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中国家蚕抗菌肽人工合成类CMⅣ基因在甜菜夜蛾虫体中的表达 被引量:6
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作者 赵东红 戴祝英 +1 位作者 周开亚 张林元 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期680-685,共6页
将人工合成的中国家蚕抗菌肽类CMⅣ基因与抗菌肽信号肽基因连接 ,经EcoRⅠ、HindⅢ双酶切后 ,克隆于pFASTBacⅠ的EcoRⅠ、HindⅢ酶切位点之间 ,得到重组转座载体pFASTBac ABP ,经测序证明阳性克隆正确。将重组转座载体转化HD1 0Bac大肠... 将人工合成的中国家蚕抗菌肽类CMⅣ基因与抗菌肽信号肽基因连接 ,经EcoRⅠ、HindⅢ双酶切后 ,克隆于pFASTBacⅠ的EcoRⅠ、HindⅢ酶切位点之间 ,得到重组转座载体pFASTBac ABP ,经测序证明阳性克隆正确。将重组转座载体转化HD1 0Bac大肠杆菌 ,得到重组Bacmid ABP。将重组Bacmid转染sf2 1细胞及感染甜菜夜蛾 (Laphygmaexigua)幼虫 ,在培养细胞上清及虫体血淋巴中均测到抗菌活性。经Northernblotting证明感染甜菜夜蛾幼虫中有类CMⅣmRNA的存在。且表达产物在酸性电泳中电泳行为与天然抗菌肽CMⅣ组分相似。为进一步利用昆虫细胞及虫体生产抗菌肽药物打下了基础。 展开更多
关键词 中国家蚕抗菌肽类 CMⅣ基因 昆虫杆状病毒表达系统 Bac-to-Bac策略 sf21细胞 甜菜夜蛾幼虫
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HCV结构蛋白在昆虫细胞中的表达及病毒样颗粒的组装 被引量:2
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作者 王瑞青 梁昌镛 +2 位作者 焦成松 宋建华 陈新文 《中国病毒学》 CSCD 2005年第1期5-10,共6页
本文利用Bac to Bac杆状病毒表达系统构建了含有丙型肝炎病毒 (Hepatitis C Virus,HCV)结构蛋白编码基因的重组杆状病毒vAcHCVsp1,并获得了HCV结构蛋白在昆虫细胞Sf21中的表达。HCV mRNA转录和蛋白质表达时相分析表明,感染后16 h HCV... 本文利用Bac to Bac杆状病毒表达系统构建了含有丙型肝炎病毒 (Hepatitis C Virus,HCV)结构蛋白编码基因的重组杆状病毒vAcHCVsp1,并获得了HCV结构蛋白在昆虫细胞Sf21中的表达。HCV mRNA转录和蛋白质表达时相分析表明,感染后16 h HCV结构蛋白编码基因开始转录,72 h达最高峰;蛋白质表达则是在感染后48h开始,72 h达到高峰。电镜观察表明 vAcHCVsp1 感染的 Sf21 细胞 96 h时在细胞质中可见很多空泡,空泡中可见50nm的球形颗粒,为HCV结构蛋白组装的病毒样颗粒。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 结构蛋白 表达 病毒样颗粒 sf21细胞
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文山松毛虫质型多角体病毒在Sf21细胞中离体增殖试验 被引量:2
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作者 马永平 孟小林 徐进平 《中国病毒学》 CSCD 2002年第2期137-141,共5页
研究了文山松毛虫质型多角体病毒 (DpCPV W )在Sf2 1细胞中的离体增殖行为 ,并进行了空斑试验 ,结果显示DpCPV W毒株能够在Sf2 1细胞中增殖 ,也能在Sf2 1细胞上形成空斑 ,并能产生形态正常的病毒多角体。在DpCPV W中加入基因工程增效蛋... 研究了文山松毛虫质型多角体病毒 (DpCPV W )在Sf2 1细胞中的离体增殖行为 ,并进行了空斑试验 ,结果显示DpCPV W毒株能够在Sf2 1细胞中增殖 ,也能在Sf2 1细胞上形成空斑 ,并能产生形态正常的病毒多角体。在DpCPV W中加入基因工程增效蛋白 ,能显著增加病毒粒子对离体细胞的感染率 ,增幅达 145 %。生物测定表明 ,离体增殖的病毒多角体与虫体增殖的多角体的毒力相当。因此 ,Sf2 1细胞可以作为文山松毛虫CPV增殖行为研究的离体细胞系统 。 展开更多
关键词 文山松毛虫质型 多角体病毒 sf21细胞 离体增殖试验 空斑试验 增效蛋白
