荷斯坦阉牛瘤胃液中阿魏酸酯酶和乙酰酯酶的酶学特性研究 被引量：9

1

作者 杨红建 岳群 曹阳春 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期73-78,共6页

为研究瘤胃液中阿魏酸酯酶和乙酰酯酶的酶学特性,自安装永久瘤胃瘘管的成年荷斯坦阉牛瘤胃中采集瘤胃食糜液,4℃1 000g离心10min制备成粗酶液,测定了粗酶液中阿魏酸酯酶和乙酰酯酶活性及其酶促反应动力学参数。结果表明,瘤胃液中阿魏酸... 为研究瘤胃液中阿魏酸酯酶和乙酰酯酶的酶学特性,自安装永久瘤胃瘘管的成年荷斯坦阉牛瘤胃中采集瘤胃食糜液,4℃1 000g离心10min制备成粗酶液,测定了粗酶液中阿魏酸酯酶和乙酰酯酶活性及其酶促反应动力学参数。结果表明,瘤胃液中阿魏酸酯酶酶促反应最适pH为9.0,最适温度为40～50℃;用阿魏酸甲酯作为为酶促反应标准底物,测得米氏常数(Km)为0.76mmol/L,最大反应速度(Vmax)为5.43mU;乙酰酯酶酶促反应最适pH为8.0,最适反应温度为50℃。用对-硝基苯乙酰酯作为标准底物,测得Km为0.64mmol/L,Vmax为91.00mU。研究发现Fe2+可以促进阿魏酸酯酶酶促反应,而Cu2+等金属离子可以抑制阿魏酸酯酶酶活性;Mg2+、K+、Co2+、Ca2+和Mn2+则可促进乙酰酯酶酶促反应。尽管瘤胃内环境并不能为2种酯酶发挥最大酶效提供最适温度和pH条件,相比较而言,阿魏酸酯酶在瘤胃液中稳定性更优于乙酰酯酶。 展开更多

关键词 牛 瘤胃液 阿魏酸酯酶 乙酰酯酶 酶学特性

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新型甘露聚糖酶-乙酰酯酶双功能酶的功能和结构域协同研究 被引量：2

2

作者 刘亮 刘佳文 +3 位作者 王若楠 张瑜 李宝珍 袁红莉 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期2690-2704,共15页

【目的】分析鉴定高效木质纤维素降解菌群EMSD5来源的新型甘露聚糖酶-乙酰酯酶双功能酶44884,解析催化域间的协同关系,以及碳水化合物结合模块(CBM)对催化域特性的影响,拓展对该类双功能酶的认识,为甘露聚糖酶的升级改造和应用提供依据... 【目的】分析鉴定高效木质纤维素降解菌群EMSD5来源的新型甘露聚糖酶-乙酰酯酶双功能酶44884,解析催化域间的协同关系,以及碳水化合物结合模块(CBM)对催化域特性的影响,拓展对该类双功能酶的认识,为甘露聚糖酶的升级改造和应用提供依据。【方法】通过大肠杆菌异源表达甘露聚糖酶-乙酰酯酶双功能酶44884,并构建截短和定点突变的突变体,利用TLC和DNS法比较野生型和突变体的酶学性质。【结果】成功对44884全长和突变蛋白进行克隆表达,并发现44884中2个催化域能够彼此促进各自产物的释放,而且以双功能酶形式存在时,这种促进效果更为明显。44884中的2个CBM65均有甘露聚糖和结晶纤维素结合活性,且CBM65的存在并不改变甘露聚糖酶和乙酰酯酶的最适反应条件和水解模式。虽然CBM65显著降低了2个催化域的热稳定性,但水解天然底物时,2个CBM65对各自临近催化域的水解具有明显的促进效果。【结论】本研究首次发现并探究了新型甘露聚糖酶和乙酰酯酶形成的双功能酶44884的功能,解析了催化域之间高效的协同效应,以及新型甘露聚糖结合模块CBM65对双功能酶水解的促进作用。 展开更多

