牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌疫苗候选株的筛选及鉴定 被引量：6

1

作者 朱玲 柳旭伟 +3 位作者 剡文亮 张锐 韩小丽 剡根强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第2期471-478,共8页

为了筛选生长快、毒力强、免疫原性好、副反应小的牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)灭活疫苗菌株,本试验选取6株来自不同地区致犊牛肺炎死亡的牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌分离株,测定了培养基生长曲线、小鼠毒力、... 为了筛选生长快、毒力强、免疫原性好、副反应小的牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)灭活疫苗菌株,本试验选取6株来自不同地区致犊牛肺炎死亡的牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌分离株,测定了培养基生长曲线、小鼠毒力、菌体脂多糖(LPS)含量及各菌株灭活菌苗免疫小鼠和家兔后的抗体效价,并进行了攻毒保护试验。结果显示,分离株Pm2、Pm3、Pm5生长速度较快、毒力较强、LPS含量较多,均含有与毒力和免疫相关的ptfA和fimA基因;免疫小鼠及家兔未发现明显不良反应,在二免后14d血清抗体达1∶64~1∶128,强毒攻毒后全部存活,而PBS对照组全部死亡。本试验结果表明,Pm2、Pm3、Pm5均可作为多杀性巴氏杆菌灭活菌苗的候选菌株,其中Pm3作为首选株。 展开更多

关键词 牛源多杀性巴氏杆菌 荚膜血清A型 灭活菌苗 免疫保护 抗体效价

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牛多杀性巴氏杆菌和牛支原体双重PCR检测方法的建立及应用 被引量：6

2

作者 于新友 李天芝 +1 位作者 王金良 沈志强 《中国奶牛》 2015年第14期19-22,共4页

参照Gen Bank中牛多杀性巴氏杆菌kmt1基因序列(AF016259)和牛支原体opp D/F基因序列(AF130119),设计两对引物,在建立两种细菌单项PCR检测方法的基础上,优化双重PCR反应条件,建立了两种细菌的双重PCR检测方法,用这两对引物对同一样品中... 参照Gen Bank中牛多杀性巴氏杆菌kmt1基因序列(AF016259)和牛支原体opp D/F基因序列(AF130119),设计两对引物,在建立两种细菌单项PCR检测方法的基础上,优化双重PCR反应条件,建立了两种细菌的双重PCR检测方法,用这两对引物对同一样品中的牛多杀性巴氏杆菌、牛支原体核酸为模板进行双重PCR扩增,结果可同时扩增牛多杀性巴氏杆菌和牛支原体的265bp和439bp的特异性片段,而对其他4种牛病原菌的扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明,对牛多杀性巴氏杆菌和牛支原体的最低核酸检出限均为1pg。通过对30份临床病料检测,将建立的双重PCR技术和单项PCR方法进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为100%。结果表明,建立的双重PCR检测方法具有特异、快速、准确的特点,可用于对牛多杀性巴氏杆菌和牛支原体的同时检测和鉴别诊断。 展开更多

关键词 牛多杀性巴氏杆菌 牛支原体 双重PCR 检测

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牛源多杀性巴氏杆菌新型交叉保护性抗原的筛选 被引量：5

3

作者 杜慧慧 潘婷婷 +5 位作者 伍晨露 秦小彬 雷桂花 刘亚净 冯思源 彭远义 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1293-1300,共8页

为了筛选多杀性巴氏杆菌潜在的交叉保护性抗原,首先对牛源多杀性巴氏杆菌PmCQ2株(A型)、PmCQ6株(A型)、PmB株(B型)、PmF株(F型)全基因组序列进行分泌蛋白及膜蛋白预测,并使用Signal、TMMHM在线分析筛选到48个候选共有抗原基因;然后分别... 为了筛选多杀性巴氏杆菌潜在的交叉保护性抗原,首先对牛源多杀性巴氏杆菌PmCQ2株(A型)、PmCQ6株(A型)、PmB株(B型)、PmF株(F型)全基因组序列进行分泌蛋白及膜蛋白预测,并使用Signal、TMMHM在线分析筛选到48个候选共有抗原基因;然后分别克隆于pET-28α中构建原核重组表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中诱导表达,SDS-PAGE检测获得31个重组表达蛋白。间接ELISA检测重组蛋白对3种不同血清型牛多杀性巴氏杆菌多抗的反应原性,发现13个重组蛋白具有较强的反应原性。最后选择5个重组蛋白免疫小鼠后,分别采用10LD50PmCQ2、PmB和PmF进行攻毒保护性试验,结果显示:r-PmCQ2_1g0376免疫后的小鼠对PmCQ2和PmB的攻毒保护率为50%和30%,对PmF则没有保护性;r-PmCQ2_4g0132免疫后对PmCQ2、PmB和PmF株的攻毒保护率分别为80%,20%和10%;r-PmCQ2_1g0311免疫后的小鼠对PmCQ2的攻毒保护率为30%,对PmB和PmF株均无保护性。本试验筛选出2个交叉保护性抗原,可以不同程度保护同源或异源菌株的攻击,为多杀性巴氏杆菌新型疫苗候选蛋白的筛选奠定了基础。 展开更多

