青海省2011-2012年乙型流感病毒HA1基因特性研究 被引量：7

1

作者 于娟 饶华祥 +3 位作者 李红 卢囡囡 易虎 赵生仓 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期32-35,共4页

目的了解2011—2012年青海省乙型流感病毒HA1基因变异情况。方法随机选择2011—2012年流感病原监测中分离到的乙型流感毒株，提取病毒RNA，通过RT—PCR法扩增病毒HA1基因，纯化产物进行核苷酸序列测定，采用DNA Star5．0MegAlign和MEGA4... 目的了解2011—2012年青海省乙型流感病毒HA1基因变异情况。方法随机选择2011—2012年流感病原监测中分离到的乙型流感毒株，提取病毒RNA，通过RT—PCR法扩增病毒HA1基因，纯化产物进行核苷酸序列测定，采用DNA Star5．0MegAlign和MEGA4．0生物软件对测序结果进行分析处理，推导出氨基酸序列并进行基因特性分析。结果12株Victoria系乙流感病毒HA1区域核苷酸序列与2009—2011年WHO推荐疫苗株B／Brisbane／60／2008同源性为88．6％～95．7％，氨基酸替换数在2～5个，所有分离株均在1个相同的氨基酸位点发生了相同的替换，部分分离株在320位减少了一个糖基化位点。5株Yamagata系乙型流感病毒HAl区域核苷酸序列与2011-2012年WHO推荐疫苗株B／Wisconsin／01／2010HA1区相比较同源性为97．7％～99．3％，氨基酸替换数在2—3个，所有分离株均在2个相同的氨基酸位点发生了相同的替换（N116K，D196N），在196位增加了一个糖基化位点。结论青海省2011—2012年乙型流感病毒HA1基因特性正在逐渐发生变异，但尚未形成抗原漂移，今后在流感监测工作中要加强流感病原学的监测，及时发现新的乙型流感病毒变异株。 展开更多

关键词 乙型流感病毒 HA1基因 抗原决定簇 糖基化位点

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2013～2014年中国湖北省新甲型H1N1流感病毒鸡胚适应性突变分析 被引量：4

2

作者 方斌 刘琳琳 +3 位作者 叶国军 李翔 余晓 江永忠 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期582-589,共8页

为了解湖北省流感监测网络中新甲型H1N1流感病毒鸡胚适应性突变的情况,本研究对3株湖北省新甲型H1N1流感病毒鸡胚株和对应细胞株进行HA、NA和MP蛋白进化树和基因进化速率分析,氨基酸突变位点、鸡胚适应性突变位点和三维建模分析。鸡胚... 为了解湖北省流感监测网络中新甲型H1N1流感病毒鸡胚适应性突变的情况,本研究对3株湖北省新甲型H1N1流感病毒鸡胚株和对应细胞株进行HA、NA和MP蛋白进化树和基因进化速率分析,氨基酸突变位点、鸡胚适应性突变位点和三维建模分析。鸡胚株和对应细胞株在进化树分布和基因进化速率上的差异均呈现NA>HA>MP的特点,在3株鸡胚株中发现4个鸡胚适应性突变位点:HA蛋白为Q223R和V527I,NA蛋白为M19I和H275Y,其中Q223R突变会造成抗原表位Sb和Ca2相邻间的结构变化,H275Y为典型的神经氨酸酶耐药突变位点。结果表明鸡胚适应性突变会在湖北省流感监测网络的流感病毒鸡胚分离工作中发生,这些突变可能影响疫苗候选株的筛选和疫苗有效性,因此需加强流感监测网络中鸡胚适应性突变的监测工作。 展开更多

关键词 新甲型H1N1流感病毒 鸡胚株 进化树 鸡胚适应性 抗原表位 耐药位点

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2016—2023年河南省三门峡市A(H1N1)pdm09流感病毒基因特征

