新基因ANGPTL4的克隆及其在血管新生中的功能研究 被引量：20

1

作者 朱洪新 李锦军 +4 位作者 覃文新 杨艳华 何祥火 万大方 顾健人 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期94-99,共6页

目的　克隆新基因ANGPTL4 ,并探讨其功能。方法　采用以细胞生长为基础的功能筛选方法筛选人胎盘cDNA文库 ,结合RACE PCR方法克隆到一个人全长新基因ANGPTL4 ,用RH PCR方法对其进行染色体定位 ;用原核表达系统对重组ANGPTL4进行蛋白表... 目的　克隆新基因ANGPTL4 ,并探讨其功能。方法　采用以细胞生长为基础的功能筛选方法筛选人胎盘cDNA文库 ,结合RACE PCR方法克隆到一个人全长新基因ANGPTL4 ,用RH PCR方法对其进行染色体定位 ;用原核表达系统对重组ANGPTL4进行蛋白表达 ;用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)试验、原代猪主动脉内皮细胞 (PAEC)体外迁移试验、PAEC体外浸润试验、PAEC体外管状试验及小鼠体内栓子形成试验探讨了新基因ANGPTL4对体内外血管新生过程的影响。结果　获取的人全长基因ANGPTL4定位于染色体 19p13 3,其原核表达产物对PAEC的体外增殖没有明显作用 (P =0 0 5 04 ) ,但ANGPTL4的 2 μg/ml剂量组对PAEC的体外迁移和浸润均有明显的促进作用 (P <0 0 5 ) ,对其管状结构形成也有程度不同的促进作用 ;对小鼠体内血管新生有较明显的促进作用。 展开更多

关键词 血管新生 体外 新基因 体内 克隆 小鼠 浸润 人胎盘 功能研究 RACE

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细粒棘球蚴热休克蛋白70基因的克隆和序列分析 被引量：6

2

作者 丁淑琴 赵嘉庆 +2 位作者 王娅娜 王健 赵巍 《宁夏医学杂志》 CAS 2005年第8期507-509,共3页

目的获得细粒棘球蚴(E.granulosus)热休克蛋白(Heat Shock Protein70,HSP70)基因,进行DNA测序、序列特性分析及同源性分析,为研究包虫病重组疫苗候选基因奠定基础.方法从细粒棘球蚴原头蚴提取总RNA,RT-PCR技术扩增出细粒棘球蚴中国大陆... 目的获得细粒棘球蚴(E.granulosus)热休克蛋白(Heat Shock Protein70,HSP70)基因,进行DNA测序、序列特性分析及同源性分析,为研究包虫病重组疫苗候选基因奠定基础.方法从细粒棘球蚴原头蚴提取总RNA,RT-PCR技术扩增出细粒棘球蚴中国大陆株HSP70基因,将其重组到pGEM-T载体后进行序列测定和分析.结果成功扩增出细粒棘球蚴中国大陆株HSP70基因,测序表明该片段由402bp组成,与已发表基因核苷酸序列相比,同源性为96%,推导编码氨基酸序列同源性为81%.结论经DNA测序证实,扩增出的片段确为HSP70,该片段阅读框完整,可作为重组抗原的候选基因. 展开更多

关键词 棘球蚴病 基因 结构 克隆 分子 序列分析

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人细小病毒B19中国株VP1蛋白独特区基因片段序列变异分析 被引量：3

3

作者 采华 张国成 +1 位作者 许东亮 李飚 《第四军医大学学报》 北大核心 2002年第16期1464-1466,共3页

目的　研究 B1 9病毒中国株独特区 VP1的基因变异 .方法　采用聚合酶链反应技术 (PCR)从两例中国再生障碍性贫血患儿血清中扩增 VP1独特区基因片段 ,将其与PUC1 9连接 ,酶切鉴定筛选阳性克隆后测序分析 .结果　从一个患儿的血清中扩增出... 目的　研究 B1 9病毒中国株独特区 VP1的基因变异 .方法　采用聚合酶链反应技术 (PCR)从两例中国再生障碍性贫血患儿血清中扩增 VP1独特区基因片段 ,将其与PUC1 9连接 ,酶切鉴定筛选阳性克隆后测序分析 .结果　从一个患儿的血清中扩增出约 480 bp目的片段 ,并成功构建PUC1 9- VP1质粒 ,测序结果显示 ,与国外已发表的 Wi株VP1独特区序列相比 ,有 2处核苷酸发生改变 ,并可致所编码的氨基酸变化 .结论　中国 B1 9病毒 展开更多

