鸡呼肠孤病毒分离与鉴定 被引量：22

1

作者 廖敏 谢芝勋 +4 位作者 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢志勤 唐小飞 《中国家禽》 北大核心 2002年第1期12-14,共3页

从广西玉林市某鸡场出现跛行、瘫痪、跗趾关节和腱肿胀等症状的不同发病鸡群中分离到两株病毒。经病毒分离培养、理化特性鉴定、血清中和试验、动物回归试验、抗体检测以及PCR诊断,确定所分离到的两个病毒株均为禽呼肠孤病毒。

关键词 禽呼肠孤病毒 分离 鉴定 鸡

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禽呼肠孤病毒σC基因在杆状病毒表达系统中的表达及其活性鉴定 被引量：9

2

作者 孙美玉 秦立廷 +4 位作者 高玉龙 祁小乐 高宏雷 王永强 王笑梅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期353-357,共5页

本研究利用Bac-To-Bac杆状病毒表达系统构建重组禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)σC基因的杆状病毒,感染sf9细胞获得表达重组蛋白。首先,将ARVσC基因克隆至pFastBacHTA载体,构建重组供体载体pFσC,将其转化大肠杆菌DHl0Bac感受态细胞... 本研究利用Bac-To-Bac杆状病毒表达系统构建重组禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)σC基因的杆状病毒,感染sf9细胞获得表达重组蛋白。首先,将ARVσC基因克隆至pFastBacHTA载体,构建重组供体载体pFσC,将其转化大肠杆菌DHl0Bac感受态细胞,使σC基因整合到Bacmid穿梭载体中,获得重组穿梭载体BacmidσC。通过脂质体介导将其转染到sf9昆虫细胞中,获得重组杆状病毒rBacσC。通过Western Blot、间接免疫荧光试验(IFA)进行检测,结果显示:σC蛋白在重组杆状病毒rBacσC感染的sf9昆虫细胞中获得正确表达,分子质量约为37kD,表达的σC蛋白具有良好的反应活性。 展开更多

关键词 禽呼肠孤病毒 σC基因 SF9细胞 杆状病毒

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禽呼肠孤病毒分离株δ_3蛋白基因克隆及序列分析 被引量：5

3

作者 廖敏 谢芝勋 +4 位作者 刘加波 邓显文 庞耀珊 谢志勤 唐小飞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期324-327,共4页

本研究将禽呼肠孤病毒广西两分离株R1、R2和美国分离株Isol S1基因中编码σ_3蛋白的基因片段进行克隆和鉴定。对克隆片段测序后与参考株S1133、1733、138、176毒株的S1基因相应序列进行比较分析。结果表明,广西分离株R1、R2与美国分离株... 本研究将禽呼肠孤病毒广西两分离株R1、R2和美国分离株Isol S1基因中编码σ_3蛋白的基因片段进行克隆和鉴定。对克隆片段测序后与参考株S1133、1733、138、176毒株的S1基因相应序列进行比较分析。结果表明,广西分离株R1、R2与美国分离株Isol以及S1133、1733、176毒株的核苷酸和推导氨基酸的同源性均在95％以上,上参考株138的同源性在81％～85％之间。由此可见,除了与138参考株外,广西分离株R1、R2和美国分离株Isol与其他比较的毒株的S1基因上存在很大的相关性。 展开更多

关键词 禽呼肠孤病毒 分离株 δ3蛋白基因 序列分析

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禽呼肠孤病毒RT-LAMP快速检测方法的建立 被引量：6

4

作者 董嘉文 孙敏华 +1 位作者 尚毅 胡奇林 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期961-964,共4页

根据GenBank中登录的禽呼肠孤病毒(Aviem reovirus,ARV)S1基因序列设计了特异对应靶序列中的6个基因区段的4条引物,以此建立了一种快速、准确的ARV逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法,并对此方法的反应条件进行了优化。结果表明,该... 根据GenBank中登录的禽呼肠孤病毒(Aviem reovirus,ARV)S1基因序列设计了特异对应靶序列中的6个基因区段的4条引物,以此建立了一种快速、准确的ARV逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法,并对此方法的反应条件进行了优化。结果表明,该方法能够特异地扩增ARV,而对其他常见的禽类病毒均无扩增作用,特异性强、重复性好;检测ARV的灵敏度为4ELD50,是RT-PCR方法的10倍;在反应产物中添加SYBR GREENⅠ染料后,可通过肉眼观察有无荧光直接判定结果。 展开更多

