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4株琼胶降解菌的分离、鉴定及产酶条件分析 被引量:7
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作者 牟宗娟 李贵阳 +2 位作者 茅云翔 孔凡娜 莫照兰 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期13-20,共8页
从海藻及海参中分离筛选得到4株琼胶降解菌HD、JL、QJ和HS,均为革兰氏阴性菌,确定了它们发酵产酶的最佳条件均为:2216E海水培养基、初始Ph 7.5、琼胶底物浓度0.30%、培养温度28℃、培养时间36 h。大部分酶分泌到细菌细胞外。生理生化检... 从海藻及海参中分离筛选得到4株琼胶降解菌HD、JL、QJ和HS,均为革兰氏阴性菌,确定了它们发酵产酶的最佳条件均为:2216E海水培养基、初始Ph 7.5、琼胶底物浓度0.30%、培养温度28℃、培养时间36 h。大部分酶分泌到细菌细胞外。生理生化检测、16SrDNA序列同源性及聚类分析结果表明,HD、JL、HS为白色噬琼胶菌(Agarivorans albus);QJ的16SrDNA序列与Simiduia sp.,糖噬胞菌属(Sac charophagus sp.)和船蛆杆菌(Teredinibacter sp.)的相似性为93%~94%,在进化树上单独形成一个分支,但生理生化特征与它们有所不同,分类地位需要进一步确定。从HD、JL和HS中能克隆到β-琼胶酶基因,它们与其他物种的β-琼胶酶基因序列的相似性为97%~98%。 展开更多
关键词 琼胶降解菌(agarase-producing bacteria) 琼胶酶活力 鉴定 白色噬琼胶菌(Agarivor ansalbus) β-琼胶酶基因
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一株高产琼胶酶菌株MA-B22的分子鉴定与产酶条件优化 被引量:7
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作者 卢斌 柯才焕 +2 位作者 杨明 康康 赵晶 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1037-1043,共7页
琼胶酶在多糖降解应用中的作用日益重要,而从海洋微生物中筛选琼胶酶高产菌株成为一个重要途径。本研究从养殖的杂色鲍体内分离到一株高产琼胶酶的菌株MA-B22。该菌为革兰氏阴性菌,经16S rRNA序列鉴定表明,与Tamlana agarivorans sp.nov... 琼胶酶在多糖降解应用中的作用日益重要,而从海洋微生物中筛选琼胶酶高产菌株成为一个重要途径。本研究从养殖的杂色鲍体内分离到一株高产琼胶酶的菌株MA-B22。该菌为革兰氏阴性菌,经16S rRNA序列鉴定表明,与Tamlana agarivorans sp.nov.具有99%同源性,因此初步定为Tamlana sp.。在2216E培养基中该菌株在培养时间60h,温度25℃,起始pH为6.0条件下产酶活性最高。基于上述培养条件,通过单因素和正交实验确定了培养基的最佳基本组成:氮源为牛肉膏(其最适浓度为6.0‰),碳源为琼脂(其最适浓度为2.5‰),配制培养基的人工海水的最适盐度为25。经培养条件优化后,该菌胞外琼胶酶活力可达1021.79U/mL,较优化前提高8.82倍。实验首次对Tamlana sp.属的琼胶酶活性进行确定并优化其产酶条件,为构建琼胶酶高产工程菌株提供了基础,并可能为今后鲍养殖提供潜在的益生菌。 展开更多
关键词 琼胶酶 酶活力 培养基
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海洋细菌JMUAZ5琼胶酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性 被引量:7
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作者 赵蕊 倪辉 +3 位作者 洪清林 肖安风 蔡慧农 朱艳冰 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第1期61-68,共8页