关键词 细小病毒B19 分子克隆 序列分析

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人MAGE-3真核表达载体的构建与表达 被引量：2

4

作者 吴金民 孙晓东 刘杏娥 《实用肿瘤杂志》 CAS 北大核心 2003年第4期271-274,共4页

目的　克隆人黑色素瘤特异性抗原 MAGE- 3基因 ,构建真核表达载体 ,建立 MAGE- 3阳性细胞株 ,制备肿瘤核酸疫苗。方法　用 RT- PCR方法扩增 MAGE- 3c DNA,以 pc DNA3.1+为载体 ,构建重组表达质粒pc DNA3.1/ MAGE- 3。重组质粒用脂质体... 目的　克隆人黑色素瘤特异性抗原 MAGE- 3基因 ,构建真核表达载体 ,建立 MAGE- 3阳性细胞株 ,制备肿瘤核酸疫苗。方法　用 RT- PCR方法扩增 MAGE- 3c DNA,以 pc DNA3.1+为载体 ,构建重组表达质粒pc DNA3.1/ MAGE- 3。重组质粒用脂质体转染鼠 B16细胞 ,经 RT- PCR、细胞免疫染色及免疫印迹法鉴定转化细胞中 MAGE- 3的表达。结果　正确构建了 pc DNA3.1/ MAGE- 3重组质粒 ,并且在转化细胞中检测到了 MAGE- 3的表达。结论　成功构建了 pc DNA3.1/ MAGE- 3真核表达质粒 ,建立了稳定表达人 MAGE- 3的鼠 展开更多

关键词 MAGE-3 真核表达载体 构建 表达 黑色素瘤

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结核杆菌Ag85B的基因克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：3

5

作者 赵跃然 游力 +3 位作者 张春盛 张建 高春义 田志刚 《山东医科大学学报》 2001年第1期7-9,共3页

目的 :通过结核杆菌Ag85B基因的克隆和在大肠杆菌表达的研究 ,探讨Ag85B蛋白作为候选疫苗用于结核免疫预防和治疗的可行性。方法 :用PCR技术 ,扩增人结核杆菌Edman株Ag85B基因序列 ,并将扩增的DNA片段插入克隆质粒载体 pUC18,用质粒酶谱... 目的 :通过结核杆菌Ag85B基因的克隆和在大肠杆菌表达的研究 ,探讨Ag85B蛋白作为候选疫苗用于结核免疫预防和治疗的可行性。方法 :用PCR技术 ,扩增人结核杆菌Edman株Ag85B基因序列 ,并将扩增的DNA片段插入克隆质粒载体 pUC18,用质粒酶谱和DNA序列分析鉴定重组克隆。克隆的Ag85B基因插入原核表达质粒 pBV2 2 0 ,构建重组Ag85B表达质粒 ,用SDS PAGE和Westernblot鉴定大肠杆菌表达的重组蛋白。结果 :成功克隆了结核杆菌Ag85B基因 ,构建了Ag85B的原核表达载体 ,获得了高效表达菌株 ,目的蛋白的表达量达菌体总蛋白的 2 5%～ 30 %。结论 :获得了高效表达人结核杆菌Ag85B成熟蛋白的工程菌株 ,为Ag85B保护性抗原位点分析和新型结核疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 结核杆菌 基因表达 基因克隆 大肠杆菌 AG85B

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葡萄球菌肠毒素A和黑色素瘤抗原A3基因重组真核共表达载体的构建及其在293T细胞的表达 被引量：2