关键词 禽呼肠孤病毒 逆转录环介导等温扩增 条件优化

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禽呼肠孤病毒在我国部分地区蛋鸡群中的血清流行率和风险因素分析 被引量：1

5

作者 郑好 杨霞 +8 位作者 张素 赵一萌 汤君宇 高丽 曹红 马国明 王占新 郑世军 王永强 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第3期1-8,共8页

禽呼肠孤病毒(ARV)在我国流行范围较广,感染家禽后使其出现病毒性关节炎、生长不良和产蛋量下降等表现,对我国养禽业造成较严重的经济损失。为了解我国蛋鸡群中ARV的流行情况及存在的感染风险因素,本试验在2022年11月—2023年3月从北京... 禽呼肠孤病毒(ARV)在我国流行范围较广,感染家禽后使其出现病毒性关节炎、生长不良和产蛋量下降等表现,对我国养禽业造成较严重的经济损失。为了解我国蛋鸡群中ARV的流行情况及存在的感染风险因素,本试验在2022年11月—2023年3月从北京、天津、河北、山东、河南、江苏、陕西、湖北和重庆9个省市的45个蛋鸡养殖场(其中包括祖代蛋鸡群、父母代蛋鸡群和商品代蛋鸡群),收集共计45份调查问卷和968份血清样本。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中的ARV抗体,并结合调查问卷,采用单因素分析和逻辑回归分析方法找到蛋鸡出现ARV感染症状的风险因素。ELISA检测结果显示,968份血清样本中检出阳性863份,阳性率为89.15%(95%CI:87.0%~91.0%);单因素分析结果显示,全进全出饲养模式下的蛋鸡出现ARV感染症状的概率显著低于区域性全进全出饲养模式或不同日龄、不同批次混养饲养模式下的蛋鸡,且具有较强程度的关联(P<0.05,0.1<OR<0.3);生物安全防控严格的大、中型规模化养殖场(5万只以上)的蛋鸡出现ARV感染症状的概率显著低于生物安全防控存在不足的小型养殖场(2万~5万只)的蛋鸡,且具有较强程度的关联(P<0.05,0.1<OR<0.3);员工不注意对鸡舍消毒的养殖场饲养的蛋鸡出现ARV感染症状的概率显著高于员工对鸡舍具有较强或一般消毒意识的养殖场饲养的蛋鸡,具有中等程度的关联(P<0.05,1.5<OR<3.0)。综上所述,饲养模式、养殖场规模和员工对鸡舍的消毒意识可能是产蛋鸡群感染ARV的风险因素。 展开更多

关键词 蛋鸡 禽呼肠孤病毒(arv) 抗体检测 风险因素

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变异型高致病性鹅源禽呼肠孤病毒的分离和鉴定

6

作者 钱金涵 朱亭帆 +3 位作者 王强 马陈淑 秦爱建 金文杰 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第2期1-8,共8页

为了探究2020年江苏省扬州市江都区某鹅场发生的1起以肝脏和脾脏出血为典型病变特征的急性传染病病因,本试验采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测病死鹅肝脏和脾脏研磨液中禽呼肠孤病毒(ARV)的感染情况,将聚合酶链反应(PCR)阳性病... 为了探究2020年江苏省扬州市江都区某鹅场发生的1起以肝脏和脾脏出血为典型病变特征的急性传染病病因,本试验采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测病死鹅肝脏和脾脏研磨液中禽呼肠孤病毒(ARV)的感染情况,将聚合酶链反应(PCR)阳性病料进一步进行病毒的分离、鉴定、血凝性和致病性测定及遗传进化分析。结果显示,鸡胚中分离的病毒为ARV,将其命名为ARV-JSJD-2020;该病毒分离株接种鸡胚24 h后即可致其死亡;能感染Vero细胞产生细胞病变;没有血凝活性;鸡胚半数致死量(ELD50)为10^(-4.166)/0.2 mL;动物回归试验中雏鹅24 h即出现死亡现象,肝脏主要病变为局灶性坏死;σC基因序列分析显示,该分离株分类上属于水禽源呼肠孤病毒分支,但与目前疫苗株的亲缘关系较远。结果表明,本试验分离得到的ARV-JSJD-2020可以为后续鹅源ARV的防控和疫苗的研发提供参考依据。 展开更多

