类弹性蛋白多肽的从头设计、非色谱纯化及盐效应 被引量：19

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作者 黄凯宗 李晶晶 +3 位作者 李巍 葛慧华 王文研 张光亚 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期653-658,共6页

旨在克隆、表达与纯化类弹性蛋白多肽,并测定类弹性蛋白的相变温度对不同的盐敏感程度。从头设计了类弹性蛋白多肽的序列并人工合成其编码基因片段,克隆至改造后的表达载体pET-22b(+)中,构建重组表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中并... 旨在克隆、表达与纯化类弹性蛋白多肽,并测定类弹性蛋白的相变温度对不同的盐敏感程度。从头设计了类弹性蛋白多肽的序列并人工合成其编码基因片段,克隆至改造后的表达载体pET-22b(+)中,构建重组表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中并诱导表达,采用可逆相变循环经高速离心对其进行纯化,并考察了盐类型及浓度对类弹性蛋白相变温度的影响。结果表明:0.4 mmol/L的Na2CO3能使25μmol/L类弹性蛋白多肽[KV8F-20]相变温度降低至19℃,此类弹性蛋白多肽序列有望开发成一新型纯化标签,为今后重组蛋白的非色谱分离纯化奠定基础。 展开更多

关键词 类弹性蛋白多肽 非色谱法纯化 可逆相变循环 相变温度 纯化标签

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温敏类弹性蛋白多肽的基因设计及重组克隆表达 被引量：9

2

作者 任艳艳 庄嘉楠 +3 位作者 荣娜 孙薇 杜伟立 王珊珊 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期56-62,共7页

温敏类弹性蛋白多肽(elastin-like polypeptides, ELPs)作为新型的药物载体,在肿瘤治疗中具有广阔的应用前景。本研究根据大肠杆菌密码子的偏好性和简并性,将高度连续重复氨基酸的多种遗传密码引入基因序列中,利用依次插入单体基因和递... 温敏类弹性蛋白多肽(elastin-like polypeptides, ELPs)作为新型的药物载体,在肿瘤治疗中具有广阔的应用前景。本研究根据大肠杆菌密码子的偏好性和简并性,将高度连续重复氨基酸的多种遗传密码引入基因序列中,利用依次插入单体基因和递归定向连接技术,成功构建了以缬氨酸为客座氨基酸的ELPs基因的表达质粒库,即p ET28-ELP-V_5～pET28-ELP-V_(50)。将pET28-V_(50)转化至表达宿主Escherichia coli BL21(DE3)中,经重组菌的培养和IPTG诱导,SDS-PAGE结果显示ELP-V_(50)在大肠杆菌中成功获得了可溶性表达,与预期分子量大小一致。本研究为进一步构建不同分子量的ELPs基因库提供了新的思路,并为重组表达获得特定相变特性的多肽分子奠定了基础。 展开更多

关键词 类弹性蛋白多肽 基因设计 克隆表达

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不同拓扑结构类弹性蛋白相变特性及机理研究 被引量：5

3

作者 张丹丹 蔡征文 +3 位作者 王金丹 王心哲 吴姝羽 张光亚 《中国科学：化学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期881-890,共10页

本文构建了不同拓扑结构的类弹性蛋白多肽（ELPs）融合蛋白,考察了盐的类型及浓度对其相变特性的影响,并与线性ELPs进行比较.结果表明,不同盐浓度类型下,不同拓扑结构ELPs融合蛋白的相变温度平均比相同重复数的线性ELPs高1～10.9℃.其中... 本文构建了不同拓扑结构的类弹性蛋白多肽（ELPs）融合蛋白,考察了盐的类型及浓度对其相变特性的影响,并与线性ELPs进行比较.结果表明,不同盐浓度类型下,不同拓扑结构ELPs融合蛋白的相变温度平均比相同重复数的线性ELPs高1～10.9℃.其中,三臂星型ELPs在0.05 mol/L Na2CO3溶液中与线性ELP（120）相差最大,达到11.5℃;同时,随盐浓度的增加,相变温度均呈线性递减.然而,Spy Catcher-ELP40在低浓度（￡0.4 mol/L）Na2CO3溶液中未发生相变,在相同浓度的Na Cl和Na2SO4溶液中则相变现象明显;在高浓度（30.5 mol/L）Na2CO3溶液中,其相变温度骤降为7.3℃,与等浓度Na2SO4溶液中相变温度仅相差0.15℃,这一现象不符合Hofmeister离子序.其可能的原因与ELPs所融合的Spy Catcher分子表面分布了大量带电荷的氨基酸有关,并探讨了其作用机制. 展开更多