6

作者 吉晓滨 吕景礼 +2 位作者 陈敬贤 刘启才 谢景华 《中国耳鼻咽喉头颈外科》 2012年第7期349-353,共5页

目的构建葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal endotoxinA,SEA)和喉癌来源的黑色素瘤抗原A3(melanoma-associated antigenA3,MAGE-A3)基因共表达的真核表达载体,检测、鉴定其在293T细胞中的表达情况。方法分别用RT-PCR方法 及人工化学合... 目的构建葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal endotoxinA,SEA)和喉癌来源的黑色素瘤抗原A3(melanoma-associated antigenA3,MAGE-A3)基因共表达的真核表达载体,检测、鉴定其在293T细胞中的表达情况。方法分别用RT-PCR方法 及人工化学合成法获得MAGE-A3和SEA基因片段,然后依次将MAGE-A3和SEA基因克隆至含内部核糖体进入位点的真核表达载体IRES序列的上、下游,构建成重组质粒pMGEA3-IRES-SEA。经脂质体转染至293T细胞以后,用荧光定量PCR、蛋白免疫印迹分别鉴定SEA和MAGE-A3基因的表达。结果限制性内切酶酶切分析证实MAGE-A3和SEA基因均正确地克隆在pMAGEA3-IRES-SEA中,基因测序结果与GenBank公布的MAGE-A3、SEA序列完全一致,实现了双基因的正确重组。重组质粒转染293T细胞后能检测到MAGE-A3、SEA基因的高水平的有效表达。稳定表达双基因的293T细胞上清对外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)增殖有促进作用,与细胞中SEA的表达和分泌有关。结论成功地构建了pMAGEA3-IRES-SEA真核表达质粒,并能在293T细胞中有效表达MAGE-A3和SEA蛋白,由此奠定了其作为抗喉癌DNA疫苗应用的基础。 展开更多

关键词 葡萄球菌属 超抗原 真核细胞 基因 喉肿瘤 克隆 分子

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人胰岛素原DNA疫苗的构建与鉴定 被引量：2

7

作者 蒋铁建 周智广 +1 位作者 苏恒 罗建华 《科学技术与工程》 2003年第2期139-142,共4页

构建1型糖尿病关键自身抗原胰岛素原(Proinsulin)的DNA疫苗,并在体外对其表达产物进行鉴定。从人胰腺cDNA文库用半巢式PCR扩增出编码Proinsulin的cDNA,克隆入载体PGEM-T中,再将其亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组载体pcDNA3.... 构建1型糖尿病关键自身抗原胰岛素原(Proinsulin)的DNA疫苗,并在体外对其表达产物进行鉴定。从人胰腺cDNA文库用半巢式PCR扩增出编码Proinsulin的cDNA,克隆入载体PGEM-T中,再将其亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组载体pcDNA3.1(+)/Proinsulin,测序后在真核细胞COS-7中进行体外短暂表达,Western印迹法对其表达产物进行鉴定。结果克隆的人Proinsulin基因,测序表明其cDNA序列与Genbank公布的序列基本相同,仅在第63位氨基酸(C肽区)有一CAG(Glu)→CGG(Arg)的突变,Western免疫印迹法证实DNA疫苗在COS-7细胞中有效地获得了表达。结果说明运用基因克隆方法构建的Proinsulin DNA疫苗,在真核细胞内能有效地表达Proinsulin重组抗原。该疫苗的构建成功,为1型糖尿病的免疫干预提供了实验基础。 展开更多

关键词 DNA疫苗 分子克隆 胰岛素原 1型糖尿病

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差异表达新基因BQ135232 ORF的分子克隆与真核表达

8

作者 马富玲 王海涛 +3 位作者 李振莉 刘淑芬 张淑敏 畅继武 《肿瘤研究与临床》 CAS 2007年第4期221-224,共4页

目的研究差异表达新基因BQ135232的结构功能以及真核表达。方法应用生物信息学方法分析BQ135232 mRNA基因序列,初步了解其基本性状,构建表达载体,转染真核细胞(CHO/dhfr^-)。结果BQ135232具备作为免疫原的基本条件,构建表达载体pcDNA3-B... 目的研究差异表达新基因BQ135232的结构功能以及真核表达。方法应用生物信息学方法分析BQ135232 mRNA基因序列,初步了解其基本性状,构建表达载体,转染真核细胞(CHO/dhfr^-)。结果BQ135232具备作为免疫原的基本条件,构建表达载体pcDNA3-BQ-ORF-GPI,成功转染CHO/dhfr^-。结论完成差异表达新基因BQ135232的真核表达.为后续的蛋白功能研究奠定基础。 展开更多

