大肠杆菌中利用苏云金芽胞杆菌强启动子p1Ac指导Cry1Ac蛋白表达的特性分析 被引量：4

1

作者 马君兰 束长龙 +3 位作者 刘东明 张杰 宋福平 黄大昉 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期80-84,共5页

对利用苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)强启动子——cry1Ac基因启动子p1Ac指导cry基因在大肠杆菌中的表达进行了研究。结果显示,大肠杆菌中由启动子p1Ac指导表达的Cry1Ac蛋白与苏云金芽胞杆菌来源的Cry1Ac蛋白在碱溶性、胰... 对利用苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)强启动子——cry1Ac基因启动子p1Ac指导cry基因在大肠杆菌中的表达进行了研究。结果显示,大肠杆菌中由启动子p1Ac指导表达的Cry1Ac蛋白与苏云金芽胞杆菌来源的Cry1Ac蛋白在碱溶性、胰蛋白酶活化、杀虫活性等方面有较好的一致性,从而解决了目前商业化载体大肠杆菌表达cry基因时形成不易溶解的包涵体问题。同时,还对p1Ac指导的cry1Ac基因在大肠杆菌中表达的发酵条件进行了初步探索。 展开更多

关键词 cry1ac基因启动子p1ac 大肠杆菌 cry1ac蛋白 表达 发酵条件

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Cry1Ba3蛋白对亚洲玉米螟杀虫活性测定及其与BBMVs的结合分析 被引量：4

2

作者 尹凤翔 孙凯 +2 位作者 束长龙 宋福平 张杰 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期22-27,共6页

提取并纯化Cry1Ba3蛋白截短片段,用饲喂人工饲料的方法对亚洲玉米螟（Ostrinia furnacalis）初孵幼虫进行生物活性测定.结果显示,Cry1Ba3截短片段对亚洲玉米螟有良好的杀虫活性（LC50=5.29 μg/g,95％置信限为3.96～7.10 μg/g）.而纯化... 提取并纯化Cry1Ba3蛋白截短片段,用饲喂人工饲料的方法对亚洲玉米螟（Ostrinia furnacalis）初孵幼虫进行生物活性测定.结果显示,Cry1Ba3截短片段对亚洲玉米螟有良好的杀虫活性（LC50=5.29 μg/g,95％置信限为3.96～7.10 μg/g）.而纯化的Cry1Ac蛋白60 ku的活性片段对亚洲玉米螟初孵幼虫的杀虫活性LC50为0.83 μg/g.提取亚洲玉米螟5龄幼虫的BBMVs,用纯化的Cry1Ba3和Cry1Ac蛋白进行竞争结合试验,结果显示Cry1Ba3与Cry1Ac在亚洲玉米螟中肠的结合没有竞争作用,说明两种毒素在亚洲玉米螟BBMVs上可能存在不同的受体. 展开更多

关键词 cry1Ba3蛋白 cry1ac蛋白 亚洲玉米螟 竞争结合

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从噬菌体抗体库中筛选抗Cry1Ac蛋白单链抗体 被引量：4

3

作者 王耘 刘媛 +2 位作者 王祥 钱亚萍 刘贤进 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1146-1148,共3页

目的:从Tomlinson J噬菌体抗体库中筛选人源化抗Cry1Ac蛋白单链抗体(scFv)并进行鉴定。方法:以Cry1Ac蛋白为抗原包被固相,经4轮"吸附-洗脱-扩增"过程后,挑取单克隆,用ELISA法测定特异性结合活性,并对其进行基因序列测定。结果... 目的:从Tomlinson J噬菌体抗体库中筛选人源化抗Cry1Ac蛋白单链抗体(scFv)并进行鉴定。方法:以Cry1Ac蛋白为抗原包被固相,经4轮"吸附-洗脱-扩增"过程后,挑取单克隆,用ELISA法测定特异性结合活性,并对其进行基因序列测定。结果:经过4轮筛选,获得了2株能与Cry1Ac蛋白特异性结合的阳性克隆。结论:利用噬菌体抗体库技术可以不经过免疫制备出高特异性的人源化抗Cry1Ac蛋白scFv,为Cry1Ac毒素蛋白检测提供了条件。 展开更多

关键词 噬菌体抗体库 cry1ac蛋白 单链抗体

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Cry1Ac蛋白降解菌株FJSB3的分离鉴定及降解特性 被引量：4