关键词 双功能酶 甘露聚糖酶 乙酰酯酶 结构域协同 碳水化合物结合模块

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深海来源微生物乙酰酯酶的酶学性质鉴定及拆分制备D-乳酸甲酯 被引量：2

3

作者 黄锦龙 张继福 +4 位作者 胡洁莹 关见留 张云 孙爱君 胡云峰 《热带海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期38-44,共7页

D-乳酸及其酯是重要的手性药物中间体和手性化工产品。从南海深海芽孢杆菌Bacillus sp.SCSIO15029克隆到一个乙酰酯酶基因bae02030,表达并鉴定该酶Bae02030的酶学性质。该酯酶的最适p H和最适温度分别为8.5和35℃,其对多种有机溶剂和表... D-乳酸及其酯是重要的手性药物中间体和手性化工产品。从南海深海芽孢杆菌Bacillus sp.SCSIO15029克隆到一个乙酰酯酶基因bae02030,表达并鉴定该酶Bae02030的酶学性质。该酯酶的最适p H和最适温度分别为8.5和35℃,其对多种有机溶剂和表面活性剂具有较好的耐受性。乙酰酯酶Bae02030能够通过水解拆分消旋乳酸甲酯来制备光学纯的D-乳酸甲酯。通过对拆分反应进行优化,添加体积分数为60%的正庚烷能够改善乙酰酯酶Bae02030的光学选择性,所制备的D-乳酸甲酯的对映体过量值(e.e.s)超过99%,转化率(c)为56%。深海微生物来源的乙酰酯酶Bae02030作为生物催化剂在工业上制备手性药物中间体具有较好的应用潜力。 展开更多

关键词 深海微生物 乙酰酯酶 生物催化 D-乳酸甲酯 手性拆分

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厌氧真菌菌系乙酰酯酶的特性研究

4

作者 杨舒文 赵蓓 +2 位作者 迟翔 李金阳 陈玉香 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2013年第5期58-61,共4页

利用厌氧培养技术,采用产酶培养基,培养课题组自行构建的一组厌氧真菌菌系,使之产乙酰酯酶。采用硫酸铵分级沉淀、透析袋透析、DEAE-纤维素离子交换柱层析、Sephadex G-75凝胶过滤柱层析,分离纯化所得到乙酰酯酶,研究其酶学性质。酶活... 利用厌氧培养技术,采用产酶培养基,培养课题组自行构建的一组厌氧真菌菌系,使之产乙酰酯酶。采用硫酸铵分级沉淀、透析袋透析、DEAE-纤维素离子交换柱层析、Sephadex G-75凝胶过滤柱层析,分离纯化所得到乙酰酯酶,研究其酶学性质。酶活力动态分析表明,乙酰酯酶在产酶培养基上,培养至第3天酶活力达到最高。乙酰酯酶最适温度为41℃,最适pH为9.0,Mg2+、K+、Ca2+对酶有一定的激活作用,Fe3+对酶有很强的抑制作用。该厌氧真菌菌系所产的乙酰酯酶,对于发酵木质纤维素类物质具有潜在应用价值。 展开更多

关键词 厌氧真菌菌系 乙酰酯酶 酶学性质

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果胶乙酰酯酶基因AtPae7参与拟南芥对大豆疫霉菌的非寄主抗病性 被引量：2

5

作者 杨志远 王钢 +3 位作者 曹华 蓝星杰 尹军良 单卫星 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1716-1722,共7页

利用反向遗传学方法,鉴定拟南芥(Arabidopsis thaliana)对大豆疫霉菌(Phytophthora sojae)非寄主抗病性相关的基因。通过分子生物学和生物信息学方法,鉴定和分析T-DNA插入拟南芥突变体离体叶片对大豆疫霉菌的非寄主抗病性。结果表明:4... 利用反向遗传学方法,鉴定拟南芥(Arabidopsis thaliana)对大豆疫霉菌(Phytophthora sojae)非寄主抗病性相关的基因。通过分子生物学和生物信息学方法,鉴定和分析T-DNA插入拟南芥突变体离体叶片对大豆疫霉菌的非寄主抗病性。结果表明:4个果胶乙酰酯酶基因AtPae7(pectin acetyl esterase 7)突变体株系中的3个对大豆疫霉菌的抗性减弱,表现为感病;qRT-PCR检测表明突变体中AtPae7的转录水平下降;生物信息学预测PAE7蛋白的N端有23个氨基酸信号肽序列,确定其为胞外分泌蛋白。说明果胶乙酰酯酶基因AtPae7参与拟南芥对大豆疫霉菌的非寄主抗病性。 展开更多

