银杏叶提取物联合奥美沙坦酯治疗原发性高血压的疗效及其对血清蛋白表达的影响 被引量：7

1

作者 徐静雯 王楠 《中国药房》 CAS 北大核心 2016年第23期3257-3260,共4页

目的：观察银杏叶提取物联合奥美沙坦酯治疗原发性高血压的临床疗效与安全性,并探讨其对血清蛋白表达的影响。方法：选取98例原发性高血压患者,按照随机数字表法分为观察A组和观察B组,各49例;纳入40名健康志愿者为对照组。观察A组患者... 目的：观察银杏叶提取物联合奥美沙坦酯治疗原发性高血压的临床疗效与安全性,并探讨其对血清蛋白表达的影响。方法：选取98例原发性高血压患者,按照随机数字表法分为观察A组和观察B组,各49例;纳入40名健康志愿者为对照组。观察A组患者给予奥美沙坦酯片20~40 mg,po,qd;观察B组患者给予奥美沙坦酯片20~40 mg,po,qd＋银杏叶提取物片40~80 mg,po,bid,疗程均为4周。观察3组受试者血压[收缩压（SBP）和舒张压（DBP）]、中医证候评分、2-DE图谱的重复性和分辨率、蛋白质差异表达点、差异表达蛋白质的相关信息和观察组患者的不良反应发生情况。结果：治疗后,观察组患者SBP、DBP、中医证候评分均明显低于治疗前,且治疗后4周明显低于治疗后2周,观察B组明显低于观察A组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。观察B组患者治疗后的蛋白质差异表达点的重复性和分辨率明显优于观察A组。观察组治疗前15个蛋白质点表达下调,治疗后均表现为不同程度上调,且观察B组较观察A组更接近对照组水平;6个蛋白质点表达上调,治疗后均表现为不同程度下调,且观察B组较观察A组更接近对照组水平;共鉴定出11个蛋白质点。观察A组和观察B组患者不良反应发生率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：银杏叶提取物联合奥美沙坦酯治疗原发性高血压对患者的血清蛋白表达影响较大,具有较理想的降压、控压效果,且安全性较高。 展开更多

关键词 银杏叶提取物 奥美沙坦酯 原发性高血压 血清蛋白表达

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人白介素-2／人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达 被引量：6

2

作者 郭泽峰 段作营 +2 位作者 张莲芬 金坚 李华钟 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期82-86,共5页

目的:构建编码人白介素-2/人血清白蛋白的重组表达质粒pPIH,在毕赤酵母(Pichiapastria)中进行表达,获得具有白介素-2(IL-2)活性的融合蛋白。方法:通过逆转录方法从人外周血单核细胞得到人IL-2的cDNA,再通过重叠PCR方法,将编码人IL-2的c... 目的:构建编码人白介素-2/人血清白蛋白的重组表达质粒pPIH,在毕赤酵母(Pichiapastria)中进行表达,获得具有白介素-2(IL-2)活性的融合蛋白。方法:通过逆转录方法从人外周血单核细胞得到人IL-2的cDNA,再通过重叠PCR方法,将编码人IL-2的cDNA和编码人白蛋白的cDNA拼接起来,克隆至T载体获得含有融合基因IH的质粒pMD19/IH。用EcoRI和NotI双酶切pMD19/IH和pPIC9K两种质粒,通过琼脂糖凝胶电泳分离,试剂盒纯化,将IH片段和pPIC9K连接获得表达型pPIH的重组质粒,利用电转化方法转化毕赤酵母KM71获得重组表达质粒pPIH;CTLL-2/MTT法测定融合蛋白中人IL-2活性。结果:成功构建了人白介素-2/人血清白蛋白的重组表达质粒pPIH,融合蛋白得到了较理想的表达;重组菌经甲醇诱导表达后含有融合蛋白IL-2-HSA发酵上清液表现100U/mL的生物学活性。结论:成功获得具有人IL-2生物活性的重组人白介素-2/血清白蛋白融合蛋白,该研究结果未见文献报道。 展开更多

关键词 人白介素-2 人血清白蛋白 毕赤酵母 融合蛋白 表达

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红曲黄素对高脂血症小鼠血脂及肝脏AMPKα ACC、PPAR-α、CPT1蛋白表达的影响 被引量：6