关键词 计算生物学 新基因 克隆 分子

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HSPb1真核表达载体的构建及其在乳腺癌细胞中表达的研究 被引量：1

9

作者 时鹏 王明明 +1 位作者 孙靖中 冯进波 《中国现代普通外科进展》 CAS 2007年第6期467-470,共4页

目的:构建重组人HSPb1真核表达载体质粒,为研究HSPb1与乳腺癌发生和化疗耐药的关系做准备。方法:从人乳腺癌细胞MCF-7中提取总RNA,RT-PCR法反转录合成cDNA。设计引物调取目的基因片段,与T载体连接后转化大肠埃希菌DH-5α,筛选菌落并抽... 目的:构建重组人HSPb1真核表达载体质粒,为研究HSPb1与乳腺癌发生和化疗耐药的关系做准备。方法:从人乳腺癌细胞MCF-7中提取总RNA,RT-PCR法反转录合成cDNA。设计引物调取目的基因片段,与T载体连接后转化大肠埃希菌DH-5α,筛选菌落并抽提质粒。测序正确后双酶切克隆进入真核表达载体pcDNA3.1中,得到重组质粒pcDNA3.1-HSPb1。用pcDNA3.1-HSPb1转染人乳腺癌细胞MDA-MA-231,RT-PCR法和Western blot法鉴定重组质粒在其中的表达。结果:经酶切证实重组质粒pcDNA3.1-HSPb1含有目的基因HSPb1。RT-PCR和Western blot检测表明,mRNA和蛋白水平,转染细胞HSPb1的表达均明显增强。结论:pcDNA3.1-HSPb1真核表达载体构建成功,它在乳腺癌细胞中可高表达目的基因,为进一步研究HSPb1在乳腺癌发生及化疗耐药中的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤 热休克蛋白质类 基因表达 基因重组 克隆 分子

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人胃癌中Survivin基因的克隆及其剪切体的发现

10

作者 杨欣艳 王孟薇 +1 位作者 王刚石 尤纬缔 《军医进修学院学报》 CAS 2003年第1期27-29,共3页

目的 :克隆人类抗凋亡基因survivin(SVV)。方法 :提取胃癌细胞系SGC 790 1总RNA ,RT PCR扩增人SVV全长cDNA ,测序鉴定、原核表达。结果 :得到两个SVV基因cDNA克隆 ,即SVV S4 A与SVV S1 B ,前者与已知SVV基因cDNA序列相同 ,后者第 3个外... 目的 :克隆人类抗凋亡基因survivin(SVV)。方法 :提取胃癌细胞系SGC 790 1总RNA ,RT PCR扩增人SVV全长cDNA ,测序鉴定、原核表达。结果 :得到两个SVV基因cDNA克隆 ,即SVV S4 A与SVV S1 B ,前者与已知SVV基因cDNA序列相同 ,后者第 3个外显子丢失。原核表达所获融合蛋白经SDS PAGE电泳与已知SVV基因的蛋白质表达产物大小相近。结论 :自人胃癌细胞中克隆出SVV基因的全长cDNA ,并获得一个新的剪切体 ;实现了SVV基因在大肠杆菌BL2 1(DE3) 展开更多

关键词 抗凋亡基因 克隆 分子 胃肿瘤

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人NKp44基因克隆及其在大肠埃希菌中的表达和纯化 被引量：1

11

作者 高新谱 刘正敏 +4 位作者 王来城 焦玉莲 刘义庆 张雪 赵跃然 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2007年第10期728-732,共5页