4

作者 赵辉欣 刘阳 邢福国 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期922-926,共5页

从转Cry1Ac基因水稻种植田土壤中,分离纯化得到1株能高效降解Cry1Ac蛋白的细菌FJSB3。通过表型特征、16S rDNA扩增和电镜观察,初步鉴定FJSB3为寡养单胞菌(Stenotrophomonas sp.)。FJSB3发酵液能降解粗Bt蛋白。通过单因素试验确定FJSB3... 从转Cry1Ac基因水稻种植田土壤中,分离纯化得到1株能高效降解Cry1Ac蛋白的细菌FJSB3。通过表型特征、16S rDNA扩增和电镜观察,初步鉴定FJSB3为寡养单胞菌(Stenotrophomonas sp.)。FJSB3发酵液能降解粗Bt蛋白。通过单因素试验确定FJSB3降解水稻秸秆中Cry1Ac蛋白的最适条件为:发酵温度30℃,初始菌液浓度2.0×106CFU/ml,pH 7.0,碳氮比(C/N)25/1。在此条件下,水稻秸秆中Cry1Ac蛋白降解率达到92.86%。 展开更多

关键词 cry1ac蛋白 寡养单胞菌 鉴定 Bt蛋白降解

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转基因蛋白Cry1AC的非标记阻抗型电化学免疫传感器的构建 被引量：1

5

作者 游凯豪 史强 +1 位作者 江东健 何庆华 《南昌大学学报（理科版）》 CAS 北大核心 2018年第3期226-230,共5页

Cry1Ac蛋白作为一种重要的生物杀虫剂,在转基因作物中应用广泛,对转基因作物及其产品中Cry1Ac蛋白的含量进行监测,是保障食品安全及消费者知情权的重要手段。本研究在获得抗Cry1Ac蛋白单克隆抗体的基础上,以其为核心识别元件,构建非标... Cry1Ac蛋白作为一种重要的生物杀虫剂,在转基因作物中应用广泛,对转基因作物及其产品中Cry1Ac蛋白的含量进行监测,是保障食品安全及消费者知情权的重要手段。本研究在获得抗Cry1Ac蛋白单克隆抗体的基础上,以其为核心识别元件,构建非标记阻抗型电化学免疫传感器,结果显示,本研究建立的Cry1Ac阻抗性电化学免疫传感器的线性范围为0.98~125ng·mL-1,最低检测限为0.80ng·mL-1,样品加标回收率为80%~110%,并与其它蛋白无交叉反应,为转基因作物及其产品中Cry1Ac蛋白的快速检测提供了一种新的方法。 展开更多

关键词 cry1ac蛋白 抗cry1ac单克隆抗体 电化学免疫传感器 阻抗

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对二点委夜蛾高毒力苏云金芽胞杆菌的筛选及其基因型分析 被引量：3

6

作者 杨云鹤 宋萍 +2 位作者 王振营 董志平 王勤英 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期630-635,共6页

【目的】获得对二点委夜蛾Athetis lepigone(M(o|¨)schler)高毒力的苏云金芽胞杆菌(Bt)菌株,寻找对该虫具有特异杀虫活性的蛋白毒素,探索Bt菌株或其杀虫基因应用于二点委夜蛾防治的可行性。【方法】通过生物测定方法比较了36株苏... 【目的】获得对二点委夜蛾Athetis lepigone(M(o|¨)schler)高毒力的苏云金芽胞杆菌(Bt)菌株,寻找对该虫具有特异杀虫活性的蛋白毒素,探索Bt菌株或其杀虫基因应用于二点委夜蛾防治的可行性。【方法】通过生物测定方法比较了36株苏云金芽胞杆菌和一株恶臭假单胞工程菌PHB-cry1Ab对二点委夜蛾幼虫的杀虫活性,同时利用PCR-RFLP方法对这些菌株的基因型进行了分析。【结果】不同Bt菌株对二点委夜蛾幼虫的杀虫活性差别很大,杀虫活性高的菌株都含有cry1Ac基因。饲毒72 h后含单基因的BtHD-73菌株(cry1Ac)对二点委夜蛾2龄幼虫的毒力(LC_(50)值为188.51μg/g)明显高于含多基因的Bt SC-40菌株(cry1Ac,cry2Ac,cry1I,vip3A)的毒力(LC_(50)值为418.13μg/g)。含有vip3A基因的Bt SC-40和BtHD-13营养期上清液对二点委夜蛾2龄幼虫表现出一定的杀虫活性(72 h死亡率分别达到42.5%和57.4%),而无vip3A基因的Bt HD-73营养期上清液未表现出明显的杀虫活性。【结论】由cry1Ac基因编码的Cry1Ac蛋白对二点委夜蛾幼虫具有特异杀虫活性,Vip3A蛋白对二点委夜蛾幼虫可能也有一定的杀虫活性。 展开更多

