乳杆菌电转化条件的研究 被引量：36

1

作者 贾士芳 王荫榆 +1 位作者 郭兴华 还连栋 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期429-433,共5页

用ｐＧＫ１２、ｐＭＧ３６Ｃ等质粒电转化不同的乳杆菌。研究了影响转化效率的多种因素。受体细胞经２０μｇ／ｍｌ氨苄青霉素处理１ｈ，可以提高转化效率２００倍。同时，发现电击后的细胞必需在高渗培养基中才能存活，电击后２～３ｈ... 用ｐＧＫ１２、ｐＭＧ３６Ｃ等质粒电转化不同的乳杆菌。研究了影响转化效率的多种因素。受体细胞经２０μｇ／ｍｌ氨苄青霉素处理１ｈ，可以提高转化效率２００倍。同时，发现电击后的细胞必需在高渗培养基中才能存活，电击后２～３ｈ的复苏表达期和用亚抑制抗生素浓度选择转化子，这些对电转化成功以及提高转化效率都是十分关键的。在改进电转化方法中，各种参数为电场强度８７５ｋＶ／ｃｍ，电阻１００Ω或２００Ω，电容２５μＦ和２×磷酸缓冲液。 展开更多

关键词 乳杆菌 质粒 电转化

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乳酸乳球菌电转化条件的研究 被引量：22

2

作者 孙磊 孔文涛 孔健 《山东大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期121-124,共4页

以质粒pTRKH2为材料,对乳酸乳球菌MG1614进行电转化条件的研究.实验结果表明,在电转化过程中,电场强度、电阻大小、细胞生长状态和电击后菌株复苏时间均对转化效率有明显影响,得到了乳酸乳球菌的最适电转化条件为:对数生长中期的细胞,... 以质粒pTRKH2为材料,对乳酸乳球菌MG1614进行电转化条件的研究.实验结果表明,在电转化过程中,电场强度、电阻大小、细胞生长状态和电击后菌株复苏时间均对转化效率有明显影响,得到了乳酸乳球菌的最适电转化条件为:对数生长中期的细胞,经1%甘氨酸处理,在10kVcm电场强度、400Ω电阻下电转化,转化后细胞在SGM17培养液中培养2h后涂布选择性培养基,转化率(转化子个数与DNA质量之比)可达1.2×103个μg,比优化前的转化效率提高近100倍. 展开更多

关键词 乳酸乳球菌 电转化 转化效率

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影响酿酒酵母电击转化率的条件 被引量：20

3

作者 秦玉静 金建玲 +1 位作者 鲍晓明 高东 《山东大学学报（自然科学版）》 CSCD 1999年第2期236-240,共5页

以酿酒酵母为材料，用穿梭质粒ｐＹＥＳ２进行电击转化的条件实验．实验表明电击中电压大小、细胞的生长状态、处理条件和电击后细胞的培养时间以及质粒浓度等对电击转化率均有影响．取对数生长期酵母细胞，用二硫苏糖醇（ＤＴＴ）处理... 以酿酒酵母为材料，用穿梭质粒ｐＹＥＳ２进行电击转化的条件实验．实验表明电击中电压大小、细胞的生长状态、处理条件和电击后细胞的培养时间以及质粒浓度等对电击转化率均有影响．取对数生长期酵母细胞，用二硫苏糖醇（ＤＴＴ）处理以疏松细胞壁，加０．７μｇ／ｍＬ质粒ＤＮＡ，５ｋＶ电压电击，转化后细胞在完全培养基中培养６０ｍｉｎ后，涂布选择培养基，转化率可达４．８×１０５个转化子／μｇ质粒ＤＮＡ，细胞的存活率为３９．２％，比完整细胞转化的效率高。 展开更多

关键词 酿酒酵母 电击转化 转化率 pYES2质粒

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乳酸菌电转化条件研究 被引量：15

4

作者 张旭 崔艳华 +1 位作者 张兰威 曲晓军 《兰州大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第F06期26-33,共8页