目的:对人NKp44进行基因克隆及其在大肠埃希菌中重组表达,为进一步研究NK细胞抗肿瘤作用奠定基础。方法:提取人外周静脉血单个核细胞,培养并加入IL-2进行诱导后收集细胞,分离纯化外周血总RNA。用巢式PCR扩增hNKp44片段(约860bp),克隆至... 目的:对人NKp44进行基因克隆及其在大肠埃希菌中重组表达,为进一步研究NK细胞抗肿瘤作用奠定基础。方法:提取人外周静脉血单个核细胞,培养并加入IL-2进行诱导后收集细胞,分离纯化外周血总RNA。用巢式PCR扩增hNKp44片段(约860bp),克隆至质粒载体pMD18-T,并对克隆的DNA片段进行序列分析。用限制酶EcoRⅠ和NcoⅠ消化pMD18-T-hNKp44重组质粒,分离hNKp44片段,并插入原核表达载体pET30a(+)的相应限制酶位点,酶谱分析鉴定重组表达载体pET30a(+)-hNKp44。转化菌株BL21(DE3)经IPTG诱导,用SDS-PAGE和WesternBlot鉴定表达的重组蛋白。采用His.BindPurificationKit对重组蛋白进行纯化。结果:巢式PCR扩增的DNA片段与hNKp44cDNA大小一致。重组质粒pMD18-T-hNKp44的DNA序列分析显示,克隆的DNA序列与文献报道的hNKp44的cDNA序列一致。SDS-PAGE表明,重组蛋白相对分子质量为35.4×103,其表达量达菌体总蛋白的40%左右。WesternBlot分析显示,重组蛋白能特异地与抗His.Tag抗体结合。纯化得到纯度为95%的重组蛋白,纯化回收率达40%。结论:已经成功地构建了表达重组hNKp44的工程菌株。 展开更多

关键词 大肠杆菌/分离和提纯 杀伤细胞 天然/生理学 克隆 分子 基因表达

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EGF-IL-18在毕赤酵母中的表达 被引量：1

12

作者 张欢 蔡小波 +2 位作者 施晓琴 王震 吕建新 《温州医学院学报》 CAS 2010年第4期322-325,共4页

目的:在甲醇营养型毕赤酵母表达系统中分泌表达人表皮生长因子受体干扰基序和白细胞介素-18(EGF-IL-18)融合蛋白。方法:PCR扩增EGF-IL-18基因,克隆到表达载体pPIC9K,重组质粒经线性化后用电转化导入毕赤酵母GS115,筛选重组子,经摇瓶培养... 目的:在甲醇营养型毕赤酵母表达系统中分泌表达人表皮生长因子受体干扰基序和白细胞介素-18(EGF-IL-18)融合蛋白。方法:PCR扩增EGF-IL-18基因,克隆到表达载体pPIC9K,重组质粒经线性化后用电转化导入毕赤酵母GS115,筛选重组子,经摇瓶培养,用甲醇诱导表达EGF-IL-18融合蛋白。结果:序列分析表明,克隆到pPIC9K载体中的EGF-IL-18基因与设计相符,SDS-PAGE电泳分析显示表达产物EGF-IL-18以可溶性分子存在于酵母培养基中,Western印记表明表达产物EGF-IL-18具有良好的抗原性。结论:重组蛋白EGF-IL-18在毕赤酵母GS115中成功分泌表达。 展开更多

关键词 重组融合蛋白质类 EGF-IL-18 克隆 分子 毕赤酵母

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rhTPO在大肠杆菌中的表达、纯化及生物活性分析 被引量：1

13

作者 侯桂华 梁婷 +3 位作者 李璐娜 刘德宜 张超 于新娟 《山东大学学报（医学版）》 CAS 2003年第4期375-377,381,共4页

目的:探讨人促血小板生成素(humanthrombopoietin,hTPO)在大肠杆菌中表达、分离纯化及生物学活性初步鉴定。方法:利用RT-PCR法从人胎肝细胞中扩增目的基因片段,将其定向插入pQE30表达质粒T5启动子下游的多克隆区,转化大肠杆菌M15,得到pQ... 目的:探讨人促血小板生成素(humanthrombopoietin,hTPO)在大肠杆菌中表达、分离纯化及生物学活性初步鉴定。方法:利用RT-PCR法从人胎肝细胞中扩增目的基因片段,将其定向插入pQE30表达质粒T5启动子下游的多克隆区,转化大肠杆菌M15,得到pQE30-TPO的工程菌,诱导目的蛋白表达、纯化。将表达产物给血小板减少模型小鼠尾静脉注射,观察注射后不同时间血小板量的改变。结果:经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-D-galactosideIPTG)诱导培养,该工程菌可以产生单一特异性的高表达蛋白条带。将纯化后的表达蛋白注射小鼠,结果显示对实验性小鼠血小板减少症具有一定的治疗作用。结论:在大肠杆菌中成功地高效表达了重组hTPO,该产物具有促血小板生成的活性。 展开更多