【目的】分离海洋来源的琼胶酶产生菌,确定其分类地位,研究其所产琼胶酶粗酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性,为琼胶酶的进一步开发应用提供理论依据。【方法】利用以琼胶为唯一碳源的筛选培养基筛选分离产琼胶酶的菌株;采用16S r RN... 【目的】分离海洋来源的琼胶酶产生菌,确定其分类地位,研究其所产琼胶酶粗酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性,为琼胶酶的进一步开发应用提供理论依据。【方法】利用以琼胶为唯一碳源的筛选培养基筛选分离产琼胶酶的菌株;采用16S r RNA基因序列分析确定菌株的分类地位;研究菌株所产琼胶酶粗酶的酶学性质;通过测定酶解产物的还原能力和清除自由基ABTS·+的能力,分析酶解产物的抗氧化活性。【结果】分离到一株产胞外琼胶酶的菌株JMUAZ5,根据16S r RNA基因序列分析,该菌株归属于弧菌属(Vibrio sp.);菌株JMUAZ5琼胶酶粗酶具有良好的底物专一性;最适反应温度为40°C,在20°C和25°C条件下稳定;最适反应p H值为8.0,在p H 6.0~10.0范围内稳定;Ca^(2+)和Al^(3+)对酶活性具有强烈促进作用,而Zn^(2+)和Fe^(3+)对酶具有强烈抑制作用;琼胶酶粗酶对测试的抑制剂、去垢剂和变性剂均具有好的抗性;酶解产物琼胶低聚糖具有还原能力和清除ABTS·+的能力。【结论】海洋细菌弧菌属JMUAZ5可产胞外琼胶酶,酶解产物有一定的抗氧化活性,具有潜在应用价值。 展开更多
关键词 弧菌属 琼胶酶 酶学性质 抗氧化活性
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大肠杆菌表达的重组琼胶酶包涵体的纯化与复性条件研究 被引量:7
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作者 郭帅 陈梦仟 +2 位作者 朱新术 周晨妍 王燕 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期1197-1202,共6页
琼胶酶(agarase)是一类能够降解琼脂糖的糖苷水解酶,在保健食品、医药、化妆品等行业极具应用价值。本研究旨在纯化大肠杆菌BL21(DE3)plySs表达的以包涵体状态存在的重组琼胶酶rAga0917,并对纯化的包涵体蛋白的复性条件进行优化... 琼胶酶(agarase)是一类能够降解琼脂糖的糖苷水解酶,在保健食品、医药、化妆品等行业极具应用价值。本研究旨在纯化大肠杆菌BL21(DE3)plySs表达的以包涵体状态存在的重组琼胶酶rAga0917,并对纯化的包涵体蛋白的复性条件进行优化,以获得大量高活性的琼胶酶蛋白。用单因素实验,每次以单一复性条件为变量,用透析复性法探索了初始蛋白浓度、透析时间、温度、非离子去垢剂Triton X-100、甘油等对重组琼胶酶rAga0917包涵体复性的影响。实验结果显示,通过Ni^2+柱亲和层析,获得了纯度95%以上的蛋白。纯化蛋白浓度低于65μg/mL时,复性蛋白的酶活性与初始蛋白浓度成正比;4℃复性的蛋白,其琼胶酶活性明显高于25℃;随着透析时间的增长,复性效果越来越好;实验还同时发现复性液中的甘油能有效地辅助重组琼胶酶rAga0917复性。 展开更多
关键词 琼胶酶 包涵体 纯化 复性 酶活力
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一株海藻多糖降解菌的分离鉴定及产酶条件优化 被引量:4
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作者 朱大玲 唐啸龙 +4 位作者 张宝玉 杨振芳 王乐普 秦乐宁 张蕾 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期99-107,共9页
从大型褐藻藻体分离获得一株具有高效降解琼胶和褐藻胶能力的革兰氏阴性菌菌株ST-6。16S rDNA序列分析结果表明,该菌株与海绵假单胞菌的相似度达到99%,NJ法构建系统进化树也与海绵假单胞菌归为一类,鉴定为海绵假单胞菌Pseudomonas pacha... 从大型褐藻藻体分离获得一株具有高效降解琼胶和褐藻胶能力的革兰氏阴性菌菌株ST-6。16S rDNA序列分析结果表明,该菌株与海绵假单胞菌的相似度达到99%,NJ法构建系统进化树也与海绵假单胞菌归为一类,鉴定为海绵假单胞菌Pseudomonas pachastrellae ST-6。在2216E培养基、30℃培养条件下,海绵假单胞菌ST-6的生长曲线表明,接种10~48 h为菌株的指数生长期,48~72 h为生长稳定期。产酶结果表明,菌株ST-6在指数生长期时菌液的胞外琼胶酶相对酶活力较高,在接种48 h时,菌液的琼胶酶相对酶活力最高为249.15 U/m L。此外,发现菌株ST-6的琼胶酶和褐藻胶酶的分泌类型分别为非诱导型和诱导型。采用单因素分析法对其生长和产酶条件进行分析,结果表明,海绵假单胞菌ST-6最适生长条件为:温度25~35℃,33值5~9;最适产琼胶酶条件为:温度30℃,33值为7,琼胶浓度0.3%。最适产褐藻胶酶条件为:温度35℃,33值为9。在温度30℃、339和褐藻酸钠浓度0.15%的培养条件下,海绵假单胞菌ST-6获得最高胞外褐藻胶酶相对酶活力为135.54 U/m L。 展开更多
