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犬科动物繁殖生物技术研究进展 被引量:9
1
作者 张洪海 马承宝 +2 位作者 刘国世 贾丽玲 张生 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2005年第12期54-57,共4页
犬科动物繁殖生物技术的研究远远落后于其他哺乳动物,因为犬科动物为季节性单次发情,其生殖生理有独特性,这使得犬科动物繁殖生物技术面临着一些困难,尤其是卵子和胚胎在体外培养及发育的效率很低。本文综述了犬科动物卵母细胞的成熟培... 犬科动物繁殖生物技术的研究远远落后于其他哺乳动物,因为犬科动物为季节性单次发情,其生殖生理有独特性,这使得犬科动物繁殖生物技术面临着一些困难,尤其是卵子和胚胎在体外培养及发育的效率很低。本文综述了犬科动物卵母细胞的成熟培养(IVM)、体外受精(IVF)和体外胚胎生产(IVP)、精液冷冻和人工授精、胚胎移植及克隆等的研究进展。 展开更多
关键词 畜牧学 卵母细胞体外成熟 综述 克隆 犬科动物 成熟培养
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动物克隆的理论与实践 被引量:6
2
作者 李裕强 张涌 《西北农业大学学报》 CSCD 北大核心 2000年第2期85-90,共6页
动物机体的大部分分化细胞具备全能性 ,成熟卵母细胞胞质中 m RNA、蛋白质等母型信息能使注入其中的细胞基因发生再程序化 ,从而启动新个体的发育。供体细胞和受体卵母细胞的周期和功能状态的同步协调是实现重构胚正常发育的关键。克隆... 动物机体的大部分分化细胞具备全能性 ,成熟卵母细胞胞质中 m RNA、蛋白质等母型信息能使注入其中的细胞基因发生再程序化 ,从而启动新个体的发育。供体细胞和受体卵母细胞的周期和功能状态的同步协调是实现重构胚正常发育的关键。克隆动物的成功受供体细胞、受体卵母细胞以及二者之间的相互作用等多个因素的影响 ,其中的许多规律还未被掌握 ,动物克隆的研究必将揭示这些生物学规律 。 展开更多
关键词 动物克隆 核移植 核质互作 细胞全能性
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动物转基因与核移植技术的新进展 被引量:3
3
作者 严泉剑 李六金 《动物医学进展》 CSCD 2002年第3期24-29,共6页
本文就动物转基因与核移植技术进行文献回顾。原核注射是一种可靠、使用广泛的动物转基因方法。但该方法存在花费时间长、整合效率低及不能定点整合的问题。所以近年来出现了一些新的转基因方法 ,包括精子介导、反转录病毒介导、携带外... 本文就动物转基因与核移植技术进行文献回顾。原核注射是一种可靠、使用广泛的动物转基因方法。但该方法存在花费时间长、整合效率低及不能定点整合的问题。所以近年来出现了一些新的转基因方法 ,包括精子介导、反转录病毒介导、携带外源基因体细胞的核移植、ES细胞基因打靶技术等。这些方法中动物核移植技术贡献较大 ,很有前途。核移植技术解决了同源重组在大动物上的限制。可以应用于生物制药动物保种、预防遗传病、辅助生殖及治疗性克隆。 展开更多
关键词 动物 核移植技术 转基因技术 显微注射
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动物克隆的细胞学原理及技术 被引量:4
4
作者 李震 张德福 王英 《上海农业学报》 CSCD 2000年第2期94-98,共5页
动物克隆是近年来出现的生物高技术 ,因这项技术所具有的巨大应用潜力 ,世界各国都致力于该技术的研究与开发 ,使这一技术得到了很大发展。本文就动物克隆的概念、细胞学原理。
关键词 克隆 动物 细胞学原理
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抑制性消减杂交法筛选大鼠血管钙化相关基因的研究 被引量:4
5
作者 吴秀娟 刘毅 +3 位作者 孙文学 杜晓红 张媛元 徐利鸳 《中华肾脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期543-549,共7页
