猪带绦虫六钩蚴期特异性抗原基因真核表达质粒pcDNA3.1/TSO45-4B的构建 被引量：7

1

作者 方强 孙新 +5 位作者 夏惠 徐胜贵 胡守锋 杨小迪 陈兴智 王雪梅 《蚌埠医学院学报》 CAS 2006年第4期334-335,共2页

目的构建表达猪带绦虫六钩蚴期特异性抗原基因TSO45-4B的真核表达质粒pcDNA3.1/TSO45-4B。方法全基因合成TSO45-4B的基因序列,并利用PCR扩增该基因序列,将其插入真核表达载体pcDNA3.1,经酶切、测序鉴定。结果经酶切和测序鉴定表明所构... 目的构建表达猪带绦虫六钩蚴期特异性抗原基因TSO45-4B的真核表达质粒pcDNA3.1/TSO45-4B。方法全基因合成TSO45-4B的基因序列,并利用PCR扩增该基因序列,将其插入真核表达载体pcDNA3.1,经酶切、测序鉴定。结果经酶切和测序鉴定表明所构建的重组表达质粒中含有TSO45-4B基因。结论成功构建pcDNA3.1/TSO45-4B重组质粒。 展开更多

关键词 带绦虫 六钩蚴 tso45-4b 重组质粒

下载PDF 职称材料

猪带绦虫六钩蚴TSO45-4B抗原FnⅢ结构域线性B细胞表位预测及鉴定 被引量：5

2

作者 王媛媛 王小莉 +3 位作者 常雪莲 陶志勇 夏惠 方强 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2012年第6期681-684,I0001,共5页

目的预测并鉴定猪带绦虫六钩蚴TSO45-4B抗原FnⅢ结构域线性B细胞表位。方法利用生物信息学在线工具分析TSO45-4B抗原FnⅢ结构域序列并预测其线性B细胞表位;采用SWISS-MODEL软件预测TSO45-4B的蛋白空间结构,并合成两条预测表位肽。采用... 目的预测并鉴定猪带绦虫六钩蚴TSO45-4B抗原FnⅢ结构域线性B细胞表位。方法利用生物信息学在线工具分析TSO45-4B抗原FnⅢ结构域序列并预测其线性B细胞表位;采用SWISS-MODEL软件预测TSO45-4B的蛋白空间结构,并合成两条预测表位肽。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测猪囊尾蚴病人血清与两条预测表位肽的免疫反应性。结果获得2个TSO45-4B抗原FnⅢ结构域线性B细胞预测表位,其中1条预测表位合成肽可为猪囊尾蚴病患者血清识别。结论成功预测并鉴定了猪带绦虫六钩蚴TSO45-4B抗原FnⅢ结构域线性B细胞表位。 展开更多

关键词 猪带绦虫 六钩蚴 tso45-4b FnⅢ结构域 b细胞表位

原文传递

猪带绦虫六钩蚴TSO45-4B抗原FnⅢ结构域相应的线性B细胞表位肽免疫原性研究 被引量：1

3

作者 王媛媛 陶志勇 +6 位作者 杨小迪 王小莉 常雪莲 陈勇 孙新 夏惠 方强 《蚌埠医学院学报》 CAS 2013年第5期513-515,共3页

目的:观察载体蛋白偶联的TSO45-4B抗原FnⅢ结构域相应的线性B细胞表位肽诱导的体液免疫反应。方法:人工合成TSO45-4B抗原FnⅢ结构域2条预测表位肽,偶联钥孔血蓝蛋白免疫小鼠,采用ELISA法检测小鼠血清中预测表位肽特异性抗体滴度。结果:... 目的:观察载体蛋白偶联的TSO45-4B抗原FnⅢ结构域相应的线性B细胞表位肽诱导的体液免疫反应。方法:人工合成TSO45-4B抗原FnⅢ结构域2条预测表位肽,偶联钥孔血蓝蛋白免疫小鼠,采用ELISA法检测小鼠血清中预测表位肽特异性抗体滴度。结果:免疫小鼠血清中检测到1条预测表位肽特异性抗体,其效价达到1∶1 280。结论:设计的1条TSO45-4B抗原FnⅢ结构域线性B细胞表位肽可诱导小鼠产生体液免疫反应。 展开更多