关键词 苏云金芽胞杆菌 二点委夜蛾 基因型鉴定 杀虫活性 Vip3A蛋白 cry1ac蛋白

原文传递

W544F定点突变提高苏云金杆菌Cry1Ac蛋白的稳定性 被引量：2

7

作者 王发祥 夏立秋 +5 位作者 丁学知 赵新民 单世平 莫湘涛 张友明 喻子牛 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1999-2002,共4页

W544是Cry1Ac蛋白上独特于其它Cry类蛋白的一个氨基酸,它与F578和F604一起组成一个'螺旋桨状'的疏水簇,通过疏水相互作用维持蛋白的三维结构稳定.本研究通过定点突变将W544保守地替换为苯丙氨酸,SDS-PAGE分析结果表明其纯化的... W544是Cry1Ac蛋白上独特于其它Cry类蛋白的一个氨基酸,它与F578和F604一起组成一个'螺旋桨状'的疏水簇,通过疏水相互作用维持蛋白的三维结构稳定.本研究通过定点突变将W544保守地替换为苯丙氨酸,SDS-PAGE分析结果表明其纯化的原毒素对紫外照射、胰蛋白酶处理和室温存贮的稳定性相对于野生Cry1Ac都有一定程度的提高;经原子力显微镜观察,发现W544F产生的晶体两个顶点间的垂直距离比野生型Cry1Ac约长0.6μm,且晶体表面不及野生型光滑;此外,W544F与野生Cry1Ac的杀虫活性相似,但经过紫外光照射9 h后,其保留的杀虫活性比野生型高4倍以上.W544F突变较好地解决了Cry1Ac毒素蛋白田间应用不持久的问题,具有重要的应用价值. 展开更多

关键词 cry1ac蛋白 定点突变 色氨酸 苯丙氨酸 稳定性

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Cry1Ac和Cry2Ab杀虫蛋白对粘虫幼虫生长发育的影响 被引量：1

8

作者 王雪丽 路子云 +3 位作者 李建成 李贞 董杰 刘小侠 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期875-881,共7页

【目的】为探究Bt杀虫蛋白对次要靶标害虫粘虫Mythimna separata (Walker)(鳞翅目:夜蛾科)的杀虫活性及对其生长发育的影响。【方法】本文通过浸叶法饲喂初孵及2龄末粘虫不同剂量的Cry1Ac及Cry2Ab杀虫蛋白后,观察其死亡率,称量幼虫重,... 【目的】为探究Bt杀虫蛋白对次要靶标害虫粘虫Mythimna separata (Walker)(鳞翅目:夜蛾科)的杀虫活性及对其生长发育的影响。【方法】本文通过浸叶法饲喂初孵及2龄末粘虫不同剂量的Cry1Ac及Cry2Ab杀虫蛋白后,观察其死亡率,称量幼虫重,并统计了幼虫历期、化蛹率、蛹重、蛹期、蛹的羽化率、畸形率等指标。【结果】初孵幼虫取食浸泡含16、64、128μg/mLCry1Ac及Cry2Ab的玉米叶片后,随着时间的延长及浓度的增加,死亡率逐渐增加,且Cry1Ac杀虫蛋白对粘虫的生物活性高于Cry2Ab蛋白,在128μg/mL浓度下,取食Cry1Ac和Cry2Ab蛋白13d时的死亡率分别达到了65%及60%。取食两种蛋白后,初孵幼虫和2龄末幼虫重量均受到显著抑制,短期取食两种蛋白对幼虫历期、化蛹率、蛹重、蛹期、蛹的羽化率、畸形率没有影响。【结论】取食Cry1Ac和Cry2Ab杀虫蛋白后,对初孵幼虫有很好的杀虫活性,且Cry1Ac杀虫活性高于Cry2Ab杀虫蛋白;短期饲喂两种杀虫蛋白时,对2龄粘虫后期生长影响不大。本文结果为转Bt基因作物更好的应用于粘虫的防治提供了理论基础。 展开更多

关键词 粘虫 cry1ac蛋白 cry2Ab蛋白 杀虫活性 生长发育

原文传递

APN1的原核表达及其与Cry1Ac蛋白体外结合 被引量：1

9

作者 林慧岩 周子珊 +2 位作者 束长龙 高继国 张杰 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期23-28,共6页

