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百合珠芽组培及脱毒研究 被引量：97
1
作者 赵祥云 程廉 +2 位作者 邢尤美 谢丽萍 贾学文 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第3期284-288,共5页
对带有烟草环斑病毒(TRSV)的淡黄花白合(Lilium sulphureum Baker)珠芽生长点进行组培脱毒。经试验得出,珠芽生长点诱导成愈伤组织的最适培养基为MS+BA0.5+2,4-D0.25mg/l,诱导率为92.8％。适合幼芽分化的培养基为MS+BA1.5+NAA0.1+KT0.1m... 对带有烟草环斑病毒(TRSV)的淡黄花白合(Lilium sulphureum Baker)珠芽生长点进行组培脱毒。经试验得出,珠芽生长点诱导成愈伤组织的最适培养基为MS+BA0.5+2,4-D0.25mg/l,诱导率为92.8％。适合幼芽分化的培养基为MS+BA1.5+NAA0.1+KT0.1mg/l,分化率为71.4％。适合生根的培养基为1/2MS+IBA0.25mg/l,生根率为100％。从外植体到发育成幼苗约需120～150天。将培养出的幼苗在6种指示植物上进行脱毒鉴定,结果表明,0.3～0.8mm长的珠芽生长点其诱导的幼苗成功地脱去了百合的烟草环斑病毒。 展开更多
关键词 百合 珠芽 脱毒 组织培养
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RT-PCR方法检测烟草环斑病毒的研究 被引量：21
2
作者 孔宝华 蔡红 +3 位作者 陈海如 唐慧 沐咏民 刘进元 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 2001年第1期13-15,共3页
根据烟草环斑病毒 (TRSV)外壳蛋白基因非编序列设计的引物P1,P2 ,用感病及健康组织总RNA为模板 ,进行cDNA合成和PCR试验 ,感病组织中扩增出了 6 0 0bp的目的片段 ,而健康组织中无此扩增带。摸索各项实验条件 ,建立了RT -PCR检测烟草环... 根据烟草环斑病毒 (TRSV)外壳蛋白基因非编序列设计的引物P1,P2 ,用感病及健康组织总RNA为模板 ,进行cDNA合成和PCR试验 ,感病组织中扩增出了 6 0 0bp的目的片段 ,而健康组织中无此扩增带。摸索各项实验条件 ,建立了RT -PCR检测烟草环斑病毒 (TRSV)的方法。 展开更多
关键词 烟草 环斑病毒 RT-PCR 检测方法 外壳蛋白基因非编序列设计
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烟草环斑病毒的RT-PCR和IC-RT-PCR检测方法研究 被引量：11
3
作者 杨翠云 曹洁 +3 位作者 于翠 高焕利 沈禹飞 代光辉 《上海农业学报》 CSCD 2007年第1期83-87,共5页
根据TRSV CP基因的保守序列设计引物,RT-PCR和IC-RT-PCR能从TRSV的2个分离物中分别扩增到与预期大小相同的DNA条带,序列测定和分析表明所扩增序列为TRSV CP基因的部分序列,在系统关系树上与TRSV的其他分离物形成一簇,表明所建立的RT-PCR... 根据TRSV CP基因的保守序列设计引物,RT-PCR和IC-RT-PCR能从TRSV的2个分离物中分别扩增到与预期大小相同的DNA条带,序列测定和分析表明所扩增序列为TRSV CP基因的部分序列,在系统关系树上与TRSV的其他分离物形成一簇,表明所建立的RT-PCR和IC-RT-PCR检测方法是可靠的。 展开更多
关键词 烟草环斑病毒(trsv) RT-PCR IC-RT-PCR 检测方法
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葡萄的两种检疫性病毒的多重RT-PCR检测 被引量：7
4
作者 薛杨 安德荣 李明福 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第S1期14-17,共4页
本研究利用多重RT-PCR技术,对葡萄的检疫性病毒中番茄环斑病毒(ToRSV)和烟草环斑病毒(TRSV)进行检测, 并研究了反应体系中各个参数对多重RT-PCR的影响。结果表明:可以在同一反应体系中实现对ToRSV和TRSV的RT- PCR检测,但模板浓度、引物... 本研究利用多重RT-PCR技术,对葡萄的检疫性病毒中番茄环斑病毒(ToRSV)和烟草环斑病毒(TRSV)进行检测, 并研究了反应体系中各个参数对多重RT-PCR的影响。结果表明:可以在同一反应体系中实现对ToRSV和TRSV的RT- PCR检测,但模板浓度、引物浓度、循环数等3个因素对检测结果的准确性有较大的影响,3个参数的增加都会导致非特异性扩增的增多,而dNTP以及Taq酶的浓度对实验结果并无较大影响。 展开更多