关键词 促血小板生成素 分子克隆 基因表达 大肠杆菌 血小板减少

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幽门螺杆菌黏附素基因babA_2的克隆表达及定位 被引量：1

14

作者 白杨 王继德 +3 位作者 陈烨 林焕建 张兆山 张亚历 《第四军医大学学报》 北大核心 2004年第2期128-130,共3页

目的 :克隆并表达H .pylori黏附素babA2 基因 .方法 :提取H .pylori染色体基因 ,用PCR方法扩增babA2 基因 ,将其克隆至表达载体pET 2 2b(+) ,并在BL2 1 (DE3)大肠杆菌中表达及定位分析 .结果 :分离得到了 2 .2kb的babA2基因片段 ,在 37... 目的 :克隆并表达H .pylori黏附素babA2 基因 .方法 :提取H .pylori染色体基因 ,用PCR方法扩增babA2 基因 ,将其克隆至表达载体pET 2 2b(+) ,并在BL2 1 (DE3)大肠杆菌中表达及定位分析 .结果 :分离得到了 2 .2kb的babA2基因片段 ,在 37℃诱导表达 3h后 ,重组蛋白表达量占菌体总蛋白的 34.8% ,其中分泌表达占周质总蛋白的 2 2 .7% ,可溶性表达占上清的 1 5 .0 % ,包涵体占沉淀的 86 .7% .结论 :H .py loribabA2 基因的克隆与表达为H . 展开更多

关键词 螺杆菌 幽门 黏附素6n6A2 克隆 分子 基因表达

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大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因的克隆及其真核表达载体的构建

15

作者 龚福生 郑秋红 +1 位作者 谢云青 郑天荣 《实用肿瘤杂志》 CAS 北大核心 2003年第4期268-270,共3页

目的　克隆大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶 ( CD)基因 ,构建真核表达载体 ,本研究拟探索该基因在肿瘤基因治疗中的应用基础。方法　根据 Gen Bank数据库提供的 CD基因核苷酸序列 ,设计并合成一对引物 ,采用 PCR方法 ,从大肠杆菌基因组 DNA中扩增... 目的　克隆大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶 ( CD)基因 ,构建真核表达载体 ,本研究拟探索该基因在肿瘤基因治疗中的应用基础。方法　根据 Gen Bank数据库提供的 CD基因核苷酸序列 ,设计并合成一对引物 ,采用 PCR方法 ,从大肠杆菌基因组 DNA中扩增出 CD基因 ,并与 pc DNA3.1定向连接 ,构建受控于人巨细胞病毒启动子的重组真核载体 pc DNA3.1- CD,并用限制性内切酶、PCR和 DNA测序进行鉴定。结果　克隆了大肠杆菌 CD基因 ,并构建了真核表达载体 ,经限制性内切酶酶切、PCR扩增和 DNA测序证实了其正确性。结论　 pc DNA 3.1- CD真核表达载体构建成功。 展开更多

关键词 大肠杆菌 胞嘧啶 脱氨酶 基因 克隆 真核表达载体

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鸡转录增强因子-1相关基因cDNA片段的克隆及其在发育过程中的表达

16

作者 张雪平 张洁欣 +2 位作者 陆纲 陈瑞华 贾弘褆 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期58-61,共4页