关键词 卵菌 T-DNA插入突变体 非寄主互作 果胶乙酰酯酶

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大肠杆菌头孢菌素C乙酰酯酶的敲除对头孢菌素C酰化酶应用的影响 被引量：1

6

作者 赵强 刘洋 +1 位作者 周晶辉 许岗 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期96-103,共8页

7-氨基头孢烷酸(7-ACA)是合成头孢菌素类抗生素的重要中间体,工业上通常采用头孢菌素C酰化酶一步水解头孢菌素C制备,但在该反应产物中存在一个主要杂质3-去乙酰基-7-氨基头孢烷酸(D-7-ACA),该杂质的产生是由大肠杆菌中内源基因aes编码... 7-氨基头孢烷酸(7-ACA)是合成头孢菌素类抗生素的重要中间体,工业上通常采用头孢菌素C酰化酶一步水解头孢菌素C制备,但在该反应产物中存在一个主要杂质3-去乙酰基-7-氨基头孢烷酸(D-7-ACA),该杂质的产生是由大肠杆菌中内源基因aes编码的头孢菌素C乙酰酯酶水解头孢菌素C或7-ACA引起的。为了防止D-7-ACA的形成,获得高品质7-ACA,减少下游精制成本,采用大肠杆菌双质粒pTargetF/pCas敲除系统,设计相应的gRNA以及同源修复供体DNA,对大肠杆菌BL21(DE3)中的aes进行敲除,从而获得了Aes缺陷型菌株BL21(DE3)△aes。将携带头孢菌素C酰化酶(CPCacy)表达质粒pET30-CPCacy的重组工程菌BL21(DE3)/pET30-CPCacy和BL21(DE3)△aes/pET30-CPCacy所诱导表达的孢菌素C酰化酶细胞破碎上清液进行7-ACA的生产对比试验,结果表明,敲除菌BL21(DE3)△aes/pET30-CPCacy对头孢菌素C的转化率为98.8%而原始菌为98.5%,同时7-ACA的产率为80.7%而原始菌株为80.2%,杂质D-7-ACA的产率仅为0.1%,为原始菌的25%,这些工作为进一步生产高品质的7-ACA奠定了基础。 展开更多

关键词 3-去乙酰基-7-氨基头孢烷酸(D-7-ACA) 孢菌素C酰化酶(CPCacy) 头孢菌素C乙酰酯酶 pTargetF/pCas

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大肠杆菌乙酰酯酶(AES)的酶学性质

7

作者 李筱筱 刘炜 +1 位作者 咸漠 王卫 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期1011-1014,共4页

以乙酸香叶酯为底物,对大肠杆菌乙酰酯酶(Acetyl esterase,AES)的酶学性质进行解析,实现将乙酸香叶酯生物转化为香叶醇.结果显示:大肠杆菌AES酶的最佳反应p H范围为6.0-7.5;最适反应温度为30℃;最佳催化时间为2 h;Mg^(2+)、Mn^(2+)、Co^... 以乙酸香叶酯为底物,对大肠杆菌乙酰酯酶(Acetyl esterase,AES)的酶学性质进行解析,实现将乙酸香叶酯生物转化为香叶醇.结果显示:大肠杆菌AES酶的最佳反应p H范围为6.0-7.5;最适反应温度为30℃;最佳催化时间为2 h;Mg^(2+)、Mn^(2+)、Co^(2+)对酶活没有太大影响,而Cu^(2+)、Zn^(2+)明显抑制酶的活性.对AES的动力学研究可知,其米氏常数Km、最大反应常数Vm分别为2.88 mmol/L、1.87 mmol/L.该酶同样可水解乙酸松油酯、乙酸薄荷酯、乙酸香茅酯,分别产生松油醇、薄荷醇和香茅醇.本研究得出了大肠杆菌乙酰酯酶的最适反应条件,可为后期香叶醇的生物合成优化和产量提高以及其他萜醇类化合物的生物合成提供参考依据. 展开更多