乳酸菌是一类重要的革兰氏阳性菌,已广泛应用于食品、轻工业、医药、饲料等多个领域,是公认的具有较高经济价值的微生物.乳酸菌的遗传转化是限制其遗传操作的关键因素,制约着乳酸菌表达外源基因、基因功能鉴定和代谢机制的研究.本文综... 乳酸菌是一类重要的革兰氏阳性菌,已广泛应用于食品、轻工业、医药、饲料等多个领域,是公认的具有较高经济价值的微生物.乳酸菌的遗传转化是限制其遗传操作的关键因素,制约着乳酸菌表达外源基因、基因功能鉴定和代谢机制的研究.本文综述了细胞收获时期、细胞壁削弱剂、质粒、电击参数等因素对乳酸菌电转化效率的影响,并对其中部分影响因素的作用机制进行了初步的探讨,旨在为乳酸菌电转化研究提供借鉴和参考. 展开更多

关键词 乳酸菌 电转化 转化效率

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乳杆菌电转化的研究进展 被引量：13

5

作者 曹晓梅 张虎成 +1 位作者 李曼 陈薇 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2008年第6期590-593,共4页

乳杆菌在食品、工业、微生物学等领域发挥着重要作用,作为益生菌,既可向体外生物反应器方向开发,又可作为潜在疫苗的抗原递送载体。由于乳杆菌属革兰阳性菌,细胞壁厚,重组质粒电转化效率低,甚至不能实现转化,影响了它作为基因工程受体... 乳杆菌在食品、工业、微生物学等领域发挥着重要作用,作为益生菌,既可向体外生物反应器方向开发,又可作为潜在疫苗的抗原递送载体。由于乳杆菌属革兰阳性菌,细胞壁厚,重组质粒电转化效率低,甚至不能实现转化,影响了它作为基因工程受体菌的应用。笔者研究了近年来有关乳杆菌的电转化方案,总结了影响电转化效率的因素。如细胞壁预处理、电转缓冲液、电击参数、培养基、孵育时间以及菌体密度、质粒用量、热击条件等,并根据自己的试验结果提出优化方案,为乳杆菌在疫苗及生物反应器等领域的遗传开发研究提供较全面的借鉴。 展开更多

关键词 乳杆菌属 电转化 转化效率

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利用组成型表达载体pMG36e电转化德式乳杆菌保加利亚亚种的研究 被引量：8

6

作者 郭红敏 谷新晰 +3 位作者 张玉兰 田洪涛 郭兴华 罗云波 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第2期8-16,共9页

以典型的乳酸菌组成型表达质粒pMG36e为载体,德式乳杆菌保加利亚亚种为受体,采用电转化方法研究受体菌株的生长状态与细胞壁处理方式、质粒浓度、电转化参数、复苏培养基组成与复苏培养时间、受体菌株的限制修饰作用对电转化效率的影响... 以典型的乳酸菌组成型表达质粒pMG36e为载体,德式乳杆菌保加利亚亚种为受体,采用电转化方法研究受体菌株的生长状态与细胞壁处理方式、质粒浓度、电转化参数、复苏培养基组成与复苏培养时间、受体菌株的限制修饰作用对电转化效率的影响,探讨电转化的最适条件,以提高电转化效率。结果表明:选择含2.5%甘氨酸的SMRS培养基培养受体细胞至对数中期,收获制成感受态细胞,在电场强度12kV/cm、电阻200Ω、电容25μF条件下电击转化,以含20mmol/LMgCl2、CaCl2的SMRS培养基复苏培养2h,涂板筛选得到较高的电转化效率。特别是采用受体菌株修饰的质粒进行电转化,转化效率提高30倍以上,达到6.3×104cfu/μgDNA。本研究结果为进一步构建乳酸菌组成型高效表达系统和食品级基因工程乳酸菌株提供试验依据。 展开更多