关键词 牛源多杀性巴氏杆菌 生物信息学 交叉保护抗原 筛选

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牛溶血性曼氏杆菌及牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌灭活疫苗对小鼠的保护性研究 被引量：3

4

作者 李甜 杨洋 +4 位作者 谢黎卿 王远兰 李攀 彭远义 李能章 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期2579-2588,共10页

牛溶血性曼氏杆菌及牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌是导致牛呼吸道疾病(bovine respiratory disease,BRD)的重要细菌性病原,每年给养牛业带来巨大的经济损失,目前对其疫苗研究仍显不足。本研究选用牛溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh... 牛溶血性曼氏杆菌及牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌是导致牛呼吸道疾病(bovine respiratory disease,BRD)的重要细菌性病原,每年给养牛业带来巨大的经济损失,目前对其疫苗研究仍显不足。本研究选用牛溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)Mh422株和牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)PmCQ2株作为疫苗菌株,分别制备了2种菌体浓度的Mh和Pm单价灭活菌苗及3种菌量配比(1∶1、2∶1和3∶1)的Mh-Pm二联灭活苗,以小鼠为模型,皮下多点免疫(0.2 mL),加强免疫2次,免疫剂量均为首免的一半。首免后第7天及其后每隔5 d,小鼠尾静脉采血分离血清,ELISA方法检测抗体效价,三免后第20天,分别以Mh422或PmCQ2进行腹腔攻毒测定免疫保护效果。结果显示,所有小鼠接种疫苗均无不良反应,二免后第10天抗体达较高水平,三免后抗体水平持续升高,第15天到达高峰,其后25 d维持高水平,后缓慢下降。Mh单菌苗的2种免疫剂量对Mh422株攻毒的免疫保护率均为0,而Pm单菌苗的2种免疫剂量对PmCQ2株攻毒的免疫保护率全为100%;Mh和Pm间无交叉免疫保护作用;3种菌量配比的Mh-Pm二联疫苗对Mh422株和PmCQ2株攻毒的各自免疫保护率分别为53%~71%和100%。该研究结果表明,所制备的Mh422单菌苗对同型攻毒无免疫保护作用,在诱导机体抗体产生方面,Mh和Pm间无相互抑制作用,PmCQ2株具有促进Mh422株灭活疫苗对Mh422的免疫保护作用,这为牛溶血性曼氏杆菌和牛多杀性巴氏杆菌二联疫苗的进一步研究提供了理论基础。 展开更多

关键词 牛溶血性曼氏杆菌 牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌 灭活疫苗 免疫保护

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牛源多杀性巴氏杆菌主要荚膜群和脂多糖基因型两组三重PCR检测方法 被引量：2

5

作者 李霄阳 许建 +4 位作者 刘文晓 章振华 徐福洲 陈小玲 李永清 《中国动物检疫》 CAS 2022年第1期97-104,共8页

为掌握国内牛源多杀性巴氏杆菌流行的主要荚膜群及脂多糖基因型,建立了检测多杀性巴氏杆菌(Pm)及其A、B荚膜群的三重PCR(PmAB-3PCR)以及检测3个脂多糖基因型的三重PCR(LPS-3PCR)方法,检验了其特异性和敏感性,用感染Pm小鼠的组织和人工污... 为掌握国内牛源多杀性巴氏杆菌流行的主要荚膜群及脂多糖基因型,建立了检测多杀性巴氏杆菌(Pm)及其A、B荚膜群的三重PCR(PmAB-3PCR)以及检测3个脂多糖基因型的三重PCR(LPS-3PCR)方法,检验了其特异性和敏感性,用感染Pm小鼠的组织和人工污染Pm的牛鼻拭子样品进行了临床模拟检验,并对30株P m进行了PCR检测和传统血清学分型比较。结果显示:PmAB-3PCR特异性好,PmAB-3PCR和LPS-3PCR的DNA检测限分别为10~100 pg和1 ng,二者对菌液的检测限分别为200~2000 CFU和2000~20000 CFU。模拟临床样品PmAB-3PCR检测结果与细菌分离结果100%一致。PmAB-3PCR与琼扩试验的符合率为84%,二者检出的阳性率分别为88%和72%,差异不显著(P>0.05);LPS-3PCR与琼扩试验的符合率为60%,检出的阳性率分别为90%和50%,差异显著(P<0.05)。结果表明,建立的两组三重PCR方法准确高效且重复性好,可取代常规血清学方法用于国内牛巴氏杆菌病的诊断、流调和疫苗株筛选。 展开更多