目的了解大鼠血管钙化过程中血管组织基因表达的改变。方法选取6周龄SPF级雄性SD大鼠24只,随机分成钙化组和对照组(各12只),钙化组大鼠制作血管钙化模型(VDN)。两组大鼠于实验第8周处死后测定动脉组织钙含量并作病理检查。提取两... 目的了解大鼠血管钙化过程中血管组织基因表达的改变。方法选取6周龄SPF级雄性SD大鼠24只,随机分成钙化组和对照组(各12只),钙化组大鼠制作血管钙化模型(VDN)。两组大鼠于实验第8周处死后测定动脉组织钙含量并作病理检查。提取两组大鼠主动脉中膜RNA,反转录成eDNA,采用抑制消减杂交法(SSH)分离钙化组较正常组高表达基因的cDNA片段,将差异片段与PMD18-T质粒载体连接起来,热转化法转化感受态菌DH-5α,建立钙化组与对照组之间的差异表达eDNA文库。菌落PCR法鉴定重组载体,测序阳性克隆,BLAST比对分析测序结果。随机对Nell 1等6个基因进行差异表达的RT—PCR验证。结果(1)病理检查示钙化组大鼠主动脉中膜扭曲并见明显钙盐沉积,对照组大鼠主动脉中膜无任何钙盐沉积。(2)血管组织钙测定示钙化组和对照组大鼠分别为(15.34±2.51)mg/g和(5.20±0.75)mg/g,钙化组大鼠血管组织钙含量显著高于对照组(P〈0.01)。(3)采用SSH方法成功构建血管钙化的差减文库,对正反双向差减文库进行菌落PCR鉴定后分别获得92个阳性克隆(正向文库)和18个阳性克隆(反向文库),插入片段的大小主要集中于150~400bp。对所获阳性克隆进行测序和BLAST比对分析,获得钙化相关43个上调基因和11个下调基因。RT—PCR验证示CytoP450、Nell1等5个基因在钙化组和对照组中表达变化较大,钙化组表达高于对照组,约为后者的1.71倍。结论成功构建血管钙化VDN模型。血管钙化过程中相关基因表达发生改变,一些骨化基因以及凋亡、氧化、炎性反应和细胞因子等相关基因表达上调,同时伴有少数可能抑制钙化的基因下调。 展开更多
关键词 钙质沉着症 基因文库 模型 动物 骨化 抑制性消减杂交 克隆
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动物克隆技术的研究状况 被引量:4
6
作者 李林春 《信阳农业高等专科学校学报》 2001年第1期38-40,共3页
概述了近年来国内外在鱼类、两栖类和哺乳类等动物克隆方面的研究进展 ,同时也向人们展示了克隆在医药医疗领域。
关键词 动物克隆 转基因技术 研究状况
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哺乳动物胚胎干细胞的特性及利用 被引量:2
7
作者 江中良 李青旺 王立强 《西南民族学院学报(自然科学版)》 2002年第1期65-69,共5页
哺乳动物胚胎干细胞(ES细胞)是由动物早期胚胎发育的内细胞团(ICM)或原始生殖细胞(PGC)分离得到的.人们利用ES细胞所具有的全能性、体外分化以及稳定的遗传性能等特点,展示了ES细胞在建立哺乳动物的早期胚胎体外分化模型、转基因动物... 哺乳动物胚胎干细胞(ES细胞)是由动物早期胚胎发育的内细胞团(ICM)或原始生殖细胞(PGC)分离得到的.人们利用ES细胞所具有的全能性、体外分化以及稳定的遗传性能等特点,展示了ES细胞在建立哺乳动物的早期胚胎体外分化模型、转基因动物模型、器官和组织的修复与移植治疗、克隆动物的生产、发育生物学的研究等方面广阔的应用前景.但是,由于哺乳动物错综复杂的基因调控和环境因素的影响,对于胚胎干细胞的研究还存在诸多问题,还需作更深入细致的研究. 展开更多
关键词 胚胎干细胞 全能性 体外分化 转基因动物 移动治疗 克隆动物 哺乳动物 应用
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动物克隆与转基因动物乳腺生物反应器 被引量:3
8
作者 曹善东 《临沂师范学院学报》 2003年第6期60-63,共4页
动物克隆及转基因动物乳腺生物反应器是生物工程的核心技术,通过转基因动物乳腺生物发生器生产基因药物比传统的生物工程制药具有产量高、成本低、效价好的特点.因此,将动物克隆和转基因动物乳腺生物发生器用于生物制药,具有广阔的发展... 动物克隆及转基因动物乳腺生物反应器是生物工程的核心技术,通过转基因动物乳腺生物发生器生产基因药物比传统的生物工程制药具有产量高、成本低、效价好的特点.因此,将动物克隆和转基因动物乳腺生物发生器用于生物制药,具有广阔的发展前景,必将产生巨大的经济效应和社会效益。 展开更多
关键词 动物克隆 转基因动物 乳腺 生物反应器 生物制药
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HSV1-tk基因的部分DNA序列分析 被引量:2
9
作者 刘彦文 钟女奇 +2 位作者 都同功 黄冰 陈系古 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期87-90,共4页
采用PCR技术从商品质粒pHSV10 6扩增出HSV1 tk基因 (112 8bp) ,PCR产物用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后定向克隆至真核表达载体pcDNA3,然后以重组质粒pcTK为模板 ,tk基因的 5′端引物为DNA测序引物进行部分DNA序列分析 .部分DNA序列分析证明PC... 采用PCR技术从商品质粒pHSV10 6扩增出HSV1 tk基因 (112 8bp) ,PCR产物用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后定向克隆至真核表达载体pcDNA3,然后以重组质粒pcTK为模板 ,tk基因的 5′端引物为DNA测序引物进行部分DNA序列分析 .部分DNA序列分析证明PCR产物为HSV1 tk基因正确无误 ,成功筛选到HSV1 tk基因的真核表达载体pcTK 。 展开更多