关键词 香叶醇 乙酰酯酶(AES) 大肠杆菌 生物合成

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利用可视化CRISPR/Cas9系统获得拟南芥Cas9-free突变体

8

作者 王媛媛 金天麟 +2 位作者 刘小芳 蒋梦婷 梁大成 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2021年第11期3605-3611,共7页

CRISPR/Cas9是实现基因精准突变的有效工具而被广泛应用到功能基因组学研究中。通常需要在已编辑后代的基因组中剔除此编辑体系,以防Cas9进一步编辑导致复杂的脱靶效应。本研究利用可视化的CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除拟南芥AtPAE4基因... CRISPR/Cas9是实现基因精准突变的有效工具而被广泛应用到功能基因组学研究中。通常需要在已编辑后代的基因组中剔除此编辑体系,以防Cas9进一步编辑导致复杂的脱靶效应。本研究利用可视化的CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除拟南芥AtPAE4基因,测序结果显示AtPAE4在第一个外显子的第478号碱基前面插入了一个碱基A,导致氨基酸的移码突变而提前终止。利用种皮特异启动子控制表达的m Cherry荧光蛋白,可以在T_(1)代纯合突变体种子群体中分别鉴定出发荧光和不发荧光的种子家系,抗性筛选及分子检测发现不发荧光家系为Cas9-free的AtPAE4突变家系。对AtPAE4突变体的根、茎、叶进行qPCR分析发现AtPAE4在根、茎、叶上的转录水平均显著下调。这些结果表明可视化CRISPR/Cas9系统在基因编辑后代中可快速鉴定到Cas9-free突变体植株,这有助于为进一步研究靶基因功能而获得背景清晰的编辑材料。 展开更多

关键词 果胶乙酰脂酶(PAE) AtPAE4 CRISPR/Cas9 qPCR

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寄主对豆野螟的药剂敏感性和体内解毒酶活性的影响 被引量：13

9

作者 潘亚飞 孟建玉 +2 位作者 张小亚 周兴苗 雷朝亮 《昆虫知识》 CSCD 北大核心 2006年第4期496-500,共5页

比较取食不同寄主植物的豆野螟MarucatestulalisGeyer幼虫对3种药剂敏感性的差异,及其体内4种解毒酶活性之间的差异。结果表明:取食不同寄主植物的豆野螟对高效顺反氯氰菊酯和灭多威的敏感性差异显著,豇豆>四季豆>扁豆;对茚虫威... 比较取食不同寄主植物的豆野螟MarucatestulalisGeyer幼虫对3种药剂敏感性的差异,及其体内4种解毒酶活性之间的差异。结果表明:取食不同寄主植物的豆野螟对高效顺反氯氰菊酯和灭多威的敏感性差异显著,豇豆>四季豆>扁豆;对茚虫威的敏感性差异不显著。取食不同寄主植物的豆野螟体内4种酶活性都发生了变化,乙酰胆碱酯酶(AChE)羧酸酯酶(CarE)和多功能氧化酶(MFO)活性之间存在显著差异,豇豆>四季豆>扁豆;但谷胱甘肽-S转移酶(GST)活性之间不具有显著差异。推测:取食扁豆的豆野螟体内产生对高效顺反氯氰菊酯和灭多威具有一定解毒作用的物质;而取食豇豆的豆野螟产生的某种物质对茚虫威具有一定的解毒作用,4种酶在其对茚虫威的解毒过程中起一定的作用。 展开更多

关键词 豆野螟 寄主植物 药剂敏感性 乙酰胆碱酯酶 谷胱甘肽-S转移酶 羧酸酯酶 多功能氧化酶

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乙酰木聚糖酯酶研究进展 被引量：2

10

作者 吴红丽 薛勇 +2 位作者 刘健 甘礼惠 龙敏南 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期102-110,共9页