3

作者 刘燕玲 吴美玲 +2 位作者 胡莹 王旭景 丁科 《中国中医药科技》 CAS 2019年第3期351-356,共6页

目的:研究红曲黄素(Ankaflavin,AK)对高脂血症小鼠的血脂调节及肝脏保护作用。方法:选用70只清洁级健康雄性C57BL/6J小鼠,适应性饲养1周,随机选取10只小鼠作为正常组,喂以基础饲料,其余小鼠喂以高脂饲料,连续6周。将成模小鼠随机分为5组... 目的:研究红曲黄素(Ankaflavin,AK)对高脂血症小鼠的血脂调节及肝脏保护作用。方法:选用70只清洁级健康雄性C57BL/6J小鼠,适应性饲养1周,随机选取10只小鼠作为正常组,喂以基础饲料,其余小鼠喂以高脂饲料,连续6周。将成模小鼠随机分为5组,分别为模型组、AK低、中、高[50、100、200 mg/(kg·d)]剂量组和SIM[15 mg/(kg·d)]组,模型组与正常组灌胃给予等体积生理盐水,每组10只,每天灌胃1次,连续4周。末次给药后,各组小鼠麻醉后腹主动脉采血进行血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、瘦素(Leptin)、谷草转氨酶(AST)及谷丙转氨酶(ALT)的含量测定。解剖取肝脏,测定肝脏组织中TC、TG含量,并通过HE染色观察肝脏组织形态变化、油红O染色观察肝脏脂质沉积情况;采用Western blot法检测小鼠肝脏中PPAR-α和CPT1的蛋白表达水平以及AMPKα和ACC的磷酰化情况。结果:与正常组相比,模型组小鼠的体质量、血清和肝组织TC、TG含量均显著升高(P<0.01或P<0.05);肝组织P-AMPKα、P-ACC、PPAR-α及CPT1蛋白的表达显著降低(P<0.01);肝细胞形成脂质沉积,胞浆内多出现脂肪空泡。AK干预后,小鼠体质量降低,血清中TC、TG、Leptin含量降低,AST、ALT含量降低及肝脏P-AMPKα、P-ACC、PPAR-α及CPT1蛋白表达水平显著增加,肝脏的脂肪性病变明显改善。结论:AK对高脂血症小鼠具有明显的降脂效果并有效减轻其肝脏损伤;其作用机制可能与激活AMPK途径刺激脂肪酸氧化密切相关。 展开更多

关键词 红曲黄素 高脂血症 血脂 组织形态 蛋白表达 小鼠

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J亚群禽白血病病毒gp85单因子血清的制备 被引量：6

4

作者 梁艺瑜 冯少珍 +5 位作者 史伟伟 刘红波 王小芬 李育豪 廖明 曹伟胜 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第10期76-81,共6页

J亚群禽白血病病毒(ALV-J)在中国普遍存在,严重危害养禽业,暂时尚无有效预防、治疗禽白血病的措施,只能通过净化控制。因此,研究一种低成本、易推广的检测方法对防控此病非常重要。用DF-1细胞接种病毒,以细胞基因组为模板,通过巢式PCR... J亚群禽白血病病毒(ALV-J)在中国普遍存在,严重危害养禽业,暂时尚无有效预防、治疗禽白血病的措施,只能通过净化控制。因此,研究一种低成本、易推广的检测方法对防控此病非常重要。用DF-1细胞接种病毒,以细胞基因组为模板,通过巢式PCR方法扩增出941bp的含酶切位点的ALV-J特异性基因gp85基因序列,连接于pET32a(+)载体上,实现gp85蛋白在宿主菌BL21的表达,以切胶回收方式纯化蛋白,成功获得约52ku的重组融合蛋白,免疫新西兰兔,制备gp85单因子抗血清,Dot-ELISA检测抗体效价。结果显示,纯化所得蛋白质具有良好抗原性,制备的抗血清效价高于1.024×105。本试验通过较简便、低耗的方法获得高效单因子血清,为抗血清的制备提供参考,为ALV-J gp85蛋白的研究、ALV-J特异性检测方法的研制打下基础,对ALV-J的净化有重要意义。 展开更多

关键词 J亚群禽白血病病毒 单因子血清 GP85基因 蛋白表达

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SAA在鼻咽癌CNE-2细胞中的表达及其对细胞生长、凋亡的影响 被引量：4