本研究分析了Cry1Ac蛋白与棉铃虫BBMVs的结合情况;并将棉铃虫apn1基因的全长和片段在大肠杆菌Rosetta（DE3）中进行表达,利用Ligand blotting技术分析原核表达的APN1全长及4个片段与Cry1Ac蛋白的结合情况。结果表明：Cry1Ac蛋白可以与... 本研究分析了Cry1Ac蛋白与棉铃虫BBMVs的结合情况;并将棉铃虫apn1基因的全长和片段在大肠杆菌Rosetta（DE3）中进行表达,利用Ligand blotting技术分析原核表达的APN1全长及4个片段与Cry1Ac蛋白的结合情况。结果表明：Cry1Ac蛋白可以与棉铃虫的BBMVs结合;在大肠杆菌中表达的棉铃虫受体蛋白APN1的全长、片段H1（33~257）、H2（258~547）和H3（548~798）可以与Cry1Ac蛋白结合,其中片段H3是首次发现可以与Cry1Ac蛋白结合。本研究的结果也为其他Bt蛋白受体的体外功能研究提供新的借鉴。 展开更多

关键词 cry1ac蛋白 棉铃虫 APN1 原核表达 结合位点

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芽胞外壁基质组成蛋白的编码基因启动子PexsY指导的cry1Ac基因表达 被引量：1

10

作者 郑庆云 王冠男 +5 位作者 张喆 曲宁 彭琦 张杰 高继国 宋福平 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1138-1145,共8页

【目的】利用非cry基因启动子PexsY(芽胞外壁基质组成蛋白编码基因启动子)表达Cry1Ac晶体蛋白,发现可用于cry基因表达的新元件,为高效工程菌的构建奠定基础。【方法】采用启动子融合lacZ技术,通过β-半乳糖苷酶活性分析了PexsY启动子和... 【目的】利用非cry基因启动子PexsY(芽胞外壁基质组成蛋白编码基因启动子)表达Cry1Ac晶体蛋白,发现可用于cry基因表达的新元件,为高效工程菌的构建奠定基础。【方法】采用启动子融合lacZ技术,通过β-半乳糖苷酶活性分析了PexsY启动子和截短的PexsY启动子的转录活性;利用该启动子在苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)HD73菌株中表达了cry1Ac基因,通过透射电子显微镜观察晶体形态;蛋白定量、SDS-PAGE比较蛋白产量;生物活性测定进行功能验证。【结果】PexsY启动子在芽胞晚期转录活性很高,透射电镜观察到利用该启动子表达的cry1Ac基因形成了菱形晶体,SDS-PAGE分析可以检测到133kDa的Cry1Ac蛋白,且与cry3A启动子指导表达的蛋白产量相近,少于cry8E启动子指导表达的蛋白产量;生物活性测定表明PexsY指导表达Cry1Ac蛋白对玉米螟(Ostrinia furnacalis)具有杀虫活性。【结论】在Bt无晶体突变体中,非cry基因启动子PexsY可以正常表达133kDa的Cry1Ac蛋白,并形成晶体,具有在芽胞形成晚期表达cry基因的能力,该类启动子将在Bt工程菌构建中发挥重要作用。 展开更多

关键词 苏云金芽胞杆菌 PexsY启动子 cry1ac蛋白

原文传递

棉铃虫JNKs基因的克隆及表达分析

11

作者 于思琪 汤金荣 +2 位作者 张彩虹 EI THINZAR SOE 梁革梅 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期139-146,共8页

c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)是MAPK家族(mitogen-activated protein kinases,丝裂原活化蛋白激酶)的重要成员,具有参与昆虫抗逆反应等多种功能。为明确JNK在棉铃虫Helicoverpa armigera中的表达特性及其对Bt杀虫... c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)是MAPK家族(mitogen-activated protein kinases,丝裂原活化蛋白激酶)的重要成员,具有参与昆虫抗逆反应等多种功能。为明确JNK在棉铃虫Helicoverpa armigera中的表达特性及其对Bt杀虫蛋白的应激与免疫反应,本研究通过PCR克隆得到2个棉铃虫JNK基因HaJNK1和HaJNK2;生物信息学分析结果显示:HaJNK1和HaJNK2基因开放阅读框分别为1 191、1 143 bp,分别编码397、381个氨基酸。系统进化树分析结果表明棉铃虫HaJNK1与黏虫Mythimna separata聚为一支,亲缘关系较近,HaJNK2与家蚕Bombyx mori聚为一支,同源性较高。利用实时荧光定量PCR技术分析HaJNK1与HaJNK2在棉铃虫不同发育时期、不同组织中的表达量,发现HaJNK1与HaJNK2在卵中表达量最高,其次是雌成虫;HaJNK1在性腺中表达量最高,其次是唾液腺;HaJNK2在头部表达量最高,其次是性腺。取食Cry1Ac的4龄棉铃虫幼虫的中肠组织中,HaJNK1与HaJNK2的表达量均显著升高。推测HaJNKs基因可能参与棉铃虫抵御Bt杀虫蛋白伤害的应激和抗逆反应。 展开更多