3

作者 杨洁 卫成 +4 位作者 刘天福 张毅珍 许苗苗 李大攀 赵升 《现代疾病预防控制》 2024年第9期691-697,共7页

目的了解河南省三门峡市A(H1N1)pdm09流感病毒血凝素(hemagglutimin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因的进化特征、抗原及受体结合位点变异及其遗传进展。方法选取2016—2023年三门峡市分离的24株A(H1N1)pdm09流感病毒毒株,提取... 目的了解河南省三门峡市A(H1N1)pdm09流感病毒血凝素(hemagglutimin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因的进化特征、抗原及受体结合位点变异及其遗传进展。方法选取2016—2023年三门峡市分离的24株A(H1N1)pdm09流感病毒毒株,提取核酸后对流感病毒全基因组进行二代测序,利用生物信息学软件分析HA、NA基因特征,构建系统进化树。结果2016—2023年A(H1N1)pdm09流感病毒毒株的HA、NA核苷酸和氨基酸同源性相对于A/California/07/2009参考株逐年降低,与当年疫苗推荐株相比,同源性仍保持在96%以上,属于6B.1和6B.2分支,且不断进化出6B.1A、6B.1A.5、6B.1A.7等亚分支。与参考株相比,HA1蛋白表现出60个氨基酸突变,在抗原决定簇中有11个突变位点;NA蛋白13个抗原决定簇和药物结合位点共发生45个氨基酸突变。2023年的毒株在HA上发现了8个新的突变位点,包括位于HA抗原决定簇内的A186T、Q189E突变;NA蛋白中出现2个新的突变位点V453M、K469N。在23株毒株中发现了HA1蛋白的Sa抗原决定簇内的162位(162NQSY或162NQT)的额外糖基化位点,其中所有毒株在NA蛋白的42位(NQS)新增1个糖基化位点。结论三门峡市分离的A(H1N1)pdm09流感病毒毒株的HA和NA基因持续发生氨基酸位点变异和糖基化位点增加,这些发现表明加强流感毒株型别及突变监测的必要性。 展开更多

关键词 流感病毒 血凝素 神经氨酸酶 抗原决定簇 变异位点 进化树

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宁夏地区2017—2023流感监测年乙型流感病毒血凝素基因变异状况及序列分析

4

作者 孙晓强 穆婷 +3 位作者 袁芳 李龙山 张薇 马学平 《江苏预防医学》 CAS 2024年第4期418-421,449,共5页

目的了解近年宁夏地区乙型流感病毒的病原学检测情况和血凝素(hemagglutinin,HA)基因变异情况。方法采用时空分布抽样方法选取2017—2023年自治区疾控中心分离的乙型流感毒株44株,提取RNA,通过RT-PCR反应扩增HA片段并测序,测序结果利用... 目的了解近年宁夏地区乙型流感病毒的病原学检测情况和血凝素(hemagglutinin,HA)基因变异情况。方法采用时空分布抽样方法选取2017—2023年自治区疾控中心分离的乙型流感毒株44株,提取RNA,通过RT-PCR反应扩增HA片段并测序,测序结果利用生物信息软件进行分析。结果对分离的44株乙型流感分离株进行全基因组测序分析,对比疫苗株B/California/12/2015,15株BY系中有7个毒株发生抗原位点改变,涉及120环抗原表位的R136G和L137H的改变,均涉及受体结合位点改变;对比疫苗株B/Colorado/06/2017,29株BV系毒株有26株发生了抗原位点变异,涉及4个抗原表位的11个受体结合位点。涉及受体结合位点2个的3个位点发生改变;未检出潜在糖基化位点发生改变。本次研究中的所有BY系的毒株均隶属于Clade 3分支,所有BV系的毒株全部属于Clade 1A分支。结论2017—2023流感监测年,乙型流感在宁夏地区持续流行,其抗原位点发生了一定程度的变异,未来应加强监测。 展开更多

关键词 乙型流感病毒 血凝素 基因变异 抗原位点 序列分析

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人源抗狂犬病毒糖蛋白Ⅲ号表位链置换基因工程抗体研究 被引量：3

5

作者 孙丽娜 刘洋 +2 位作者 李川 李德新 梁米芳 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期393-398,共6页