关键词 禽呼肠孤病毒(arv) 分离 鉴定 σC基因

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禽呼肠孤病毒σC蛋白重组腺病毒载体的构建及其对肝癌细胞增殖的影响

7

作者 黄莉 周艾玲 +4 位作者 李雨桐 王紫薇 徐昊 钱明明 周崇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第3期287-291,297,共6页

目的构建表达禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)σC蛋白的重组腺病毒载体pAd-σC,并检测其对肝癌细胞增殖的影响,为新型抗肿瘤疫苗的研发奠定基础。方法采用PCR法扩增ARVσC基因,构建重组穿梭载体pShuttle-σC,随后转化含有腺病毒载体pA... 目的构建表达禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)σC蛋白的重组腺病毒载体pAd-σC,并检测其对肝癌细胞增殖的影响,为新型抗肿瘤疫苗的研发奠定基础。方法采用PCR法扩增ARVσC基因,构建重组穿梭载体pShuttle-σC,随后转化含有腺病毒载体pAdessy-1的BJ5183感受态细胞,通过同源重组获得重组腺病毒载体pAd-σC,在HEK293细胞内包装病毒,TCID50法检测病毒滴度,Western blot和ELISA法检测σC蛋白的表达,CCK-8法检测病毒对人肝癌细胞SMMC7721增殖的影响。结果重组穿梭载体pShuttle-σC经双酶切及测序鉴定证明构建正确,重组腺病毒载体pAd-σC经菌落PCR鉴定证明构建正确;σC蛋白在肝癌细胞SMMC7721中可成功表达;重组腺病毒Ad-σC效价为107.5/0.1 mL,可抑制肝癌细胞SMMC7721增殖。结论成功构建了含有ARVσC基因的重组腺病毒载体pAd-σC,初步分析其对肿瘤细胞增殖具有抑制作用,为揭示ARV溶瘤效应的分子机制及进一步研发新型抗肿瘤生物制剂奠定了基础。 展开更多

关键词 腺病毒 禽呼肠孤病毒 σC蛋白 肿瘤细胞 增殖 抑制

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禽呼肠孤病毒σB和σC蛋白在昆虫细胞中的共表达 被引量：3

8

作者 王盛 谢芝勋 +9 位作者 沈文康 谢丽基 范晴 罗思思 张艳芳 曾婷婷 黄娇玲 张民秀 谢志勤 邓显文 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第5期1334-1341,共8页

本研究旨在获得具有天然构象和活性良好的禽呼肠孤病毒(ARV)σB和σC蛋白,采用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中共表达σB和σC蛋白,并对其活性进行鉴定。根据NCBI数据库中ARVσB和σC基因序列设计引物,将两个基因克隆至pFast-Dual载体,转... 本研究旨在获得具有天然构象和活性良好的禽呼肠孤病毒(ARV)σB和σC蛋白,采用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中共表达σB和σC蛋白,并对其活性进行鉴定。根据NCBI数据库中ARVσB和σC基因序列设计引物,将两个基因克隆至pFast-Dual载体,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,筛选获得重组穿梭杆粒。通过转染sf9细胞,筛选到含有σB和σC基因的重组病毒。将重组病毒感染sf9细胞,通过优化接毒量和收获时间等参数,确定最佳表达条件,在sf9细胞中高效共表达σB和σC蛋白。Western blotting和间接免疫荧光(IFA)检测结果表明,成功在sf9细胞中共表达了ARVσB和σC蛋白,并具有很好的生物学活性。本试验结果为开发鉴别诊断试剂以及ARV颗粒疫苗的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 禽呼肠孤病毒(arv) σB基因 σC基因 杆状病毒表达系统 SF9细胞

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禽呼肠孤病毒σB基因在杆状病毒表达系统中的表达与鉴定 被引量：2

9

作者 王盛 谢芝勋 +9 位作者 沈文康 谢丽基 范晴 罗思思 张艳芳 曾婷婷 黄娇玲 张民秀 谢志勤 邓显文 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期479-484,共6页

