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人心肌肌钙蛋白T胶体金免疫层析法的建立 被引量:17
1
作者 李志梁 钱洪津 +3 位作者 焦保明 姜朝新 陆青 王素华 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期380-382,共3页
目的建立一种简便、快速、准确检测人心肌肌钙蛋白 T(c Tn T)的胶体金免疫层析法 (GICA)。方法制备的胶体金标记抗 c Tn T单克隆抗体 3F7,生物素标记另一株抗体 2 H8,链霉亲和素结合于硝酸纤维素膜上 ,制成免疫层析试纸条。血清中 c Tn ... 目的建立一种简便、快速、准确检测人心肌肌钙蛋白 T(c Tn T)的胶体金免疫层析法 (GICA)。方法制备的胶体金标记抗 c Tn T单克隆抗体 3F7,生物素标记另一株抗体 2 H8,链霉亲和素结合于硝酸纤维素膜上 ,制成免疫层析试纸条。血清中 c Tn T与测试条两种抗体结合后 ,沿硝酸纤维素膜移动 ,与链霉亲和素交联形成肉眼可见的红色线条。结果测试条灵敏度可达 0 .5 ng/ml。检测 30例急性心肌梗塞 (AMI)患者血清 c Tn T水平 ,并与国外同类产品比较 ,符合率达 92 %。结论本方法特异性强、灵敏度高、简便快速 。 展开更多
关键词 心肌肌钙蛋白T 胶体金 免疫层析法 心肌梗塞
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纳米免疫磁珠富集单核增生李斯特菌 被引量:15
2
作者 钟子清 熊勇华 +5 位作者 赖卫华 许恒毅 山珊 陈奇 谢芳 余扬帆 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第23期212-215,共4页
比较抗体直接偶联、链霉亲和素-生物素介导偶联的免疫磁珠以及免疫磁珠的粒径对单增李斯特菌捕获效率的影响。结果表明:链霉亲和素-生物素介导偶联的免疫磁珠捕获效率约是直接偶联法的3倍;同时,磁珠粒径对捕获效率也有较大影响,当免疫... 比较抗体直接偶联、链霉亲和素-生物素介导偶联的免疫磁珠以及免疫磁珠的粒径对单增李斯特菌捕获效率的影响。结果表明:链霉亲和素-生物素介导偶联的免疫磁珠捕获效率约是直接偶联法的3倍;同时,磁珠粒径对捕获效率也有较大影响,当免疫磁珠用量为100μg时,180、350、1150nm的免疫磁珠捕获效率分别为95%、18%和9%。因此,采用链霉亲和素-生物素介导偶联的180nm免疫磁珠是一种低成本、易操作、高效率的单核增生李斯特菌富集方法。 展开更多
关键词 单核增生李斯特菌 免疫磁分离 链霉亲和素
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量子点标记链霉亲和素及其生物活性检测 被引量:8
3
作者 邵君 尤晓刚 +2 位作者 高峰 贺蓉 崔大祥 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1625-1628,共4页
选用无机盐为前驱体,在水相中合成CdTe量子点,并用此量子点标记链霉亲和素,通过SephadexG-100层析分离纯化量子点标记的链霉亲和素,采用磁颗粒标记的链霉亲和素与量子点标记的链霉亲和素竞争结合辣根过氧化酶标记的生物素,即酶联免疫竞... 选用无机盐为前驱体,在水相中合成CdTe量子点,并用此量子点标记链霉亲和素,通过SephadexG-100层析分离纯化量子点标记的链霉亲和素,采用磁颗粒标记的链霉亲和素与量子点标记的链霉亲和素竞争结合辣根过氧化酶标记的生物素,即酶联免疫竞争抑制分析法检测链霉亲和素标记量子点后的生物活性,计算约70.3%的链霉亲和素标记到量子点上,且具有生物活性。每毫克量子点大约可偶联0.14 mg的链霉亲和素。采用荧光光谱研究量子点标记前后的荧光变化,标记后量子点的最大发射波长蓝移了8 nm,而发射光谱的半峰宽基本不变,说明量子点与链霉亲和素结合后粒子没有团聚,分散性好。 展开更多
关键词 量子点标记 链霉亲和素 竞争抑制反应
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氯噻啉胶体金增强免疫层析分析方法的建立 被引量:13
4
作者 施海燕 盛恩泽 +2 位作者 马明 华修德 王鸣华 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2017年第3期403-408,共6页