关键词 类弹性蛋白多肽 SpyTag-SpyCatcher Hofmeister离子序 相变温度 蛋白拓扑结构

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类弹性蛋白多肽黏膜下注射在黏膜剥离术中应用的实验研究 被引量：5

4

作者 赵明星 郑忠青 +2 位作者 刘文天 刘文革 Ashutosh Chilkoti 《中国内镜杂志》 CSCD 北大核心 2014年第4期337-342,共6页

目的将类弹性蛋白多肽(ELP)作为一种黏膜下注射液应用于内镜黏膜下剥离术(ESD),对其有效性进行评估,为临床应用提供依据。方法 54只雄性SD大鼠随机分为3组(n=18)。第一组观察不同注射液分离组织的有效性。根据注射不同的注射剂随机分为... 目的将类弹性蛋白多肽(ELP)作为一种黏膜下注射液应用于内镜黏膜下剥离术(ESD),对其有效性进行评估,为临床应用提供依据。方法 54只雄性SD大鼠随机分为3组(n=18)。第一组观察不同注射液分离组织的有效性。根据注射不同的注射剂随机分为3个亚组(n=6),暴露胃后壁分别黏膜下注射ELP、透明质酸钠(SH)和生理盐水(NS)0.2mL,观察并记录药物注射后0、5、10、30及60min局部黏膜隆起厚度及黏膜表面的改变;第2组观察注射不同注射液后30min黏膜隆起的组织学表现(n=6);第3组观察黏膜下剥离时不同注射液对出血的影响。根据注射不同注射剂随机分为3个亚组(n=6)。给予上述注射剂处理后,用无菌手术刀片完整切除黏膜下注射后形成的隆起部位,测定黏膜切除20min内的出血量。结果注射药物后60min内黏膜隆起厚度比较:ELP组分别与SH和NS组相比差异有显著性(P<0.05),即ELP维持黏膜隆起厚度明显大于SH和NS;SH与NS组相比差异有显著性(P<0.05),即SH维持黏膜隆起厚度大于NS。组织学观察ELP注射部位的周围组织中未见明显的炎性细胞浸润及坏死。黏膜切除时的出血量:ELP组、SH组、NS组分别为(854.0±98.9)、(726.3±104.8)和(1144.0±112.4)mg,ELP、SH组分别与NS组相比差异有显著性(P<0.05),应用ELP与SH较NS可明显减少出血量。结论黏膜下注射ELP后,ELP在黏膜下组织中的弥散明显延缓,在黏膜下形成较持久的液体垫维持黏膜厚度,有利于黏膜组织的剥离切除,并可以减少出血量,因此ELP有可能作为ESD中较为理想的黏膜下注射剂应用于临床。 展开更多

关键词 内镜黏膜下剥离术 黏膜下注射 类弹性蛋白多肽

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类弹性蛋白多肽在给药系统中的应用研究进展 被引量：5

5

作者 董文凤 毕娟 +2 位作者 杜丽 徐希明 李凤前 《药学服务与研究》 CAS CSCD 2013年第5期321-325,共5页

类弹性蛋白多肽(elastin-like polypeptides,ELPs)是一种人工基因工程化多肽聚合物,主要由五肽重复序列单元串联而成。它对环境温度非常敏感,具有可逆温敏相变特征,加之良好的生物相容性、生物降解性及可高通量制备等优势,使其在生物医... 类弹性蛋白多肽(elastin-like polypeptides,ELPs)是一种人工基因工程化多肽聚合物,主要由五肽重复序列单元串联而成。它对环境温度非常敏感,具有可逆温敏相变特征,加之良好的生物相容性、生物降解性及可高通量制备等优势,使其在生物医药领域展现出广阔的应用前景。本文参考国内外ELPs研究的主要文献,就其相变特性、载药潜能、载药方式及其在给药系统中的应用等方面进行综述。 展开更多

关键词 类弹性蛋白多肽 相转变 载药 给药系统 综述

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影响类弹性蛋白多肽自组装成微球的因素及其作用机制 被引量：4

6

作者 葛慧华 王文研 +1 位作者 张光亚 王士斌 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1274-1282,共9页