关键词 棉铃虫 cry1ac蛋白 JNK基因 表达水平

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表面等离子共振传感器检测转基因植物中苏云金芽孢杆菌cry1Ac蛋白的方法研究 被引量：1

12

作者 杜方 纪淑娟 黄新 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期482-486,共5页

为建立表面等离子共振传感器检测转基因植物中苏云金芽孢杆菌cry1Ac蛋白的方法,根据生物分子间的相互作用,在金片表面修饰cry1Ac蛋白的特异性单克隆抗体,对不同稀释梯度的cry1Ac蛋白进行检测研究。结果表明:该方法可有效的检测到cry1Ac... 为建立表面等离子共振传感器检测转基因植物中苏云金芽孢杆菌cry1Ac蛋白的方法,根据生物分子间的相互作用,在金片表面修饰cry1Ac蛋白的特异性单克隆抗体,对不同稀释梯度的cry1Ac蛋白进行检测研究。结果表明:该方法可有效的检测到cry1Ac蛋白,检测灵敏度可达到10ng·mL-1,与cry2A蛋白及CP4-EPSPS蛋白无交叉反应。说明利用表面等离子共振方法检测cry1Ac蛋白操作简单,省时且灵敏度高,特异性强,可用于对cry1Ac蛋白的定量检测。 展开更多

关键词 表面等离子共振传感器 cry1ac蛋白 苏云金芽孢杆菌 转基因植物

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棉田Cry1Ac蛋白降解菌株12T-103的分离鉴定及降解能力研究 被引量：1

13

作者 肖海兵 董震宇 +3 位作者 董红强 符娜 尚北晨 杨明禄 《塔里木大学学报》 2018年第4期59-63,共5页

为分离鉴定棉田转Cry1Ac基因棉的Cry1Ac蛋白土壤降解细菌及测定其降解能力。采用蛋白质凝胶电泳(SDSPAGE)、酶联免疫法(ELISA)法和常规细菌培养与鉴定技术,对第一师12团棉田土壤中Cry1Ac蛋白降解菌进行分离、纯化、形态生理生化观察以... 为分离鉴定棉田转Cry1Ac基因棉的Cry1Ac蛋白土壤降解细菌及测定其降解能力。采用蛋白质凝胶电泳(SDSPAGE)、酶联免疫法(ELISA)法和常规细菌培养与鉴定技术,对第一师12团棉田土壤中Cry1Ac蛋白降解菌进行分离、纯化、形态生理生化观察以及降解功能测定。结果表明:从棉田土壤分离一株具有降解Cry1Ac蛋白能力的土壤细菌,命名为12T-103菌株,细菌形态学、生理生化特征和16S r DNA序列鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),该菌株对Cry1Ac蛋白的降解效果较为明显,在1h时Cry1Ac蛋白含量由15. 95μg·L-1降至0. 68μg·L-1,其降解程度达极显著水平(p <0. 01),其降解率为92. 26%。结论:分离于转基因棉田的12T-103菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),该菌株对Cry1Ac蛋白的降解能力较强。 展开更多

关键词 cry1ac蛋白 棉田土壤 降解细菌 降解能力

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转Bt基因棉花中Cry1Ac蛋白经烟粉虱途径向龟纹瓢虫的传递 被引量：1

14

作者 周福才 顾爱祥 +3 位作者 杨益众 苏宏华 胡其靖 杨爱民 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期911-916,共6页