5

作者 江青山 邓文蓉 +1 位作者 肖桃源 沈宝茗 《山东医药》 CAS 2013年第45期1-4,共4页

目的观察血清淀粉样蛋白A(SAA)在鼻咽癌CNE-2细胞中的表达及其对细胞生长、凋亡的影响。方法构建针对SAA基因的shRNA表达干扰载体,筛选出有效的小干扰RNA(siRNA)序列,利用siRNA技术和高表达载体分别沉默及过表达SAA,检测SAA表达对鼻咽癌... 目的观察血清淀粉样蛋白A(SAA)在鼻咽癌CNE-2细胞中的表达及其对细胞生长、凋亡的影响。方法构建针对SAA基因的shRNA表达干扰载体,筛选出有效的小干扰RNA(siRNA)序列,利用siRNA技术和高表达载体分别沉默及过表达SAA,检测SAA表达对鼻咽癌CNE-2细胞的生长及凋亡的影响。结果 pGPU6/GFP/Neo-SAA1-homo-482和pCD3.1(+)-SAA在鼻咽癌CNE-2细胞中可有效地沉默及过表达SAA基因的mRNA和蛋白,且与对照组比较差异具有统计学意义(P均<0.05);SAA增高可促进鼻咽癌CNE-2细胞生长,降低可促进鼻咽癌CNE-2细胞凋亡。结论在SAA基因的shRNA表达干扰载体中,只有pGPU6/GFP/Neo-SAA1-homo-482可有效沉默SAA在鼻咽癌CNE-2细胞中的表达;SAA增高可促进鼻咽癌CNE-2细胞生长,SAA沉默可促进鼻咽癌CNE-2细胞凋亡。 展开更多

关键词 鼻咽肿瘤 血清淀粉样蛋白A 表达载体 干扰载体

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重组人骨保护素片段OPG^(179)与人血清白蛋白在毕赤酵母中的融合表达 被引量：4

6

作者 刘俊丽 刘波 +5 位作者 宋淑军 司少艳 谭小青 吴军 景青萍 张建中 《生物技术通讯》 CAS 2011年第1期15-18,23,共5页

目的:在毕赤酵母中融合表达人骨保护素(OPG)片段OPG179与人血清白蛋白(HSA)。方法:通过RT-PCR扩增获得OPG179基因,构建表达质粒pHILD2-rhOPG179-HSA,转化至毕赤酵母菌中进行表达、纯化,对分泌表达产物进行SDS-PAGE及Western印迹检测。结... 目的:在毕赤酵母中融合表达人骨保护素(OPG)片段OPG179与人血清白蛋白(HSA)。方法:通过RT-PCR扩增获得OPG179基因,构建表达质粒pHILD2-rhOPG179-HSA,转化至毕赤酵母菌中进行表达、纯化,对分泌表达产物进行SDS-PAGE及Western印迹检测。结果:酶切鉴定与测序结果显示重组表达质粒pHILD2-rhOPG179-HSA正确;经Western印迹检测,融合蛋白rhOPG179-HSA的相对分子质量约为97×103,符合预期值;rhHSA-OPG179在毕赤酵母中的表达量约为80 mg/L。结论:表达并纯化制备了重组骨保护素片段与人血清白蛋白的融合蛋白,为后续的生物学活性研究奠定了一定的基础。 展开更多

关键词 人骨保护素 人血清白蛋白 融合蛋白 毕赤酵母 表达 纯化

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无血清悬浮驯化CHO-K1单克隆细胞株的建立及其表达验证

7

作者 谢涛 孙青 +6 位作者 彭秀娥 张朝 张宽 王翠 刘伯宁 李文宾 姚兵 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第8期945-951,共7页

目的通过无血清悬浮驯化CHO-K1细胞,筛选出单克隆源性可追溯、生长状态良好的宿主细胞株,并进行表达验证。方法采用逐步降低血清含量的方法,将贴壁状态的CHO-K1细胞驯化成适应无血清培养基培养的悬浮细胞;通过单细胞接种/成像系统Verifi... 目的通过无血清悬浮驯化CHO-K1细胞,筛选出单克隆源性可追溯、生长状态良好的宿主细胞株,并进行表达验证。方法采用逐步降低血清含量的方法,将贴壁状态的CHO-K1细胞驯化成适应无血清培养基培养的悬浮细胞;通过单细胞接种/成像系统Verified In-Situ Plate Seeding(简称VIPS系统)筛选单克隆,经连续培养综合评估单克隆细胞的倍增时间、结团率、细胞直径等参数,确定候选克隆;将候选克隆分别转染携带绿色及红色荧光蛋白的质粒,根据荧光蛋白表达情况确定1株克隆作为工程细胞株的宿主细胞。结果驯化获得的CHO-K1细胞适应无血清悬浮培养,倍增时间为20~24 h;通过单克隆筛选和产量评估确定的单克隆细胞株单克隆源性良好且可追溯,以0.5×10~6个/mL的细胞密度接种,培养7 d最高细胞密度可达8.27×10~6个/mL,活率不低于80%,平均倍增时间20.31 h,能较好地表达外源基因。结论通过无血清驯化培养,成功获得单克隆源性可追溯、生长状态良好且能够用于蛋白高表达的CHO-K1细胞株。 展开更多