关键词 猪带绦虫 六钩蚴 tso45-4b FnⅢ结构域 b细胞表位 免疫反应

下载PDF 职称材料

猪囊尾蚴病重组DNA疫苗pcDNA3.1-TSO45-4B在小鼠体内的表达及诱导的细胞免疫效应 被引量：2

4

作者 王媛媛 孙新 +6 位作者 方强 胡守锋 杨小迪 张莺莺 陈兴智 王雪梅 夏惠 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2007年第4期262-265,共4页

目的观察基于六钩蚴期的猪囊尾蚴病基因疫苗pcDNA3.1-TSO45-4B在小鼠体内的表达及诱导的小鼠细胞免疫应答。方法将真核重组表达质粒pcDNA3.1-TSO45-4B肌注小鼠,RT-PCR方法扩增出目的条带;ELISA方法检测小鼠血清细胞因子IL-2、IL-4及IFN... 目的观察基于六钩蚴期的猪囊尾蚴病基因疫苗pcDNA3.1-TSO45-4B在小鼠体内的表达及诱导的小鼠细胞免疫应答。方法将真核重组表达质粒pcDNA3.1-TSO45-4B肌注小鼠,RT-PCR方法扩增出目的条带;ELISA方法检测小鼠血清细胞因子IL-2、IL-4及IFN-γ含量。结果RT-PCR产物为单一条带,大小为456bp,与TSO45-4B大小一致。免疫小鼠第2周细胞因子含量达到较高水平,第4周达到最高水平,第8周开始下降。结论基于猪囊尾蚴保护性抗原TSO45-4B的DNA疫苗能在小鼠体内表达并有效诱导细胞免疫效应。 展开更多

关键词 猪囊尾蚴 pcDNA 3 1-tso45—4b 疫苗 RT—PCR 细胞免疫

下载PDF 职称材料

猪带绦虫TSO45W-4B基因的克隆、表达和抗体制备 被引量：10

5

作者 周必英 周泠 +2 位作者 刘美辰 刘晖 张曦 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期372-375,共4页

目的克隆、表达猪带绦虫TSO45W-4B基因,以重组蛋白TSO45W-4B免疫兔制备抗体。方法全基因合成猪带绦虫TSO45W-4B抗原编码基因,定向克隆至pGEX-1λT表达载体,构建重组质粒pGEX-TSO45W-4B。转化至大肠埃希菌ArcticExpress(DE3)后,异丙基-β... 目的克隆、表达猪带绦虫TSO45W-4B基因,以重组蛋白TSO45W-4B免疫兔制备抗体。方法全基因合成猪带绦虫TSO45W-4B抗原编码基因,定向克隆至pGEX-1λT表达载体,构建重组质粒pGEX-TSO45W-4B。转化至大肠埃希菌ArcticExpress(DE3)后,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达情况。表达产物经谷胱甘肽-S-转移酶(GST)亲和层析柱纯化后,免疫新西兰大白兔,制备抗血清。GST亲和层析柱纯化获得血清中抗体后,ELISA测定抗体效价,蛋白质印迹法(Western blotting)鉴定抗体特异性。结果酶切和测序结果表明,重组质粒pGEX-TSO45W-4B构建成功。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白相对分子质量(M r)约为40 000,经GST亲和层析后可获得纯度为90%以上的重组蛋白。ELISA结果显示,抗体的效价为1∶512 000。Western blotting分析结果显示,该抗体能与纯化的重组蛋白发生特异性反应,在约M r40 000处出现一条带,与预期大小一致。结论猪带绦虫TSO45W-4B基因能在大肠埃希菌中表达,制备了TSO45W-4B重组蛋白和兔抗血清。 展开更多