关键词 多重RT-PCR 番茄环斑病毒(ToRSV) 烟草环斑病毒(trsv)
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逆转录环介导等温扩增技术检测烟草环斑病毒的研究 被引量：7
5
作者 张吉红 陈先锋 孙辉 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期629-633,共5页
本研究采用环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),建立了一种快速、简便的烟草环斑病毒检测方法。根据TRSV外壳蛋白编码基因上的8个位点,共设计了6条引物,通过RT-LAMP扩增得到特征性的梯度条带。特异性试... 本研究采用环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),建立了一种快速、简便的烟草环斑病毒检测方法。根据TRSV外壳蛋白编码基因上的8个位点,共设计了6条引物,通过RT-LAMP扩增得到特征性的梯度条带。特异性试验表明,引物对TRSV的检测具有良好的特异性;灵敏度试验显示RT-LAMP比普通RT-PCR高10倍。通过反应温度和时间的优化,该方法只需在水浴锅中60℃等温扩增60 min,整个检测周期约1.5 h,结果采用SYBR green I染色显示,易于观察和判定。 展开更多
关键词 烟草环斑病毒 环介导等温扩增 检测
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应用逆转录环介导等温扩增技术检测大豆种子中烟草环斑病毒 被引量：3
6
作者 郭立新 陈先锋 +3 位作者 徐亚飞 邱志君 朱迪琦 段维军 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期980-983,987,共5页
根据烟草环斑病毒(TRSV)外壳蛋白基因序列设计并合成了1组RT-LAMP引物,利用实时浊度仪监测反应过程,初步建立了烟草环斑病毒的RT-LAMP检测方法,并进行了特异性与灵敏度检测。结果显示,RT-LAMP灵敏度与普通RT-PCR法相当,但检测时间明显缩... 根据烟草环斑病毒(TRSV)外壳蛋白基因序列设计并合成了1组RT-LAMP引物,利用实时浊度仪监测反应过程,初步建立了烟草环斑病毒的RT-LAMP检测方法,并进行了特异性与灵敏度检测。结果显示,RT-LAMP灵敏度与普通RT-PCR法相当,但检测时间明显缩短,1 h即可完成反应。此外,体系中加入钙黄绿素,反应结束后,可通过裸眼观察荧光的有无来判断是否有扩增。对大豆种子中携带的烟草环斑病毒进行了RT-LAMP检测,裸眼判定与仪器监测结果一致。结果证明所建立的TRSV RT-LAMP方法具有快速、特异、灵敏,操作简单的特点,不需复杂仪器设备,适合于TRSV的现场快速检测。 展开更多
关键词 烟草环斑病毒 逆转录环介导等温扩增 检测
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基于抗原表位烟草环斑病毒单克隆抗体的制备 被引量：1
7
作者 秦绍钊 何月秋 +3 位作者 李旻 雷屈文 王光勇 丁元明 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期598-603,共6页
基于多种生物信息学软件综合预测烟草环斑病毒(TRSV)外壳蛋白抗原表位所在的结构域,明确了该外壳蛋白抗原表位可能位于C端319～328、384～388、420～430、480～487、495～511位氨基酸残基附近。通过RT-PCR扩增出了目的片段,构建了TRSV... 基于多种生物信息学软件综合预测烟草环斑病毒(TRSV)外壳蛋白抗原表位所在的结构域,明确了该外壳蛋白抗原表位可能位于C端319～328、384～388、420～430、480～487、495～511位氨基酸残基附近。通过RT-PCR扩增出了目的片段,构建了TRSV外壳蛋白原核表达载体,表达的TRSV外壳蛋白外源融合蛋白具免疫活性。采用杂交瘤细胞技术,利用外源融合蛋白制备了单克隆抗体,制备的抗血清可与TRSV外壳蛋白基因原核表达产物发生免疫反应。检验结果表明,制备的抗血清具较好的特异性,可应用于TRSV的检疫检验。 展开更多
关键词 烟草环斑病毒 抗原表位 原核表达 融合蛋白 单克隆抗体
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