半纤维素是一类丰富可再生而又亟待开发利用的生物质资源,将半纤维素降解为糖类进而生产木糖醇及其它化学品是利用生物质资源的关键一步。乙酰木聚糖酯酶是降解半纤维素的一个重要酶,它能够水解乙酰化木聚糖中的木糖残基上的2位和3位的... 半纤维素是一类丰富可再生而又亟待开发利用的生物质资源,将半纤维素降解为糖类进而生产木糖醇及其它化学品是利用生物质资源的关键一步。乙酰木聚糖酯酶是降解半纤维素的一个重要酶,它能够水解乙酰化木聚糖中的木糖残基上的2位和3位的O乙酰基,在工业、农业及食品业具有广阔的应用前景。综述了乙酰木聚糖酯酶的分类、酶学性质、催化机制、基因克隆和协同酶解等方面的研究进展,同时对该研究进行了展望。 展开更多

关键词 乙酰木聚糖酯酶 酶学性质 催化机制 协同酶解

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枯草芽胞杆菌乙酰木聚糖酯酶的鉴定及诱导剂对酯酶活力的影响 被引量：2

11

作者 田倩倩 宋萍 +3 位作者 陈晨 林明 江凌 李霜 《生物加工过程》 CAS CSCD 2013年第1期60-64,共5页

以枯草芽胞杆菌CICC 20034为研究对象,对其分泌的高相对分子质量酯酶进行鉴定,并考察诱导剂对其活力的影响。结果表明:枯草芽胞杆菌CICC 20034可分泌一种相对分子质量为1.07×105的酯酶,经蛋白质质谱鉴定为乙酰木聚糖酯酶,单体分相... 以枯草芽胞杆菌CICC 20034为研究对象,对其分泌的高相对分子质量酯酶进行鉴定,并考察诱导剂对其活力的影响。结果表明:枯草芽胞杆菌CICC 20034可分泌一种相对分子质量为1.07×105的酯酶,经蛋白质质谱鉴定为乙酰木聚糖酯酶,单体分相对子质量为3.56×104。在发酵培养基中添加乙酸乙酯和木糖可以显著的促进乙酰木聚糖酯酶的活力,而三丁酸甘油酯和大分子诱导剂——木聚糖、玉米芯粉和壳聚糖对酯酶的活力几乎无促进作用。枯草芽胞杆菌CICC 20034以乙酸乙酯为诱导剂时最高比酶活为0.62 U/mL,为已知报道的野生细菌乙酰木聚糖酯酶的最高酯酶活力。 展开更多

关键词 乙酰木聚糖酯酶 枯草芽胞杆菌 诱导剂

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植物根际芽胞杆菌菌种资源采集及其具有过水解催化活性水解酶基因的克隆 被引量：1

12

作者 王倩 李欢 +5 位作者 郑琳 贾文敬 黄建忠 李欣 董思圳 舒正玉 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期76-87,共12页

[背景]芽胞杆菌源枯草杆菌蛋白酶(subtilisin carlsberg)、乙酰基木聚糖酯酶(acetyl xylan esterase)和头孢菌素乙酰水解酶(cephalosporin acetyl hydrolase)具有较高的过水解催化活性,有商业开发价值。[目的]挖掘芽胞杆菌菌株中具有过... [背景]芽胞杆菌源枯草杆菌蛋白酶(subtilisin carlsberg)、乙酰基木聚糖酯酶(acetyl xylan esterase)和头孢菌素乙酰水解酶(cephalosporin acetyl hydrolase)具有较高的过水解催化活性,有商业开发价值。[目的]挖掘芽胞杆菌菌株中具有过水解酶催化活性的水解酶蛋白基因,为后续制备过水解酶及酶法合成过氧乙酸奠定基础。[方法]利用定向筛选培养基,从植物根际及纳豆产品中筛选产蛋白酶芽胞杆菌候选菌株,并利用RFLP及16S rRNA基因对其进行鉴定。从蛋白酶高产芽胞杆菌菌株中克隆枯草杆菌蛋白酶、乙酰木聚糖醋酶和头孢菌素乙酰水解酶的全长基因。[结果]从植物根际土壤及纳豆产品中共分离到85个候选菌株,RFLP及16S rRNA基因鉴定结果表明候选菌株均为芽胞杆菌,分别属于Bacillus subtilis、Bacillus cereus、Bacillus pumilus和Bacillus megaterium四个类群。从B.subtilis NSYT-3克隆的枯草杆菌蛋白酶基因编码的多肽链全长381个氨基酸,从B.pumilus OSLJ-3克隆得到的乙酰基木聚糖酯酶基因编码的多肽链全长320个氨基酸,从B.subtilis NSYT-3克隆的头孢菌素乙酰水解酶基因编码的多肽链全长318个氨基酸,3D结构模拟表明这3个酶蛋白均具有α/β水解酶折叠家族蛋白结构特点。[结论]芽胞杆菌源具过水解催化活性水解酶基因的克隆,为后续开发酶法合成过氧乙酸工艺奠定了基础。 展开更多