利用生物素-链霉亲和素的高亲和作用,研制了一种简便、快速、高灵敏的氯噻啉胶体金增强免疫层析分析方法(Gold immunochromatographic assay,GICA)。将氯噻啉抗体和生物素化DNA与13 nm胶体金双标记,将链霉亲和素与41 nm胶体金标记,制备... 利用生物素-链霉亲和素的高亲和作用,研制了一种简便、快速、高灵敏的氯噻啉胶体金增强免疫层析分析方法(Gold immunochromatographic assay,GICA)。将氯噻啉抗体和生物素化DNA与13 nm胶体金双标记,将链霉亲和素与41 nm胶体金标记,制备了氯噻啉胶体金增强免疫层析试纸条。系统优化了试纸条的工作条件,并通过交叉反应、添加回收和高效液相色谱(High performance liquid chromatography,HPLC)验证评价GICA的敏感性、特异性、精确性和准确性。在最优条件下,试纸条可在10 min内实现可视化判读,检出限(LOD)为25 ng/m L,除与吡虫啉有较大交叉反应外,与其它类似化合物无交叉反应。氯噻啉在河水、大米、黄瓜、番茄、梨、甘蓝和苹果样品中的添加浓度为0.05,0.5和5μg/g时,GICA的检测结果均符合添加水平。在未知浓度河水和梨样品的检测中,GICA的检测结果与HPLC方法相符。 展开更多
关键词 氯噻啉 单克隆抗体 金标免疫层析分析 链霉亲和素 生物素
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实时生物分子相互作用分析技术用于链霉亲和素-生物素化抗体的层层组装研究 被引量:5
5
作者 裴仁军 崔小强 +1 位作者 杨秀荣 汪尔康 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2002年第2期195-198,共4页
使用生物分子相互作用分析 ( Biomolecular interaction analysis,BIA)技术实时监测了在链霉亲和素表面层层组装亲和素 -生物素化抗体多层膜的过程 ,结果表明 ,通过链霉亲和素与生物素之间的强亲和作用 ,能够在表面形成均一的多层膜 ,... 使用生物分子相互作用分析 ( Biomolecular interaction analysis,BIA)技术实时监测了在链霉亲和素表面层层组装亲和素 -生物素化抗体多层膜的过程 ,结果表明 ,通过链霉亲和素与生物素之间的强亲和作用 ,能够在表面形成均一的多层膜 ,并用实时 BIA技术求得了每层蛋白质的表面浓度 .对于生物素化抗体 ,单层吸附表面浓度为 1 .32 ng/mm2 ;对于链霉亲和素 ,单层吸附表面浓度为 2 .93ng/mm2 . 展开更多
关键词 表面等离子体子共振 层层组装 链霉亲和素 生物素化抗体 生物分子相互作用分析技术 亲和作用力
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SA-TNF-α融合蛋白高效表达、纯化及复性研究 被引量:10
6
作者 徐翠香 胡志明 +1 位作者 李金龙 高基民 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期412-415,共4页
目的研究链亲和素标记的人肿瘤坏死因子α(SA-TNF-α)融合蛋白的纯化、复性方法,并研究其生物学功能。方法在大肠杆菌中表达SA-TNF-α融合蛋白,对表达的SA-TNF-α融合蛋白采用镍金属螯合(Ni-NTA)层析柱进行纯化,分别在尿素体系和盐酸胍... 目的研究链亲和素标记的人肿瘤坏死因子α(SA-TNF-α)融合蛋白的纯化、复性方法,并研究其生物学功能。方法在大肠杆菌中表达SA-TNF-α融合蛋白,对表达的SA-TNF-α融合蛋白采用镍金属螯合(Ni-NTA)层析柱进行纯化,分别在尿素体系和盐酸胍体系中复性,Western blot对其进行鉴定。MTT法检测SA-TNF-α融合蛋白对L929细胞的杀伤活性,流式细胞仪分析SA-TNF-α融合蛋白对生物素化的MB49细胞锚定修饰率。结果SA-TNF-α融合蛋白在大肠杆菌中实现了高效表达,表达的目标蛋白占菌体蛋白30%以上,镍金属螯合(Ni-NTA)层析柱纯化的SA-TNF-α融合蛋白纯度达到95.7%,经过两种体系复性形成的SA-TNF-α融合蛋白的二聚体和多聚体均具有双功能活性:既对L929细胞有杀伤活性又能锚定修饰生物素化的MB49细胞,锚定修饰率大于90%。结论初步建立了SA-TNF-α融合蛋白制备工艺,SA-TNF-α二聚体和多聚体均具有双功能活性,SA-TNF-α融合蛋白的研制有望为肿瘤的治疗提供新的治疗方法及新型药物。 展开更多
关键词 人肿瘤坏死因子Α 链亲和素 融合蛋白 蛋白纯化 蛋白复性
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人尿中IgG的时间分辨荧光免疫分析法──以铕标记链亲和素作为标记物 被引量:4
7
作者 史华红 杨燕生 +1 位作者 陈泮藻 李振甲 《中山大学学报(自然科学版)》 CSCD 1996年第2期71-74,共4页
利用铕标记链亲和素作为标记物,建立了固相抗体竞争性的人尿中IgG的时间分辨荧光免疫分析法,标准曲线范围0.625~40.0mg/L.检测范围宽,可以用于检测人尿中的IgG含量,不用对样品进行稀释,能满足临床检测需要.