关键词 牛源多杀性巴氏杆菌 荚膜群 脂多糖基因型 三重PCR 琼脂扩散试验

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抗牛多杀性巴氏杆菌高免卵黄抗体IgY的制备及间接血凝检测方法的建立 被引量：3

6

作者 高家登 剡根强 +3 位作者 王静梅 杨铭伟 王超丽 杨龙龙 《中国奶牛》 2014年第9期26-29,共4页

本研究通过自制牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌灭活菌苗免疫产蛋鸡,采用卡拉胶结合硫酸铵沉淀法提取卵黄抗体IgY,并采用间接血凝方法检测抗体效价。结果表明,抗原致敏红细胞的最佳浓度是800μg/mL,免疫后第7周抗体效价达到高峰,效价为1:... 本研究通过自制牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌灭活菌苗免疫产蛋鸡,采用卡拉胶结合硫酸铵沉淀法提取卵黄抗体IgY,并采用间接血凝方法检测抗体效价。结果表明,抗原致敏红细胞的最佳浓度是800μg/mL,免疫后第7周抗体效价达到高峰,效价为1:1024,高效价持续5周开始下降,测定提取的IgY浓度为8.258mg/mL,无菌检测及动物安全性实验表明制备的卵黄抗体安全可靠。本研究制备了抗牛多杀性巴氏杆菌卵黄抗体,为防治由荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌所致的犊牛肺炎提供了新的手段。 展开更多

关键词 牛多杀性巴氏杆菌 卵黄抗体(IgY) 间接血凝试验

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长途运输激发牛巴氏杆菌病的病例报告

7

作者 高志卿 朱生荣 《中国牛业科学》 2017年第3期95-96,共2页

2017年3月,笔者接诊一例由于长途运输和气候突变引发的牛出败病例,主要表现为水肿型和肺炎型,应用"双黄连+头孢噻呋钠"治疗效果显著,现将有关情况报告如下。

关键词 长途运输 激发 牛巴氏杆菌病

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重组牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌脂蛋白E的免疫保护性研究 被引量：9

8

作者 牛思博 姜志刚 +1 位作者 德艳艳 于力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期401-404,共4页

为鉴定多杀性巴氏杆菌脂蛋白E的免疫保护性,本研究从牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌PM-HLJ株的基因组DNA中扩增出大小为1 011 bp的脂蛋白E编码基因(PlpE),经序列测定显示,其氨基酸序列与A型多杀性巴氏杆菌参考株PlpE序列一致性为95.83%。将P... 为鉴定多杀性巴氏杆菌脂蛋白E的免疫保护性,本研究从牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌PM-HLJ株的基因组DNA中扩增出大小为1 011 bp的脂蛋白E编码基因(PlpE),经序列测定显示,其氨基酸序列与A型多杀性巴氏杆菌参考株PlpE序列一致性为95.83%。将PM-HLJ的PlpE基因克隆于表达质粒pET-30a(+)并诱导表达,将表达的重组脂蛋白E纯化后经腹腔免疫小鼠,间接ELISA检测结果显示各免疫组均产生了针对重组脂蛋白E的IgG抗体,免疫保护试验显示,当小鼠免疫剂量为20μg、30μg、40μg和60μg时,保护率分别达到20%、40%、80%和100%。结果表明,牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌重组脂蛋白E具有良好的免疫保护作用。 展开更多

关键词 牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌 重组脂蛋白E 免疫保护

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多杀性巴氏杆菌转铁结合蛋白TbpA的原核表达及免疫原性 被引量：6

9

作者 王斐 张洪峰 +3 位作者 梁婉 彭忠 陈焕春 吴斌 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1151-1156,共6页