影响类弹性蛋白多肽(ELPs)自组装成微球的因素较多,目前尚缺乏系统研究。以类弹性蛋白多肽[KV8F]n为对象,利用动态光散射仪测定了不同条件下其自组装成微球的粒径。结果表明:随着分子量的增加ELPs形成的微球粒径也随之增大,粒径的均一... 影响类弹性蛋白多肽(ELPs)自组装成微球的因素较多,目前尚缺乏系统研究。以类弹性蛋白多肽[KV8F]n为对象,利用动态光散射仪测定了不同条件下其自组装成微球的粒径。结果表明:随着分子量的增加ELPs形成的微球粒径也随之增大,粒径的均一度减小;当盐浓度低于0.4 mol/L时,盐浓度的增加,微球粒径相应增加,而盐浓度高于0.4 mol/L则呈减少的趋势,但粒径均大于1.1μm;而当ELPs末端融合木聚糖酶和1,3-丙二醇氧化还原酶后,其自组装形成的微球粒径急剧减小,约为游离ELPs的1/10,分别为151.0 nm和174.2 nm。导致这种现象的原因可能是酶分子和ELPs通过静电引力相互作用后,酶分子的空间位阻妨碍了ELPs分子的聚集。 展开更多

关键词 类弹性蛋白多肽 静电引力 空间位阻 自组装 融合蛋白

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以类弹性蛋白多肽为标签纯化1,3-丙二醇氧化还原酶 被引量：3

7

作者 葛慧华 黄志宏 +2 位作者 王文研 张诗冉 张光亚 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期709-712,共4页

以类弹性蛋白多肽(ELPs)为标签的非色谱纯化重组蛋白显示出良好的应用前景.本文使用自行设计的新型ELPs纯化标签,以低浓度盐诱发其可逆相变,从而更温和、高效地纯化融合表达的1,3-丙二醇氧化还原酶(PDOR).在测得ELPs-PDOR融合蛋白在不... 以类弹性蛋白多肽(ELPs)为标签的非色谱纯化重组蛋白显示出良好的应用前景.本文使用自行设计的新型ELPs纯化标签,以低浓度盐诱发其可逆相变,从而更温和、高效地纯化融合表达的1,3-丙二醇氧化还原酶(PDOR).在测得ELPs-PDOR融合蛋白在不同浓度Na2CO3溶液中相变温度的基础上,选取0.8 mol/L Na2CO3溶液,在室温下使ELPs发生可逆相变,与目的蛋白PDOR一同聚集,经可逆相变以离心法得以纯化,得到纯度约98%的纯酶,纯化倍数可达到8倍以上,是组氨酸标签的7倍多.融合酶的酶学性质表明ELPs作为纯化标签对目标蛋白空间结构影响微小,融合蛋白可直接作为酶催化化学反应.低盐诱发相变的方法,可避免盐浓度过高对酶结构及性能产生的不利影响,因此,在重组酶纯化上更具有优势. 展开更多

关键词 类弹性蛋白多肽 纯化标签 可逆相变 重组酶纯化 非色谱法

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黄鳍金枪鱼抗菌肽YFGAP在大肠杆菌中融合表达及其活性检测 被引量：3

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作者 李慧 陈云华 +1 位作者 张光亚 李夏兰 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1745-1751,共7页

【目的】抗菌肽YFGAP由32个氨基酸组成,分子量为3.4 k D,对革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G-)表现出强效的抑制作用,不具有溶血活性。在大肠杆菌中表达抗菌肽YFGAP,分离纯化抗菌肽并鉴定其生物学活性。【方法】化学合成EK-YFGAP和L-EK... 【目的】抗菌肽YFGAP由32个氨基酸组成,分子量为3.4 k D,对革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G-)表现出强效的抑制作用,不具有溶血活性。在大肠杆菌中表达抗菌肽YFGAP,分离纯化抗菌肽并鉴定其生物学活性。【方法】化学合成EK-YFGAP和L-EK-YFGAP基因序列,构建表达载体p ET22b-ELP20-EK-YFGAP、p ET22b-ELP40-EK-YFGAP和p ET22b-ELP40-L-EKYFGAP,分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,可逆相变循环纯化融合蛋白。肠激酶酶切,经Vivaspin Turbo纯化柱纯化,测定重组抗菌肽的抑菌活性和溶血活性。【结果】纯化出两种融合蛋白ELP40-EK-YFGAP和ELP40-L-EK-YFGAP,肠激酶酶切纯化后获得重组抗菌肽YFGAP,对4种病原菌均有抑制效果,溶血活性较低。【结论】以ELPs作为非色谱纯化标签,实现了抗菌肽YFGAP的融合表达,具有操作简单、成本低、易于扩大的优势,为重组抗菌肽的量化制备及应用提供了理论基础和技术支持。 展开更多