为获得针对狂犬病毒糖蛋白Ⅲ号表位的人源单抗,本研究采用噬菌体展示平台,对一株狂犬病毒糖蛋白Ⅲ号抗原表位的人源单抗CR4098采用链置换法进行改造。以CR4098单链抗体为骨架,从狂犬疫苗接种者外周血分离淋巴细胞,提核酸逆转录,PCR扩增... 为获得针对狂犬病毒糖蛋白Ⅲ号表位的人源单抗,本研究采用噬菌体展示平台,对一株狂犬病毒糖蛋白Ⅲ号抗原表位的人源单抗CR4098采用链置换法进行改造。以CR4098单链抗体为骨架,从狂犬疫苗接种者外周血分离淋巴细胞,提核酸逆转录,PCR扩增抗体轻链可变区基因,替换CR4098的轻链基因,构建轻链置换文库。经纯化狂犬病毒aG株富集筛选,以上述筛选出的轻链阳性克隆为骨架,构建重链置换抗体库,富集筛选后通过ELISA和IFA鉴定阳性抗体克隆并进行序列测定。利用IgG表达载体VH/VK双质粒系统瞬时转染293T细胞实现IgG抗体的分泌型表达,通过亲和力测定和中和试验鉴定IgG抗体功能。结果显示,通过轻链置换,我们获得14株抗狂犬病毒scFv抗体,通过ELISA、IFA、亲和力测定及中和试验确定人源抗体RV3A5特异性结合狂犬病毒糖蛋白,对狂犬病毒CVS株和aG株均具有良好的中和活性,亲和力达到2.8×10-9 M。通过竞争ELISA对抗体结合表位进行鉴定,结果表明RV3A5特异性识别糖蛋白Ⅲ号抗原表位。通过链置换法成功获得1株全新的针对狂犬病毒糖蛋白Ⅲ号表位的高亲和力人源中和抗体,为狂犬病毒抗体制剂鸡尾酒治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 狂犬病毒 单链抗体 糖蛋白 表位

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我国H9N2亚型禽流感病毒血凝素蛋白145和153位抗原位点变异分析 被引量：1

6

作者 陈子轩 张楠 +5 位作者 胡群 全柯吉 秦涛 陈素娟 彭大新 刘秀梵 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期1165-1172,共8页

H9N2亚型禽流感病毒(AIV)血凝素蛋白(HA)易发生抗原漂移,但识别我国H9N2亚型AIV流行株抗原差异性的关键抗原位点还不清楚。选取两株血凝抑制(HI)效价高的H9N2亚型AIV单克隆抗体2E4与2D6对A/Chicken/Shanghai/F/1998(H9N2)毒株施加抗体... H9N2亚型禽流感病毒(AIV)血凝素蛋白(HA)易发生抗原漂移,但识别我国H9N2亚型AIV流行株抗原差异性的关键抗原位点还不清楚。选取两株血凝抑制(HI)效价高的H9N2亚型AIV单克隆抗体2E4与2D6对A/Chicken/Shanghai/F/1998(H9N2)毒株施加抗体压力制备单抗逃逸突变株,鉴定抗原位点;利用单抗对2017—2019年H9N2亚型AIV代表株进行HI抗原谱分析,确定抗原位点与基因分型关系;分析我国H9N2亚型AIV相应抗原位点的变异规律。结果显示:单抗2E4与2D6分别识别HA头部的145位和153位抗原位点;2017—2019年华东地区H9N2亚型AIV分离株根据HA基因遗传进化树可分为Group 1和Group 2两大分支,Group 1代表株与两株单抗反应性好,而Group 2代表株与两株单抗反应性差,序列分析发现已发生S145D(16/16)和D153G(15/16)的突变;通过对我国1996—2021年禽源H9N2亚型AIV HA蛋白位点自然突变率分析发现,含HA蛋白145D和153G的毒株占比分别上升至68%和66%,成为优势流行株。单抗2E4可用于当前H9N2亚型AIV的抗原分型,抗原位点145位是鉴别Group 1和Group 2抗原群差异的分子靶标之一。 展开更多

关键词 H9N2亚型AIV HA蛋白 抗原变异 单抗逃逸突变株 抗原位点

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类禽H1N1亚型与Pdm/09H1N1亚型猪流感重组病毒的分离鉴定及其遗传进化分析 被引量：1

7

作者 秦锋 蔡孟楷 +7 位作者 黄俊明 方博 卜德新 罗永峰 付新亮 曹振鹏 马俊 张桂红 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期113-120,共8页

为了解猪流感病毒（SIV）的流行情况，本试验在2014年10月-2015年9月期间在广东省各地区采集猪的鼻拭子和肺脏病料，将样品处理之后进行鸡胚分离和RT-PCR检测，分离到1株SIV，对其进行全基因组测序和遗传进化分析，结果表明为H1N1亚型SI... 为了解猪流感病毒（SIV）的流行情况，本试验在2014年10月-2015年9月期间在广东省各地区采集猪的鼻拭子和肺脏病料，将样品处理之后进行鸡胚分离和RT-PCR检测，分离到1株SIV，对其进行全基因组测序和遗传进化分析，结果表明为H1N1亚型SIV，病毒HA，NA，M和NS基因片段属于类禽分支（EA），病毒PB2、PB1、PA和NP基因片段属于Pdm／09分支。HA基因序列同源性结果显示，核苷酸相似性为93．2％～99．1％，其中与A／swine／Jiangxi／3858／2011（H1N1）SIV同源性最高。抗原位点分析结果表明，分离毒株的抗原位点基本保守。本研究通对广东省各地区分离的SIV分析，为SIV的重组和变异趋势及公共卫生安全的防控提供依据。 展开更多