关键词 根际细菌 芽胞杆菌 过水解催化活性 枯草杆菌蛋白酶 乙酰木聚糖酯酶 头孢菌素乙酰水解酶

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灰色链霉菌中乙酰木聚糖酯酶基因的克隆、表达及酶学性质研究 被引量：1

13

作者 刘伟娜 梁迪 +4 位作者 王晓宇 玉王宁 厚凌宇 金一 谢响明 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期153-159,共7页

根据Gen Bank数据库中已报道的灰色链霉菌(Streptomyces griseus)全基因组序列,分析得到假定的乙酰木聚糖酯酶基因序列并设计引物;利用分子克隆的方法得到该菌株基因组中乙酰木聚糖酯酶基因,并构建原核表达载体p ET28a-Sgraxe,经IPTG诱... 根据Gen Bank数据库中已报道的灰色链霉菌(Streptomyces griseus)全基因组序列,分析得到假定的乙酰木聚糖酯酶基因序列并设计引物;利用分子克隆的方法得到该菌株基因组中乙酰木聚糖酯酶基因,并构建原核表达载体p ET28a-Sgraxe,经IPTG诱导表达重组Sgr Axe,Ni-NTA亲和层析法纯化该蛋白。结果显示,克隆得到乙酰木聚糖酯酶基因axe,其序列全长1 008 bp,编码336个氨基酸。SDS-PAGE检测带有p ET28a-Sgraxe转化菌株诱导表达产物相对分子量约为37 k D,与理论值相符。纯化的重组Sgr Axe酶学性质表明,该酶最适反应温度为50℃,最适p H8.0,热稳定性较强,p H作用范围广;金属离子对酶均表现为抑制作用,尤其是Zn2+严重抑制酶活力;重组酶特征的分析揭示了其在工业中潜在的应用价值。 展开更多

关键词 灰色链霉菌 乙酰木聚糖酯酶 原核表达 纯化 酶学性质

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乙酰木聚糖酯酶基因的克隆、表达及酶学性质研究 被引量：1

14

作者 朱天地 殷欣 +2 位作者 邬敏辰 何瑶 唐存多 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1084-1089,共6页

乙酰木聚糖酯酶可以水解乙酰化木聚糖的O-乙酰基,消除木聚糖酶水解木聚糖时该基团产生的空间阻碍作用。以宇佐美曲霉（Aspergillus usamii）E001菌株的总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增了乙酰木聚糖酯酶成熟肽的编码基因（Auaxe）,并构... 乙酰木聚糖酯酶可以水解乙酰化木聚糖的O-乙酰基,消除木聚糖酶水解木聚糖时该基团产生的空间阻碍作用。以宇佐美曲霉（Aspergillus usamii）E001菌株的总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增了乙酰木聚糖酯酶成熟肽的编码基因（Auaxe）,并构建了重组表达质粒p PIC9K^M-Auaxe,SalⅠ线性化后电转入毕赤酵母（Pichia pastoris）GS115中,经G418抗性筛选及甲醇诱导表达72 h,获得了重组乙酰木聚糖酯酶（reAuAxe）,其酶活性为35.6 U/m L。发酵液经纯化获得电泳纯reAuAxe,其表观相对分子质量约为3.4×10^4,比酶活性为390.5 U/mg。纯化后reAuAxe的最适反应温度为50℃,在45℃及以下稳定;其最适反应pH为6.0,在pH 4.5-7.0范围内稳定;所测的多数金属离子及EDTA对其酶活性影响不大。 展开更多