为研究多杀性巴氏杆菌转铁结合蛋白TbpA的免疫原性,本试验利用PCR从牛源A型多杀性巴氏杆菌HB01基因组中扩增了TbpA的编码基因tbpA,并将其克隆至原核表达载体pET-30α(+)上,转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达。SDS-PAGE检测结果显示,rTbp... 为研究多杀性巴氏杆菌转铁结合蛋白TbpA的免疫原性,本试验利用PCR从牛源A型多杀性巴氏杆菌HB01基因组中扩增了TbpA的编码基因tbpA,并将其克隆至原核表达载体pET-30α(+)上,转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达。SDS-PAGE检测结果显示,rTbpA蛋白成功表达。Western blot证实该蛋白能够与抗多杀性巴氏杆菌HB01血清发生阳性反应。将rTbpA免疫小鼠后,分别于免疫后14,28 d采血,利用ELISA试验检测血清中的抗体滴度,结果显示血清中的抗rTbpA蛋白的IgG抗体显著升高(P<0.05)。感染试验结果显示,免疫rTbpA蛋白能够保护70%的小鼠抵抗多杀性巴氏杆菌的致死性攻击,并且病理切片结果表明,免疫小鼠的肺部损伤相对于对照组小鼠显著降低。本试验为筛选新型的多杀性巴氏杆菌免疫原性蛋白提供依据。 展开更多

关键词 牛源A型多杀性巴氏杆菌 转铁结合蛋白 克隆表达 小鼠

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牛源A型多杀性巴氏杆菌pm 0979和pm 0442基因编码蛋白对小鼠的免疫保护性研究 被引量：3

10

作者 冯思源 马建伟 +2 位作者 杜慧慧 李能章 彭远义 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期797-800,共4页

为评价牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌(Pm)pm0979和pm0442基因编码蛋白的免疫保护效果,本研究以牛源PmCQ2株基因组DNA为模板,经PCR扩增得到pm0979、pm0442全长基因,将其分别克隆到pET-30a、pET-32a载体并转化BL21(DE3)大肠杆菌,经IPTG... 为评价牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌(Pm)pm0979和pm0442基因编码蛋白的免疫保护效果,本研究以牛源PmCQ2株基因组DNA为模板,经PCR扩增得到pm0979、pm0442全长基因,将其分别克隆到pET-30a、pET-32a载体并转化BL21(DE3)大肠杆菌,经IPTG诱导表达,分别获得大小约41.8 ku(rPM0979)和21.6 ku(rPM0442)的重组蛋白;将其亲合层析纯化后分别免疫小鼠,以PmCQ2株进行攻毒试验,测定其抗体产生情况和保护效果。结果表明,两种重组蛋白均可以诱导小鼠产生较高水平的抗体;其中rPM0979对小鼠的免疫保护高于rPM0442,保护率可达60%。结果表明,重组蛋白PM0979可作为Pm的一种疫苗候选蛋白,为进一步的疫苗研制奠定了基础。 展开更多

关键词 牛A型多杀性巴氏杆菌 pm0979和pm0442基因 编码蛋白 免疫保护性

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牛A型多杀性巴氏杆菌新型保护性抗原的筛选及鉴定 被引量：1

11

作者 李能章 刘舒萍 +4 位作者 程蓉 冯思源 张继鑫 李春明 彭远义 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1438-1443,共6页

为筛选牛A型多杀性巴氏杆菌新型保护性抗原,采用生物信息学方法,对牛A型多杀性巴氏杆菌Pm CQ 2基因组中功能未知基因进行分析,从中筛选出22个具有信号肽的蛋白编码基因进行克隆表达。以Pm CQ2基因组D N A为模板,22个基因经PCR扩增分别... 为筛选牛A型多杀性巴氏杆菌新型保护性抗原,采用生物信息学方法,对牛A型多杀性巴氏杆菌Pm CQ 2基因组中功能未知基因进行分析,从中筛选出22个具有信号肽的蛋白编码基因进行克隆表达。以Pm CQ2基因组D N A为模板,22个基因经PCR扩增分别克隆到载体p ET-30a(+)或p ET-32a(+)上,转入E.coli BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达,经SDS-PAGE检测,22个基因均获得表达。W estern-blot检测发现有8个重组蛋白与感染Pm CQ2的犊牛血清具有良好的免疫反应,以其制备抗原免疫昆明小鼠,经ELISA检测免疫小鼠血清抗体水平后,采用2 LD50的Pm CQ2腹腔攻毒测定其免疫保护效果。结果表明,8个重组蛋白均能诱导小鼠产生较高水平的抗体,其中3号和9号蛋白免疫小鼠后抗体效价达到1∶12 800,且3号和9号蛋白免疫保护效果最好,免疫保护率均为30%,其余重组蛋白的免疫保护率均较低。 展开更多

关键词 牛A型多杀性巴氏杆菌 新型保护性抗原 筛选 鉴定

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牛A型巴氏杆菌高、低毒力株LPS激活RAW264.7细胞TLR4信号通路的比较分析

12

作者 李艳红 刘洁 +3 位作者 李伟平 崔雨婷 彭远义 吴正理 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期620-626,共7页