关键词 CHO-K1细胞 无血清培养 细胞驯化 单克隆筛选 外源蛋白表达

原文传递

精神分裂症患者与饮用水锂元素水平关系及相关基因调查研究 被引量：4

8

作者 刘飞虎 吴强驹 +6 位作者 崔小花 贺瑞峰 张曼 师艳宁 王国栋 贾杰 刘勇 《陕西医学杂志》 CAS 2019年第4期535-538,共4页

目的:精神分裂症(SZ)是一种慢性的可致残的精神疾病,具有一定的遗传性,但其发病原因尚不清楚。本课题通过临床调研,考察锂元素与精神分裂症关系,同时从基因层面探究锂元素与精神分裂症的内在机制关系。方法:收集陕西省内的精神分裂症患... 目的:精神分裂症(SZ)是一种慢性的可致残的精神疾病,具有一定的遗传性,但其发病原因尚不清楚。本课题通过临床调研,考察锂元素与精神分裂症关系,同时从基因层面探究锂元素与精神分裂症的内在机制关系。方法:收集陕西省内的精神分裂症患者病例,采集样本血液和头发,运用ELISA和实时定量PCR技术检测血清内相关因子GSK-3β、NRG1、ErbB4、Bcl-2、CSF2RA的mRNA和蛋白的表达水平。结果:在饮水中锂元素偏低的地区,精神分裂症患者比例显著升高,且其头发内锂元素含量也显著低于(P<0.05)正常人。此外, ELISA和Real-time PCR结果表明,精神分裂症患者血清内精神营养因子NRG1及其受体ErbB4,以及炎症细胞因子CSF2RA的和mRNA蛋白水平显著升高,锂的作用靶点GSK3β以及神经保护因子B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达量显著下降。结论 :精神分裂症的发病机制可能与区域水质内锂含量的高低相关。 展开更多

关键词 精神分裂症 锂 血清 ELISA 检测 基因 蛋白表达

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小麦ATG8的原核表达及其抗血清制备 被引量：3

9

作者 吴洪波 刘刚 +1 位作者 张路路 王冬梅 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2013年第1期101-105,共5页

提取小麦品种L10的总RNA,进行反转录,其产物用于探究自噬基因ATG8的生物学功能。用PCR方法克隆ATG8,将克隆的ATG8亚克隆至表达载体PMD19-T,酶切后切胶回收,然后把产物测序鉴定,转化宿主菌E.coliRosetta-gami B(DE3),构建原核表达系统,... 提取小麦品种L10的总RNA,进行反转录,其产物用于探究自噬基因ATG8的生物学功能。用PCR方法克隆ATG8,将克隆的ATG8亚克隆至表达载体PMD19-T,酶切后切胶回收,然后把产物测序鉴定,转化宿主菌E.coliRosetta-gami B(DE3),构建原核表达系统,将融合蛋白纯化后制备其兔抗血清,然后利用Western Blotting技术对兔抗血清进行检测,鉴定了该抗血清的结合特异性。ATG8抗体的成功制备,为小麦中ATG8基因和自噬功能的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 ATG8 免疫印迹 抗血清 融合蛋白 原核表达

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低剂量辐射对小鼠血清蛋白差异表达的影响 被引量：3

10

作者 陈伟 何颖 +7 位作者 沈先荣 蒋定文 王庆蓉 侯登勇 刘玉明 李珂娴 刘琼 钱甜甜 《辐射研究与辐射工艺学报》 CAS CSCD 2014年第1期22-26,共5页