关键词 猪流感病毒 RT-PCR 遗传进化分析 重组病毒 抗原位点

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2008—2009年南宁市人季节性H1N1流感病毒神经氨酸酶潜在的抗原位点和抑制剂耐药位点分析 被引量：1

8

作者 范云燕 刘海燕 +3 位作者 石健 秦剑秋 黄莉 覃巍巍 《华南预防医学》 2012年第5期6-10,共5页

目的了解2008—2009年南宁市人季节性H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)基因的遗传进化特征,探讨NA基因潜在的抗原位点和活性位点(抑制剂耐药性位点)变异规律。方法提取2008—2009年20株H1N1流感病毒RNA,采用RT-PCR扩增病毒NA基因后进行序列测... 目的了解2008—2009年南宁市人季节性H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)基因的遗传进化特征,探讨NA基因潜在的抗原位点和活性位点(抑制剂耐药性位点)变异规律。方法提取2008—2009年20株H1N1流感病毒RNA,采用RT-PCR扩增病毒NA基因后进行序列测定,通过CTLPred软件预测NA基因上潜在的抗原位点,并对NA分子进化和其重要功能位点的遗传变异进行分析。结果将20株H1N1流感病毒毒株与北半球疫苗推荐株A/Solomon/3/2006和A/Bris-bane/59/2007构建进化树,NA进化树共分成3个类群,10株2008年H1N1流感病毒毒株聚集成分支Ⅱ,10株2009年毒株与疫苗株A/Brisbane/59/2007聚集成分支Ⅰ,A/Solomon/3/2006则独立形成1个分支(Ⅲ)。2008年毒株抗原位点替换频率较高,相对于A/Solomon/3/2006氨基酸替换分布在不同的3个区域的3个位点,分别是N64H、Y100H、L367I;2009年度的毒株抗原决定簇位点相对保守。在已知NA的酶活性位点中,2009年所有毒株均在275位点发生了H>Y的突变,而这种变异在2008年的毒株中未有出现。结论 A/Solomon/3/2006落后于2008年毒株,A/Brisbane/59/2007对应的疫苗在2009年能起到较好的保护作用;大量H275Y耐药株的出现提示在流感病毒监测中应密切关注其耐药位点的变异。 展开更多

关键词 流感病毒 H1N1 神经氨酸酶 抗原位点 耐药性

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一组抗人肝癌单抗相应抗原的表达及位点分析

9

作者 米力 陈志南 +3 位作者 张盈华 王茜 刘彦仿 隋延仿 《第四军医大学学报》 1995年第3期173-176,共4页

目的：为分析肿瘤细胞的异质性，解决导向诊治中的问题．方法：我们用流式细胞仪定量地测定了四株抗人肝癌单抗在五种不同人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１，ＢＥＬ－７４０２，ＱＧＹ－７７０１人肝癌细胞系ＨＨＣＣ，ＨＨＣＣ－９２０... 目的：为分析肿瘤细胞的异质性，解决导向诊治中的问题．方法：我们用流式细胞仪定量地测定了四株抗人肝癌单抗在五种不同人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１，ＢＥＬ－７４０２，ＱＧＹ－７７０１人肝癌细胞系ＨＨＣＣ，ＨＨＣＣ－９２０４和正常人肝细胞ＱＺＧ中的相应抗原表达及抗原位点分析．结果：Ｈ１８，Ｈ２７和Ｅ５相应抗原在五种人肝癌细胞株中均有表达，Ｆ１１在ＳＭＭＣ－７７２１，ＱＧＹ－７７０１两种肝癌细胞株有表达，但表达量均不相同．Ｈ１８和Ｈ２７有较高的表达，Ｅ５和Ｆ１１低表达．Ｈ１８，Ｈ２７和Ｅ５三株单抗，两两组合其ＡＩ值均大于４０％，表明其抗原位点不同．结论：这为肝癌单抗的导向诊断和治疗提供了指导性的依据． 展开更多

关键词 单克隆抗体 流式细胞仪 抗原位点 肝细胞癌

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肾综合征出血热病毒大鼠单克隆抗体亲和力及抗原结合位点测定