关键词 海绵假单胞菌 琼胶酶酶活 褐藻胶酶酶活 3 5-二硝基水杨酸比色法 产酶条件优化
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龙须菜贮藏过程中的琼胶品质变化研究
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作者 贺紫微 王迪 +4 位作者 杨贤庆 陈胜军 赵永强 戚勃 相欢 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第17期251-258,共8页
为探究不同水分含量(12%、25%、35%、45%、55%)的龙须菜以及龙须菜在不同贮藏温度(10、20、30、40、50℃)条件下的品质变化规律,该研究对龙须菜的琼胶提取得率、凝胶强度、藻体还原糖含量、琼胶酶活性和菌落总数等指标的变化进行了研究... 为探究不同水分含量(12%、25%、35%、45%、55%)的龙须菜以及龙须菜在不同贮藏温度(10、20、30、40、50℃)条件下的品质变化规律,该研究对龙须菜的琼胶提取得率、凝胶强度、藻体还原糖含量、琼胶酶活性和菌落总数等指标的变化进行了研究。结果表明,贮藏7 d内,龙须菜琼胶提取得率和凝胶强度随着藻体水分含量以及贮藏温度的升高而降低,且随着贮藏时间的延长,龙须菜琼胶提取得率和凝胶强度也呈现下降趋势。低水分含量和低温贮藏条件下的龙须菜能够保持较好的加工品质,微生物的生长繁殖相对缓慢,藻体还原糖含量较少,琼胶酶活性更低且琼胶得率较高,凝胶强度也更稳定。该研究为合理晾晒、贮藏龙须菜及保障琼胶品质提供了数据支撑和理论指导,对高值化利用龙须菜,推动琼胶产业的发展具有重要意义。 展开更多
关键词 琼胶 贮藏 还原糖 琼胶酶活性 凝胶强度
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贮藏条件对江蓠琼胶酶活性和琼胶凝胶强度的影响 被引量:3
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作者 张曦文 伍菱 +5 位作者 童风景 姜泽东 朱艳冰 肖安风 倪辉 李清彪 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期880-886,共7页
通过调控保鲜盒中湿度获得水分为10%、14%、40%、60%的江蓠样品,然后将各组江蓠样品密封保鲜盒分别置于5、15、25℃和35℃恒温培养箱中,模拟贮藏温度和湿度环境,连续处理4 d,每日测定处理后江蓠中琼胶酶活性、还原糖含量、琼胶提取得率... 通过调控保鲜盒中湿度获得水分为10%、14%、40%、60%的江蓠样品,然后将各组江蓠样品密封保鲜盒分别置于5、15、25℃和35℃恒温培养箱中,模拟贮藏温度和湿度环境,连续处理4 d,每日测定处理后江蓠中琼胶酶活性、还原糖含量、琼胶提取得率、琼胶凝胶强度等指标,连续测定4 d、每组3次。试验结果表明,环境温度和湿度的变化对江蓠琼胶酶活性和所提取的琼胶凝胶强度具有重要的影响,而湿度是最关键的影响因素,江蓠琼胶酶活性和琼胶的凝胶强度随着湿度的上升呈升高趋势。在贮藏开始1 d和2 d后,在江蓠水分含量为10%时提取琼胶的凝胶强度普遍高于水分含量为60%的江蓠所提取琼胶的凝胶强度,其胶凝胶强度最高达到604.2±136.7。 展开更多
关键词 江蓠 琼胶 还原糖 琼胶酶活性 凝胶强度
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1株高产琼脂糖酶海洋弧菌的分离与酶活性的测定 被引量:2
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作者 张静雅 刘宇鹏 +3 位作者 吴超 邓益琴 尹浩贤 赵哲 《热带生物学报》 2018年第2期142-146,共5页