应用蛋白质组学方法筛选对低剂量?射线敏感的蛋白质,并采用双向凝胶电泳和基质辅助激光解析飞行时间串联质谱技术分离、鉴定不同低剂量?射线导致的小鼠血清差异表达蛋白。不同低剂量?射线照射后,对实验组与对照组的血清双向电泳图谱进... 应用蛋白质组学方法筛选对低剂量?射线敏感的蛋白质,并采用双向凝胶电泳和基质辅助激光解析飞行时间串联质谱技术分离、鉴定不同低剂量?射线导致的小鼠血清差异表达蛋白。不同低剂量?射线照射后,对实验组与对照组的血清双向电泳图谱进行比较分析,通过质谱鉴定得到7个差异表达点,分别是载脂蛋白C-III、?珠蛋白、腮腺分泌蛋白、?2巨球蛋白前体、转甲状腺蛋白晶体结构H链、C1qc蛋白和丛生蛋白。提示低剂量?射线辐照能导致小鼠血清中某些蛋白表达发生变化。 展开更多

关键词 低剂量辐射 血清蛋白 差异表达 蛋白质组学 小鼠

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人血清白蛋白与PTH(1-34)融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达及鉴定 被引量：3

11

作者 陈静 孙红颖 +2 位作者 杨颖 王学芬 陈枢青 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2008年第2期126-133,共8页

目的:在毕赤酵母中高效分泌表达人血清白蛋白与PTH(1-34)融合蛋白。方法:利用PCR技术获得HSA和PTH(1-34)基因,以柔性连接肽相连插入到表达载体pPIC9,重组质粒线性化后,用化学法转化毕赤酵母GS115,经组氨酸缺陷型培养板和PCR鉴定筛选得... 目的:在毕赤酵母中高效分泌表达人血清白蛋白与PTH(1-34)融合蛋白。方法:利用PCR技术获得HSA和PTH(1-34)基因,以柔性连接肽相连插入到表达载体pPIC9,重组质粒线性化后,用化学法转化毕赤酵母GS115,经组氨酸缺陷型培养板和PCR鉴定筛选得到转化子。在启动子AOX1和α交配因子信号肽的作用下,分泌表达融合蛋白HSA-PTH(1-34)。PCR法和电泳鉴定表达验证阳性转化子,并观测不同时间点的表达量。Western blot验证其免疫活性,在兔肾皮质细胞膜中测定腺苷酸环化酶的激活产生cAMP的量来检测融合蛋白的生物学活性。结果:PCR鉴定重组转化子验证了融合基因的成功整合,用甲醇诱导表达,蛋白电泳分析表明融合基因得到高效表达,HSA-PTH(1-34)同时具有HSA和PTH(1-34)的抗原性,且能激活兔肾皮质细胞中的腺苷酸环化酶产生cAMP,但活性低于PTH(1-34)。结论:在毕赤酵母中成功表达了具有生物学活性的人血清白蛋白与PTH(1-34)融合蛋白。 展开更多

关键词 毕赤酵母 甲状旁腺激素肽(1—34) 血清白蛋白 质粒 重组 遗传 人甲状旁腺激素(1—34) 融合蛋白 分泌表达

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冠心病血瘀证患者与健康人血清蛋白质表达的差异 被引量：2

12

作者 刘烨 《医疗装备》 2015年第12期5-6,共2页

目的:研究冠心病瘀血证患者与健康人在血清蛋白质表达方面存在的差异。方法:选取8例冠心病血瘀证患者以及8名健康人士作为本次实验的研究对象,分析两组患者血清蛋白质存在的差异。结果:冠心病血瘀证患者与健康人士相差12个蛋白质点。结... 目的:研究冠心病瘀血证患者与健康人在血清蛋白质表达方面存在的差异。方法:选取8例冠心病血瘀证患者以及8名健康人士作为本次实验的研究对象,分析两组患者血清蛋白质存在的差异。结果:冠心病血瘀证患者与健康人士相差12个蛋白质点。结论:冠心病血瘀证患者的相关蛋白主要集中在脂质代谢与炎症反应方面,并且发现了具有进一步研究价值的黄醇结合蛋白4。 展开更多

关键词 冠心病血瘀证 健康人士 血清蛋白 表达差异

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应用2-DE技术对冷应激前后雏鸡血清蛋白质表达谱的差异分析 被引量：1

13

作者 贺军 李士泽 +3 位作者 张雪 李云龙 李静辉 孟宇 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第7期109-111,289,290,共5页