关键词 猪带绦虫 tso45W-4b 表达 纯化 抗体

下载PDF 职称材料

猪带绦虫TSO45W-4B基因在长双歧杆菌中的表达 被引量：1

6

作者 周必英 刘美辰 杨凤娇 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期243-246,共4页

目的:在成功构建猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒p GEX-TSO45W-4B的基础上,研究猪带绦虫TSO45W-4B基因在长双歧杆菌中的表达情况。方法:将猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒p GEX-TSO45W-4B电转化入长双歧杆菌,异丙基-β-D... 目的:在成功构建猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒p GEX-TSO45W-4B的基础上,研究猪带绦虫TSO45W-4B基因在长双歧杆菌中的表达情况。方法:将猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒p GEX-TSO45W-4B电转化入长双歧杆菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-d-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和Western blot分析表达情况。结果:酶切、聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)和测序证实,重组质粒p GEX-TSO45W-4B成功转入长双歧杆菌。SDS-PAGE显示,重组蛋白相对分子质量(Mr)约为40 k D,经谷胱甘肽转移酶(glutathione S-transferase,GST)亲和层析后可获得纯度为85%以上的重组蛋白。Western blot显示,重组蛋白能被兔抗TSO45W-4B血清、囊虫病猪血清和囊虫病患者血清所识别。结论:猪带绦虫TSO45W-4B基因能够在长双歧杆菌中获得表达,表达的重组蛋白具有特异的抗原性。 展开更多

关键词 猪带绦虫 tso45W-4b 长双歧杆菌 表达

下载PDF 职称材料

猪带绦虫重组Bb(pGEX-TSO45W-4B-TSOL18)疫苗的构建及鉴定 被引量：13

7

作者 周必英 刘美辰 贺莉芳 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第4期289-292,298,共5页

目的构建和鉴定猪带绦虫重组双歧杆菌(Bb)(pGEX-TSO45W-4B-TSOL18)疫苗。方法用疏水甘氨酸接头连接TSO45W-4B和TSOL18编码基因,通过全基因合成方法合成猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因。将该融合基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿... 目的构建和鉴定猪带绦虫重组双歧杆菌(Bb)(pGEX-TSO45W-4B-TSOL18)疫苗。方法用疏水甘氨酸接头连接TSO45W-4B和TSOL18编码基因,通过全基因合成方法合成猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因。将该融合基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT中,构建重组质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18。电穿孔法将该质粒导入Bb,构建猪带绦虫重组Bb(pGEX-TSO45W-4B-TSOL18)疫苗,从具有氨苄青霉素抗性的rBb中抽提质粒进行酶切、PCR和测序鉴定。结果全基因合成789bp的TSO45W-4B-TSOL18融合基因片段。从具有氨苄青霉素抗性的rBb中抽提质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切得到4 944bp的pGEX-1λT载体片段和789bp的TSO45W-4B-TSOL18融合基因片段,与预期结果相符;以该重组质粒为模板进行PCR扩增得到789bp的TSO45W-4B-TSOL18融合基因片段,经测序基因片段为789bp,与预期大小相符。结论成功构建了猪带绦虫重组Bb(pGEX-TSO45W-4B-TSOL18)疫苗,为该疫苗的表达及免疫原性研究奠定了基础。 展开更多

关键词 猪带绦虫 重组bb(pGEX-tso45W-4b-tsoL18)疫苗 构建 鉴定

原文传递

猪带绦虫TS045W-4B—TSOL18融合基因在大肠埃希菌ArcticExpress（DE3）中的表达、纯化和兔抗血清的制备 被引量：10

8

作者 周泠 周必英 +2 位作者 刘美辰 刘晖 贺莉芳 《中华地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期619-624,共6页