关键词 抗菌肽 类弹性蛋白 融合蛋白 抑菌活性

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类弹性蛋白多肽黏膜下注射在内镜黏膜下剥离术中的应用研究 被引量：2

9

作者 张续乾 赵明星 +2 位作者 董魁 刘文革 刘文天 《国际生物医学工程杂志》 CAS 2015年第1期40-42,47,I0006,共5页

目的 研究类弹性蛋白多肽（ELP）作为一种黏膜下注射制剂在内镜黏膜下剥离术（ESD）中的应用,比较不同质量浓度的ELP在ESD中的应用,并对其有效性和安全性进行评估.方法 40只新西兰大白兔随机分为2组（n=20）.第1组观察不同注射液分离组... 目的 研究类弹性蛋白多肽（ELP）作为一种黏膜下注射制剂在内镜黏膜下剥离术（ESD）中的应用,比较不同质量浓度的ELP在ESD中的应用,并对其有效性和安全性进行评估.方法 40只新西兰大白兔随机分为2组（n=20）.第1组观察不同注射液分离组织的有效性.依据不同质量浓度的ELP（0.05、0.025、0.012 5、0.005 g/ml）及对照组（甘油果糖）随机分为5个亚组（n=4）,切取胃组织,在胃窦或胃体处分别注射不同质量浓度的ELP和甘油果糖2ml,观察并记录药物注射后0、5、10、30 min局部黏膜隆起高度及黏膜表面的改变.第2组测量不同注射液的注射压力.亚组分组同第1组,使用注射器/压力计组件分别测量2ml不同质量浓度ELP和甘油果糖的注射压力.结果 注射药物后30 min内,0.05、0.025 g/ml ELP维持黏膜隆起高度均大于甘油果糖,差异具有统计学意义（P＜0.05）;0.012 5 g/ml ELP维持黏膜隆起高度与甘油果糖相比,差异无统计学意义（P＞0.05）;0.005 g/ml ELP维持黏膜隆起高度小于甘油果糖,且差异具有统计学意义（P＜0.05）.同时,注射压力与浓度相关,2 ml ELP（0.05、0.025、0.012 5、0.005 yml）和甘油果糖注射后的平均注射压力分别为（332±36）、（223±24）、（174±22）、（142±19）、（269±17）kPa,0.025 g/ml ELP注射压力小于甘油果糖,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 ELP是一种安全有效的新型黏膜下注射制剂,推荐ESD术中注射ELP的最适质量浓度为0.025 g/ml. 展开更多

关键词 类弹性蛋白多肽 内镜黏膜下剥离术 黏膜下注射

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Foldon介导的寡聚化类弹性蛋白多肽的相变特性 被引量：2

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作者 葛慧华 张丹丹 +2 位作者 吴姝羽 邱岳 张光亚 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期853-859,共7页

为了解SpyCatcher-ELPs40（C-E）相变异常的原因并考察寡聚化结构域对其相变行为的影响,将Foldon（F）分别与C-E和ELPs40（E）融合,构建拓扑结构为非共价三臂星型寡聚化的C-E-F和E-F;探究不同盐浓度和类型对其相变特性的影响,并与其他E... 为了解SpyCatcher-ELPs40（C-E）相变异常的原因并考察寡聚化结构域对其相变行为的影响,将Foldon（F）分别与C-E和ELPs40（E）融合,构建拓扑结构为非共价三臂星型寡聚化的C-E-F和E-F;探究不同盐浓度和类型对其相变特性的影响,并与其他ELPs进行比较.结果显示：融合了Foldon的ELPs40的相变温度高于线型ELPs120而低于线型ELPs40及Spy Tag/Spy Catcher介导的共价三臂星型ELPs,非共价三臂星型C-E-F的相变温度变化幅度较大,与等重复数的C-E和ELPs40相比,平均分别高出28.75℃和35.6℃,尤其在NaCl浓度为0.8 mol/L时,相差分别为41.2℃和47.1℃.同时,Na2CO3浓度在0.7 mol/L及以上时,非共价三臂星型C-E-F才会在低温下发生相变,而其在较低浓度的Na2SO4溶液中相变现象明显,不符合Hofmeister效应.本研究报道了非线型ELPs特殊的相变行为,并证明ELPs拓扑结构会影响其相变行为,但Foldon和Spy Catcher表面电荷是更重要的因素. 展开更多

关键词 类弹性蛋白多肽 相变温度 拓扑结构与性能关系 Hofmeister离子序 蛋白寡聚化

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类弹性蛋白多肽介导的二氧化硅仿生矿化 被引量：2

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作者 邱岳 林源清 +1 位作者 罗少凡 张光亚 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第28期3037-3046,共10页