琼脂糖酶是一类糖苷水解酶,能够催化琼脂多糖分解为低聚糖,在食品工业、化妆品及生物医学领域等具有重要的应用价值。笔者从华南沿海海水样品中分离出1株海洋弧菌HN897,选用以琼脂为唯一碳源的培养基并通过透明圈筛选法筛选,确定此海洋... 琼脂糖酶是一类糖苷水解酶,能够催化琼脂多糖分解为低聚糖,在食品工业、化妆品及生物医学领域等具有重要的应用价值。笔者从华南沿海海水样品中分离出1株海洋弧菌HN897,选用以琼脂为唯一碳源的培养基并通过透明圈筛选法筛选,确定此海洋弧菌为1株具有琼脂酶高产能力的细菌。16S r RNA基因序列分析结果显示,该菌株属于弧菌属Vibrio astriarenae。通过DNS-还原糖法对其在2种TSB和LB2培养液上清中的酶活性进行测定,测得粗酶液酶活力分别为0.366和0.413 U·m L-1,说明琼脂糖酶具有潜在开发利用价值。本研究结果可为后续开发研究及应用奠定基础。 展开更多
关键词 海洋弧菌 琼脂糖酶 酶活力
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Agarivorans albus RZW1-1产琼胶酶的发酵条件优化 被引量:2
9
作者 刘婷威 朱新术 +4 位作者 陈梦仟 张鹏 郭帅 孙朋洋 王燕 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期4372-4379,共8页
为了提高菌株Agarivorans albus RZW1-1的产琼胶酶能力,本研究通过单因素实验探究碳源、氮源、海盐浓度、琼脂浓度、初始pH、装液量、培养时间、培养温度等因素对产酶的影响,得到该菌株的最佳发酵条件。在单因素实验的基础之上,运用正... 为了提高菌株Agarivorans albus RZW1-1的产琼胶酶能力,本研究通过单因素实验探究碳源、氮源、海盐浓度、琼脂浓度、初始pH、装液量、培养时间、培养温度等因素对产酶的影响,得到该菌株的最佳发酵条件。在单因素实验的基础之上,运用正交试验的方法,得到菌株RZW1-1产酶最高的培养基组分。综合单因素实验和正交设计,最终确定了最佳产酶条件为:葡萄糖0.2 g/L、酵母粉9 g/L、海盐浓度4%、琼脂粉浓度0.1%,在装液量25 m L (250 m L三角瓶)、初始pH7.0、28℃、130 r/min条件下培养48 h酶活力达到最高为23.020 U/mL,较基础培养基提高了2.01倍。 展开更多
关键词 琼胶酶 发酵条件优化 单因素实验 正交试验 酶活力
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黄海日照海域部分可培养细菌的分离、初步鉴定及产琼胶酶细菌的筛选 被引量:1
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作者 刘昂 王爽 +2 位作者 杜峰 薛庆节 李秀真 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期2240-2250,共11页
海洋细菌在海洋的物质与能量循环中起着非常重要的作用。为了适应复杂多变的海洋环境,海洋细菌在物种和基因方面表现出极高的丰富度。【目的】对中国黄海日照海域部分可培养细菌进行分离、初步鉴定,同时筛选产琼胶酶菌株。【方法】对从... 海洋细菌在海洋的物质与能量循环中起着非常重要的作用。为了适应复杂多变的海洋环境,海洋细菌在物种和基因方面表现出极高的丰富度。【目的】对中国黄海日照海域部分可培养细菌进行分离、初步鉴定,同时筛选产琼胶酶菌株。【方法】对从日照海域河流入海口和潮间带沙样和海水中分离到的73株细菌进行了16S rRNA基因序列测定,并进行序列同源性分析。同时检测了这些菌株对琼脂的降解能力。【结果】结果显示,分离到的73株细菌属于4个门、13个科、34个属。18株细菌可能是新分类单元,其中16株为潜在新种,2株为可能的新属。73株细菌中,5株菌具有降解琼脂的能力,最高的琼胶酶活可达到2.17±0.04 U/mL,其中4株嗜琼胶属的细菌降解琼脂糖的产物均为新琼四糖。【结论】本研究丰富了人们对黄海海域可培养细菌多样性的理解,为新物种和新酶的研究提供了基础,并为琼胶酶的提取提供了高产菌株。 展开更多
关键词 可培养细菌 多样性 潜在新种 琼胶酶活性
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大肠杆菌基因工程菌诱导表达重组琼胶酶rAga0917的条件优化
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作者 陈梦仟 郭帅 +2 位作者 孙朋洋 张鹏 王燕 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期3434-3439,共6页