目的构建猪带绦虫pGEX—TS045W-4B-TSOL18重组质粒，纯化重组融合蛋白及制备兔抗重组蛋白血清。方法用疏水甘氨酸接头（Gly,Ser），连接TS045W-4B和TSOL18编码基因，通过全基因合成猪带绦虫TS045W-4B—TSOL18融合基因。将融合基因定向... 目的构建猪带绦虫pGEX—TS045W-4B-TSOL18重组质粒，纯化重组融合蛋白及制备兔抗重组蛋白血清。方法用疏水甘氨酸接头（Gly,Ser），连接TS045W-4B和TSOL18编码基因，通过全基因合成猪带绦虫TS045W-4B—TSOL18融合基因。将融合基因定向克隆到pGEX—1λT表达载体上，构建重组质粒pGEX—TS045W-4B—TSOL18，再用重组质粒转化大肠埃希菌（E．col）ArcticExpress（DE3）。用异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导其表达，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）分析表达情况，亲和层析纯化获得重组融合蛋白。用纯化的重组蛋白按0．5mg／只与弗氏完全佐剂（CFA）混合，于兔后腿肌肉及背部皮下多点免疫注射；2周后再用相同剂量的重组蛋白与弗氏不完全佐剂（IFA）混合加强免疫，此后每隔10d按第2次免疫法重复加强免疫，第4次免疫后6d，采集兔心脏血并分离血清，立即纯化及制备抗血清。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定抗血清的效价，采用蛋白印迹（Western blot）法鉴定抗血清的特异性。结果全基因合成的TS045W-4B—TSOL18融合基因片段长度为789bp。酶切证实pGEX—TS045W-4B—TSOL18重组质粒成功构建，测序结果获得的基因片段大小为789bp，与预期大小相符。SDS—PAGE分析和亲和层析后显示，重组质粒在转化E．col ArcticExpress（DE3）后，获得了相对分子质量约为55×10。的重组融合蛋白，纯度为85％。EUSA测定兔抗血清的效价为1：512000，Westernblot证实抗血清能与重组融合蛋白发生特异性反应，在相对分子质量约为55×10^3处出现1条与预期大小-致的特异性条带。结论成功地构建猪带绦虫重组质粒pGEX—TS045W-4B—TSOL18及制备了高纯度的TS045W-4B—TSOL18重组融合蛋白和高滴度的兔抗重组蛋白血清。 展开更多

关键词 猪带绦虫 TS045W-4b—tsoL18编码基因 重组融合蛋白 抗血清

原文传递

猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B疫苗诱导仔猪保护力及其免疫机制研究 被引量：7

9

作者 江楠 刘美辰 +4 位作者 周泠 杨凤娇 贾启 王灵军 周必英 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第10期900-904,共5页

目的构建猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B疫苗,研究该疫苗诱导仔猪产生的保护力及其免疫机制。方法以猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B疫苗1×1011 CFU灌胃免疫40日龄健康仔猪,同时设空载体对照组和双歧杆菌液体培养基(MRS)对照组,每组4头。每两... 目的构建猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B疫苗,研究该疫苗诱导仔猪产生的保护力及其免疫机制。方法以猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B疫苗1×1011 CFU灌胃免疫40日龄健康仔猪,同时设空载体对照组和双歧杆菌液体培养基(MRS)对照组,每组4头。每两周免疫1次,共免疫2次。于末次免疫后4周,用猪带绦虫卵进行攻击感染,攻击感染后3个月解剖猪体,摘取囊尾蚴,计算减蚴率;前腔静脉取血,分离血清和制备外周血淋巴细胞(PBMC)。酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测血清IgG、IgG1、IgG2a水平和PBMC培养上清液中IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测PBMC增殖情况。结果猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B疫苗免疫仔猪获得71.36%的保护力;与空载体对照组和MRS对照组比较,血清IgG和IgG2a水平显著升高(F=95.055、650.293,P<0.05),IgG1水平显著降低(F=78.422,P<0.05);加抗原刺激时,PBMC增殖水平显著升高(F=107.019,P<0.05);PBMC培养上清液中IL-2和IFN-γ水平显著升高(F=229.668、2251.690,P<0.05),IL-4和IL-10水平显著降低(F=274.832、1168.768,P<0.05)。结论猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B疫苗能够诱导仔猪产生一定的保护力,其中Th1型免疫应答在其诱导的保护性免疫机制中起重要作用。 展开更多