本研究旨在通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达具有生物学活性的禽呼肠孤病毒σB蛋白。首先,根据NCBI中ARVσB基因序列,设计引物构建σB基因重组供体质粒pFast-σB。随后转化DH10bac感受态细胞,筛选获得重组穿梭质粒Bacmid-σB。通过... 本研究旨在通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达具有生物学活性的禽呼肠孤病毒σB蛋白。首先,根据NCBI中ARVσB基因序列,设计引物构建σB基因重组供体质粒pFast-σB。随后转化DH10bac感受态细胞,筛选获得重组穿梭质粒Bacmid-σB。通过脂质体介导法转化sf9细胞,获得重组杆状病毒rBac-σB。将重组病毒感染sf9细胞,表达重组蛋白。通过SDS-PAGE、Western-blot和间接免疫荧光(IFA)检测表明,ARVσB蛋白在sf9细胞中成功表达,分子量约为41 ku,并具有良好的生物学活性,为进一步研究ARVσB基因的功能及其基因工程亚单位疫苗的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 禽呼肠孤病毒 σB基因 杆状病毒表达系统 SF9细胞

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Vero细胞中禽呼肠孤病毒的增殖特性研究 被引量：1

10

作者 沈文康 谢芝勋 +10 位作者 王盛 黄莉 谢丽基 黄娇玲 曾婷婷 张艳芳 张民秀 罗思思 范晴 谢志勤 邓显文 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第1期141-143,254,共4页

为了研究绿猴肾（Vero）细胞中禽呼肠孤病毒（ARV）的增殖特性,试验采用了光学显微镜观察、半数组织感染量（TCID50）测定、RT-PCR检测等方法对细胞培养物进行了研究。结果表明:ARV S1133毒株在Vero细胞中能有效增殖,并出现细胞破碎、... 为了研究绿猴肾（Vero）细胞中禽呼肠孤病毒（ARV）的增殖特性,试验采用了光学显微镜观察、半数组织感染量（TCID50）测定、RT-PCR检测等方法对细胞培养物进行了研究。结果表明:ARV S1133毒株在Vero细胞中能有效增殖,并出现细胞破碎、萎缩、抱团、脱落、边缘模糊、胞体变大,甚至死亡等典型的细胞病变（CPE）;RT-PCR检测成功扩增出一条大小为1 248 bp的条带;ARV在感染Vero细胞后会经历三个时期,即潜伏期、快速增长期、稳定期,并在稳定期病毒效价达到峰值,TCID50为1×10-8.46/0.1 m L。 展开更多

关键词 禽呼肠孤病毒(arv) 绿猴肾(Vero)细胞 细胞病变(CPE) 半数组织感染量(TCID50) 反转录 增殖特性

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禽呼肠孤病毒分子信标LAMP检测方法的建立

11

作者 任红玉 谢芝勋 +8 位作者 华俊 王盛 万丽军 谢丽基 谢志勤 黄娇玲 张艳芳 曾婷婷 罗思思 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期1402-1407,共6页

为了建立一种快速鉴别诊断禽呼肠孤病毒(avian reovirus, ARV)的分子信标环介导等温扩增(LAMP)检测方法,根据ARV S1基因序列的高保守区域设计1套LAMP引物,并取F1c和B1c之间的序列设计分子信标(在5′端标记Cy5荧光基团,3′端标记BHQ-3淬... 为了建立一种快速鉴别诊断禽呼肠孤病毒(avian reovirus, ARV)的分子信标环介导等温扩增(LAMP)检测方法,根据ARV S1基因序列的高保守区域设计1套LAMP引物,并取F1c和B1c之间的序列设计分子信标(在5′端标记Cy5荧光基团,3′端标记BHQ-3淬灭基团),通过实时浊度仪,并对反应体系和反应条件进行优化,试验结果通过多通道荧光成像仪进行观察,结果显示:ARV阳性样品在荧光成像仪下显示红色荧光,而其他几种病原样品无荧光显示,建立的ARV分子信标LAMP检测方法仅特异性扩增ARV,与其他几种禽类常见疾病无交叉反应;对ARV的最低检测值为10拷贝/μL;在对22份临床样品的检测中,结果与荧光定量PCR的检测结果一致,将阳性产物进行测序鉴定均为ARV阳性样品。研究建立的ARV分子信标LAMP检测方法,结果可视化,整个试验流程无需开盖,能有效避免气溶胶污染,真正做到了特异性强、灵敏性好、准确性高,可应用于ARV的临床检测。 展开更多

关键词 禽呼肠孤病毒(arv) 环介导等温扩增技术(LAMP) 分子信标

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禽呼肠孤病毒感染DF1细胞后干扰素刺激基因在转录水平表达量的动态变化 被引量：1