为了比较冷应激前后雏鸡血清蛋白质组的差异,试验采取冷应激处理前后的雏鸡血清,经双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE),考马斯亮蓝染色后用PDQuest凝胶图像分析软件测定分析了雏鸡冷应激前后的血清蛋白质组。结果表明:冷... 为了比较冷应激前后雏鸡血清蛋白质组的差异,试验采取冷应激处理前后的雏鸡血清,经双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE),考马斯亮蓝染色后用PDQuest凝胶图像分析软件测定分析了雏鸡冷应激前后的血清蛋白质组。结果表明:冷应激前后雏鸡血清蛋白质组具有明显的差异表达;成功建立了雏鸡血清蛋白质双向电泳技术。 展开更多

关键词 冷应激 双向电泳 雏鸡 血清 蛋白质组 蛋白质表达谱 蛋白质组学 差异表达

原文传递

大鼠空白血清对阴虚内热型SLE患者外周血单核细胞蛋白质表达谱的影响 被引量：1

14

作者 程喜平 范瑞强 +4 位作者 赖梅生 陈明春 余捷凯 朱晓浚 许德清 《皮肤性病诊疗学杂志》 2012年第4期203-207,共5页

目的:在蛋白表达谱水平探讨大鼠空白血清作为含药血清空白对照的价值。方法:收集SLE阴虚内热证患者外周血单核细胞,分为实验组和对照组,实验组按孵化液量的20%加入大鼠空白血清,对照组按孵化液量的20%加入RPMI 1640培养液,收集孵化后细... 目的:在蛋白表达谱水平探讨大鼠空白血清作为含药血清空白对照的价值。方法:收集SLE阴虚内热证患者外周血单核细胞,分为实验组和对照组,实验组按孵化液量的20%加入大鼠空白血清,对照组按孵化液量的20%加入RPMI 1640培养液,收集孵化后细胞进行PMBC的蛋白表达谱检测。结果:实验组和对照组比较,外周血单核细胞的32个蛋白峰表达有差异,其中11个蛋白峰表达有统计学差异;建立了质荷比(m/z)为7027、5270、2908、4128、2311Da模式来判别大鼠空白血清和对照之间的差别。应用生物信息学方法分析7027Da模式蛋白,可知其对应的蛋白为HLADRB1,相应的基因为HLADRB1。结论:大鼠空白血清本身对SLE阴虚内热证患者外周血单核细胞具有明确的调节作用,因此分析含药血清作用时应考虑到此作用。 展开更多

关键词 大鼠 空白血清 系统性红斑狼疮 外周血单核细胞 蛋白表达谱 表面增强激光解吸电离飞行时间质谱

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昆虫细胞BTI-Tn-5B1-4和Sf-9的无血清培养及其特性研究 被引量：1

15

作者 李银花 郑桂玲 +2 位作者 李长友 马明 李国勋 《青岛农业大学学报（自然科学版）》 2009年第2期131-135,共5页

本研究对目前应用最多的两种昆虫细胞BTI-Tn-5B1-4和Sf-9在无血清培养基Sf-900Ⅲ中进行驯化和培养,现已稳定传至45代以上。比较了两种细胞在Sf-900Ⅲ和有血清培养基TNM-FH中的细胞形态、生长速率、病毒产量和重组蛋白表达水平。结果表明... 本研究对目前应用最多的两种昆虫细胞BTI-Tn-5B1-4和Sf-9在无血清培养基Sf-900Ⅲ中进行驯化和培养,现已稳定传至45代以上。比较了两种细胞在Sf-900Ⅲ和有血清培养基TNM-FH中的细胞形态、生长速率、病毒产量和重组蛋白表达水平。结果表明,在Sf-900Ⅲ中Sf-9细胞比TNM-FH培养的略大,BTI-Tn-5B1-4的圆形细胞增多,BTI-Tn-5B1-4和Sf-9在Sf-900Ⅲ中生长速度快,群体倍增时间分别为18.5h和21.7h,而在TNM-FH中,BTI-Tn5B1-4和Sf-9的群体倍增时间分别为21.9h和25.4h;在两种培养基中BTI-Tn-5B1-4和Sf-9细胞的病毒感染率、多角体产量和β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)的表达水平均无明显差异,而碱性磷酸酶(secreted alkaline phosphatase,SEAP)在Sf-900Ⅲ中的表达水平明显高于TNM-FH中的水平。 展开更多

关键词 昆虫细胞 无血清培养 生长曲线 病毒产量 蛋白表达

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CHO细胞无血清培养基的工艺优化 被引量：1

16

作者 蒋娟娟 任东升 +1 位作者 段鑫 张艳 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期607-612,共6页