【目的】烟粉虱Bemisia tabaci是转基因棉的非靶标害虫，对棉花生产造成严重影响。本文探讨转Bt基因棉花中CrylAc蛋白在棉花．烟粉虱一龟纹瓢食物链中的传递规律，以期为转基因棉的环境安全评价提供科学依据。【方法】在实验室条件下，... 【目的】烟粉虱Bemisia tabaci是转基因棉的非靶标害虫，对棉花生产造成严重影响。本文探讨转Bt基因棉花中CrylAc蛋白在棉花．烟粉虱一龟纹瓢食物链中的传递规律，以期为转基因棉的环境安全评价提供科学依据。【方法】在实验室条件下，以常规棉SM3号、33、SY321为对照，分析转Bt基因棉花GKl2、XM33B、SGK321叶片、在这些棉花上取食的烟粉虱、以及捕食烟粉虱的瓢虫体内CrylAc蛋白含量。同时，将取食转Bt基因棉花上的烟粉虱的瓢虫转接到对应的受体亲本棉花上，分析瓢虫体内CrylAc蛋白含量变化规律。【结果】在转Bt基因棉花上取食的烟粉虱成虫和若虫以及它们的蜜露中均能检测到CrylAc蛋白，以转Bt基因棉花上的烟粉虱若虫为食料的龟纹瓢虫体Propylaea japonica内也能检测到CrylAc蛋白。龟纹瓢虫取食转Bt基因棉花上的烟粉虱若虫1d后体内即能检测到CrylAc蛋白，并且随着取食时间的延长，体内CrylAc蛋白的含量逐渐增加，但到第6～8天后CrylAc蛋白的含量相对稳定。取食3个不同品种棉花上烟粉虱若虫的龟纹瓢虫体内CrylAc蛋白的含量存在明显差异，这种差异与棉花叶片上表达的CrylAc蛋白量呈正相关。但取食后6d，在3个品种棉花上取食的龟纹瓢虫体内的CrylAc蛋白含量之间没有明显的差异。以转Bt基因棉花上的烟粉虱若虫为食料的龟纹瓢虫转移到对应的常规棉亲本上以后，体内的CrylAc蛋白的含量迅速下降，但10d后仍能检测到微量的CrylAc蛋白。【结论】转Bt基因棉花中的CrylAc蛋白可以通过烟粉虱途径传递到龟纹瓢虫体内，龟纹瓢虫对食料中的CrylAc蛋白具有富集作用，并且CrylAc蛋白的富集存在饱和现象，富集饱和量与食料中的CrylAc含量无关；龟纹瓢虫脱离含有CrylAc蛋白的食料环境后，体内的CrylAc蛋白可以消减，但在10d时间内龟纹瓢虫体内仍会有CrylAc残留。 展开更多

关键词 转BT基因棉花 烟粉虱 龟纹瓢虫 cry1ac蛋白 传递

原文传递

基因工程玉米Bt799对大鼠胚胎中脑细胞微团及腭板发育的影响

15

作者 侯超 郭倩颖 +4 位作者 刘欣然 刘思奇 麻慧娟 刘珊 王军波 《中国生育健康杂志》 2021年第4期343-349,共7页

目的通过体外培养大鼠中脑细胞微团和胚胎腭板,研究基因工程玉米Bt799及所表达Cry1Ac蛋白发育毒性。方法实验用大鼠选用Wistar大鼠,购自北京大学医学部实验动物部,年龄9周,体重(200±20)g,常规饲养于SPF级动物房。第一部分:于雌鼠孕... 目的通过体外培养大鼠中脑细胞微团和胚胎腭板,研究基因工程玉米Bt799及所表达Cry1Ac蛋白发育毒性。方法实验用大鼠选用Wistar大鼠,购自北京大学医学部实验动物部,年龄9周,体重(200±20)g,常规饲养于SPF级动物房。第一部分:于雌鼠孕13 d提取胚胎中脑细胞,以即刻离心血清替代培养基中胎牛血清,在不同条件下培养中脑细胞5 d,并观察其增殖分化情况。中脑细胞微团培养分八个组进行,分别对应八种不同培养环境。将制备ICS的Wistar大鼠随机分为六组,其中NM组、TM3组、TM1M组、TM3M组、PCB组为前五组大鼠,BP组、BC组、PCA组因大鼠未经直接干预且不影响组间比较,故共同使用第六组大鼠的血清。其中TM3、TM1M、TM3M组使用经Bt799玉米干预3 d、1个月、3个月大鼠的血清,BP组使用添加Cry1Ac蛋白的血清,PCA使用添加双酚A的血清,PCB组使用经双酚A灌胃3 d大鼠的血清,NM组使用经亲本玉米郑58干预3 d大鼠的血清、BC组使用经AIN-93G饲料喂养3 d大鼠的血清。第二部分:于雌鼠孕12.5 d摘取大鼠胚胎腭板,以加入Cry1Ac蛋白(BP组)或全反式视黄酸(RA组)条件旋转培养腭板72 h,根据腭板融合情况计算融合率,判断Cry1Ac蛋白对大鼠胚胎腭板发育的影响。结果第一部分:TM3、TM1M、TM3M、BP组细胞增殖率、分化率与NM组、BC组相比差异均无统计学意义。PCA组和PCB组细胞增殖率和分化率低于NM组、BC组且差异有统计学意义。第二部分:BP组腭板融合率与BC组相比差异无统计学意义。RA组腭板融合率低于BC组,且差异有统计学意义。结论本研究未观察到Bt799玉米及其表达蛋白Cry1Ac的胚胎发育毒性。 展开更多