关键词 免疫球蛋白G 免疫分析法 链亲和素 尿液
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3,6-Bis-β-Dicarbonylsubstituted Carbazoles Bearing N-Spacers and Their Eu(III) Complexes as Immunofluorescent Labelling Agents
8
作者 Dmitry E. Pugachev Georgy V. Zatonsky +2 位作者 Tatyana S. Kostryukova Anna G. Shubina Nikolay V. Vasiliev 《International Journal of Organic Chemistry》 2024年第1期20-31,共12页
New reagents for immunofluorescence analysis of carbazole series containing fluorinated β-dicarbonyl fragments and carboxylic substituent groups separated by spacers of different lengths from the light-gathering carb... New reagents for immunofluorescence analysis of carbazole series containing fluorinated β-dicarbonyl fragments and carboxylic substituent groups separated by spacers of different lengths from the light-gathering carbazole scaffold have been developed. The markers in complex with Eu<sup>3+</sup> ions possess stability in the aqueous phase, intense and prolonged luminescence (τ 550 - 570 μs) with characteristic emission maxima in the region of 615 nm and excitation wavelengths in the region of 380 - 390 nm, which distinguishes them from most of the analogs used. In the study of marker conjugation with streptavidin, a reagent containing 4 - 5 europium labeling complexes based on spacer-containing carbazole tetraketone was obtained. The marker-doped silicate nanoparticles exhibit intense and long-lived luminescence in the characteristic region. 展开更多
关键词 Fluorescence Immunoassay Fluorinated β-Diketones CARBAZOLE Europium Complexes streptavidin Nanodispersions
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Discovery Studio软件在生物化学教学中的应用——分子的刚性对接 被引量:8
9
作者 侯彦君 蔡开聪 《化学教育(中英文)》 CAS 北大核心 2019年第2期73-77,共5页
借助Discovery Studio(简称:DS)软件,探讨了分子对接中的刚性对接在课堂教学中的运用,促使学生对配体与受体间相互作用机制及其强弱关系有更感性的认识,进而提高课堂教学质量。同时,有利于学生在课后自行练习,深化对分子间非键作用的认识。
关键词 DISCOVERY STUDIO软件 分子对接 刚性对接 维生素H 链霉亲和素
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链霉菌ZG0429的分类鉴定与链霉亲和素的分离纯化研究 被引量:8
10
作者 张蕾 刘春琴 +2 位作者 高智慧 曹宇 白钢 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期7-10,共4页
从土壤中筛选得到1株高产链霉亲和素的放线菌ZG0429,根据形态观察、培养特征、生理生化鉴定以及16S rRNA序列分析,初步判定该菌株为链霉菌属中的淡紫灰链霉菌(Streptomyces lavendulae)。经发酵,ZG0429的链霉亲和素产量可达201.0mg/L。... 从土壤中筛选得到1株高产链霉亲和素的放线菌ZG0429,根据形态观察、培养特征、生理生化鉴定以及16S rRNA序列分析,初步判定该菌株为链霉菌属中的淡紫灰链霉菌(Streptomyces lavendulae)。经发酵,ZG0429的链霉亲和素产量可达201.0mg/L。进一步采用硫铵沉淀和凝胶过滤层析纯化,链霉亲和素的回收率为76.87%,纯度可以达到97.03%。该方法简单易行,成本低廉,可得到高产量、高纯度、高活性的目的蛋白,为链霉亲和素发酵产品的大规模纯化提供了依据。 展开更多
关键词 链霉亲和素 淡紫灰链霉菌 分类鉴定 分离纯化
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基于磁珠的可见光检测微阵列信号的新方法 被引量:6
