目的探讨12/15-脂氧合酶抑制剂黄芩素(Baicalein)对硝普钠(SNP)诱导的软骨细胞凋亡的抑制作用及可能机制。方法取8周雄性SD大鼠膝关节软骨,采用Ⅱ型胶原酶消化法提取软骨细胞并体外培养。设置对照组、SNP凋亡组和Baicalein给药组,以0.5 ...目的探讨12/15-脂氧合酶抑制剂黄芩素(Baicalein)对硝普钠(SNP)诱导的软骨细胞凋亡的抑制作用及可能机制。方法取8周雄性SD大鼠膝关节软骨,采用Ⅱ型胶原酶消化法提取软骨细胞并体外培养。设置对照组、SNP凋亡组和Baicalein给药组,以0.5 m M SNP作用24小时诱导软骨细胞凋亡,以5 M,25 M,50 M,100 M不同浓度的Baicalein作用细胞,确定最适浓度,对照组仅加入同体积溶剂(蒸馏水)。CCK8法检测药物对细胞毒性;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;免疫荧光观测凋亡诱导因子(AIF)在软骨细胞中的定位。结果 Baicalein在各浓度下对软骨细胞无明显毒性,与对照组相比,凋亡组软骨细胞活性明显下降(<0.01),与凋亡组相比,给药组细胞活性浓度依赖性地升高(<0.01);流式检测显示对照组软骨细胞早期凋亡率3.16%,凋亡组27.8%,100 M Baicalein给药组14.1%;免疫荧光检测显示,凋亡组AIF出现核内移位,100 M Baicalein给药组AIF核移位受到抑制。结论 Baicalein通过抑制12/15-脂氧合酶活性,进而抑制AIF从线粒体中的释放及核转位,发挥抗软骨细胞凋亡作用。展开更多
文摘目的探讨12/15-脂氧合酶抑制剂黄芩素(Baicalein)对硝普钠(SNP)诱导的软骨细胞凋亡的抑制作用及可能机制。方法取8周雄性SD大鼠膝关节软骨,采用Ⅱ型胶原酶消化法提取软骨细胞并体外培养。设置对照组、SNP凋亡组和Baicalein给药组,以0.5 m M SNP作用24小时诱导软骨细胞凋亡,以5 M,25 M,50 M,100 M不同浓度的Baicalein作用细胞,确定最适浓度,对照组仅加入同体积溶剂(蒸馏水)。CCK8法检测药物对细胞毒性;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;免疫荧光观测凋亡诱导因子(AIF)在软骨细胞中的定位。结果 Baicalein在各浓度下对软骨细胞无明显毒性,与对照组相比,凋亡组软骨细胞活性明显下降(<0.01),与凋亡组相比,给药组细胞活性浓度依赖性地升高(<0.01);流式检测显示对照组软骨细胞早期凋亡率3.16%,凋亡组27.8%,100 M Baicalein给药组14.1%;免疫荧光检测显示,凋亡组AIF出现核内移位,100 M Baicalein给药组AIF核移位受到抑制。结论 Baicalein通过抑制12/15-脂氧合酶活性,进而抑制AIF从线粒体中的释放及核转位,发挥抗软骨细胞凋亡作用。
基金国家自然科学青年基金（81000300）国家自然科学基金（81170669）+1 种基金国家教育部博士点基金（2010006120024）吉林大学白求恩B计划项目.志谢 感谢美国Beckman Research Institute of City of Hope糖尿病研究中心Dr.N.Rama友情提供的稳定高表达12-LO基因的MC（pcDNA-12-LO）及对照组MC（pcDNA）