10

作者 徐海峰 杨为松 +4 位作者 崔龙洙 梁喆 白雪帆 米力 刘原 《中华实验和临床病毒学杂志》 CSCD 1995年第2期119-121,共3页

应用非竞争ＥＬＩＳＡ和ＥＬＩＳＡ相加试验对８株抗肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）大鼠单克隆抗体（ＭｃＡｂ）进行了抗体亲和力和抗原结合位点的测定。结果提示这些ＭｃＡｂ至少可识别ＨＦＲＳＶ核壳蛋白（ＮＰ）上６种不同抗原决... 应用非竞争ＥＬＩＳＡ和ＥＬＩＳＡ相加试验对８株抗肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）大鼠单克隆抗体（ＭｃＡｂ）进行了抗体亲和力和抗原结合位点的测定。结果提示这些ＭｃＡｂ至少可识别ＨＦＲＳＶ核壳蛋白（ＮＰ）上６种不同抗原决定簇，并且表明ＮＰ上可能存在ＨＦＲＳＶ组、亚组、型或亚型抗原决定簇。ＭｃＡｂ亲和常数测定的高低排序结果为ＫＦ１２＞ＤＥ１１＞Ｘ１０＞ＣＨ１０＞ＩＧ４。 展开更多

关键词 出血热病毒 单克隆抗体 肾病综合症 抗原位点

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利用噬菌体肽库技术进行抗原中和位点的鉴定

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作者 陈鹤 陈福 赵悦 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 2000年第4期246-248,共3页

目的确定病毒 ＩＢＤＶ（ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｂｕｒｓａｌ　ｄｉｓｅａｓｅｓ　ｖｉｒｕｓ，　ＩＢＤＶ）的中和位点，为生产病毒疫苗奠定基础。方法利用噬菌体肽库技术，模拟病毒的病原决定簇，同抗ＩＢＤＶ的单抗相结合，通过对肽... 目的确定病毒 ＩＢＤＶ（ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｂｕｒｓａｌ　ｄｉｓｅａｓｅｓ　ｖｉｒｕｓ，　ＩＢＤＶ）的中和位点，为生产病毒疫苗奠定基础。方法利用噬菌体肽库技术，模拟病毒的病原决定簇，同抗ＩＢＤＶ的单抗相结合，通过对肽库的筛选和测序，从而确定病毒的中和位点的氨基酸序列。结果与ＩＢＤＶ抗原的原序列进行对应查找，发现原序列上的１９８～２０８（Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ）这１１个氨基酸能够体现中和位点的特点，并且与所测序列有４～５个氨基酸残基的重复。结论该序列就是抗原的中和位点。 展开更多

关键词 抗原决定簇 噬蓖体肽库 中和位点 序列分析

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日本乙型脑炎病毒单克隆抗体的抗原结合位点及亲和力测定 被引量：7

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作者 张明杰 汪美先 +2 位作者 姜绍谆 马文煜 于碧云 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第1期34-37,共4页

用快速酶联免疫吸附试验双抗体夹心法(RDS-ELISA),测定了6株抗日本乙型脑炎病毒(JEV)单克隆抗体(nG2、2H4、2D2、mG9、2F2、mC3)的抗原结合位点及相对亲和力。通过ELISA相加试验证实,6株单克隆抗体识别5个不同的抗原位点.2H4和2F2识别... 用快速酶联免疫吸附试验双抗体夹心法(RDS-ELISA),测定了6株抗日本乙型脑炎病毒(JEV)单克隆抗体(nG2、2H4、2D2、mG9、2F2、mC3)的抗原结合位点及相对亲和力。通过ELISA相加试验证实,6株单克隆抗体识别5个不同的抗原位点.2H4和2F2识别的抗原位点相同或接近,而其余单克隆抗体则识别不同的或相距较远的抗原位点。从50％最大结合的单克隆抗体浓度分析可知,6株单克隆抗体的相对亲和力为nG2>2H4>2D2>mG9>2F2>mC3,浓度范围约为0.01～1.50ng。本研究为JEV单克隆抗体在诊断学及其疫苗研究中的应用提供了必要的资料。 展开更多

关键词 乙型脑炎病毒 单克隆抗体 抗原位占

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猪传染性胃肠炎病毒S基因抗原位点B与C之间片段的克隆与原核表达 被引量：2

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作者 张春叶 孙英健 +3 位作者 沈红 李焕荣 吴国娟 于同泉 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期510-513,共4页