关键词 HSV1-TK 基因治疗 转基因动物 克隆 DNA序列分析
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动物转基因及克隆技术研究 被引量:1
10
作者 余华 叶健强 刘丹 《信阳农业高等专科学校学报》 2009年第2期104-108,共5页
动物转基因是通过转基因技术将改造后的目的基因或基因组片段导入实验动物的受精卵,使其与受精卵DNA发生整合,然后将此受精卵转移到雌性受体的输卵管或子宫中,使其顺利完成胚胎的发育。克隆是指基因型完全相同的两个或更多的个体组成的... 动物转基因是通过转基因技术将改造后的目的基因或基因组片段导入实验动物的受精卵,使其与受精卵DNA发生整合,然后将此受精卵转移到雌性受体的输卵管或子宫中,使其顺利完成胚胎的发育。克隆是指基因型完全相同的两个或更多的个体组成的一个群体。转基因克隆动物技术的采用可使基因转移效率大大提高。 展开更多
关键词 动物 转基因 克隆
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百年动物克隆
11
作者 付国斌 《自然杂志》 2018年第4期265-269,共5页
生物学里有很多非常专业的词汇,其中只有为数不多的一些能够进入大众视野,而克隆就是这为数不多中的之一。克隆起源于发育生物学,其发展可以追溯到一个世纪前。文章简单介绍了克隆的含义和百年发展历史中的一些重要突破,并讨论相关的伦... 生物学里有很多非常专业的词汇,其中只有为数不多的一些能够进入大众视野,而克隆就是这为数不多中的之一。克隆起源于发育生物学,其发展可以追溯到一个世纪前。文章简单介绍了克隆的含义和百年发展历史中的一些重要突破,并讨论相关的伦理问题及其发展过程对我们的启示,让大家可以对克隆有一个基本的认识。 展开更多
关键词 有性繁殖 无性繁殖 动物克隆 体细胞核移植 伦理
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现代生物技术与动物育种 被引量:22
12
作者 陈宏 《黄牛杂志》 2000年第4期1-5,共5页
本文概述了动物育种技术及其发展、现代生物技术的产生与现状 ,转基因动物技术、胚胎工程技术、动物克隆技术和各种分子生物技术及其对动物育种技术的影响 ,并讨论了 2 1世纪动物育种的趋势和展望。
关键词 生物技术 转基因 胚胎工程 动物克隆 动物育种
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PCR-mtDNA技术鉴别检测不同动物肌肉组织和饲料中鸭源性成分 被引量:17
13
作者 张娟 宗卉 张利平 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1832-1836,共5页
以鸭肌肉组织DNA为模板,利用PCR-mtDNA技术成功克隆出了鸭mtDNA COⅢ基因(GenBank Accession No.DQ655706)。对所克隆的序列分析表明,其序列包括鸭细胞色素C氧化酶Ⅲ(COⅢ)基因全序列784 bp,通过同源性分析可知,动物的线粒体DNA COⅢ基... 以鸭肌肉组织DNA为模板,利用PCR-mtDNA技术成功克隆出了鸭mtDNA COⅢ基因(GenBank Accession No.DQ655706)。对所克隆的序列分析表明,其序列包括鸭细胞色素C氧化酶Ⅲ(COⅢ)基因全序列784 bp,通过同源性分析可知,动物的线粒体DNA COⅢ基因是相对保守的,利用此特性设计PCR-mtDNA方法鉴别检测鸭源性成分的特异性引物;以各种动物肌肉组织及饲料DNA为模板进行PCR扩增、经反复验证筛选出只能扩增出鸭DNA的目的片段,而不能扩增出其他动物DNA片段的特异性强、稳定性好的引物P3、P4;利用此引物PCR扩增鸭DNA的特异性片段为226 bp,对PCR产物进行测序分析可知与已克隆的鸭mtDNA COⅢ基因同源性达到100%,证明了所筛选引物的准确性。通过对不同含量的DNA模板溶液进行PCR扩增的方法,对筛选出的特异性引物P3、P4进行灵敏度试验,结果分析表明灵敏度约为0.001%,证明该PCR方法具有特异性强、灵敏度高的特点,完全可作为鉴别不同动物肌肉组织和饲料中鸭源性成分的方法。 展开更多
关键词 鸭源性成分 鉴别检测 线粒体DNA 细胞色素C氧化酶Ⅲ基因 不同动物肌肉组织和饲料 克隆