关键词 cry1ac蛋白 Bt799玉米 腭板培养 微团培养 发育毒性

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基于三级营养传递Cry1Ac蛋白对普通草蛉酶活力及生长发育的影响

16

作者 丁瑞丰 阿克旦.吾外士 +4 位作者 李海强 潘洪生 李号宾 王冬梅 刘建 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1444-1451,共8页

【目的】研究Cry1Ac蛋白通过棉花、棉蚜的传递对普通草蛉酶活性及生长发育的影响,为转Bt基因棉花的安全性评价提供参考和依据。【方法】采用ELISA方法,检测Bt棉、取食Bt棉的棉蚜和捕食棉蚜普通草蛉体内Bt杀虫蛋白含量;通过酶活力测定普... 【目的】研究Cry1Ac蛋白通过棉花、棉蚜的传递对普通草蛉酶活性及生长发育的影响,为转Bt基因棉花的安全性评价提供参考和依据。【方法】采用ELISA方法,检测Bt棉、取食Bt棉的棉蚜和捕食棉蚜普通草蛉体内Bt杀虫蛋白含量;通过酶活力测定普通草蛉幼虫取食Bt棉花上棉蚜后其体内的类胰蛋白酶、类胰凝乳蛋白酶和氨肽酶的酶活性;室内生物测定普通草蛉取食Bt棉花上的棉蚜后对其生长发育的影响。【结果】Cry1Ac杀虫蛋白在棉叶中的表达量为788. 76 ng/g,远高于棉蚜体内的2. 35 ng/g,取食Bt棉花上棉蚜的普通草蛉3龄幼虫体内并未检测到Bt杀虫蛋白;通过三级营养传递的Cry1Ac蛋白对普通草蛉酶活力影响甚微。【结论】棉蚜取食Bt棉花后体内仅能累计微量Cry1Ac蛋白;普通草蛉取食Bt棉花上的棉蚜后,对其体内三种酶活性和生长发育均没有负面影响。 展开更多

关键词 普通草蛉 cry1ac蛋白 酶活力 生长发育 生物学

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南疆三地棉铃虫田间种群对Bt棉的抗性频率监测

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作者 宁忠雄 李维政 +5 位作者 梁赫 秦子昕 王冬梅 李海强 刘冰 路伟 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2021年第2期479-484,共6页

为了监测南疆主要Bt棉区棉铃虫田间种群对Bt棉的抗性频率,分别采集库尔勒、阿克苏、泽普三地的棉铃虫单雌系,以Bt毒蛋白作为人工饲料,采用单雌系F 1代法进行棉铃虫田间种群抗性个体检测。本文从库尔勒、阿克苏、泽普三地分别筛选了57个... 为了监测南疆主要Bt棉区棉铃虫田间种群对Bt棉的抗性频率,分别采集库尔勒、阿克苏、泽普三地的棉铃虫单雌系,以Bt毒蛋白作为人工饲料,采用单雌系F 1代法进行棉铃虫田间种群抗性个体检测。本文从库尔勒、阿克苏、泽普三地分别筛选了57个、106个、92个棉铃虫单雌系。三地棉铃虫单雌系幼虫在正常饲料和Cry1Ac饲料上的平均发育级别呈线性相关,相对平均发育级别平均值分别为0.5210、0.4935、0.4623,无≥0.8的个体,估测南疆三地棉铃虫种群的Bt抗性基因频率均小于0.001。泽普玉米种植比例较高,可有效稀释棉铃虫种群的Bt抗性基因,因此泽普的棉铃虫种群敏感度最高。本研究可为新疆Bt棉区棉铃虫的抗性治理提供科学依据。 展开更多

关键词 BT棉 棉铃虫 cry1ac蛋白 抗性基因频率 南疆

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生物炭对Bt Cry1Ac蛋白抗紫外能力影响

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作者 饶文华 占亚婷 +6 位作者 方云 游雨欣 聂丹玥 郭雪萍 张顶洋 关雄 潘晓鸿 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2020年第5期714-720,共7页