琼胶酶可催化长链琼脂糖分子内糖苷键水解产生具有生物活性的琼胶寡糖。琼胶酶具有重要的科研和应用价值,从而对琼胶酶的研究也日益增多。为获得基因工程菌株BL21(DE3)ply Ss-p ET28a(+)-Aga0917重组琼胶酶r Aga0917的高效表达条件... 琼胶酶可催化长链琼脂糖分子内糖苷键水解产生具有生物活性的琼胶寡糖。琼胶酶具有重要的科研和应用价值,从而对琼胶酶的研究也日益增多。为获得基因工程菌株BL21(DE3)ply Ss-p ET28a(+)-Aga0917重组琼胶酶r Aga0917的高效表达条件,本研究通过单因素实验及正交设计探索了种龄、诱导剂浓度、诱导时机、诱导温度和诱导时间对基因工程菌株表达的r Aga0917酶活力的影响。单因素实验结果显示,种龄6 h、诱导剂终浓度0.05 mmol/L、诱导时机4 h、诱导温度25℃、诱导时间16 h时酶活力最高;正交设计结果显示,r Aga0917的最优表达条件组合为:种龄6 h、诱导时机4 h、诱导剂终浓度0.1 mmol/L、诱导温度16℃。对正交设计结果的直观分析和方差分析结果均表明,四个因素对异源表达目的蛋白琼胶酶酶活力影响的顺序为:诱导时机〉诱导温度〉种龄〉诱导剂终浓度。 展开更多
关键词 琼胶酶 表达条件优化 单因素实验 正交设计 酶活力
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产琼胶酶菌株Pseudoalteromonas citrea的发酵条件优化
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作者 刘振华 王燕 +1 位作者 周晨妍 孙午炎 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期2411-2416,共6页
琼胶寡糖因具有多种生理功能而成为海洋生物研究的一大热门。采用微生物分泌的琼胶水解酶水解琼胶制备琼胶寡糖由于条件温和、能耗低和专一性强,是目前最理想最环保的琼胶寡糖生产技术。本研究旨在对产琼胶酶菌株Pseudoalteromonas cit... 琼胶寡糖因具有多种生理功能而成为海洋生物研究的一大热门。采用微生物分泌的琼胶水解酶水解琼胶制备琼胶寡糖由于条件温和、能耗低和专一性强,是目前最理想最环保的琼胶寡糖生产技术。本研究旨在对产琼胶酶菌株Pseudoalteromonas citrea的发酵条件进行优化,以提高产酶能力,保证最佳酶活性。采用单因素实验,每次以单一发酵条件为变量,培养一段时间后用DNS法测定酶活力值,逐一找出各个最优发酵条件。本研究对8个因素进行了优化,得出的最佳发酵条件分别为:时间24 h、温度20℃、装液量10%、海盐浓度3%、p H值为10、琼脂浓度0.2%、碳源为琼脂、氮源为硝酸钠。 展开更多
关键词 琼胶酶 发酵条件优化 培养基 酶活力
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琼胶酶产生菌Stenotrophomonas sp. Z705的发酵条件优化 被引量:2
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作者 缪伏荣 董志岩 刘景 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2014年第10期152-158,165,共8页
【目的】研究从腐烂紫菜中分离的Stenotrophomonas sp.Z705菌株产琼胶酶的最佳发酵条件和培养基组成。【方法】采用单因素试验,分析装液量、摇床转速、发酵时间、初始pH、发酵温度、盐度等因素对Stenotrophomonas sp.Z705菌株发酵产琼... 【目的】研究从腐烂紫菜中分离的Stenotrophomonas sp.Z705菌株产琼胶酶的最佳发酵条件和培养基组成。【方法】采用单因素试验,分析装液量、摇床转速、发酵时间、初始pH、发酵温度、盐度等因素对Stenotrophomonas sp.Z705菌株发酵产琼胶酶活力的影响,从中筛选出该菌株的最佳发酵条件。在此基础上,采用单因素试验和L9(33)正交试验,分析不同氮源和碳源对Stenotrophomonas sp.Z705菌株发酵产琼胶酶活力的影响,从中筛选出该菌株最佳培养基的组成。【结果】Stenotrophomonas sp.Z705菌株发酵产琼胶酶的最佳条件为:装液量25mL、摇床转速200r/min、发酵时间23h、初始pH 7.2、发酵温度28℃、盐度3.4%;最佳培养基组成为:牛肉膏5.0g/L、酵母浸膏1.50g/L、琼胶0.30g/L。【结论】在最佳组成培养基和发酵条件下,该菌株产琼胶酶活力稳定在87.1U/mL左右,比优化前提高了60.4%。 展开更多
关键词 寡养单胞菌属 琼胶酶产生菌 正交试验 酶活力
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