关键词 猪带绦虫 重组bb-tso45W-4b疫苗 保护力 免疫机制 仔猪

原文传递

猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因在长双歧杆菌中的表达 被引量：6

10

作者 周必英 刘美辰 杨凤娇 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期889-892,共4页

目的在成功构建猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18的基础上,研究猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因在长双歧杆菌中的表达情况。方法将猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18电转化入... 目的在成功构建猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18的基础上,研究猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因在长双歧杆菌中的表达情况。方法将猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18电转化入长双歧杆菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达情况。结果酶切、PCR和测序证实,重组质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18成功转入长双歧杆菌。SDS-PAGE显示,重组蛋白相对分子质量(Mr)约为55kD,与预期结果相一致。Western blot显示,重组蛋白能被兔抗血清、囊虫病猪血清和囊虫病患者血清所识别。结论猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因能够在长双歧杆菌中获得表达,表达的重组蛋白具有特异的抗原性。 展开更多

关键词 猪带绦虫 tso45W-4b-tsoL18融合基因 长双歧杆菌 表达

下载PDF 职称材料

猪带绦虫重组双歧杆菌（pGEX-TSO45W-4B）疫苗构建及鉴定 被引量：5

11

作者 周必英 刘美辰 贺莉芳 《中华地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期591-595,共5页

目的 构建和鉴定猪带绦虫重组双歧杆菌（Bb）（pGEX-TSO45W-4B）疫苗.方法 通过全基因合成猪带绦虫TSO45W-4B基因,预期该基因中的片段长度为351 bp.将该基因定向克隆到大肠埃希菌-Bb穿梭表达载体pGEX-1λT中,构建重组质粒pGEX-TSO45W-4B... 目的 构建和鉴定猪带绦虫重组双歧杆菌（Bb）（pGEX-TSO45W-4B）疫苗.方法 通过全基因合成猪带绦虫TSO45W-4B基因,预期该基因中的片段长度为351 bp.将该基因定向克隆到大肠埃希菌-Bb穿梭表达载体pGEX-1λT中,构建重组质粒pGEX-TSO45W-4B,电穿孔法将该质粒导入长双歧杆菌,构建猪带绦虫重组Bb（pGEX-TSO45W-4B）疫苗,通过酶切、PCR和测序进行鉴定,证实猪带绦虫重组Bb （pGEX-TSO45W-4B）疫苗中含有片段长度为351 bp的基因.结果 全基因合成351 bp的TSO45W-4B基因片段.酶切、PCR和测序鉴定证明猪带绦虫重组Bb （pGEX-TSO45W-4B）疫苗构建成功,均获得了351 bp基因片段.结论 成功构建了猪带绦虫重组Bb （pGEX-TSO45W-4B）疫苗,为该疫苗的表达及免疫原性研究奠定了基础. 展开更多

关键词 猪带绦虫 重组bb (pGEX-tso45W-4b)疫苗 构建 鉴定

原文传递

猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18重组蛋白疫苗免疫小鼠诱导的免疫应答 被引量：5

12

作者 肖红利 申万文 +3 位作者 高健安 石林江 张又心 周必英 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第2期159-164,共6页