关键词 德式乳杆菌保加利亚亚种 组成型表达载体 质粒pMG36e 电转化 电转化效率

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响应面法优化乳酸乳球菌电转化效率研究 被引量：8

7

作者 韦云莹 王立峰 +3 位作者 熊智强 王世杰 赵林森 艾连中 《上海理工大学学报》 CAS 北大核心 2018年第6期566-571,共6页

乳酸乳球菌NZ9000是乳酸菌食品级高效蛋白表达系统中使用最广泛的宿主菌株。为获得高效的电转化效率,首先采用单因素试验,对影响NZ9000电转化效率的各因素:生长阶段、甘氨酸浓度、质粒浓度、电场强度、复苏培养和复苏时间进行优化;然后... 乳酸乳球菌NZ9000是乳酸菌食品级高效蛋白表达系统中使用最广泛的宿主菌株。为获得高效的电转化效率,首先采用单因素试验,对影响NZ9000电转化效率的各因素:生长阶段、甘氨酸浓度、质粒浓度、电场强度、复苏培养和复苏时间进行优化;然后利用响应面法对其中的关键因素进一步优化,确定最佳电转化条件为吸光值OD600 0.2,甘氨酸浓度8 g/L和电场强度12.5 kV/cm,电转化效率达到3.76×10~7 CFU/μg DNA,比优化前提高了250%。本研究通过优化乳酸乳球菌NZ9000感受态的制备方法,提高了电转化效率,为深入挖掘乳酸乳球菌感受态潜力奠定了基础。 展开更多

关键词 乳酸乳球菌 响应面法 电转化

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甲醇毕赤酵母电转化条件的研究 被引量：6

8

作者 江成英 冮洁 曹畅 《齐齐哈尔大学学报（自然科学版）》 2005年第1期8-11,共4页

采用电转化的方法,将携带有tPA355基因的DNA片段转化进甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)。通过调整参数,对影响电转化效率的主要因素进行探索,建立了质粒pMETα-tPA355对甲醇毕赤酵母PMAD16的高效电转化方法。

关键词 甲醇毕赤酵母 电转化 转化率 tPA355

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密码子优化的人成纤维细胞生长因子-21在毕赤酵母中的表达 被引量：6

9

作者 马忠辉 赵巧香 +3 位作者 高新 王诗鸿 宋海峰 杨焕民 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第1期43-46,共4页

目的在毕赤酵母中表达密码子优化的人成纤维细胞生长因子-21(hFGF-21),为探讨hFGF-21在糖尿病治疗方面的作用奠定基础。方法经密码子优化合成hFGF-21基因,构建表达载体pPICZαA-hFGF-21,电转化毕赤酵母GS115,斑点免疫印迹法筛选工程菌株... 目的在毕赤酵母中表达密码子优化的人成纤维细胞生长因子-21(hFGF-21),为探讨hFGF-21在糖尿病治疗方面的作用奠定基础。方法经密码子优化合成hFGF-21基因,构建表达载体pPICZαA-hFGF-21,电转化毕赤酵母GS115,斑点免疫印迹法筛选工程菌株,甲醇诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物,并对诱导条件进行优化。结果重组表达质粒经PCR、双酶切及测序鉴定,证明构建正确。筛选出5株阳性菌株,诱导上清经SDS-PAGE分析,可见相对分子质量约为25000的目的蛋白条带,目的蛋白的表达量约为6μg/L。Westernblot显示该蛋白具有良好的反应原性。诱导96h和培养液pH值为4.0时,目的蛋白的表达量最高,甲醇浓度对表达量无影响。结论已成功构建了密码子优化的hFGF-21真核表达载体,并在毕赤酵母GS115中分泌表达了hFGF-21。 展开更多

关键词 人成纤维细胞生长因子-21 毕赤酵母 电转化 表达

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噬菌体裂解酶基因Lys BT1在普通小球藻中的表达

10

作者 束忠涛 王冉 +4 位作者 沈元朝 张汉泽 朱树娇 王姝璇 孙利厂 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第4期734-739,共6页

噬菌体裂解酶因高效、安全的杀菌特性成为潜在的抗菌药物,并受到广泛关注。本试验在前期通过基因表达制备高效噬菌体裂解酶Lys BT1的基础上,深度解析Lys BT1与细菌上裂解酶受体相互作用的结构特点,成功构建出质粒pCAMBIA 1301-BT1。将... 噬菌体裂解酶因高效、安全的杀菌特性成为潜在的抗菌药物,并受到广泛关注。本试验在前期通过基因表达制备高效噬菌体裂解酶Lys BT1的基础上,深度解析Lys BT1与细菌上裂解酶受体相互作用的结构特点,成功构建出质粒pCAMBIA 1301-BT1。将该质粒通过电转化的方式导入普通小球藻中,电转条件为:电场强度1.5 kV、脉冲距离2 mm、脉冲时间0.2 ms,瞬时表达后成功进行了活性测定,从而验证了普通小球藻作为裂解酶表达载体的可行性,为噬菌体裂解酶的表达系统研发提供了一条可行路径。 展开更多