将RT-PCR扩增的猪传染性胃肠炎病毒S基因抗原位点B与C之间的目的片段经克隆、双酶切后连接于表达载体,经酶切、PCR和测序鉴定的阳性重组质粒转化BL21(DE3),用IPTG诱导重组菌株表达其融合蛋白。结果显示,目的片段的大小为357bp,序列分析... 将RT-PCR扩增的猪传染性胃肠炎病毒S基因抗原位点B与C之间的目的片段经克隆、双酶切后连接于表达载体,经酶切、PCR和测序鉴定的阳性重组质粒转化BL21(DE3),用IPTG诱导重组菌株表达其融合蛋白。结果显示,目的片段的大小为357bp,序列分析表明,S基因与其他猪传染性胃肠炎病毒相应基因具有很高的同源性;Western-blotting检测表明,分子质量约34ku的融合蛋白具有良好的反应原性。 展开更多

关键词 猪 传染性胃肠炎病毒 S基因 抗原位点B 抗原位点C 克隆 原核表达

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O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的原核表达与抗原性分析 被引量：3

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作者 徐程 陈亚波 方维焕 《动物医学进展》 CSCD 2007年第6期14-18,共5页

研究分析了O型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP1与当前猪FMDV疫苗血清的免疫反应性。将VP1基因克隆至原核表达载体pET32c,并在大肠埃希菌BL21中得到了表达,Western blot分析表明该重组蛋白与豚鼠O型FMDV标准阳性血清具有良好免疫反应性。目... 研究分析了O型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP1与当前猪FMDV疫苗血清的免疫反应性。将VP1基因克隆至原核表达载体pET32c,并在大肠埃希菌BL21中得到了表达,Western blot分析表明该重组蛋白与豚鼠O型FMDV标准阳性血清具有良好免疫反应性。目的蛋白经纯化后用ELISA分析其与猪疫苗血清的免疫反应性,结果显示该重组VP1蛋白(rVP1)只能与部分O型FMDV疫苗血清反应。推测当前使用的不同O型FMDV疫苗毒株在VP1重要中和抗原位点G-H环(134 aa^158 aa)与C末端(200 aa^213 aa)存在较大差异。 展开更多

关键词 O型口蹄疫病毒 结构蛋白VP1 免疫反应性 疫苗毒株 中和抗原位点

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计算机模建和点突变分析抗人CD40单克隆抗体5C11识别的抗原表位 被引量：3

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作者 张婷 张学光 +1 位作者 瞿秋霞 章良 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期355-361,共7页

目的:通过计算机模拟与点突变实验初步探讨本课题组前期研制的抗人CD40激发型单克隆抗体5C11识别的抗原表位。方法:利用InsightⅡ软件分别模拟抗原、抗体结构,构建抗原抗体复合物模型,通过计算推测5C11单抗所识别的抗原表位。构建人野生... 目的:通过计算机模拟与点突变实验初步探讨本课题组前期研制的抗人CD40激发型单克隆抗体5C11识别的抗原表位。方法:利用InsightⅡ软件分别模拟抗原、抗体结构,构建抗原抗体复合物模型,通过计算推测5C11单抗所识别的抗原表位。构建人野生型CD40(wtCD40)及其第70位苏氨酸突变型(70muCD40)和第114位谷氨酸突变型(114muCD40)的重组真核表达载体pIRES2-EGFP/wtCD40、pIRES2-EGFP/70muCD40和pIRES2-EGFP/114muCD40,脂质体转染法将重组载体导入HEK293细胞,筛选稳定转染细胞株(即HEK293/wtCD40、HEK293/70muCD40和HEK293/114muCD40细胞)。流式细胞术和Western blotting检测5C11单抗与HEK293/wtCD40、HEK293/70muCD40和HEK293/114muCD40细胞的结合能力。结果:成功构建pIRES2-EG-FP/wtCD40、pIRES2-EGFP/70muCD40和pIRES2-EGFP/114muCD40真核表达载体和相应稳定转染细胞株。5C11单抗与HEK293/70muCD40和HEK293/114muCD40细胞结合能力较HEK293/wtCD40细胞明显减弱;Western blotting检测结果表明,5C11单抗仅识别HEK293/wtCD40细胞,不识别HEK293/70muCD40和HEK293/114muCD40细胞。结论:人CD40氨基酸序列的第70位苏氨酸和第114位谷氨酸是其单抗5C11识别的抗原表位,对构建人源化CD40抗体具有潜在的临床意义。 展开更多

关键词 CD40 抗原表位 同源模建 点突变 肿瘤生物治疗

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猪传染性胃肠炎病毒S基因A抗原位点序列的克隆与原核表达 被引量：2