仿生矿化是目前先进无机材料制备的重要手段之一,经仿生硅化所制备的二氧化硅具有更优越的性能.因此,开发能介导仿生硅化制备新型二氧化硅材料的多肽具有重要理论和应用价值.本文报道了一种具有仿生硅化能力的新型多肽——类弹性蛋白多... 仿生矿化是目前先进无机材料制备的重要手段之一,经仿生硅化所制备的二氧化硅具有更优越的性能.因此,开发能介导仿生硅化制备新型二氧化硅材料的多肽具有重要理论和应用价值.本文报道了一种具有仿生硅化能力的新型多肽——类弹性蛋白多肽(ELPs120).经化学测定、红外分析、元素分析及电子显微镜等表征手段证实ELPs120具有独特的仿生硅化性能:ELPs120能在pH2.2~9.6的缓冲液中介导硅酸仿生硅化;且在浓度更低的条件下,其仿生硅化所需时间更短(约100 s),仅为其他多肽所需时间的1/6.此外,它能在盐酸-巴比妥钠(无磷酸根离子)缓冲液中形成浓度为1472.60μg/mL的二氧化硅,表明其仿生硅化不依赖于磷酸根.上述特性暗示ELPs120可能存在介导硅酸仿生硅化的新机制.由ELPs120特殊的自分离特性,其制备更为简单,在二氧化硅仿生制备领域应用潜力巨大. 展开更多

关键词 仿生矿化 类弹性蛋白多肽 硅酸 二氧化硅仿生制备

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融合蛋白ELP30-Trx的表达及PEG8000对其相变温度的影响 被引量：1

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作者 张立超 葛高顺 胡学军 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期36-39,共4页

目的:研究不同浓度的PEG8000对融合蛋白ELP30-Trx相变温度的影响。方法:将硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)基因克隆到pET28-ELP30-Trx表达载体中,经IPTG诱导在宿主菌E.coli BLR(DE3)中表达ELP30-Trx,通过可逆相变循环(Inverse transition c... 目的:研究不同浓度的PEG8000对融合蛋白ELP30-Trx相变温度的影响。方法:将硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)基因克隆到pET28-ELP30-Trx表达载体中,经IPTG诱导在宿主菌E.coli BLR(DE3)中表达ELP30-Trx,通过可逆相变循环(Inverse transition cycling,ITC)纯化融合蛋白。测量相变温度(T t),并检测不同浓度的PEG8000对ELP30-Trx T t的影响。结果:经酶切及测序鉴定证实成功构建了ELP30-Trx表达载体,经Westen-Blot检测表明成功表达ELP30-Trx融合蛋白。经ITC纯化后的ELP30-Trx纯度可达95%以上。5%、10%、15%、20%的PEG8000(W/V)使终浓度为25μmol/L ELP30-Trx的T t从37.9℃分别降低至34.6℃、28.5℃、14.0℃、6.0℃。结论:成功构建、表达融合蛋白ELP30-Trx,PEG8000能显著降低ELP30-Trx相变温度。通过对类弹性蛋白的研究,为类弹性蛋白的扩大应用提供理论依据。 展开更多

关键词 类弹性蛋白 纯化标签 PEG8000 融合蛋白 硫氧还蛋白

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疏水类弹性蛋白多肽的克隆表达及相变特性分析

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作者 王珊珊 刘阳 +3 位作者 高琪 王令 路宏朝 张涛 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期27-32,共6页

类弹性蛋白多肽(elastin-like polypeptides,ELPs)作为新型温敏生物材料,在药物递送、组织工程和蛋白质分离纯化领域具有广阔的应用前景,精确控制快速生物合成具有特定相变特性的ELPs至关重要。利用质粒重建递归定向连接技术,成功构建... 类弹性蛋白多肽(elastin-like polypeptides,ELPs)作为新型温敏生物材料,在药物递送、组织工程和蛋白质分离纯化领域具有广阔的应用前景,精确控制快速生物合成具有特定相变特性的ELPs至关重要。利用质粒重建递归定向连接技术,成功构建以缬氨酸为客座氨基酸的重组质粒pET28-ELP 25、pET28-ELP 50和pET28-ELP 100,分别转化至Escherichia coli BL21(DE3)中,经自诱导培养基的培养,SDS-PAGE结果表明,ELPs在大肠杆菌体系中实现了胞内可溶过量表达,表达量约占胞内全细胞蛋白的30%以上。利用可逆相变循环法(inverse transition cycling,ITC)进行分离纯化,仅需3轮ITC获得电泳纯ELP 25、ELP 50和ELP 100。热比浊法测定相变温度,分析显示ELPs的相变温度与多肽浓度、离子强度和多肽分子量均呈负相关,为进一步重组克隆表达特定相变特性的温敏多肽生物材料奠定理论基础。 展开更多