目的 :克隆转录增强因子 1(transcriptionenhancerfactor 1,TEF 1)相关基因 (relatedTEF 1,RTEF 1) ,检测鸡发育过程RTEF 1基因的表达及组织分布。方法 :从 13d鸡胚骨骼肌mRNAs经RT PCR方法扩增RTEF 1的编码序列 (cDNA) ,将其克隆到 p... 目的 :克隆转录增强因子 1(transcriptionenhancerfactor 1,TEF 1)相关基因 (relatedTEF 1,RTEF 1) ,检测鸡发育过程RTEF 1基因的表达及组织分布。方法 :从 13d鸡胚骨骼肌mRNAs经RT PCR方法扩增RTEF 1的编码序列 (cDNA) ,将其克隆到 pGEM和 pUC载体并进行核苷酸序列分析。采用RT PCR技术检测鸡胚发育第9天至雏鸡孵出后 6周的骨骼肌组织中RTEF 1基因的表达 ,并测试其在 13d鸡胚和出生后 1d雏鸡的骨骼肌、心肌、脑、肝和胗等 5种组织中的存在。结果 :克隆序列分析结合GenBank检索表明 ,所克隆的cDNA片段 ( 90 0bp)与cTEF 1A序列仅相差两个碱基。应用RT PCR技术在鸡胚发育 9d至出生后 6周雏鸡的骨骼肌组织均检出了RTEF 1基因的表达 ;13d鸡胚和出生后 1d雏鸡的骨骼肌、心肌、脑、肝和胗等 5种组织中均有TEF 1相关基因的转录。结论 :克隆的cDNA片段属多种组织普遍存在的cTEF 1A。与先前检测的M CAT结合因子发生规律 (在两周前表达 )不同 ,cTEF 1A在鸡胚发育的第 9天至出生后 展开更多

关键词 M-CAT结合因子 转录增强因子-1 基因表达 克隆分子 鸡胚发育

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重组超抗原葡萄球菌肠毒素A基因的克隆及表达载体的构建

17

作者 马文学 余海 +2 位作者 易平勇 金洪传 严杰 《实用肿瘤杂志》 CAS 北大核心 2002年第3期164-165,共2页

目的　克隆金黄色葡萄球菌肠毒素 A(SEA)全长基因并构建其表达载体。方法　以金黄色葡萄球菌的基因组 DNA为模板 ,用两条针对 SEA全长基因特异的引物 ,通过 PCR方法克隆 SEA全长基因 ,PCR产物与p GEM- T载体连接 ,经测序证实后进行亚克... 目的　克隆金黄色葡萄球菌肠毒素 A(SEA)全长基因并构建其表达载体。方法　以金黄色葡萄球菌的基因组 DNA为模板 ,用两条针对 SEA全长基因特异的引物 ,通过 PCR方法克隆 SEA全长基因 ,PCR产物与p GEM- T载体连接 ,经测序证实后进行亚克隆 ,构建其表达载体 p ET- 2 8b- SEA,再次测序验证。结果　克隆了 SEA全长基因 ,编码 2 5 7个氨基酸残基 ,经测序证实与 Genbank中收录的 SEA基因序列完全一致 ;并构建了 SEA的表达载体。结论　成功克隆了 SEA全长基因并构建了其表达载体 ,为进一步研究 展开更多

关键词 葡萄球菌属 肠毒素类 基因表达 克隆 表达载体 细菌超抗原 抗肿瘤活性

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7型腺病毒温州株基因组主要序列的克隆与分析

18

作者 姜招嫦 赵娜 +2 位作者 黄燕燕 余雪姣 彭颖 《温州医学院学报》 CAS 2010年第4期339-342,共4页

目的:克隆和分析7型腺病毒温州株(Ad7wz1)基因组主要序列ITR、E1A261R、E1B55kDa、Hexon和E3。方法:分离并提取了Ad7wz1基因组DNA,PCR扩增得到各基因后利用PMD18 simple T载体进行克隆,并测序分析。结果:获得Ad7wz1 ITR-L、E1A261R、E1B... 目的:克隆和分析7型腺病毒温州株(Ad7wz1)基因组主要序列ITR、E1A261R、E1B55kDa、Hexon和E3。方法:分离并提取了Ad7wz1基因组DNA,PCR扩增得到各基因后利用PMD18 simple T载体进行克隆,并测序分析。结果:获得Ad7wz1 ITR-L、E1A261R、E1B55kDa、Hexon、E3和ITR-R六个基因的克隆,并测得核苷酸序列;分析表明其核苷酸序列和相应的氨基酸序列与GenBank上已发表的Ad7全基因组序列比较同源性分别达到93.2%～100%和97.8%～100%。结论:初步确定本次分离的Ad7wz1毒株为Ad7d2型,Ad7wz1与已经发表的Ad7病毒株序列有高度同源性,为研究Ad7的致病机制提供了重要的理论基础。 展开更多