关键词 噬菌体裂解酶 小球藻 电转化 抗菌药物

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电转化法提高平连载体DNA转化效率的研究 被引量：6

11

作者 方勤 田静 《生物技术》 CAS CSCD 1999年第4期5-8,共4页

探讨了电转化过程中一些影响平连载体ＤＮＡ转化效率的因素，并与化学法进行了比较，由此建立了优化的电转化条件。结果显示，在ＯＤ６００值０．７２－０．７８收获细胞时，可使平连载体ＤＮＡ的转化效率达到５×１０６转化子／μ... 探讨了电转化过程中一些影响平连载体ＤＮＡ转化效率的因素，并与化学法进行了比较，由此建立了优化的电转化条件。结果显示，在ＯＤ６００值０．７２－０．７８收获细胞时，可使平连载体ＤＮＡ的转化效率达到５×１０６转化子／μｇｃＤ－ＮＡ，较化学法高１０２－１０３倍。同时，降低连接产物的盐浓度。 展开更多

关键词 电转化法 感受态细胞 平连载体DNA 转化效率

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GFP标记的短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)转座突变株的构建初探 被引量：5

12

作者 沈新迁 胡晓璐 +2 位作者 刘通 孙文良 陈云鹏 《上海交通大学学报（农业科学版）》 2012年第4期15-20,共6页

以水稻叶面附生菌短小芽孢杆菌(B.pumilus)为研究对象,通过构建pMOD-egfp-Tetr转座复合体,采用电击转化法对短小芽孢杆菌DX01菌株进行了Tn5转座插入诱变,获得了大量的转化子。对转化子进行了遗传稳定性分析和分子鉴定,并且在荧光显微镜... 以水稻叶面附生菌短小芽孢杆菌(B.pumilus)为研究对象,通过构建pMOD-egfp-Tetr转座复合体,采用电击转化法对短小芽孢杆菌DX01菌株进行了Tn5转座插入诱变,获得了大量的转化子。对转化子进行了遗传稳定性分析和分子鉴定,并且在荧光显微镜下观察到了强烈的绿色荧光,研究结果表明外源DNA已经成功整合进细菌的基因组中,gfp基因在短小芽孢杆菌中实现了组成型表达。 展开更多

关键词 短小芽胞杆菌 Tn5转座 电击转化 绿色荧光蛋白

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海洋红酵母电转化条件的研究 被引量：5

13

作者 刘秀莲 王宇光 雷禄旺 《生命科学研究》 CAS CSCD 2008年第2期136-140,共5页

采用电穿孔的方法对海洋红酵母进行外源DNA的转化.通过调整参数,对影响电转化的主要因素进行探索,初步建立了载体pTEF1/Zeo-rDNA对海洋红酵母的高效电转化方法.结果表明,当采用对数生长中期的菌体制备感受态细胞、电压为900V、质粒浓度... 采用电穿孔的方法对海洋红酵母进行外源DNA的转化.通过调整参数,对影响电转化的主要因素进行探索,初步建立了载体pTEF1/Zeo-rDNA对海洋红酵母的高效电转化方法.结果表明,当采用对数生长中期的菌体制备感受态细胞、电压为900V、质粒浓度为20mg/L和0.2cm电转化杯时,转化率达到最大值,为每微克质粒DNA52个转化子.经抽样鉴定所得到的转化子均为阳性克隆.首次建立了以海洋红酵母为宿主的高效电转化体系,为外源基因在海洋红酵母中的表达奠定了基础. 展开更多

