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油菜基因BnWRI1的克隆及RNAi对种子含油量的影响 被引量:16
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作者 柴国华 白泽涛 +5 位作者 蔡丽 郭学兰 张学江 石磊 董彩华 刘胜毅 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期1512-1518,共7页
【目的】阐明油菜基因BnWRI1对其种子含油量的影响。【方法】采用RT-PCR技术从油菜中克隆到BnWRI1基因编码区内384bp的片段,将该片段正反向插入干扰载体pGΩ4ARi中,构建成RNAi表达载体pGΩ4ARi-WRI1,通过花粉管通道法将其转入油菜受体... 【目的】阐明油菜基因BnWRI1对其种子含油量的影响。【方法】采用RT-PCR技术从油菜中克隆到BnWRI1基因编码区内384bp的片段,将该片段正反向插入干扰载体pGΩ4ARi中,构建成RNAi表达载体pGΩ4ARi-WRI1,通过花粉管通道法将其转入油菜受体品种中双9号中,【结果】获得3棵转基因植株,PCR扩增和基因组Southern杂交证实外源片段已整合在受体油菜基因组中。利用半定量RT-PCR和改进的索氏提取法分别检测转基因T1代植株的BnWRI1基因表达量和种子含油量,结果表明:与非转基因对照相比,转基因植株的BnWRI1基因均受抑制,种子含油量有所降低。【结论】采用RNAi技术可使油菜内源基因BnWRI1沉默,表明油菜基因BnWRI1能有效调控种子含油量。 展开更多
关键词 油菜 含油量 wri1基因 花粉管通道法 RNAI
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沙棘WRI1转录因子基因的生物信息学分析 被引量:8
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作者 马倩 李景滨 +1 位作者 阮成江 李荣荣 《湖北农业科学》 2016年第22期5972-5975,5981,共5页
以构建的沙棘(Hippophae rhamnoides Linn.)不同组织转录组数据库为基础,分离得到1个沙棘WRI1转录因子编码基因,命名为Hr WRI1,利用生物信息学方法对其基因结构、理化性质、保守域、信号肽、亚细胞定位、磷酸化位点和高级结构等进行了... 以构建的沙棘(Hippophae rhamnoides Linn.)不同组织转录组数据库为基础,分离得到1个沙棘WRI1转录因子编码基因,命名为Hr WRI1,利用生物信息学方法对其基因结构、理化性质、保守域、信号肽、亚细胞定位、磷酸化位点和高级结构等进行了预测和较为全面的分析。结果表明,该成员含有1 206 bp的完整开放阅读框,编码401个氨基酸组成的不稳定亲水蛋白,无信号肽和跨膜结构域,存在多个磷酸化位点,定位于细胞核中,高级结构以无规则卷曲为主。与不同植物中已报道的同源WRI1转录因子进行多重序列比对后,发现它们在核酸与氨基酸水平均高度同源,并且具有相同的结构域。 展开更多
关键词 沙棘(Hippophae rhamnoides Linn.) wri1基因 生物信息学
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甘蓝型油菜WRI1基因cDNA的克隆与序列分析 被引量:7
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作者 施春霖 刘聪 +3 位作者 肖旦望 陈社员 官春云 熊兴华 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期247-252,共6页
通过RT-PCR方法克隆了甘蓝型油菜湘油15号5个WRI1基因cDNA。测序结果显示,BnWRI1-1大小为1 248 bp,BnWRI1-2和BnWRI1-3大小为1 254 bp,BnWRI1-4、BnWRI1-5大小为1 242 bp;聚类分析结果显示,所克隆WRI1基因cDNA在进化关系上属于AP2/ERF... 通过RT-PCR方法克隆了甘蓝型油菜湘油15号5个WRI1基因cDNA。测序结果显示,BnWRI1-1大小为1 248 bp,BnWRI1-2和BnWRI1-3大小为1 254 bp,BnWRI1-4、BnWRI1-5大小为1 242 bp;聚类分析结果显示,所克隆WRI1基因cDNA在进化关系上属于AP2/ERF转录因子家族,同拟南芥AtWRI1(At3G54320)同处1个分支,并且所克隆基因cDNA来自甘蓝型油菜不同的基因组;通过核苷酸序列比对分析,得到所克隆WRI1基因cDNA单核苷酸变异位点40个;特异性酶切位点分析显示,来源于A基因组的BnWRI1-1、BnWRI1-2、BnWRI1-3第892位与来源于C基因组的BnWRI1-4和BnWRI1-5第880位的核苷酸发生变异,导致Bcl I识别位点的变化;酶切试验结果表明,采用BclI酶可区分甘蓝型油菜的AtWRI1-like WRI1基因的A或C基因组来源。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 wri1基因 CDNA 序列分析
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棉花中一个新型转录因子GhWRI1的表达特征与功能分析 被引量:5
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作者 李鑫 王正明 +1 位作者 薛伟 初明光 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期80-86,共7页