关键词 类弹性蛋白多肽 质粒重建递归定向连接 可逆相变循环 相变温度

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含RGD肽类弹性蛋白制备及促HUVECs细胞黏附的影响 被引量：1

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作者 崔梅英 王明月 +5 位作者 陈丽 王冬梅 杨泽斌 黄莉莉 刘宇轩 关新刚 《北华大学学报（自然科学版）》 CAS 2020年第6期740-743,共4页

目的探讨含RGD肽的类弹性蛋白多肽RGD-ELPs和RDG-ELPs与细胞相容性及两种融合蛋白对人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)黏附的影响.方法应用大肠杆菌系统表达RGDELPs和RDG-ELPs蛋白,利用可逆相变循环(ITC... 目的探讨含RGD肽的类弹性蛋白多肽RGD-ELPs和RDG-ELPs与细胞相容性及两种融合蛋白对人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)黏附的影响.方法应用大肠杆菌系统表达RGDELPs和RDG-ELPs蛋白,利用可逆相变循环(ITC)纯化两种融合蛋白;通过MTT法及活/死细胞染色法检测两种融合蛋白与人胚肾细胞(HEK293T)的相容性;通过贴壁细胞计数方法检测不同浓度RGD-ELP对体外HUVECs细胞黏附表达的影响.结果利用BL21(DE3)大肠杆菌表达系统制备高浓度的RGD-ELPs和RDGELPs,通过ITC纯化得到了高纯度融合蛋白;MTT法及活/死细胞染色法结果提示RGD-ELPs和RDG-ELPs蛋白具有良好的相容性;细胞黏附实验结果表明:RGD-ELPs浓度越大,HUVEC细胞黏附能力越强,而对照组RDGELPs则未显示出明显的细胞黏附效果.结论成功表达并纯化了RGD-ELPs和RDG-ELPs融合蛋白;两种蛋白均具有良好的细胞相容性;RGD-ELPs蛋白具有明显的促进HUVECs细胞黏附作用. 展开更多

关键词 类弹性蛋白多肽 RGD肽 蛋白纯化 细胞黏附

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载奥沙利铂类弹性蛋白多肽水凝胶的制备及其对小鼠结肠癌CT26细胞的杀伤作用

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作者 胡楠楠 杨馥旭 +5 位作者 穆业腾 郭冲 薛晗 范宇鑫 郭峰霖 关新刚 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期94-100,共7页

目的:制备担载奥沙利铂(OXA)的类弹性蛋白多肽(ELPs)水凝胶,研究其体外药物释放情况及对小鼠结肠癌CT26细胞的杀伤作用。方法:利用大肠杆菌(E.coli)系统表达ELPs原核蛋白,利用可逆相变循环法(ITC)进行蛋白纯化,将ELPs蛋白溶液与交联剂... 目的:制备担载奥沙利铂(OXA)的类弹性蛋白多肽(ELPs)水凝胶,研究其体外药物释放情况及对小鼠结肠癌CT26细胞的杀伤作用。方法:利用大肠杆菌(E.coli)系统表达ELPs原核蛋白,利用可逆相变循环法(ITC)进行蛋白纯化,将ELPs蛋白溶液与交联剂四羟甲基氯化磷(THPC)混匀制备水凝胶,扫描电子显微镜(SEM)观察水凝胶的超微结构,CCK-8法检测不同浓度ELPs水凝胶处理后CT26细胞和小鼠成纤维NIH3T3细胞存活率,活/死细胞染色法观察30和40 g∙L-1 ELPs水凝胶作用48 h后CT26细胞存活情况。制备载OXA的ELPs水凝胶,检测其在不同pH值(6.5和7.4)缓冲液中的药物释放情况,CCK-8法检测加入载不同浓度(0.25、1.00、4.00、16.00和64.00 mg∙L-1)OXA的ELPs水凝胶浸泡液后各组CT26细胞存活率和处理不同时间各组CT26细胞存活率。结果:凝胶电泳分析,E.coli诱导后在预计相对分子质量38000附近出现明显加粗的蛋白条带,ITC纯化后泳道中无明显杂蛋白存在。ELPs蛋白溶液中加入THPC后由透明液体状态转变为不透明的白色水凝胶,SEM观察显示出排列整齐的孔隙和三维结构;CCK-8法检测,经不同浓度ELPs蛋白处理后CT26细胞和NIH3T3细胞存活率仍接近100%;活/死细胞染色,ELPs水凝胶处理后的CT26细胞在荧光显微镜下呈现明亮的绿色荧光。载OXA的ELPs水凝胶能在体外持续释放OXA,在pH值6.5条件下OXA的释放速度较pH值7.4条件下稍快;CCK-8法检测,载不同浓度OXA的ELPs水凝胶浸泡液呈剂量依赖性抑制CT26细胞增殖,且随孵育时间的延长CT26细胞存活率逐渐降低。结论:载OXA的ELPs水凝胶具有持续释放OXA的特性,能够高效且持续地杀伤小鼠结肠癌CT26细胞,可作为一种安全有效的药物递送载体用于抗肿瘤研究。 展开更多