本文以表达人肿瘤坏死因子受体-人Ig G-Fc抗体融合蛋白的CHO细胞为研究对象,通过对影响其细胞密度、活力及蛋白表达量和聚体百分比的进行了3个大类因素的考察,即水解物:0.5%酵母提取物,0.5%谷类水解物,0.5%大豆蛋白水解物,0.5%植物蛋白... 本文以表达人肿瘤坏死因子受体-人Ig G-Fc抗体融合蛋白的CHO细胞为研究对象,通过对影响其细胞密度、活力及蛋白表达量和聚体百分比的进行了3个大类因素的考察,即水解物:0.5%酵母提取物,0.5%谷类水解物,0.5%大豆蛋白水解物,0.5%植物蛋白胨;脂类物质:10 mmol/L磷脂酰胆碱,10 mg/L乙醇胺,0.05%脂肪乳剂;激素类物质:10μmol/L氢化可的松(肾上腺皮质激素),10 mg/L胰岛素,20 n M孕酮(类固醇激素)。结果表明,水解物中0.5%酵母水解物,脂类物质中10 mg/L乙醇胺,激素类物质中10 mg/L胰岛素对提高CHO细胞密度、活力和蛋白表达量和降低聚体含量具有重要促进作用。 展开更多

关键词 CHO细胞 无血清培养基 细胞活力 蛋白表达量

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基于iTRAQ多重标记串联质谱技术系统性筛选乳腺癌患者血清蛋白表达的差异分析 被引量：1

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作者 刘艳翠 张欣 +3 位作者 李文媛 孙成 孙平 赵微 《中国现代医生》 2022年第16期33-35,共3页

目的 观察串联质谱技术在乳腺癌血清蛋白表达中的差异。方法 选取2020年2月~2021年2月黑龙江省牡丹江医学院附属二院收治的乳腺癌新辅助化疗患者20例作为研究组,包含10例化疗有效患者及10例化疗无效患者,同时选取8名健康者作为对照组。... 目的 观察串联质谱技术在乳腺癌血清蛋白表达中的差异。方法 选取2020年2月~2021年2月黑龙江省牡丹江医学院附属二院收治的乳腺癌新辅助化疗患者20例作为研究组,包含10例化疗有效患者及10例化疗无效患者,同时选取8名健康者作为对照组。采集所有患者的肘静脉血,分别采用高通量miRNA、iTRAQ表达谱测序技术,从“组学”的角度对乳腺癌新辅助化疗不同疗效患者miRNA差异表达谱、外周血单个核细胞蛋白组进行研究。随后,先进行Pathway通路分析,该过程在蛋白质层面进行,然后找出sRNA的成熟体序列,在此过程中严格根据miRbase18数据库。将已知的cDNA序列整理为一行,对得到的sRNA对应靶基因进行预测,Pathway分析靶基因,最后将同一Pathway通路中的sRNA靶基因及蛋白质寻找出来。结果 研究组和对照组共筛选出19个差异表达蛋白,选取其中具有较大表达差异的肝细胞生长因子(HGF)进行验证。iTRAQ标记图谱显示,研究组和对照组的血清HGF表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期患者的血清HGF表达水平逐渐升高(P<0.05),均高于对照组(均P<0.05),符合i TRAQ标记图谱鉴定结果。结论 串联质谱技术用于筛选发现乳腺癌细胞HGF表达水平升高具有显著效果,可有效指导临床诊治乳腺癌的工作,将有效参考提供给靶向治疗药物的开发。 展开更多

关键词 iTRAQ多重标记串联质谱技术 系统性筛选 乳腺癌 血清蛋白表达

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不同手术方法治疗非肌层浸润性膀胱癌效果 被引量：1

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作者 甄洪涛 易强 +2 位作者 唐晓龙 王继征 王同庆 《菏泽医学专科学校学报》 2022年第3期40-42,78,共4页

目的研究两种不同手术方法治疗非肌层浸润性膀胱癌(NMIBC)患者的效果。方法将103例NMIBC患者采用随机数字表法分为两组。对照组51例采用经尿道膀胱肿瘤电切术治疗,观察组52例采用经尿道钬激光膀胱肿瘤切除术(THLRBT)治疗,比较两组患者... 目的研究两种不同手术方法治疗非肌层浸润性膀胱癌(NMIBC)患者的效果。方法将103例NMIBC患者采用随机数字表法分为两组。对照组51例采用经尿道膀胱肿瘤电切术治疗,观察组52例采用经尿道钬激光膀胱肿瘤切除术(THLRBT)治疗,比较两组患者围手术期指标、血清指标及蛋白表达情况。结果观察组手术时间、下床时间、尿管留置时间、住院时间及术中出血量均低于对照组(P<0.05);观察组术后纤维蛋白原、肝细胞生长因子、肿瘤特异性生长因子水平明显优于对照组(P<0.05);观察组P53、Ki-67蛋白阳性表达率均明显低于对照组(P<0.05)。结论THLRBT治疗NMIBC,能够有效减少术中出血量,缩短手术时间和住院时间,同时改善血清指标和蛋白表达情况。 展开更多