关键词 宇佐美曲霉 乙酰木聚糖酯酶 基因克隆 表达 酶学性质

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白色链霉菌乙酰木聚糖酯酶基因的克隆及生物信息学分析 被引量：1

15

作者 汪文静 吴慧君 +4 位作者 王晓宇 杨颖 厚凌宇 郑瑞珠 谢响明 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期122-128,共7页

乙酰木聚糖酯酶可以水解乙酰化木聚糖中的O-乙酰取代基团,消除该基团对木聚糖酶水解的空间阻碍作用,增强木聚糖酶对木聚糖的亲和力和降解能力。以白色链霉菌基因组为模板,利用简并PCR和TAIL-PCR扩增获得长约741 bp阅读框片段,编码247个... 乙酰木聚糖酯酶可以水解乙酰化木聚糖中的O-乙酰取代基团,消除该基团对木聚糖酶水解的空间阻碍作用,增强木聚糖酶对木聚糖的亲和力和降解能力。以白色链霉菌基因组为模板,利用简并PCR和TAIL-PCR扩增获得长约741 bp阅读框片段,编码247个氨基酸。生物信息学分析表明,该多肽片段具有AXE1家族蛋白保守区域;与已知的乙酰木聚糖酯酶蛋白C端区相比,相似性较高,二级和三级结构空间排布特点极为相似;初步判定该多肽片段为白色链霉菌乙酰木聚糖酯酶的C端区域。 展开更多

关键词 白色链霉菌 乙酰木聚糖酯酶 基因克隆 生物信息学

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一种包含双纤维素结合域的新型生物纸张增强剂

16

作者 郑斐 石翛然 +2 位作者 吴咪佳 汪晶 丁少军 《林产化学与工业》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第3期61-65,共5页

将两个来源于草菇乙酰木聚糖酯酶的家族I的纤维素结合域(CBD)融合到一起形成重组蛋白,并将该功能性纤维素吸附重组蛋白在大肠杆菌中进行表达,利用该重组蛋白处理What-man滤纸后检测滤纸的机械性能。检测发现经纯化的重组蛋白处理后的滤... 将两个来源于草菇乙酰木聚糖酯酶的家族I的纤维素结合域(CBD)融合到一起形成重组蛋白,并将该功能性纤维素吸附重组蛋白在大肠杆菌中进行表达,利用该重组蛋白处理What-man滤纸后检测滤纸的机械性能。检测发现经纯化的重组蛋白处理后的滤纸其机械性能都有所提高,其中抗张强度提高了10%,耐破度提高了8.7%,耐折度提高了30%。该研究表明CBD在纤维及造纸工业等方面具有巨大的潜在应用价值。 展开更多

关键词 乙酰木聚糖酯酶 纤维素结合域 机械性能 纸张增强剂

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草菇乙酰木聚糖酯酶的生物信息学分析

17

作者 赵妍 陈明杰 王孟兰 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2015年第2期53-58,共6页

以草菇(Volvariella volvacea)乙酰木聚糖酯酶AXE、AXEII为研究对象,采用生物信息学方法对其核苷酸及编码的蛋白氨基酸序列、组成成分、信号肽、跨膜结构域、疏水性/亲水性、蛋白质三级结构等进行预测和分析,并构建了乙酰木聚糖酯酶蛋... 以草菇(Volvariella volvacea)乙酰木聚糖酯酶AXE、AXEII为研究对象,采用生物信息学方法对其核苷酸及编码的蛋白氨基酸序列、组成成分、信号肽、跨膜结构域、疏水性/亲水性、蛋白质三级结构等进行预测和分析,并构建了乙酰木聚糖酯酶蛋白家族的系统进化树。结果表明,草菇的AXE蛋白由349个氨基酸残基组成,编码蛋白质的分子量为37.55 ku,等电点为8.58,属稳定性蛋白质。AXEII由253个氨基酸残基组成,编码蛋白质的分子量为27.70 ku,等电点为5.82,属稳定性蛋白质。两者均为亲水性蛋白,存在信号肽,AXE与AXEII的潜在磷酸化位点总数分别为15个和11个。草菇的AXE与灰盖鬼伞(Coprinopsis cinerea)亲缘关系较近,AXEII与裂褶菌(Schizophyllum commune)亲缘关系较近。 展开更多

