国内报道的PRV变异株的核苷酸和氨基酸序列的同源性均高于欧美毒株。gE基因的遗传进化树分析表明,本试验中9株分离株相互之间遗传距离较近,与国内PRV变异株处在同一分支,而与欧美毒株遗传距离较远。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 变异毒株 ge基因 遗传变异分析
原文传递
检测猪伪狂犬病病毒gE抗体红细胞凝集试验的建立及应用 被引量：11
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作者 廖文军 吴健敏 +4 位作者 覃绍敏 袁书智 陈凤莲 华俊 谢彬 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第2期162-165,共4页
以纯化的抗人红细胞单链抗体(ScFv)—猪伪狂犬病病毒(PRV)gE蛋白双功能融合蛋白为抗原,建立了检测猪伪狂犬病毒gE抗体的红细胞凝集试验。利用方阵滴定试验筛选出最佳抗原工作浓度为55μg/mL,血清最佳稀释度为1∶20,作用时间15 min,与猪... 以纯化的抗人红细胞单链抗体(ScFv)—猪伪狂犬病病毒(PRV)gE蛋白双功能融合蛋白为抗原,建立了检测猪伪狂犬病毒gE抗体的红细胞凝集试验。利用方阵滴定试验筛选出最佳抗原工作浓度为55μg/mL,血清最佳稀释度为1∶20,作用时间15 min,与猪瘟(CSF)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪乙型脑炎(JE)、猪布氏杆菌病(Brucellosis)阳性血清和PRV gE缺失疫苗接种的猪免疫血清均不出现红细胞凝集现象,与PRV标准阳性血清反应出现肉眼可见的凝集圈。与美国进口的PRV抗体检测gE-ELISA诊断试剂盒检测结果比较,50份猪血清的阴、阳性检出符合率均为100%。红细胞凝集试验检测方法具有操作简便、敏感性和特异性较高的特点,可用于PRV野毒感染的快速筛查。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 红细胞凝集试验 ge基因 抗体检测
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