目的观察猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18重组蛋白疫苗免疫小鼠诱导产生的体液和细胞免疫应答。方法将SPF级昆明小鼠60只随机分为3组,每组20只,分别为重组蛋白疫苗组和重组蛋白疫苗加弗氏佐剂组和生理盐水对照组。采用多点皮下注射法免疫3次,... 目的观察猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18重组蛋白疫苗免疫小鼠诱导产生的体液和细胞免疫应答。方法将SPF级昆明小鼠60只随机分为3组,每组20只,分别为重组蛋白疫苗组和重组蛋白疫苗加弗氏佐剂组和生理盐水对照组。采用多点皮下注射法免疫3次,间隔2周。于免疫后0、2、4、6、8周摘眼球取血,分离血清,采用ELISA法检测小鼠血清IgG与IgG2a水平;无菌取脾,制备脾细胞悬液,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测脾细胞增殖水平,采用ELISA法检测小鼠脾细胞经特异性抗原刺激后产生IL-2和IL-4的能力。结果与0周时及生理盐水对照组相比,免疫小鼠血清IgG水平在免疫后2-8周升高,F值分别为20.108、235.886、209.012、49.058,6周时达较高水平,IgG2a水平在免疫后2-8周升高,F值分别为80.214、76.540、152.314、82.561,6周时达较高水平,脾细胞增殖水平在免疫后2-8周升高,F值分别为21.643、56.982、225.880、151.682,6周时达较高水平,小鼠脾细胞经特异性抗原刺激后产生的IL-2水平在免疫后2-8周升高,F值分别为16.699、25.967、77.133、34.662,6周时达较高水平,IL-4水平在免疫后2-8周升高,F值分别为26.087、147.353、130.654、62.807,6周时达较高水平,与0周时及生理盐水对照组相比差异均有统计学意义（P〈0.05）;免疫后2-8周重组蛋白疫苗加弗氏佐剂组与重组蛋白疫苗组比较上述指标差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18重组蛋白疫苗免疫可诱导小鼠产生体液和细胞免疫应答,免疫效果以重组蛋白疫苗加弗氏佐剂组较好。 展开更多

关键词 猪带绦虫 tso45W-4b-tsoL18重组蛋白疫苗 免疫应答 小鼠

原文传递

猪带绦虫重组Bb—TS045W-4B—TSOL18疫苗诱导仔猪的保护性免疫应答 被引量：4

13

作者 贾启 刘美辰 +4 位作者 周泠 杨凤娇 江楠 王灵军 周必英 《中华地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期717-722,共6页

目的探讨猪带绦虫重组Bb．TS045W-4B．TSOL18疫苗免疫仔猪后，对猪带绦虫卵攻击感染后的保护性免疫应答。方法将20头40日龄健康仔猪按体质量（约15kg）采用随机数字表法分为5组，每组4头。分别为重组b-TS045W．4B—TSOL18疫苗灌胃组、重... 目的探讨猪带绦虫重组Bb．TS045W-4B．TSOL18疫苗免疫仔猪后，对猪带绦虫卵攻击感染后的保护性免疫应答。方法将20头40日龄健康仔猪按体质量（约15kg）采用随机数字表法分为5组，每组4头。分别为重组b-TS045W．4B—TSOL18疫苗灌胃组、重组Bb—TS045W-4B疫苗灌胃组、重组Bb-TSOLl8疫苗灌胃组、空载体对照组和双歧杆菌液体培养基（MRS）对照组。各疫苗的免疫剂量为1×10“菌落形成单位（CFU），间隔2周免疫1次，共免疫2次。于末次免疫仔猪4周后，各组仔猪用猪带绦虫卵攻击感染，攻击感染后3个月剖杀仔猪，分离猪囊尾蚴，计算减蚴率；前腔静脉取血，分离血清和制备外周血淋巴细胞（PBMC）。酶联免疫吸附试验（ELISA法）检测血清免疫球蛋白（Ig）G、IgGl、lgG2a水平和PBMC培养上清液中白细胞介素（IL）．2、干扰素（IFN）．1、IL4及IL-10水平；四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测PBMC增殖情况。结果猪带绦虫重组Bb．TS045W．4B．TSOLl8、重组Bb—TS045W．4B、重组Bb—TSOLl8疫苗灌胃组减蚴率分别为83．09％、71.36％和74．85％。仔猪血清IgG、IgGl和IgG2a水平组间比较差异均有统计学意义（F=132．348、106．336、596．091，P〈0．05）。其中重组Bb-TS045W-4B-TSOL18、重组Bb-TS045W-4B、重组Bb．TSOL18疫苗灌胃组IgG、IgG2a水平[（366．81±3．84）、（334．94±11．65）、（333．52±11．09），（87．74±0．95）、（84．48±0．80）、（84．30±1．09）mg／L]均高于MRS对照组[（245．94±8．81）、（62．61±0．84）mg／L，P均〈0．05]，IgGl水平[（26．55±1．06）、（33．24±1．92）、（32．60±1．94）mg／L]低于MRS对照组[（42．78±0．87）mg／L，P均〈0．05]。仔猪PBMC培养上清原液中IL-2、IFN-1、IL．4和IL．10水平组间比较差异均有统计学意义（F=139．522、1053．102、769．097、962．298，P均〈0．05）。其中重组Bb．TS045W．4B．T 展开更多