11
作者 郭永刚 张冠斌 +3 位作者 熊强 郭旻 邢婉丽 程京 《分析科学学报》 CAS CSCD 2007年第1期1-4,共4页
以磁珠作为标记物,提出了一种在微阵列上检测核酸的新方法。该法基于生物素同链霉亲和素的亲和作用,利用磁珠的超顺磁性和宏观可见特性,使得杂交结果可在普通的光学显微镜或放大镜下检测,甚至肉眼可见。以合成探针为对照,用参比荧光标... 以磁珠作为标记物,提出了一种在微阵列上检测核酸的新方法。该法基于生物素同链霉亲和素的亲和作用,利用磁珠的超顺磁性和宏观可见特性,使得杂交结果可在普通的光学显微镜或放大镜下检测,甚至肉眼可见。以合成探针为对照,用参比荧光标记染料Cy3标记方法,对这种新方法的检出限进行了研究,并在此基础上采用大肠杆菌16s rDNA的PCR产物作为样品,进行了细菌检测的尝试,取得了较好的实验结果。本法所得的实验结果易于观测,无需采用大型的荧光检测仪器,因而大大降低了检测成本,与其它可见光检测方法(如金胶银染等)相比,具有方便、快捷的特点。这种新方法在传染病检测和环境监测中将具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 磁珠 微阵列 链霉亲和素 生物素
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SA-IL-2锚定修饰治疗表浅膀胱癌的实验研究(英文) 被引量:7
12
作者 黄鑫 余宏盛 陈忠 《Chinese Journal of Cancer》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第6期611-616,共6页
Background and Objective:Intravesical administration of Bacillus Calmette-Guèrin(BCG) after transurethral resection is by far the most effective local therapy for superficial bladder cancer,the fifth most common ... Background and Objective:Intravesical administration of Bacillus Calmette-Guèrin(BCG) after transurethral resection is by far the most effective local therapy for superficial bladder cancer,the fifth most common cancer in the world.However,approximately one-third of patients fail to respond and most patients eventually relapse.In addition,there are pronounced side effects of BCG therapy,such as BCG sepsis and a high frequency of BCG-induced cystitis.This study established a novel immunotherapy through immobilization of streptavidin-tagged human IL-2(SA-hIL-2) on the biotinylated mucosal surface of bladder wall.Methods:A mouse orthotopic model of MB49 bladder cancer was established by perfusing MB49 cells into mouse bladders.The SA-hIL-2 fusion protein was immobilized on the biotinylated mucosal surface of the bladder wall.Treatment began on day 1 after MB49 implantation,once every 3 days for 6 times.Immunohistochemical assay was performed to assess the persistence of SA-hIL-2 immobilized on the biotinylated mucosal surface of the bladder wall.The mice were monitored for tumor growth and survival.On day 60 after MB49 implantation,the SA-hIL-2-cured mice,which were found to have no hematuria or palpable tumors,were challenged with wild-type MB49 cells implanted into the pretreated bladder and monitored for survival.Results:SA-hIL-2 could be immobilized efficiently and durably on the bladder mucosal surface as long as 7 days.On day 60 after MB49 implantation,9 out of 20 SA-hIL-2-treated mice survived,but all mice in PBS control group died.More importantly,5 out of 9 tumor-free mice in the SA-hIL-2 group were protected against a second intravesical wild-type MB49 tumor challenge.Conclusions:SA-hIL-2 fusion protein could significantly inhibit tumor growth and extend the survival time in the orthotopic model of MB49 bladder cancer. 展开更多