关键词 类弹性蛋白多肽 水凝胶 奥沙利铂 结肠肿瘤 药物递送

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载多西他赛温敏类弹性蛋白多肽自组装微粒的制备 被引量：1

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作者 毕娟 何勤 李凤前 《药学服务与研究》 CAS CSCD 2013年第2期111-114,共4页

目的:制备温敏类弹性蛋白多肽(ELPs)自组装微粒,并考察其温敏特性及对模型药物多西他赛的包载效能。方法:将ELPs冻干粉重新分散于冷的NaCl磷酸盐缓冲液中,利用配备电热温控装置的紫外-可见分光光度计,在波长350nm处测定ELPs溶液的光密度... 目的:制备温敏类弹性蛋白多肽(ELPs)自组装微粒,并考察其温敏特性及对模型药物多西他赛的包载效能。方法:将ELPs冻干粉重新分散于冷的NaCl磷酸盐缓冲液中,利用配备电热温控装置的紫外-可见分光光度计,在波长350nm处测定ELPs溶液的光密度,升降温速率为1℃/min,计算相变温度。向ELPs溶液中加入多西他赛50%乙醇水溶液,混合完全,相变温度下孵育30min即得载药微粒,保温离心测定包封率并考察体外释放情况。结果:相变温度下自组装形成的载药微粒外观圆整,粒径约为1μm,包封率可达15.12%。结论:ELPs具有温敏特性,且可实现对多西他赛的包载。 展开更多

关键词 类弹性蛋白多肽 温敏特性 自组装 多西他赛 包封率

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溶剂特性对三臂星型类弹性蛋白多肽相变温度的影响 被引量：1

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作者 熊紫阳 张丹丹 +1 位作者 张光亚 李夏兰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1141-1148,共8页

本文利用Spy Tag/Spy Catcher特性构建了三臂星型结构的类弹性蛋白多肽（elastin-like polypeptides,ELPs）,考察其在不同溶剂,如分子拥挤试剂、osmolytes及深共熔溶剂（deep eutectic solvents,DESs）中的相变温度及行为,并与含有相同E... 本文利用Spy Tag/Spy Catcher特性构建了三臂星型结构的类弹性蛋白多肽（elastin-like polypeptides,ELPs）,考察其在不同溶剂,如分子拥挤试剂、osmolytes及深共熔溶剂（deep eutectic solvents,DESs）中的相变温度及行为,并与含有相同ELPs重复数的线性ELPs120作对比。结果表明：在不同浓度拥挤试剂PEG2000作用下,两种结构的ELPs相变温度均降低,当其各自浓度均为25μmol/L时,三臂星型ELPs相变温度降低3℃-13℃,而ELPs120相变温度仅降低1.5℃-10.8℃。此外,在添加PEG2000后,三臂星型ELPs相变缓慢;在不同类型和浓度的osmolytes溶液中,25μmol/L三臂星型ELPs相变温度明显要比线性ELPs高8℃左右;在DESs体系中,三臂星型ELPs有类似与水溶液中的相变行为,且其相变温度受到抑制,另外三臂星型ELPs和ELPs120在DESs/PBS体系中,与在（氯化胆碱＋尿素）/PBS体系中的相变行为一致,其中当DESs体积含量为50%,ELPs120相变温度是最低的。由于ELPs在非单一缓冲液体系中的相变行为不同,这丰富了ELPs作为纯化标签的应用,且在非单一缓冲液体系中因降低了相变温度,节约了纯化融合蛋白的经济成本,同时也为研究ELPs拓扑结构与其相变行为之间的关系奠定理论基础。 展开更多