关键词 膀胱肿瘤 钬激光 血清指标 蛋白表达

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健脾化痰汤含药血清对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞蛋白质表达的影响 被引量：1

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作者 李保良 张琪 +4 位作者 林冠凯 周燕 吴菁 居凌云 沈璐 《中医药导报》 2018年第16期20-25,共6页

目的:探究健脾化痰汤含药血清对IR脂肪细胞蛋白质表达谱的影响,阐述其治疗IR相关机理。方法:运用体外试验方法,先将3T3-L1小鼠脂肪前体细胞分化为脂肪细胞,再采用地塞米松法构建IR脂肪细胞模型,再次随机分为IR组(10%空白组血清+1640培... 目的:探究健脾化痰汤含药血清对IR脂肪细胞蛋白质表达谱的影响,阐述其治疗IR相关机理。方法:运用体外试验方法,先将3T3-L1小鼠脂肪前体细胞分化为脂肪细胞,再采用地塞米松法构建IR脂肪细胞模型,再次随机分为IR组(10%空白组血清+1640培养液培养IR脂肪细胞)和健脾化痰汤组(10%健脾化痰汤组血清+1640培养液培养IR脂肪细胞),分别培养48 h,测定培养上清葡萄糖消耗量,同时收集各组细胞,分别提取细胞总蛋白,利用2-DE分离总蛋白,用PDQuest8.0软件分析2-DE图谱,比较组间蛋白表达量,运用MALDI-TOF-MS鉴定差异蛋白点肽谱,通过生物信息学分析确定差异蛋白质及其功能。结果:2组凝胶中有12个显著差异表达蛋白质点,与IR组比较,健脾化痰汤中表达上调有9个,即二氢硫辛酰胺脱氢酶、异戊酰辅酶A脱氢酶、酰基辅酶A结合蛋白、三磷酸腺苷合成酶、酰基辅酶A酰基转移酶2、线粒体H+-ATP合成酶、硫氧还蛋白依赖性过氧化物还原酶、过氧化氢酶、二硫键异构酶6;下调有3个,即硫氧还蛋白、钙网蛋白、α-1-酸性糖蛋白,主要涉及能量代谢和氧化应激等相关蛋白。结论:健脾化痰汤可能通过影响脂肪细胞能量代谢和氧化应激相关蛋白表达,调节其能量代谢和氧化应激功能而改善IR,治疗非酒精性脂肪肝。 展开更多

关键词 胰岛素抵抗 健脾化痰汤 药物血清 蛋白质表达 3T3-L1脂肪细胞

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不同乙肝病毒携带者血清蛋白差异分析

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作者 吴志鹏 姚碧红 魏碧蓉 《南昌大学学报（医学版）》 CAS 2014年第7期9-11,共3页

目的对比转氨酶水平正常的乙肝病毒携带者(AsC)与乙肝患者的血清蛋白表达差异。方法各收集15例AsC(对照组)与乙肝患者(实验组)血清,利用双向电泳技术分离2组的血清蛋白,并对其血清蛋白样品的双向电泳图谱进行比较。结果 2组血清蛋白样... 目的对比转氨酶水平正常的乙肝病毒携带者(AsC)与乙肝患者的血清蛋白表达差异。方法各收集15例AsC(对照组)与乙肝患者(实验组)血清,利用双向电泳技术分离2组的血清蛋白,并对其血清蛋白样品的双向电泳图谱进行比较。结果 2组血清蛋白样品中共找到6个明显的差异点:其中实验组血清中表达量上调有4个点,表达量下调有1个点,新出现1个点。结论 AsC与乙肝患者的血清蛋白的双向电泳图谱有一些差异,这些差异点可能为乙肝患者的诊治提供新的靶点。 展开更多

关键词 血清蛋白 乙肝病毒携带者 乙型肝炎 双向电泳图谱 差异蛋白

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