关键词 7型腺病毒 克隆 分子 序列分析 序列同源性

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“混合克隆”快速筛选重组体

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作者 陆纲 鹿培源 贾弘禔 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期86-87,共2页

目的 :从DNA重组体中快速鉴定出阳性克隆。方法 :通过将单克隆菌液混合分组提取质粒酶切鉴定找出阳性组 ,再从阳性组中鉴定出阳性单克隆。结果 :1 4组混合克隆中 2组为阳性 ,在 2个阳性组 8个单克隆中鉴定出 2个阳性单克隆。结论 :采用... 目的 :从DNA重组体中快速鉴定出阳性克隆。方法 :通过将单克隆菌液混合分组提取质粒酶切鉴定找出阳性组 ,再从阳性组中鉴定出阳性单克隆。结果 :1 4组混合克隆中 2组为阳性 ,在 2个阳性组 8个单克隆中鉴定出 2个阳性单克隆。结论 :采用混合克隆方法筛选重组体可大大缩短筛选时间 ,而且没有假阴性 ,是一种既快又可靠的方法。目的 :从DNA重组体中快速鉴定出阳性克隆。方法 :通过将单克隆菌液混合分组提取质粒酶切鉴定找出阳性组 ,再从阳性组中鉴定出阳性单克隆。结果 :1 4组混合克隆中 2组为阳性 ,在 2个阳性组 8个单克隆中鉴定出 2个阳性单克隆。结论 :采用混合克隆方法筛选重组体可大大缩短筛选时间 ,而且没有假阴性 ,是一种既快又可靠的方法。 展开更多

关键词 重组DNA 克隆 遗传载体 基因扩增 分子克隆

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一个新的高血压病相关基因的克隆和表达 被引量：45

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作者 陈光慧 张晨晖 +4 位作者 朱燕青 董纲 周爱儒 马大龙 汤键 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第11期823-828,共6页

目的寻找和克隆新的高血压病相关基因，探讨高血压病的发病机制。方法应用差异显示筛选的方法，对正常（ＷＫＹ）大鼠和自发性高血压病大鼠（ＳＨＲ）血管平滑肌细胞进行ＲＮＡｍａｐｐｉｎｇ分析，选择下调的ｃＤＮＡ进行克隆。结果获... 目的寻找和克隆新的高血压病相关基因，探讨高血压病的发病机制。方法应用差异显示筛选的方法，对正常（ＷＫＹ）大鼠和自发性高血压病大鼠（ＳＨＲ）血管平滑肌细胞进行ＲＮＡｍａｐｐｉｎｇ分析，选择下调的ｃＤＮＡ进行克隆。结果获得一个新的ｃＤＮＡ，其长度为４１６０ｂｐ，可编码５５１个氨基酸，蛋白质分子量为６２６４４。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析证明，这一基因不仅存在于血管平滑肌细胞中，而且也广泛分布在大鼠心、肾、脑、肺和肝组织中。这一基因在ＳＨＲ大鼠的心、肾、脑、肝中低表达，在ＷＫＹ大鼠高表达；血管紧张素ＩＩ、内皮素－１、ＩＬ－１等致血管平滑肌细胞增殖和高血压的因素可以抑制这一基因的表达，其作用可为相应的拮抗剂所阻断；心钠素、降钙素基因相关肽、肾上腺髓质降压素等抑制血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖和降低高血压的因素可以上调这一基因的表达。结论获得了一种新的与血管平滑肌细胞增殖或高血压相关的基因，它可能拮抗ＶＳＭＣ增殖，在高血压的发生中起重要作用。 展开更多

关键词 高血压 基因表达 克隆 血管平滑肌细胞 病理

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