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一株嗜热梭菌β-葡聚糖酶基因的克隆和表达 被引量:7
14
作者 吕文平 许梓荣 +2 位作者 孙建义 李卫芬 杜文理 《科技通报》 2005年第1期45-49,共5页
提取嗜热梭菌(Clostridium.sp)基因组DNA,首次通过PCR克隆了该菌的β-葡聚糖酶基因全长,结果表明:该基因全长1040bp,ORF为1003bp,编码334个氨基酸,计算分子量为37.8kD,等电点为7.67。经Blast分析,该序列与热纤梭菌同源性最高(99%),而与... 提取嗜热梭菌(Clostridium.sp)基因组DNA,首次通过PCR克隆了该菌的β-葡聚糖酶基因全长,结果表明:该基因全长1040bp,ORF为1003bp,编码334个氨基酸,计算分子量为37.8kD,等电点为7.67。经Blast分析,该序列与热纤梭菌同源性最高(99%),而与基因库中嗜热梭菌的同源性为94%,该基因已被GenBank接受(AY225318)。用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切目的片段和表达载体pET鄄30a(+)后相连接,构建重组表达载体pET鄄clo,并导入BL21细菌中表达.酶学特性表明:SDS鄄PAGE电泳在37kD左右有表达蛋白带,该工程菌最适酶活29.4U/mL,是出发菌的15倍,最适温度在80℃左右,最适pH在9左右。该工程菌可构建耐热性好、酶活高的杂合基因工程菌。 展开更多
关键词 动物营养与饲料科学 Β-葡聚糖酶 嗜热梭菌 克隆 大肠杆菌 表达
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反向遗传学技术在动物RNA病毒研究中的应用进展
15
作者 关飞虎 宋亚芬 +5 位作者 温立佳 王丽华 李丹 张辉 张乾义 王静 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期962-967,共6页
反向遗传学操作系统的出现为RNA病毒在体外研究提供了一种重要的技术方法,使在精确位置对病毒基因组进行修饰成为可能。病毒的反向遗传系统通常构建在高拷贝数或低拷贝数的质粒中,通过对基因进行改造或插入外源基因等操作实现对病毒改... 反向遗传学操作系统的出现为RNA病毒在体外研究提供了一种重要的技术方法,使在精确位置对病毒基因组进行修饰成为可能。病毒的反向遗传系统通常构建在高拷贝数或低拷贝数的质粒中,通过对基因进行改造或插入外源基因等操作实现对病毒改造的目的,被广泛应用于RNA病毒研究的各个领域,从毒力基因到抗病毒筛选和疫苗开发,为研究病毒蛋白的结构与功能、解析其感染致病机制、新型疫苗构建等提供技术平台。本文就反向遗传操作系统的构建方法、面临的问题和解决思路及在动物RNA病毒中的实际应用进行了综述,为新发和再发动物疫病筛选新型药物靶点、新的基因功能挖掘提供技术支撑。 展开更多
关键词 RNA病毒 反向遗传 病毒拯救 感染性克隆
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动物的基因工程技术及其意义 被引量:3
16
作者 高翔 刘京贞 《临沂师范学院学报》 2001年第6期65-66,共2页
动物的基因工程技术 (或遗传工程技术 )目前已发展了三大类 ,包括动物转基因技术、克隆技术及转基因克隆技术 .它们具有重大的应用价值和科学意义 ,有着诱人的发展前景 ,必将成为 2
关键词 基因工程 转基因动物技术 克隆动物技术 基因技术
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现代动物生物技术的发展及应用前景 被引量:4
17
作者 李瑞国 苗朝华 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期82-88,共7页
主要综述了以转基因动物技术、动物克隆技术和基因打靶技术为代表的现代农业动物生物技术的发展历程和重要进展,阐述了其在家畜和家禽的遗传性状和品种改良,扩大优良畜种数量、保护动物遗传资源,开展功能基因研究,实现基因表达调控,生... 主要综述了以转基因动物技术、动物克隆技术和基因打靶技术为代表的现代农业动物生物技术的发展历程和重要进展,阐述了其在家畜和家禽的遗传性状和品种改良,扩大优良畜种数量、保护动物遗传资源,开展功能基因研究,实现基因表达调控,生产药用蛋白和再造人类器官等方面的诱人前景。为促进这一技术的尽快产业化和直接服务人类的生产生活提出了建议。 展开更多
关键词 转基因动物 体细胞克隆 基因打靶 进展 应用前景
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家畜体细胞克隆中核重编程机理研究进展 被引量:1
18