关键词 类弹性蛋白多肽 相变温度 拥挤试剂 深共熔溶剂 OSMOLYTES SPY Tag/Spy Catcher

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弹性蛋白样生物材料的制备及性质鉴定

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作者 张潇航 李媛媛 +1 位作者 贾敏晅 顾奇 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期33-40,共8页

组织工程器官重建因不同的用途而对材料的弹性、刚度、生物活性等有一系列的需求,但当前所应用的材料多难以同时满足,例如弹性材料聚乙二醇双丙烯酸酯等高分子材料并不具备较高的生物活性,而生物材料胶原等生物活性好而弹性较差。弹性蛋... 组织工程器官重建因不同的用途而对材料的弹性、刚度、生物活性等有一系列的需求,但当前所应用的材料多难以同时满足,例如弹性材料聚乙二醇双丙烯酸酯等高分子材料并不具备较高的生物活性,而生物材料胶原等生物活性好而弹性较差。弹性蛋白(elastin)作为广泛存在于动物体内的一种弹性极佳的功能蛋白,因其可承受较大形变而不破坏本身结构,故应用于弹性器官的组织工程重建中。为获得高生物活性的弹性蛋白样多肽(elastin-like polypeptides,ELP),根据其基本重复单元Val-Pro-Gly-Xaa-Gly设计了氨基酸序列,并进行优化,构建成原核表达质粒,通过大肠杆菌BL21(DE3)菌株进行诱导表达并收集,SDS-PAGE鉴定。通过流变检测、扫描电镜检测、细胞活性检测等方法鉴定材料的弹性性能、物理结构及生物活性,为下一步通过调整交联方法提高其弹性提供了材料,也为ELP作为生物材料应用于组织工程器官重建奠定了基础。 展开更多

关键词 弹性蛋白样多肽 原核表达 生物材料

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类弹性蛋白多肽的原核表达与纯化

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作者 韩鹏飞 陈雪利 +4 位作者 张贵虎 闫梦 徐丹华 王小引 王天云 《新乡医学院学报》 CAS 2020年第2期113-115,共3页

目的构建类弹性蛋白多肽(ELPs)的表达质粒并获得类弹性蛋白多肽。方法构建含ELPs的原核表达载体,转化E.coli BL21感受态细胞,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导ELPs蛋白表达并对其进行纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白纯度。结果成功构... 目的构建类弹性蛋白多肽(ELPs)的表达质粒并获得类弹性蛋白多肽。方法构建含ELPs的原核表达载体,转化E.coli BL21感受态细胞,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导ELPs蛋白表达并对其进行纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白纯度。结果成功构建pET-28a-ELPs原核表达载体,在相对分子质量55 000处出现目的条带,与目的蛋白分子量大小一致,蛋白纯度为95%。结论成功表达并纯化出ELPs蛋白,为ELPs在组织工程方面的应用奠定了基础。 展开更多

关键词 类弹性蛋白多肽 原核表达 相变温度 蛋白纯化

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类弹性蛋白多肽长度对不溶活性ELPs-木聚糖酶聚集体酶学性质的影响

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作者 葛慧华 吴姝羽 +1 位作者 沈婷婷 张光亚 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期848-853,共6页

为了系统研究ELPs的长度对不溶活性ELPs-木聚糖酶聚集体(IAEXA)的影响,构建带有木聚糖酶与不同长度ELPs融合基因的克隆及表达载体,经表达、纯化得到不同长度ELPs与木聚糖酶的不溶活性聚集体,并考察其酶学性质.结果表明:所有IAEXA的最适... 为了系统研究ELPs的长度对不溶活性ELPs-木聚糖酶聚集体(IAEXA)的影响,构建带有木聚糖酶与不同长度ELPs融合基因的克隆及表达载体,经表达、纯化得到不同长度ELPs与木聚糖酶的不溶活性聚集体,并考察其酶学性质.结果表明:所有IAEXA的最适温度均为70℃,比未连接ELPs的自由木聚糖酶提高了20℃,其最适反应p H均为7.0,比自由酶提高了1个p H单位,且在p H为8-9时仍保持80%以上活力,其耐碱能力也有较大提升.其中,由40个重复ELPs形成的IAEXA热稳定性最好,80个重复的ELPs的p H稳定性最好,其重复使用性也最佳,而60个重复的ELPs形成的IAEXA与底物的亲和性最佳.因此,较长ELPs有助于提高IAEXA的催化效率及重复使用率,拓展其应用范围. 展开更多

关键词 木聚糖酶 类弹性蛋白多肽 不溶活性聚集体 酶学性质 固定化酶

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