12

作者 王盛 万丽军 +9 位作者 谢芝勋 谢丽基 罗思思 范晴 张艳芳 曾婷婷 黄娇玲 张民秀 谢志勤 邓显文 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第4期1423-1430,共8页

为了解干扰素(interferon,IFN)和干扰素刺激基因在禽呼肠孤病毒(ARV)感染DF1细胞后的表达情况,试验将ARV病毒感染DF1细胞,观察细胞病变,收集感染后0、6、12、24、36、48、72、96 h的细胞样品,抽提反转录成cDNA,通过实时荧光定量PCR技术... 为了解干扰素(interferon,IFN)和干扰素刺激基因在禽呼肠孤病毒(ARV)感染DF1细胞后的表达情况,试验将ARV病毒感染DF1细胞,观察细胞病变,收集感染后0、6、12、24、36、48、72、96 h的细胞样品,抽提反转录成cDNA,通过实时荧光定量PCR技术检测干扰素IFN-α和IFN-β及9种禽源常见干扰素刺激基因在感染后不同时间点在转录水平表达量的动态变化规律。结果显示,在ARV感染DF1细胞后,DF1细胞出现典型的细胞病变,感染后12 h病毒开始快速增殖,在36~96 h维持在较高的水平;IFN-α和IFN-β在转录水平的表达量在感染后均表现为显著下调(P<0.05;P<0.01);IFI6、OAS、IFIT5、ISG12在转录水平表达量变化规律相似,均呈现显著上调表达(P<0.05;P<0.01),在感染后96 h达到峰值;其中IFIT5的上调幅度最大,感染后96 h的表达量是0 h的19.62倍(P<0.01);而Mx、IFITM3、PKR、Viperin、ZAP的表达量变化规律相似,均表现为显著下调表达(P<0.05;P<0.01),其中Mx、IFITM3、Viperin的下调幅度较大,PKR和ZAP下调幅度很小。说明在ARV感染DF1细胞后,干扰素及多种干扰素刺激基因在转录水平呈现规律性变化,与病毒在DF1细胞中复制存在一定的联系。结果表明,ARV感染后可以诱导多种干扰素刺激基因的表达,这些干扰素刺激基因在抵御ARV病毒的入侵,抑制ARV的复制、释放及病毒的清除中发挥着重要作用。本研究为今后深入研究ARV的致病机理和宿主的抗病毒免疫应答提供了参考。 展开更多

关键词 禽呼肠孤病毒(arv) DF1细胞 干扰素 干扰素刺激基因 转录水平

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二重微滴式数字PCR定量检测禽呼肠孤病毒和鸡滑液囊支原体方法的建立

13

作者 谢志勤 谢芝勋 +14 位作者 张艳芳 李小凤 范晴 谢丽基 万丽军 罗思思 李孟 张民秀 曾婷婷 黄娇玲 王盛 李丹 韦悠 任红玉 阮志华 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1232-1241,共10页

为绝对定量检测禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)和鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS),本研究建立了二重微滴式数字PCR(ddPCR)。根据已发表的ARV S1基因和MS的VlhA基因序列保守序列,分别设计了针对S1和VlhA基因的特异引物和探针... 为绝对定量检测禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)和鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS),本研究建立了二重微滴式数字PCR(ddPCR)。根据已发表的ARV S1基因和MS的VlhA基因序列保守序列,分别设计了针对S1和VlhA基因的特异引物和探针,通过优化引物和探针的浓度及反应条件后,建立了二重ddPCR定量检测ARV和MS方法,并对建立方法的特异性、敏感性和重复性进行测试。结果显示,优化后最佳的引物和探针浓度分别为1.2和0.35μmol/L,最佳退火温度为55℃。特异性检测结果只检出ARV和MS,没有检出其他对照的禽病病原。敏感性检测结果显示,该方法检测ARV及MS重组质粒DNA的检出限分别为微滴数6.3和5.4 copies/μL,检测方法的检出限与单重ddPCR最低检出限相同,敏感性比荧光定量PCR方法高10倍。对3个连续稀释的ARV和MS重组质粒DNA检测结果的变异系数均小于5%,重复性好。对92份病鸡关节囊、喉拭子及肺样品进行检测,二重ddPCR方法检出12份样品呈ARV阳性,9份样品呈MS阳性,其中2份样品呈ARV和MS阳性,ARV阳性检出率为13.0%(12/92),MS阳性检出率为9.8%(9/92),混合感染阳性率为2.2%(2/92)。结果表明,本研究建立的二重ddPCR方法在定量检测ARV及MS时特异性强、敏感性高、重复性好,为绝对定量检测ARV及MS提供了更敏感的检测技术手段。 展开更多