本研究旨在比较牛A型多杀性巴氏杆菌高毒力株(PmCQ2)和低毒力株(PmCQ6)脂多糖(LPS)对小鼠巨噬细胞RAW264.7内TLR4信号通路的影响。选用体外培养RAW264.7细胞,经LPS刺激后检测细胞内TLR4信号激活及对TNF-α和IL-12p40表达的影响;并利用We... 本研究旨在比较牛A型多杀性巴氏杆菌高毒力株(PmCQ2)和低毒力株(PmCQ6)脂多糖(LPS)对小鼠巨噬细胞RAW264.7内TLR4信号通路的影响。选用体外培养RAW264.7细胞,经LPS刺激后检测细胞内TLR4信号激活及对TNF-α和IL-12p40表达的影响;并利用Western blot检测LPS对IκBα磷酸化及NF-κBp65活化的影响。结果显示,高毒力株LPS_(PmCQ2)和低毒力株LPS_(PmCQ6)分别刺激RAW264.7细胞后,均能显著提高TLR4的表达,并诱导细胞因子TNF-α和IL-12p40的分泌表达;LPS_(PmCQ2)和LPS_(PmCQ6)均能诱导IκBα磷酸化,促进NF-κBp65核转位,但二者没有显著差异(P>0.05)。本研究表明牛A型多杀性巴氏杆菌高、低毒力株LPS均能参与TLR4介导的小鼠巨噬细胞免疫应答,且二者对TLR4介导的IκBα-NF-κB信号通路的作用无显著差异,暗示牛A型多杀性巴氏杆菌对小鼠巨噬细胞的毒力与LPS无明显相关性,可能由其他毒力因子决定。 展开更多

关键词 牛A型多杀性巴氏杆菌 脂多糖 Toll样受体4 核因子κB 肿瘤坏死因子α

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牛源A型多杀性巴氏杆菌(Pm12)灭活疫苗的制备及小鼠攻毒保护试验 被引量：3

13

作者 陶乔孝慈 邬琴 +8 位作者 顾晓晓 马雪 李劼 周霞 张星星 黄新 吴桐忠 韩猛立 钟发刚 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第5期127-130,135,共5页

为了防控新疆北疆A型多杀性巴氏杆菌(Pm)引起的牛纤维素性化脓性肺炎,分析制备的A型Pm12灭活疫苗在试验小鼠体内抗体产生情况和保护作用,试验按细菌灭活疫苗制备程序将分离筛选自新疆北疆部分地区发病牛场的1株毒性强、免疫原性好的牛源... 为了防控新疆北疆A型多杀性巴氏杆菌(Pm)引起的牛纤维素性化脓性肺炎,分析制备的A型Pm12灭活疫苗在试验小鼠体内抗体产生情况和保护作用,试验按细菌灭活疫苗制备程序将分离筛选自新疆北疆部分地区发病牛场的1株毒性强、免疫原性好的牛源A型Pm12制备成灭活疫苗,并进行安全检验。根据棋盘法对全菌抗原包被浓度、封闭液、血清稀释度、酶标二抗工作浓度、封闭时间、一抗孵育时间、二抗孵育时间及底物反应时间等检测条件进行筛选,建立检测小鼠血清抗体的间接ELISA方法,用建立的间接ELISA方法测定免疫小鼠血清抗体产生规律,对免疫小鼠以不同半数致死量(LD50)的Pm12进行攻毒保护试验,同时用A型和B型Pm对免疫小鼠进行交叉保护试验。结果表明:制备的牛源A型Pm12灭活疫苗含菌量为8×109cfu/mL,安全检测合格。根据棋盘法确定全菌抗原包被浓度为1∶25,最佳血清稀释度为1∶320~1∶640,最适封闭液为5%BSA,最适封闭时间为1 h,血清最适作用时间为1 h,酶标抗体最适稀释度为1∶3 000,底物最适作用时间为15 min;用制备的疫苗免疫小鼠后,60天的血清抗体效价均高于28天水平;Pm12灭活苗对不同LD50攻毒小鼠的保护率为80%、80%、50%,对A型Pm保护率为80%,对B型Pm的交叉保护率为60%。说明可用试验建立的方法检测小鼠血清抗体水平,制备的牛源A型Pm12灭活疫苗能够诱导小鼠产生较高水平且持续较长时间的血清抗体,能够有效保护小鼠对抗A型Pm感染,且对B型Pm呈现部分交叉保护作用。 展开更多

关键词 牛A型多杀性巴氏杆菌 灭活疫苗 小鼠 抗体水平 免疫保护 交叉保护

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