关键词 海洋红酵母 高效电转化 转化率

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电转化条件对大肠杆菌TG1转化效率的影响 被引量：5

14

作者 刘麒 王阔鹏 +1 位作者 于凌娇 刘倩宏 《吉林农业科技学院学报》 2018年第3期6-9,115,共4页

研究探索不同条件对TG1大肠杆菌转化率的影响,以探索最适合电转化条件。研究通过对细菌生长曲线绘制,改变不同生长阶段、感受态细胞浓度、转化后复苏液以及复苏时间、电转化参数、质粒浓度、抗生素浓度等影响电转化率的条件,探索最适合... 研究探索不同条件对TG1大肠杆菌转化率的影响,以探索最适合电转化条件。研究通过对细菌生长曲线绘制,改变不同生长阶段、感受态细胞浓度、转化后复苏液以及复苏时间、电转化参数、质粒浓度、抗生素浓度等影响电转化率的条件,探索最适合的电转化条件。结果表明,TG1大肠杆菌37℃、170 rpm/min震荡活化培养时间3 h后,以电压1 800 V、电容25μF、电阻200Ω进行电击转化,以LB液体对电击细胞复苏45 min,为最佳转化条件。该结果具有可重复性,为后续建立基因文库奠定良好基础。 展开更多

关键词 大肠杆菌 TG1 电转化

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星形孢菌素产生菌电转化条件的优化及其高产菌株的构建

15

作者 黄浩龙 田勋 +2 位作者 刘佳乐 张梦莹 胡海峰 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1024-1030,共7页

目的提高星形孢菌素的产量。方法本研究以星形孢菌素产生菌(Streptomyces sp.ST-07)为出发菌株,采用电转化方法和应用PCR扩增星形孢菌素生物合成的调控基因staR,成功构建含不同启动子(kasO*p和ermE*p)的加强表达staR基因的重组工程菌,... 目的提高星形孢菌素的产量。方法本研究以星形孢菌素产生菌(Streptomyces sp.ST-07)为出发菌株,采用电转化方法和应用PCR扩增星形孢菌素生物合成的调控基因staR,成功构建含不同启动子(kasO*p和ermE*p)的加强表达staR基因的重组工程菌,分别命名为ST-D-5和ST-H-23。结果通过对电转化条件的甘氨酸浓度、电场强度、菌丝体浓度、质粒浓度、孵育时间和孵育温度等关键参数优化,使电转化的效率从4×10^(6)提高至9.6×10^(8)(CFU/μg DNA);工程菌摇瓶发酵结果表明,与星孢菌素原始菌株ST-07相比,采用kasO*p启动子构建的工程菌ST-D-5星形孢菌素的产量提高了17%,最高单位可达923 mg/L。结论本文系统摸索了星形孢菌素产生菌的电转化条件,显著提高了电转化效率,不但为该菌株的高产遗传改造奠定了基础,而且对其他放线菌的遗传操作体系建立提供了有益借鉴。 展开更多

关键词 星形孢菌素 电转化 staR基因 kasO*p 启动子 高产菌

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环境条件对猪链球菌2型电转化效率的影响 被引量：1

16

作者 李明 胡福泉 +4 位作者 王长军 郑峰 董亚青 潘秀珍 唐家琪 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期760-763,共4页

目的探讨环境条件对猪链球菌2型强毒株05ZYH33电转化效率的影响。方法采用电穿孔的方法对05ZYH33强毒株进行外源DNA的转化,通过调整参数,对影响电转化效率的主要因素进行探索。结果电穿孔法可以成功地转化猪链球菌2型强毒株05ZYH33,转... 目的探讨环境条件对猪链球菌2型强毒株05ZYH33电转化效率的影响。方法采用电穿孔的方法对05ZYH33强毒株进行外源DNA的转化,通过调整参数,对影响电转化效率的主要因素进行探索。结果电穿孔法可以成功地转化猪链球菌2型强毒株05ZYH33,转化效率最高可达107/μg质粒DNA。结论猪链球菌2型强毒株05ZYH33高效电转化方法的建立,为深入研究该病原菌的功能基因组学奠定了基础。 展开更多

关键词 猪链球菌2型 电转化 转化效率

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乳酸菌电转化的原理与转化条件的优化 被引量：4

17

作者 肖冲 王春凤 《吉林畜牧兽医》 2010年第7期17-18,共2页

乳酸菌作为人和动物体内的正常菌群,具有诸多益生功能,因此被广泛应用于轻工、食品、医药及饲料工业等许多行业上。乳酸菌的遗传转化是限制对其遗传操作的关键因素之一,本文结合电转化原理,综述了乳酸菌电转化条件的优化指标。