作者 孙玉成 刘林娜 +1 位作者 刘文森 高宏伟 《现代生物医学进展》 CAS 2008年第11期2158-2162,共5页
体细胞克隆在绵羊、山羊、牛、猪等家畜中获得了成功,但目前的克隆效率非常低。克隆效率低使家畜体细胞克隆技术在畜牧业生产及其他领域的应用受到极大的限制,问题的根源在于对体细胞克隆中核重编程的分子机理缺乏了解。供体细胞核移入... 体细胞克隆在绵羊、山羊、牛、猪等家畜中获得了成功,但目前的克隆效率非常低。克隆效率低使家畜体细胞克隆技术在畜牧业生产及其他领域的应用受到极大的限制,问题的根源在于对体细胞克隆中核重编程的分子机理缺乏了解。供体细胞核移入去核的卵母细胞后,必须经过后成表观遗传修饰的重编程,从而恢复供体细胞核的全能性,才能保证重构胚的正常发育及个体的正常生长。本文从移植核的重构、DNA甲基化总体改变、组蛋白修饰、X染色体失活、端粒长度和端粒酶活性恢复、印迹基因及其他与发育相关基因的表达及核重编程的影响因素等几个方面探讨了体细胞克隆中的核重编程机理,为克隆效率提高的方法研究提供理论依据。 展开更多
关键词 家畜 体细胞克隆 核重编程 机理
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Establishment of cell clones with different metastatic potential from the metastatic hepatocellular carcinoma cell line MHCC97 被引量:111
19
作者 Yan Li Zhao-You Tang Sheng-Long Ye Yin-Kun Liu Jie Chen Qiong Xue Jun Chen Dong-Mei Gao Wei-Hua Bao Liver Cancer Institute and Zhongshan Hospital of Fudan University (Former Liver Cancer Institute of Shanghai Medical University),Shanghai 200032,China 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2001年第5期630-636,共7页
AIM: To establish clone cells with different metastatic potential for the study of metastasis-related mechanisms. METHODS: Cloning procedure was performed on parental hepatocellular carcinoma (HCC) cell line MHCC97, a... AIM: To establish clone cells with different metastatic potential for the study of metastasis-related mechanisms. METHODS: Cloning procedure was performed on parental hepatocellular carcinoma (HCC) cell line MHCC97, and biological characteristics of the target clones selected by in vivo screening were studied. RESULTS: Two clones with high (MHCC97-H) and low (MHCC97-L) metastatic potential were isolated from the parent cell line. Compared with MHCC97-L, MHCC97-H had smaller cell size (average cell diameter 43 microm vs 50 microm) and faster in vitro and in vivo growth rate (tumor cell doubling time was 34.2h vs 60.0h). The main ranges of chromosomes were 55-58 in MHCC97-H and 57-62 in MHCC97-L. Boyden chamber in vitro invasion assay demonstrated that the number of penetrating cells through the artificial basement membrane was (37.5 +/- 11.0) cells/field for MHCC97-H