目的:探讨TLR4信号对乳腺癌4T1细胞株中miR-21表达的影响及调控机制,研究miR-21对乳腺癌细胞凋亡和增殖的影响。方法:体外培养乳腺癌细胞株4T1,以TLR4配体LPS刺激6、12、18、24 h,实时荧光定量PCR检测4T1细胞中miR-21的表达变化。Wester...目的:探讨TLR4信号对乳腺癌4T1细胞株中miR-21表达的影响及调控机制,研究miR-21对乳腺癌细胞凋亡和增殖的影响。方法:体外培养乳腺癌细胞株4T1,以TLR4配体LPS刺激6、12、18、24 h,实时荧光定量PCR检测4T1细胞中miR-21的表达变化。Western blotting检测TLR4信号活化后4T1细胞中NF-κBp65的表达和磷酸化情况;应用NF-κB抑制剂PDTC预处理30 min,实时荧光定量PCR检测4T1细胞中miR-21的变化。转染miR-21抑制剂和阴性对照后,Annexin-V/PI双标法检测4T1细胞凋亡情况,MTT法检测4T1细胞增殖情况。结果:LPS刺激致TLR4信号活化能够时间依赖性地上调miR-21的表达(18 h时:2.07±0.33 vs 1;t=5.61,P=0.03),TLR4信号能够时间依赖性地上调NF-κB的活化,NF-κB抑制剂PDTC能明显抑制TLR4信号诱导的4T1细胞的miR-21上调(0.70±0.10 vs 2.14±0.32;t=-7.357,P=0.002)。与阴性对照组相比,miR-21抑制剂组4T1细胞的凋亡率明显增高[(24.2±2.4)%vs(14.8±5.1)%;t=2.891,P=0.044],4T1细胞的增殖能力明显降低(0.42±0.02 vs 0.55±0.01;t=-8.528,P=0.001)。结论:TLR4信号通路的活化能够上调乳腺癌4T1细胞中miR-21的表达,其机制与NF-κB的活化有关;靶向抑制miR-21能有效促进4T1细胞的凋亡、抑制4T1细胞增殖。展开更多
目的:探讨内毒素(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠心肌中Toll样受体4(Toll like receptor4,TLR4)通路分子靶点激活的时间相关性及其意义。方法:将雄性C57BL/6J小鼠随机分为LPS处理组(腹腔注射LPS10mg/kg)和生理盐水对照组,Western bl...目的:探讨内毒素(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠心肌中Toll样受体4(Toll like receptor4,TLR4)通路分子靶点激活的时间相关性及其意义。方法:将雄性C57BL/6J小鼠随机分为LPS处理组(腹腔注射LPS10mg/kg)和生理盐水对照组,Western blotting检测处理后5min、10min、30min、1h、2h、6h、12h、24h各时间点(n=3)心肌TLR4通路各分子靶点的激活。结果:TLR4-MyD88-IκBα通路5min即被激活,2h达高峰,随后开始下降(P<0.05)。MAPKs5min被激活,6h达峰值,随后开始下降(P<0.05)。Akt10min被激活,6h达峰值,其后逐渐下降(P<0.05)。结论:LPS诱导心肌TLR4通路的激活与时间变化存在密切联系。展开更多
文摘目的:探讨TLR4信号对乳腺癌4T1细胞株中miR-21表达的影响及调控机制,研究miR-21对乳腺癌细胞凋亡和增殖的影响。方法:体外培养乳腺癌细胞株4T1,以TLR4配体LPS刺激6、12、18、24 h,实时荧光定量PCR检测4T1细胞中miR-21的表达变化。Western blotting检测TLR4信号活化后4T1细胞中NF-κBp65的表达和磷酸化情况;应用NF-κB抑制剂PDTC预处理30 min,实时荧光定量PCR检测4T1细胞中miR-21的变化。转染miR-21抑制剂和阴性对照后,Annexin-V/PI双标法检测4T1细胞凋亡情况,MTT法检测4T1细胞增殖情况。结果:LPS刺激致TLR4信号活化能够时间依赖性地上调miR-21的表达(18 h时:2.07±0.33 vs 1;t=5.61,P=0.03),TLR4信号能够时间依赖性地上调NF-κB的活化,NF-κB抑制剂PDTC能明显抑制TLR4信号诱导的4T1细胞的miR-21上调(0.70±0.10 vs 2.14±0.32;t=-7.357,P=0.002)。与阴性对照组相比,miR-21抑制剂组4T1细胞的凋亡率明显增高[(24.2±2.4)%vs(14.8±5.1)%;t=2.891,P=0.044],4T1细胞的增殖能力明显降低(0.42±0.02 vs 0.55±0.01;t=-8.528,P=0.001)。结论:TLR4信号通路的活化能够上调乳腺癌4T1细胞中miR-21的表达,其机制与NF-κB的活化有关;靶向抑制miR-21能有效促进4T1细胞的凋亡、抑制4T1细胞增殖。
文摘目的:探讨内毒素(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠心肌中Toll样受体4(Toll like receptor4,TLR4)通路分子靶点激活的时间相关性及其意义。方法:将雄性C57BL/6J小鼠随机分为LPS处理组(腹腔注射LPS10mg/kg)和生理盐水对照组,Western blotting检测处理后5min、10min、30min、1h、2h、6h、12h、24h各时间点(n=3)心肌TLR4通路各分子靶点的激活。结果:TLR4-MyD88-IκBα通路5min即被激活,2h达高峰,随后开始下降(P<0.05)。MAPKs5min被激活,6h达峰值,随后开始下降(P<0.05)。Akt10min被激活,6h达峰值,其后逐渐下降(P<0.05)。结论:LPS诱导心肌TLR4通路的激活与时间变化存在密切联系。