关键词 膀胱炎 尿道切除 卡介苗 膀胱癌
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Development of BCPDA-Eu^3+-BAS Labeled Hepatitis B Surface Antibodies 被引量:4
13
作者 TAN Wenjia SUN Zhixia +4 位作者 XUAN Lili LI Junling XIE Wenbing HE Chengyan PAN Lihua 《Chemical Research in Chinese Universities》 SCIE CAS CSCD 2018年第1期24-27,共4页
The effect of the chelating agent 4,7-bis(chlorosulfophenyl)-1,10-phenanthroline-2,9-dicarboxylic acid (BCPDA) labeled hepatitis B surface antibodies(HBsAb) on time-resolved fluoroimmunoassays(TRFIA) was inves... The effect of the chelating agent 4,7-bis(chlorosulfophenyl)-1,10-phenanthroline-2,9-dicarboxylic acid (BCPDA) labeled hepatitis B surface antibodies(HBsAb) on time-resolved fluoroimmunoassays(TRFIA) was investigated. The labeling detection method was established. The biotin-streptavidin(BAS) system was introduced, and the multi-stage amplification effect of the BAS system was analyzed. It is found that the BCPDA-Eu^3+-HBsAb-BAS fluorescent marker can emit strong fluorescence. Compared to BCPDA-Eu^3+-HBsAb, BCPDA-Eu^3+-HBsAb-BAS demonstrates an enhanced fluorescence intensity by over 10 times. This study provides a guidance for the next generation non-radio immunoassays in clinical diagnosis, 展开更多
关键词 Time-resolved fluorescence immunoassay BIOTIN streptavidin
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人血清IL-6电化学发光检测方法的建立 被引量:6
14
作者 席杰 梁辰 +6 位作者 薛辉 冯杰 潘雯 陈建红 曾映 周明 颜光涛 《标记免疫分析与临床》 CAS 2019年第9期1574-1578,共5页
目的通过双抗体夹心一步法的原理,建立一种检测人血清白细胞介素6(IL-6)的电化学发光免疫分析方法。方法将标本、生物素化的IL-6单克隆抗体和三联吡啶钌标记的IL-6单克隆抗体反应以形成抗原抗体夹心复合物,然后与链霉亲和素包被的磁微... 目的通过双抗体夹心一步法的原理,建立一种检测人血清白细胞介素6(IL-6)的电化学发光免疫分析方法。方法将标本、生物素化的IL-6单克隆抗体和三联吡啶钌标记的IL-6单克隆抗体反应以形成抗原抗体夹心复合物,然后与链霉亲和素包被的磁微粒结合,形成的复合物通过磁场清洗,从而将未结合的物质除去。然后加入三丙胺激发缓冲液,从而检测相对光子强度(relative light units,RLU)。结果本研究建立的方法,最低检测限为1.5pg/mL,线性范围为1.5~5000 pg/mL,准确度为0.900~1.100,批内变异小于8%,批间变异小于10%。与罗氏公司IL-6检测试剂盒相关系数为r=0.9996(n=75),经过37℃7 d热处理后的试剂,各项性能指标均达标,检测结果差异不大(线性相关系数r=0.9972,准确度高值0.951,准确度低值0.947,批内精密度(CV)高值2.81%,低值1.63%)。结论该方法灵敏度高、线性范围广、准确度高、稳定性好,各种指标都能达到临床检测要求,可以推广使用。 展开更多
关键词 IL-6 生物素 三联吡啶钌 链霉亲和素 电化学发光法
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可阻断IBDV感染的抗CEF膜蛋白单克隆抗体的筛选 被引量:2
15
作者 杨艳艳 朱礼倩 +6 位作者 杨继飞 滕蔓 柴书军 王丽 罗俊 邓瑞广 张改平 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期701-705,共5页