AP2(APETALA2)/EREBP(ethylene-responsive element binding protein)是一类特异性存在于植物中的转录因子,在植物中的许多代谢过程都起着十分重要的作用。从棉花中分离并获得了一个新的AP2基因GhWRI1,该基因长1 314 bp,所编码的蛋白含... AP2(APETALA2)/EREBP(ethylene-responsive element binding protein)是一类特异性存在于植物中的转录因子,在植物中的许多代谢过程都起着十分重要的作用。从棉花中分离并获得了一个新的AP2基因GhWRI1,该基因长1 314 bp,所编码的蛋白含有437个氨基酸,分子量约为48 kD,pI为5.77。序列分析结果显示,GhWRI1蛋白含有2个AP2结构域,该蛋白属于AP2家族;与GFP蛋白的融合表达试验结果显示,在洋葱表皮细胞中,GhWRI1是特异性在细胞核中表达的。Real-time RT-PCR数据显示GhWRI1主要在真叶、根、纤维以及种子中表达,而且其在纤维和种子中的表达量是随着发育时间的推移而不断升高的。同时构建了GhWRI1与LUC共表达的载体,通过检测LUC的活性来反映GhWRI1的表达量,试验数据显示,当GhWRI1与LUC共表达后,LUC的活性提高了约20倍。试验结果都显示GhWRI1是一个很强的转录激活子。 展开更多
关键词 wri1基因 转录因子 AP2结构域 转录激活试验 棉花
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续随子转录因子ElWRI1的鉴定及功能分析
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作者 牛听风 葛丽萍 +2 位作者 苏云婷 王壮琳 李润植 《植物科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期458-466,共9页
续随子(Euphorbia lathyris L.)种子可积累大量油脂且富含油酸,WRINKLED1(WRI1)为AP2/EREBP类转录因子,参与调控脂肪酸的合成及种子发育等生命过程。本研究通过对续随子的全基因组鉴定,获得了11个续随子ElWRI1转录因子基因,命名为ElWRI1... 续随子(Euphorbia lathyris L.)种子可积累大量油脂且富含油酸,WRINKLED1(WRI1)为AP2/EREBP类转录因子,参与调控脂肪酸的合成及种子发育等生命过程。本研究通过对续随子的全基因组鉴定,获得了11个续随子ElWRI1转录因子基因,命名为ElWRI1-1~ElWRI1-11。结果显示,它们均具有两个AP2结构域;其编码蛋白均属于不稳定亲水蛋白,无跨膜结构;亚细胞定位预测显示所有WRI1蛋白均位于细胞核。表达分析结果表明,ElWRI1-6与ElWRI1-8在种子发育时期的表达量较高,且后者的表达模式与种子油脂积累模式一致。在本氏烟草(Nicotiana benthamiana L.)叶片中异源过表达ElWRI1-8,叶片中总油脂含量增加,且油酸含量显著上升。研究结果表明ElWRI1-8可能是调控续随子种子油脂和油酸生物合成的一个重要转录因子。 展开更多
关键词 续随子 转录因子 wri1基因 油脂合成 叶片瞬时表达
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拟南芥WRI1基因的克隆及其植物反义载体的构建 被引量:1
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作者 吴晓梅 吴雄熊 陈明训 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2010年第3期68-69,79,共3页
应用聚合酶链式反应技术(PCR)扩增了拟南芥WRI1基因,并将其克隆到pMD18-Tvector载体上,对重组子进行PCR检测和限制性内切酶分析,并测定了该基因全序列。结果表明,该基因全长为1 287 bp。将拟南芥WRI1基因反向克隆到植物表达载体pCambia1... 应用聚合酶链式反应技术(PCR)扩增了拟南芥WRI1基因,并将其克隆到pMD18-Tvector载体上,对重组子进行PCR检测和限制性内切酶分析,并测定了该基因全序列。结果表明,该基因全长为1 287 bp。将拟南芥WRI1基因反向克隆到植物表达载体pCambia1300的35S启动子下游,构建了该基因的植物反义表达载体。 展开更多
关键词 拟南芥 PCR wri1基因 反义表达载体
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油棕油脂合成调控因子WRI1s的挖掘鉴定及表达分析
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作者 周丽霞 杨蒙迪 +2 位作者 张安妮 曹红星 杨耀东 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2024年第15期4905-4911,共7页
WRI1基因在油棕油脂合成过程中起着重要的调控作用,本研究旨在挖掘油棕WRI1 (EgWRI1)基因,并对其理化性质及组织表达特性进行分析。本研究利用生物信息学方法鉴定获得3个EgWRI1基因,均含有6个内含子,通过染色体定位分析发现EgWRI1-1和Eg... WRI1基因在油棕油脂合成过程中起着重要的调控作用,本研究旨在挖掘油棕WRI1 (EgWRI1)基因,并对其理化性质及组织表达特性进行分析。本研究利用生物信息学方法鉴定获得3个EgWRI1基因,均含有6个内含子,通过染色体定位分析发现EgWRI1-1和EgWRI1-2位于油棕的第5条染色体上,EgWRI1-3位于油棕第10条染色体上。3个基因均含有AP2保守结构域,编码氨基酸数目分别为337、338、367 aa,EgWRI1-1及EgWRI1-3蛋白的等电点均小于7,分别为6.51及6.29,EgWRI1-2蛋白的等电点大于7 (8.31),3个EgWRI1蛋白均为不稳定亲水蛋白,无信号肽,含有多个磷酸化位点,均定位在细胞核中,EgWRI1-1和EgWRI1-3以α-螺旋为主,EgWRI1-2以无规卷曲为主。聚类分析表明在遗传系数为0.625处,3个EgWRI1和ATWRI1同处一个分支,在0.680处,EgWRI1-1和EgWRI1-2的进化关系最近,且与EgWRI1-3聚为一类。定量PCR分析得知EgWRI1-1在中果皮80 d时的表达量最大,EgWRI1-2在果仁95 d中的表达量最大,在其他组织中表达很低或不表达;EgWRI1-3在各组织中的表达量均较低,该结果为深入研究EgWRI1-1和EgWRI1-2在油棕中果皮和果仁脂肪酸合成过程中的调控机理提供参考。 展开更多
关键词 油棕 wri1s基因 生物信息学 表达分析
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