关键词 草菇 乙酰木聚糖酯酶 生物信息学

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利用具有过水解活性的乙酰基木聚糖酯酶催化制备过氧乙酸

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作者 袁琪 陶惟一 +1 位作者 羊亚平 李霜 《生物加工过程》 CAS 2020年第5期567-571,共5页

以甘油三乙酸酯和H2O2为底物,利用来源枯草芽孢杆菌的乙酰木聚糖酯酶(AXE)游离酶和固定化酶催化过水解反应制备过氧乙酸(PAA),并以化学法制备的过氧乙酸为对照组进行性质比较。结果表明:游离酶用量(酶蛋白)为1.0 g/L,可得到11.6 g/L的... 以甘油三乙酸酯和H2O2为底物,利用来源枯草芽孢杆菌的乙酰木聚糖酯酶(AXE)游离酶和固定化酶催化过水解反应制备过氧乙酸(PAA),并以化学法制备的过氧乙酸为对照组进行性质比较。结果表明:游离酶用量(酶蛋白)为1.0 g/L,可得到11.6 g/L的过氧乙酸,对甘油三乙酸酯的转化率为16.7%;游离酶用量(酶蛋白)为75 mg/L,过氧乙酸质量浓度可达3.5 g/L,对甘油三乙酸酯的转化率为15.3%;固定化酶用量(树脂量)为50 g/L,可得3.6 g/L的过氧乙酸。低浓度过氧乙酸比高浓度过氧乙酸更稳定。将对照组和酶法制备过氧乙酸的质量浓度均设置为3.5 g/L,其pH分别为1.98和4.45;对照组使铜片形成重度腐蚀,对碳钢有轻度腐蚀性,对不锈钢和铝基本无腐蚀;酶法制备的过氧乙酸对上述4种金属均无腐蚀。 展开更多

关键词 过氧乙酸 乙酰木聚糖酯酶 固定化酶 过水解活性

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平原和模拟高原条件下梭曼中毒对AChE活力影响的比较

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作者 赵清 欧阳子倩 魏相德 《解放军预防医学杂志》 CAS 北大核心 1998年第5期326-330,共5页

采用DTNB显色法 ,研究平原和模拟 40 0 0m高原缺氧条件下梭曼对犬、大鼠组织及全血AChE活力的影响。结果显示 :(1)缺氧可抑制AChE活性。(2 )模拟高原条件下梭曼对两种动物AChE的抑制和平原条件下一样 ,均为持续性抑制 ,中毒后 2hAChE仍... 采用DTNB显色法 ,研究平原和模拟 40 0 0m高原缺氧条件下梭曼对犬、大鼠组织及全血AChE活力的影响。结果显示 :(1)缺氧可抑制AChE活性。(2 )模拟高原条件下梭曼对两种动物AChE的抑制和平原条件下一样 ,均为持续性抑制 ,中毒后 2hAChE仍无明显回升。 (3)缺氧复合梭曼中毒对犬全血AChE的抑制速度和抑制程度都较平原中毒组有增高的趋势。而对于大鼠组织来说 ,其AChE的抑制速度明显快于平原中毒组 ,抑制程度也偏重 ,且存在一定的剂量效应关系。(4)缺氧复合梭曼中毒对大鼠全血AChE的抑制峰提前出现 ,但抑制程度相对轻些。以上结果表明在缺氧条件下血液中AChE的活性变化与梭曼的毒性并不呈平行关系 ,而脑组织中AChE的变化一定程度上可反映梭曼的毒性程度。 展开更多

关键词 梭曼中毒 模拟高原 胆碱酯酶 平原

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