关键词 猪带绦虫 重组bb-tso45W-4b-tsoL18疫苗 保护性免疫应答 仔猪

原文传递

猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗诱导仔猪免疫应答的动态观察 被引量：2

14

作者 王灵军 刘美辰 +4 位作者 周泠 杨凤娇 贾启 江楠 周必英 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期356-362,375,共8页

目的研究猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗免疫仔猪后诱导免疫应答的动态变化。方法将16头40d龄健康仔猪均分为4组：重组Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗组、重组Bb-TSO45W-4B疫苗组、重组Bb-TSOL18疫苗组和双歧杆菌液体培养基（MRS）对照... 目的研究猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗免疫仔猪后诱导免疫应答的动态变化。方法将16头40d龄健康仔猪均分为4组：重组Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗组、重组Bb-TSO45W-4B疫苗组、重组Bb-TSOL18疫苗组和双歧杆菌液体培养基（MRS）对照组。各疫苗组均以1011 CFU灌胃免疫,间隔2周免疫1次,共免疫2次。在免疫后0、2、4、6、8周采集仔猪前腔静脉血,分离血清和外周血淋巴细胞（PBMC）。采用ELISA法检测仔猪血清IgG、IgG1及IgG2a水平和PBMC培养上清液IL-2、IFN-γ、IL-4及IL-10水平;MTT比色法检测PBMC增殖水平;FCM检测CD4＋和CD8＋T细胞亚群。结果各疫苗组血清IgG、IgG1、IgG2a水平均在免疫后2～8周升高,均在免疫后4周、6周、4周达较高水平;PBMC增殖水平均在免疫后2～8周升高,均在免疫后6周达较高水平;CD4＋和CD8＋T细胞水平均在免疫后2～8周升高,均在免疫后8周和6周达较高水平;PBMC培养上清液IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10水平分别在免疫后2～6周、2～8周、4～6周和2～8周升高,分别在免疫后4周、6周、4周和8周达较高水平。各疫苗组上述指标与MRS对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）;重组Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗组与重组Bb-TSO45W-4B疫苗组和重组Bb-TSOL18疫苗组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗免疫仔猪可诱导产生特异性的免疫应答,且TSO45W-4BTSOL18融合抗原疫苗组优于TSO45W-4B或TSOL18单一抗原疫苗组。 展开更多

关键词 猪带绦虫 重组bb-tso45W-4b-tsoL18疫苗 免疫应答 仔猪

下载PDF 职称材料

猪带绦虫混合重组双歧杆菌疫苗诱导仔猪的保护效果研究 被引量：1

15

作者 周必英 刘美辰 +4 位作者 周泠 杨凤娇 贾启 江楠 王灵军 《中华地方病学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第8期552-556,共5页