关键词 二重微滴式数字PCR 定量检测 禽呼肠孤病毒 鸡滑液囊支原体

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禽呼肠孤病毒基因组结构和功能及其基因工程疫苗的研究进展 被引量：1

14

作者 刘媛 陈云娇(综述) 王学理(审校) 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1017-1021,共5页

禽呼肠孤病毒病是由禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)引起的一种传染性疾病。ARV可感染多种禽类,分布范围十分广泛。近年来,禽呼肠孤病毒病感染谱不断扩大,给养禽业的发展带来了一定的经济损失。本文对ARV的基因组结构和功能,及其基因... 禽呼肠孤病毒病是由禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)引起的一种传染性疾病。ARV可感染多种禽类,分布范围十分广泛。近年来,禽呼肠孤病毒病感染谱不断扩大,给养禽业的发展带来了一定的经济损失。本文对ARV的基因组结构和功能,及其基因工程疫苗的研究进展作一综述,以期为禽呼肠孤病毒病的研究和防控提供参考。 展开更多

关键词 禽呼肠孤病毒 蛋白结构 功能 基因工程疫苗

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利用玉米作为生物反应器表达禽呼肠孤病毒σC抗原蛋白

15

作者 王盛 谢芝勋 +9 位作者 万丽军 谢丽基 罗思思 范晴 张艳芳 曾婷婷 黄娇玲 张民秀 谢志勤 邓显文 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第3期166-172,共7页

本研究采用玉米作为生物反应器表达禽呼肠孤病毒(ARV)σC抗原蛋白。首先,根据NCBI数据库中ARV σC基因的序列及玉米中高表达蛋白密码子的偏好性,用于软件分析优化σC基因序列,并人工合成σC基因;将σC基因克隆到植物表达载体pRI201,将... 本研究采用玉米作为生物反应器表达禽呼肠孤病毒(ARV)σC抗原蛋白。首先,根据NCBI数据库中ARV σC基因的序列及玉米中高表达蛋白密码子的偏好性,用于软件分析优化σC基因序列,并人工合成σC基因;将σC基因克隆到植物表达载体pRI201,将重组质粒转化农杆菌GV3101,筛选获得阳性菌株。随后通过农杆菌介导法,将σC基因转化玉米愈伤组织,筛选获得转基因玉米植株。PCR、RT-PCR鉴定结果表明,ARV σC基因成功的整合到玉米基因组中,并能进行正确的转录和翻译。Western blot结果显示,玉米中表达的σC蛋白可以被ARV阳性血清识别,具有良好的反应原性。本研究为ARV新型植物口服疫苗的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 arv σC基因 转基因玉米 口服疫苗

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实时荧光定量PCR技术在SPF鸡四种垂直传播疾病监测中的应用 被引量：1

16

作者 王静 陈冬妮 +4 位作者 欧芷华 袁文 邓庆丽 陆勇军 张钰 《中国比较医学杂志》 2012年第8期6-14,共9页

目的探讨荧光定量PCR检测技术对SPF鸡四种垂直传播病毒的检测应用。方法采集60份SPF鸡及70份普通鸡群蛋清、泄殖腔试子样品,提取样品核酸,分别进行ARV、REV、CAV、ALV四种病毒实时荧光定量PCR检测,根据标准曲线及溶解曲线分析判读样品... 目的探讨荧光定量PCR检测技术对SPF鸡四种垂直传播病毒的检测应用。方法采集60份SPF鸡及70份普通鸡群蛋清、泄殖腔试子样品,提取样品核酸,分别进行ARV、REV、CAV、ALV四种病毒实时荧光定量PCR检测,根据标准曲线及溶解曲线分析判读样品病毒拷贝数。结果 SPF鸡ALV 2份阳性,检出率3.3%,其余病毒检测均为阴性;普通鸡样品REV检测2份阳性,检出率2.9%,ALV 10份阳性,检出率14.3%。结论荧光定量PCR检测方法最低可检测到100个拷贝核酸,检测灵敏度较高,有望应用于SPF鸡临床样品的病原检测。 展开更多

关键词 实时荧光定量PCR 禽网状内皮增生症病毒 鸡传染性贫血病毒 禽白血病病毒 禽呼肠孤病毒 SPF鸡

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