vs (17.7 +/- 6.3)/field for MHCC97-L. The proportions of cells in G0-G1 phase, S phase, and G2-M phase for MHCC97-H/MHCC97-L were 0.56/0.65, 0.28/0.25 and 0.16/0.10, respectively, as measured by flow cytometry. The serum AFP levels in nude mice 5wk after orthotopic implantation of tumor tissue were (246 +/- 66) microg.L(-1) for MHCC97-H and (91 +/- 66) microg.L(-1) for MHCC97-L. The pulmonary metastatic rate was 100% (10/10) vs 40% (4/10). CONCLUSION: Two clones of the same genetic background but with different biological behaviors were established, which could be valuable models for investigation on HCC metastasis. 展开更多
关键词 ALBUMINS animals Carcinoma Hepatocellular Cell Division Chromosomes clone Cells Flow Cytometry Hepatitis B Hepatitis B Surface Antigens Hepatitis B virus purification Humans Keratin Liver Liver Neoplasms Experimental Male MICE Mice Inbred BALB C Mice Nude Neoplasm Invasiveness Research Support Non-U.S. Gov't Tumor Cells Cultured Virus Integration ALPHA-FETOPROTEINS
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Moving toward an understanding of the metastatic process in hepatocellular carcinoma 被引量:13
20
作者 W.Michael Korn Division of Gastroenterology and Comprehensive Cancer Canter,University of California San Francisco,San Francisco,CA 94143-0128,USA 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2001年第6期777-778,共2页
INTRODUCTIONClinical factors contributing to the therapeutic challenge of hepatocellular carcinoma (HCC) are manifold :tumors arise often in patients with compromised liver function ,therefore limiting therapeutic opt... INTRODUCTIONClinical factors contributing to the therapeutic challenge of hepatocellular carcinoma (HCC) are manifold :tumors arise often in patients with compromised liver function ,therefore limiting therapeutic options ;symptoms develop only at later stages of tumor progression ,and tumors tend to invade normal stuctures or occur in multiple locations simultaneously. 展开更多
关键词 animalS Carcinoma Hepatocellular Humans Liver Neoplasms Neoplasm Metastasis
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