关键词 乳酸菌 电转化

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嗜热脂肪芽孢杆菌质粒DNA的高压电穿孔转化研究 被引量：3

18

作者 陈兰明 盛祖嘉 毛裕民 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期85-89,共5页

采用高压电穿孔法将穿梭质粒导入了嗜热脂肪芽胞杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）Ｋ１０４１和Ｔ５２１菌株。以对数生长后期的菌体制备Ｋ１０４１转化细胞，以ＬＢ平板上于５０℃培养的过夜菌制备Ｔ５... 采用高压电穿孔法将穿梭质粒导入了嗜热脂肪芽胞杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）Ｋ１０４１和Ｔ５２１菌株。以对数生长后期的菌体制备Ｋ１０４１转化细胞，以ＬＢ平板上于５０℃培养的过夜菌制备Ｔ５２１转化细胞，细胞密度为５～７×１０９细胞／ｍＬ。电击条件如下：电容２５μＦ，电场强度１０．０ＫＶ／ｃｍ，脉冲控制器设定２００。 Ｋ１０４１和 Ｔ５２１最高转化效率分别达２．０１×１０和１．１９ ×１０转化子／μｇ ＤＮＡ。此外，研究发现Ｔ５２１和Ｋ１０４１中存在着ＤＮＡ的限制／修饰系统。 展开更多

关键词 嗜热脂肪芽胞杆菌 质粒 电击转化

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双歧杆菌感受态细胞的制备和电转化条件的研究 被引量：4

19

作者 荀安营 李娜 +4 位作者 邹兵 王成文 李迎雪 姚君 王立生 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2013年第10期1128-1130,共3页

介绍目前常用的双歧杆菌感受态细胞制备方法，并系统研究影响双歧杆菌电转化效率的关键因素。通过研究，菌体在4oo为0.3-0. 5时收集以制备感受态细胞，制备好的感受态细胞应尽早用于电转化;最佳电场强度为12.5 kV/cm;转化后的细胞复苏培... 介绍目前常用的双歧杆菌感受态细胞制备方法，并系统研究影响双歧杆菌电转化效率的关键因素。通过研究，菌体在4oo为0.3-0. 5时收集以制备感受态细胞，制备好的感受态细胞应尽早用于电转化;最佳电场强度为12.5 kV/cm;转化后的细胞复苏培养2 h为佳。感受态细胞的转化效率可达103 CFU/μg DNA。 展开更多

关键词 双歧杆菌 电转化 感受态细胞 转化效率

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基于原生质体法保加利亚乳杆菌电转化条件的研究 被引量：4

20

作者 郭鑫 王莎莎 +3 位作者 李晨 卢海强 田洪涛 罗云波 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第3期160-166,共7页

目的:研究不同因素对保加利亚乳杆菌原生质体法电转化效率的影响,通过研究电转化的最适条件,以提高电转化的效率。方法:以保加利亚乳杆菌为受体菌株,大肠杆菌-乳酸菌穿梭型质粒pMG36e为载体,通过原生质体电转化的方法研究溶菌酶浓度、... 目的:研究不同因素对保加利亚乳杆菌原生质体法电转化效率的影响,通过研究电转化的最适条件,以提高电转化的效率。方法:以保加利亚乳杆菌为受体菌株,大肠杆菌-乳酸菌穿梭型质粒pMG36e为载体,通过原生质体电转化的方法研究溶菌酶浓度、质粒浓度、电转化参数、复苏培养基组成对电转化效率的影响。结果:用SMM在37℃下制备溶菌酶(30 mg/mL)对细胞进行酶解,直至通过显微镜发现约60%的原生质体形成。用1μL质量浓度为1.2μg/μL的质粒pMG36e,在电场强度7.5 kV/cm,电阻200Ω,电容25μF的条件进行电击转化,以含有0.5 mol/L蔗糖和20 mmol/L的MgCl_2、CaCl_2且无吐温80的MRS再生培养基复苏培养2.5 h,并以含红霉素的MRS平板筛选,获得1.42×10~5CFU/μgDNA的电转化效率。结论:本研究实现了保加利亚乳杆菌的高效遗传转化,并为遗传育种提供了技术支持。 展开更多

关键词 保加利亚乳杆菌 质粒pMG36e 电转化 电转化效率

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