目的观察猪带绦虫混合重组双歧杆菌（Bh）疫苗免疫仔猪后诱导产生的保护效果。方法将40d龄健康仔猪分为实验组和对照组，每组4头。实验组以10“菌落形成单位（CFU）重组Bb-TS045W-4B疫苗和重组Bb—TSOL18疫苗，按1：1混合后灌胃免疫，间... 目的观察猪带绦虫混合重组双歧杆菌（Bh）疫苗免疫仔猪后诱导产生的保护效果。方法将40d龄健康仔猪分为实验组和对照组，每组4头。实验组以10“菌落形成单位（CFU）重组Bb-TS045W-4B疫苗和重组Bb—TSOL18疫苗，按1：1混合后灌胃免疫，间隔2周免疫1次，共免疫2次；对照组以Bb液体培养基（MRS）50ml灌胃。在免疫后不同时间点（O、2、4、6、8周）取前腔静脉血，分离血清，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清IgG水平。末次免疫4周后用猪带绦虫卵进行攻击，感染3个月后剖杀仔猪，分离囊尾蚴，计算减蚴率；取前腔静脉血，分离血清和制备外周血淋巴细胞（PBMC），采用ELISA法检测血清IgG、IgG1、IgG2a水平和PBMC培养上清液白细胞介素（IL）-2、干扰素（IFN）-1、IL．4及IL-10水平；四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测PBMC增殖水平。结果实验组血清IgG水平在首次免疫后2～8周升高，在4周达较高水平，与对照组比较，差异有统计学意义（mg／L：270．64±1．94比207．74±2．24，t=42．479，P〈0．05）。攻击感染3个月后，实验组减蚴率为80．48％；实验组与对照组比较，血清IgG、IgG2a水平显著升高，IgGl水平显著降低（mg／L：364．15±11．52比245．94±8．81．89．74±1．13比62．61±0．84，20．52±1．00比34．11±0．65，t=16．303、38．579、-22．772，P均〈0．05）；PBMC培养上清液IL-2、IFN-叫水平显著升高，IL-4、IL-10水平显著降低（ng／L：215．24±3．31比174．19±2．14．28．21±0．27比17．69±0．28．40．35±0．34比52．57±0．29．71．34±0．36比94．82±0．45，t=20．839、53．623、-54．743、-81．266，P均〈0．05）；PBMC增殖水平显著升高（0．620±0．051比0．242±0．053，t=10．259，P〈0．05）。结论猪带绦虫混合重组Bb疫苗可诱导仔猪产生-定的保护力，Th1型免疫应答在保护性免疫机制中起重要作用。 展开更多

关键词 猪带绦虫 混合重组双歧杆菌疫苗 重组bb-TS045W-4b疫苗 重组bb-tsoLl8疫苗 保护效果

原文传递

猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因重组双歧杆菌诱导家猪免疫应答 被引量：1

16

作者 周必英 刘美辰 万小波 《遵义医学院学报》 2015年第2期117-120,共4页

目的 观察猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因重组双歧杆菌口服灌胃和肌肉注射家猪后诱导的免疫应答.方法 12头40日龄健康家猪随机均分为3组,每组4头.口服灌胃组每猪灌胃1011 CFU重组双歧杆菌[溶于50 mL双歧杆菌液体培养基（MRS）],肌肉... 目的 观察猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因重组双歧杆菌口服灌胃和肌肉注射家猪后诱导的免疫应答.方法 12头40日龄健康家猪随机均分为3组,每组4头.口服灌胃组每猪灌胃1011 CFU重组双歧杆菌[溶于50 mL双歧杆菌液体培养基（MRS）],肌肉注射组每猪于猪后腿肌肉注射1011CFU重组双歧杆菌（溶于10 mL MRS）,对照组每猪灌胃50 mL MRS.每次间隔2周,共免疫2次.于免疫后0、2、4、6和8周进行前腔静脉采血,采用ELISA法检测猪血清免疫球蛋白G（IgG）水平;制备猪外周血淋巴细胞（PBMC）,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测猪PBMC增殖水平;收集粪便,测定分泌型免疫球蛋白A（sIgA）水平.结果 与免疫前和MRS对照组相比,口服灌胃组和肌肉注射组猪血清IgG水平、PBMC增殖水平均在免疫后2～8周升高,6周达较高水平;粪便sIgA水平在免疫后2～8周升高,4周达较高水平,差异均具有统计学意义（P＜0.05）.口服灌胃组的IgG、sIgA水平和PBMC增殖水平显著高于肌肉注射组（P＜0.05）.结论 猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因重组双歧杆菌可诱导家猪产生有效的免疫应答,其免疫效果口服灌胃优于肌肉注射. 展开更多

关键词 猪带绦虫 tso45W-4b-tsoL18融合基因 重组双歧杆菌 免疫应答

下载PDF 职称材料