为了研究生物炭对紫外线的防护作用,以豆壳烧制的生物炭作为载体,研究生物炭对Bt Cry1Ac蛋白的吸附行为以及生物炭对Cry1Ac蛋白的紫外保护作用。使用扫描电子显微镜、透射电子显微镜、X-射线粉末衍射以及傅立叶红外光谱等手段对生物炭... 为了研究生物炭对紫外线的防护作用,以豆壳烧制的生物炭作为载体,研究生物炭对Bt Cry1Ac蛋白的吸附行为以及生物炭对Cry1Ac蛋白的紫外保护作用。使用扫描电子显微镜、透射电子显微镜、X-射线粉末衍射以及傅立叶红外光谱等手段对生物炭的形貌和结构进行表征。结果表明,生物炭是典型的多孔结构材料,表面具有丰富的官能团。Cry1Ac蛋白与生物炭吸附平衡时间为50 min,最合适的吸附浓度比(生物炭:蛋白)为1:100,二者吸附符合准二级动力学模型和Langmuir模型。在UVB紫外照射4 h后,生物炭与Cry1Ac蛋白复合物对棉铃虫的生物活性是单纯蛋白的4.93倍,显示生物炭具有较好的紫外抵抗效果。研究结果初步表明,制备得到的生物炭能够显著提高Cry1Ac蛋白的抗紫外能力,为后续研发耐受紫外线的农药剂型提供新材料。 展开更多

关键词 苏云金芽胞杆菌 cry1ac蛋白 生物炭 吸附 抗紫外

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转基因水稻表达的Bt蛋白对拟环纹豹蛛（Pardosa pseudoannulata）体内保护酶活性的影响 被引量：1

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作者 刘立军 颜亨梅 《蛛形学报》 2010年第1期47-51,共5页

把取食24h的转Cry1Ab／Cry1Ac基因水稻叶片的稻纵卷叶螟Cnaphalocrocis medinalis（Guenée）幼虫，分别喂养拟环纹豹蛛3天、6天、9天、12天后，采用酶活力测定方法探究了转基因水稻表达的Bt蛋白对拟环纹豹蛛体内3种保护酶（SOD、PO... 把取食24h的转Cry1Ab／Cry1Ac基因水稻叶片的稻纵卷叶螟Cnaphalocrocis medinalis（Guenée）幼虫，分别喂养拟环纹豹蛛3天、6天、9天、12天后，采用酶活力测定方法探究了转基因水稻表达的Bt蛋白对拟环纹豹蛛体内3种保护酶（SOD、POD和CAT）活性的影响。结果表明：就整体来看，实验期间处理组蜘蛛体内3种保护酶（SOD、POD和CAT）的活性均受到Bt蛋白的影响，且前期3种保护酶活性均表现不同程度的被抑制，明显低于对照组。在实验过程中，SOD活性随着处理时间的增加而逐渐增强，至处理第9天时达到最大值；同时处理组POD、CAT活性也随着处理时间的增加而增强，实验初期（前6天）均显著低于对照组，而至第9天则均高于对照组。由此可见，Bt基因在水稻体内所表达的Bt蛋白能够沿食物链传递至次级消费者，并且在一定程度上对次级消费者产生影响。 展开更多

关键词 转基因水稻 cry1Ab/cry1ac蛋白 SOD POD CAT

原文传递

枯草芽孢杆菌粗酶液对Cry1Ac蛋白质的降解特性

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作者 董震宇 曾嵘 +1 位作者 肖海兵 胡志伟 《江苏农业科学》 2019年第9期273-275,共3页

为了明确枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)粗酶液对Cry1Ac毒蛋白质的降解特征,采用蛋白质凝胶电泳[十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)]和酶联免疫吸附法(ELISA),在不同温度和pH值条件下测定该菌粗酶液降解Cry1Ac蛋白质的特... 为了明确枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)粗酶液对Cry1Ac毒蛋白质的降解特征,采用蛋白质凝胶电泳[十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)]和酶联免疫吸附法(ELISA),在不同温度和pH值条件下测定该菌粗酶液降解Cry1Ac蛋白质的特性。结果表明,枯草芽孢杆菌主要以胞外酶液降解Cry1Ac蛋白质,胞外粗酶液在40℃、pH值为10的条件下对Cry1Ac蛋白质的降解效果最佳,粗酶液S1对Cry1Ac蛋白质降解的米氏常数(Km)为2.0994μg/L,最大反应速度(Vmax)为0.23958μg/(L·min)。在降解45min时,Cry1Ac蛋白质含量由4.987μg/L降至0.159μg/L,其降解程度达极显著水平(P<0.01),其降解率为96.815%。枯草芽孢杆菌的胞外酶液主要发挥降解Cry1Ac蛋白质的作用,其粗酶液对Cry1Ac蛋白质的降解最适条件为40℃、pH值为10以及Km为2.0994μg/L。 展开更多

关键词 枯草芽孢杆菌 cry1ac蛋白质 棉田土壤 降解细菌 降解能力

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