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作者 张春叶 张莉 +4 位作者 沈红 李焕荣 吴国娟 于同泉 路苹 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期845-849,共5页

将RT-PCR扩增的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因A抗原位点目的片段克隆、双酶切后连接于表达载体,经酶切、PCR和测序鉴定的阳性重组质粒转化BL21(DE3),用IPTG诱导,进行SDS-PAGE和Western-blotting分析,确定目的蛋白的原核表达情况和免疫... 将RT-PCR扩增的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因A抗原位点目的片段克隆、双酶切后连接于表达载体,经酶切、PCR和测序鉴定的阳性重组质粒转化BL21(DE3),用IPTG诱导,进行SDS-PAGE和Western-blotting分析,确定目的蛋白的原核表达情况和免疫特异性。结果显示,目的片段的大小为534bp,序列分析表明,该基因与其他TGEV相应基因具有很高的同源性;Western-blotting检测可见分子质量约43 ku的融合蛋白条带,表明,该蛋白具有良好的反应原性。 展开更多

关键词 猪传染性胃肠炎病毒 S基因A抗原位点 克隆 原核表达

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狂犬病“靶向性”Th表位DNA疫苗的构建与瞬时表达研究 被引量：2

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作者 肖跃强 管宇 +4 位作者 谢金文 郭广君 魏风 刘吉山 沈志强 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期176-181,共6页

用RT-PCR扩增BALB/c小鼠P31基因,在不影响氨基酸序列前提下,对序列中461nt NcoⅠ酶切位点进行定点突变;采用定向克隆方法将狂犬病病毒核蛋白、糖蛋白及NS蛋白主要Th抗原表位核苷酸序列替换P31序列中CLIP区域,进行新一轮PCR反应获得带有K... 用RT-PCR扩增BALB/c小鼠P31基因,在不影响氨基酸序列前提下,对序列中461nt NcoⅠ酶切位点进行定点突变;采用定向克隆方法将狂犬病病毒核蛋白、糖蛋白及NS蛋白主要Th抗原表位核苷酸序列替换P31序列中CLIP区域,进行新一轮PCR反应获得带有Kozak调控序列的P31-Th分子,以增加目的基因的表达量,并将含有Kozak序列的P31-Th分子克隆入真核表达载体pCI-neo多克隆位点,通过PCR与限制性内切酶酶切方法进行鉴定;最后将各Th表位表达载体转染COS-7细胞,Western-blot检测目的基因的瞬时表达。测序分析结果表明,BALB/c小鼠P31基因CDS区长648bp,编码215个氨基酸,与Gen-Bank中登录的Ii分子(NM_010545)的核苷酸序列、氨基酸序列均存在多个位点差异;定点突变后获得了P31分子突变体,经PCR及限制性内切酶酶切方法证明,成功构建了携带P31-Th分子的真核表达载体;Western-blot分析证实,各P31-Th分子均在COS-7细胞中获得瞬时表达,且表达的目的产物能够与兔抗P31多克隆抗体发生抗原抗体结合反应。结果表明,作者成功构建了狂犬病病毒主要Th抗原表位的"靶向性"核酸疫苗,为开展在小鼠的免疫学试验奠定了基础。 展开更多

关键词 狂犬病病毒Th表位 BALB/c小鼠恒定链 定点突变 定向克隆 瞬时表达

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应用抗-HBc单克隆抗体研究乙型肝炎核心抗原的抗原位点 被引量：2

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作者 詹美云 汤少华 +3 位作者 张文英 田瑞光 张满仓 刘崇柏 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第2期140-144,共5页

应用基因工程表达的乙型肝炎核心抗原(HBcAg)免疫Balb/c小鼠,取该鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,获得8株能稳定分泌高滴度抗HBcAg抗体的杂交瘤细胞株.用其中7株(4A4、4B5、3H6、3A5、1G8、1D3、5G10)与HBcAg亲和性相近的单克隆抗体(Mc... 应用基因工程表达的乙型肝炎核心抗原(HBcAg)免疫Balb/c小鼠,取该鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,获得8株能稳定分泌高滴度抗HBcAg抗体的杂交瘤细胞株.用其中7株(4A4、4B5、3H6、3A5、1G8、1D3、5G10)与HBcAg亲和性相近的单克隆抗体(McAb)首次证明,在HBcAg上存在3个不同的抗原位点,并分别命名为α、β和γ. α抗原位点:能诱生中和及免疫沉淀抗体,在体外能中和HBcAg的抗原活性,能与HBc-Ag产生免疫沉淀线.如3H6、4A4、4B5、3A5等单克隆抗体. β抗原位点:不能诱生中和及免疫沉淀抗体,但此种单克隆抗体与4A4或4B5混合后即可与HBcAg产生免疫沉淀线.如1G8、1D3 McAbs. γ抗原位点:能诱生免疫沉淀抗体,但不能诱生中和抗体.如5G10McAb. 抗相同抗原位点的单克隆抗体之间可产生有意义的互相竞争抑制,而抗不同抗原位点的单克隆抗体之间则无,或很少有竞争抑制.对有关问题进行了讨论. 展开更多

