目的探索小鼠淋巴瘤胸腺激酶(tk)位点基因突变试验中血清灭活对结果的影响。方法取对数生长期的小鼠淋巴瘤细胞(L5178Y3.7.2c-tk+/-)设立阴性对照组和阳性对照组,阴性对照组加入100μL DMSO,阳性对照组加入100μL 10μg/m L 4-硝基喹啉(...目的探索小鼠淋巴瘤胸腺激酶(tk)位点基因突变试验中血清灭活对结果的影响。方法取对数生长期的小鼠淋巴瘤细胞(L5178Y3.7.2c-tk+/-)设立阴性对照组和阳性对照组,阴性对照组加入100μL DMSO,阳性对照组加入100μL 10μg/m L 4-硝基喹啉(4-NQO)诱导突变,测定细胞悬浮增长率(SG)、相对悬浮增长率(RSG)、平板效率(PE)、相对存活率(RS)和相对总生长率(RTG)等指标。根据血清灭活与否和选择突变剂三氟胸苷(TFT)的含量,在筛选突变集落过程中,将阴性对照组和阳性对照组各分为:灭活组、未灭活+1.5倍TFT组、未灭活组,测定突变频率(MF),对试验结果进行评价。结果阴性对照组SG在8~32,细胞倍增速度符合试验要求;PE在65%~120%,符合试验成立条件。阳性对照的灭活组、未灭活+1.5倍TFT组、未灭活组中MF均比阴性对照组至少增加300×10-6且小克隆突变频率至少占40%,符合试验要求。阴性对照灭活组的MF数值在标准范围内,未灭活组的MF数值明显高于灭活组,超过标准数值范围,且96孔板中的大小克隆不易区分;阴性对照未灭活+1.5倍TFT组使得MF数值在标准范围内,但远高于灭活组。结论在小鼠淋巴瘤试验中,测定MF的平板一定要用灭活的血清,未灭活血清可能通过抵消TFT作用对结果产生很大影响。展开更多
文摘目的探索小鼠淋巴瘤胸腺激酶(tk)位点基因突变试验中血清灭活对结果的影响。方法取对数生长期的小鼠淋巴瘤细胞(L5178Y3.7.2c-tk+/-)设立阴性对照组和阳性对照组,阴性对照组加入100μL DMSO,阳性对照组加入100μL 10μg/m L 4-硝基喹啉(4-NQO)诱导突变,测定细胞悬浮增长率(SG)、相对悬浮增长率(RSG)、平板效率(PE)、相对存活率(RS)和相对总生长率(RTG)等指标。根据血清灭活与否和选择突变剂三氟胸苷(TFT)的含量,在筛选突变集落过程中,将阴性对照组和阳性对照组各分为:灭活组、未灭活+1.5倍TFT组、未灭活组,测定突变频率(MF),对试验结果进行评价。结果阴性对照组SG在8~32,细胞倍增速度符合试验要求;PE在65%~120%,符合试验成立条件。阳性对照的灭活组、未灭活+1.5倍TFT组、未灭活组中MF均比阴性对照组至少增加300×10-6且小克隆突变频率至少占40%,符合试验要求。阴性对照灭活组的MF数值在标准范围内,未灭活组的MF数值明显高于灭活组,超过标准数值范围,且96孔板中的大小克隆不易区分;阴性对照未灭活+1.5倍TFT组使得MF数值在标准范围内,但远高于灭活组。结论在小鼠淋巴瘤试验中,测定MF的平板一定要用灭活的血清,未灭活血清可能通过抵消TFT作用对结果产生很大影响。