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非受体型酪氨酸激酶-Syk蛋白的提取与纯化
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作者 单保恩 董青 +3 位作者 李宏芬 陈晶 董金琢 马洪 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期230-233,共4页
目的 :从转染syk基因的Sf2 1细胞中提取、纯化免疫相关因子Syk蛋白。方法 :将syk基因转染Sf2 1细胞 ,于 2 8℃培养 48h ,收集细胞 ,用超声波破碎仪裂解细胞 ,提取裂解液中总蛋白 ,用Yellow 3凝胶和Toyopearl AF Heptin 650M凝胶层析柱... 目的 :从转染syk基因的Sf2 1细胞中提取、纯化免疫相关因子Syk蛋白。方法 :将syk基因转染Sf2 1细胞 ,于 2 8℃培养 48h ,收集细胞 ,用超声波破碎仪裂解细胞 ,提取裂解液中总蛋白 ,用Yellow 3凝胶和Toyopearl AF Heptin 650M凝胶层析柱分离、纯化。层析液中的Syk蛋白存在和性质 ,用SDS PAGE、免疫印迹实验和等电聚焦实验鉴定。结果 :从 2 5亿个Sf2 1细胞裂解液中提取了含有Syk的 2 2 5mg蛋白质。经Yellow 3凝胶层析分离 ,得到两个亚种的Syk蛋白 ,相对分子质量 (Mr)均为72× 10 3 。进一步用Toyopearl AF Heptin 650M凝胶层析纯化后 ,得到两个纯的Syk蛋白 ,SDS PAGE、免疫印迹实验结果显示 ,两种Syk的Mr 均为 72× 10 3,与Syk的理论相对分子质量吻合。但等电聚焦实验显示 ,这两种Syk蛋白成分具有不同的pI值。结论 :从 2 5亿个转染syk基因的Sf2 1细胞中纯化出8mgSyk蛋白 ,纯度高于 95%。这两种Syk的Mr 虽然相同 ,但具有不同的pI值 ,是两个亚种。这些Syk可用于研究Syk的作用机制。 展开更多
关键词 SYK 分离纯化 凝胶层析 sf21细胞
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信号转导与转录激活因子3蛋白的提取及纯化
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作者 单保恩 王俊霞 +2 位作者 李宏芬 陈晶 马洪 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期119-120,共2页
关键词 转录激活因子3 凝胶层析 sf21细胞
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胡椒碱对SF-21细胞株的杀伤作用及对其形态影响的研究 被引量:1
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作者 王佳 诸葛洪祥 +2 位作者 朱江 周洪福 陈明中 《热带医学杂志》 CAS 2006年第5期521-523,513,共4页
目的检测胡椒碱对草地贪夜蛾SF-21细胞的毒性作用和生长抑制作用,以便进一步研究其对昆虫细胞离子通道的影响。方法胡椒碱处理SF-21细胞后,用MTT微量酶反应比色法、改良微波Giemsa染色法检测细胞死亡率及形态学改变,用冲击式测试法检测... 目的检测胡椒碱对草地贪夜蛾SF-21细胞的毒性作用和生长抑制作用,以便进一步研究其对昆虫细胞离子通道的影响。方法胡椒碱处理SF-21细胞后,用MTT微量酶反应比色法、改良微波Giemsa染色法检测细胞死亡率及形态学改变,用冲击式测试法检测细胞生长率及受损细胞的恢复。结果胡椒碱处理24h后,对SF-21细胞的半数毒性浓度(IC50)为95.37μg/ml,且毒性作用强度随着药物浓度增加而增强。胡椒碱浓度在10μg/ml以上时可诱发SF-21细胞形态学改变,表现为细胞呈多形性、细胞间有间隙、胞质内充满颗粒,以后随药物浓度的升高,胞质出现空泡、染色质凝成粗大颗粒或无结构大块、大片细胞脱落、崩解、死亡。低浓度胡椒碱(5μg/ml)对SF-21细胞增殖没有影响,较高浓度胡椒碱(10、20、40μg/ml)则对SF-21细胞增殖有明显的抑制作用,抑制作用强度随药物浓度的增加而增加,去除药物作用后,受抑制的细胞又重新恢复生长、分裂。结论胡椒碱对昆虫细胞有较强的毒性作用和生长抑制作用,可作为新型杀虫剂的功能物质。 展开更多
关键词 胡椒碱 草地贪夜蛾 sf-21细胞
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