关键词 乙型肝炎 核心抗原 抗原位点

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猪传染性胃肠炎病毒S基因A抗原位点的克隆及原核表达载体的构建

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作者 张春叶 沈红 +2 位作者 张莉 李焕荣 路苹 《中国农学通报》 CSCD 2008年第7期11-16,共6页

研究目的对猪传染性胃肠炎病毒S基因A抗原位点进行克隆和原核表达载体的构建。方法参考GenBank上公布的TGEVS基因A抗原位点序列,应用Primer6.0设计一对含酶切位点的引物,用于RT-PCR扩增A抗原位点目的片段,将扩增产物连接于paesy-T克隆... 研究目的对猪传染性胃肠炎病毒S基因A抗原位点进行克隆和原核表达载体的构建。方法参考GenBank上公布的TGEVS基因A抗原位点序列,应用Primer6.0设计一对含酶切位点的引物,用于RT-PCR扩增A抗原位点目的片段,将扩增产物连接于paesy-T克隆载体上构建克隆载体,用EcoRI和XholI对表达载体PET-32a(+)和重组质粒进行酶切,将酶切产物亚克隆至PET-32a(+)多克隆位点上,连接、转化至BL21(DE3),构建A位点的原核表达载体,并对阳性重组质粒进行酶切、PCR和测序鉴定。结果所扩增的目的片段的大小为534bp,与原核表达载体连接后,经核苷酸及推导的氨基酸序列分析表明,该基因与其它猪传染性胃肠炎病毒相应基因具有很高的同源性,说明成功地构建了TGEVS基因A抗原位点的原核表达载体。结论TGEVS基因A抗原位点原核表达载体的成功构建,填补了中国国内单独针对此位点进行研究的空白,也为TGEV诊断方法的建立提供良好的技术基础。 展开更多

关键词 猪传染性胃肠炎病毒 S基因A抗原位点 克隆 原核表达载体的构建

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冬虫夏草指标蛋白IP4的cDNA全长克隆及抗原决定簇预测研究

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作者 张涵 童芯锌 +3 位作者 王芳 王艺璇 彭成 国锦琳 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2018年第20期4864-4869,共6页

目的克隆获取冬虫夏草指标蛋白氰酸酶(IP4)的c DNA全长及对其抗原表位预测。方法结合课题组前期采用蛋白组学法筛选得到的冬虫夏草指标性蛋白IP4和冬虫夏草转录组数据,挖掘IP4 m RNA序列,并克隆IP4 c DNA全长,通过NCBI结构分析服务系统... 目的克隆获取冬虫夏草指标蛋白氰酸酶(IP4)的c DNA全长及对其抗原表位预测。方法结合课题组前期采用蛋白组学法筛选得到的冬虫夏草指标性蛋白IP4和冬虫夏草转录组数据,挖掘IP4 m RNA序列,并克隆IP4 c DNA全长,通过NCBI结构分析服务系统对IP4进行保守区和功能区分析,利用DNAMAN 6.0和DNAStar软件分别进行序列比对和抗原表位分析。结果从转录组数据中挖掘到IP4的2个可变剪接体,属于内含子保留的可变剪接。RT-PCR结果显示,IP4 c DNA全长465 bp,编码154 aa(氨基酸)。IP4蛋白的保守区和主要催化活性位点位于87～154 aa,该区域为氰酸酶家族保守核心区域和二聚体结合区域,DNAMAN 6.0分析结果表明1～39 aa和55～81 aa区具有较高种属特异性,DNAStar预测IP4蛋白的抗原表位区主要分布于25～90 aa。结论最终确定IP4的25～39 aa和55～81 aa为最佳抗原特异区,为后续规模化制备IP4蛋白特异抗原区及免疫法鉴定冬虫夏草奠定基础。 展开更多

关键词 冬虫夏草 指标蛋白 CDNA克隆 DNAStar 抗原区分析

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