【目的】利用细胞融合技术及细胞免疫组化方法,筛选可特异性阻断鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染的抗鸡胚成纤维细胞(CEF)膜蛋白单克隆抗体,为进一步研究IBDV的CEF受体奠定基础。【方法】用CEF细胞免疫Balb/c小鼠,经细胞融合获得杂交瘤... 【目的】利用细胞融合技术及细胞免疫组化方法,筛选可特异性阻断鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染的抗鸡胚成纤维细胞(CEF)膜蛋白单克隆抗体,为进一步研究IBDV的CEF受体奠定基础。【方法】用CEF细胞免疫Balb/c小鼠,经细胞融合获得杂交瘤细胞上清。单层CEF用杂交瘤细胞上清孵育2h后接种IBDV,病毒感染后固定细胞,先后与F22-EA6-Biotin及Streptavidin-HRP进行反应,最后用AEC染色,显微镜下计数,统计感染细胞减少的百分率以判定单抗上清阻断IBDV感染的效果。【结果】利用细胞组化的方法,共计检测了768株杂交瘤细胞上清,6株(1A5、1H11、2B12、3G1、4D10和4B8)显示有阻断IBDV感染的效果,其中4B8可完全阻断IBDV对CEF的感染,该单抗针对的CEF膜蛋白很有可能是IBDV的细胞受体。【结论】筛选到的抗CEF膜蛋白的单抗可以阻断IBDV感染CEF,表明所建立的方法具有较高的敏感性和特异性。这些单抗可以用于进一步研究IBDV的CEF细胞受体。 展开更多
关键词 鸡胚成纤维细胞 IBDV受体 BIOTIN streptavidin
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链霉亲和素化载紫杉醇相变型PLGA纳米粒的制备及体外超声显影 被引量:5
16
作者 周航 黄晓玲 +2 位作者 过源 尚婷婷 王志刚 《中国介入影像与治疗学》 CSCD 北大核心 2016年第9期571-575,共5页
目的制备链霉亲和素化载紫杉醇相变型PLGA纳米粒(PTX-PLGA-SA/PFPs),并观察其体外低强度聚焦超声(LIFU)致相变后超声增强显影特性。方法采用单乳化法(O/W)制备载紫杉醇相变型PLGA纳米粒,高效液相色谱法检测紫杉醇包封率;碳二亚胺法连接... 目的制备链霉亲和素化载紫杉醇相变型PLGA纳米粒(PTX-PLGA-SA/PFPs),并观察其体外低强度聚焦超声(LIFU)致相变后超声增强显影特性。方法采用单乳化法(O/W)制备载紫杉醇相变型PLGA纳米粒,高效液相色谱法检测紫杉醇包封率;碳二亚胺法连接链霉亲和素(SA),共聚焦激光显微镜观察二者连接情况,流式细胞术检测二者链接率;体外LIFU致相变观察超声增强显影情况。结果制备的纳米粒粒径为(322.2±85.6)nm,表面电位(-5.66±3.46)mV。紫杉醇的包封率及载药量分别为(71.56±6.51)%、(6.57±0.61)%,与链霉亲和素的连接率为(97.16±1.20)%。LIFU功率7.5 W作用3min时可明显增强该纳米粒在体外的B-mode及造影模式下的超声显影。结论成功制备了PTX-PLGA-SA/PFPs纳米粒,其紫杉醇包封率高、链霉亲和素连接率高,体外声致相变后可显著增强超声显影。 展开更多
关键词 超声检查 造影剂 紫杉醇 液气相变 链霉亲和素
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链霉亲和素纯化和鉴定方法的研究 被引量:4
17
作者 刘福英 宋淑霞 +3 位作者 郑龙 张焕铃 尤红煜 王俊霞 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期112-116,共5页
对链霉亲和素进行纯化、鉴定,采用冷钝化的方法去除培养液中大部分杂蛋白,用亲和层析法从链霉菌L-183的培养液中纯化链霉亲和素(SA),经试验,SA回收率为75%~85%。鉴定表明,自制SA的分子量为74.5kD,每分子SA可结合3.2个生物... 对链霉亲和素进行纯化、鉴定,采用冷钝化的方法去除培养液中大部分杂蛋白,用亲和层析法从链霉菌L-183的培养液中纯化链霉亲和素(SA),经试验,SA回收率为75%~85%。鉴定表明,自制SA的分子量为74.5kD,每分子SA可结合3.2个生物素分子,活性为11.2U/mg,pI为7.4。自制SA各项生物学性质与文献报道相符。 展开更多
关键词 链霉亲和素 纯化鉴定 亲和层析
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用于生物检测的链霉亲和素修饰γ-Fe_2O_3@Au复合颗粒的制备与表征 被引量:4
18
作者 刘丽赏 刘洪娜 +3 位作者 李松 邓燕 李小龙 何农跃 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第20期2041-2046,共6页
制备了粒径为30nm左右的γ-Fe2O3磁性颗粒,利用巯基硅烷(MPTES)的偶联作用最终制备了粒径约为35.9nm的金磁复合颗粒.用X射线粉末衍射仪(XRD)、透射电子显微镜(TEM)、紫外可见吸收光谱(UV-Vis)、傅里叶变换红外光谱(FT-IR)、振动样品磁强... 制备了粒径为30nm左右的γ-Fe2O3磁性颗粒,利用巯基硅烷(MPTES)的偶联作用最终制备了粒径约为35.9nm的金磁复合颗粒.用X射线粉末衍射仪(XRD)、透射电子显微镜(TEM)、紫外可见吸收光谱(UV-Vis)、傅里叶变换红外光谱(FT-IR)、振动样品磁强计(VSM)等方法对所得金磁颗粒的表面形貌、大小、结构、光学和磁学性质进行了表征.结果表明:金成功地包覆到了γ-Fe2O3颗粒的表面,所得金磁颗粒具有超顺磁性.利用静电吸附作用,链霉亲和素有效修饰到了γ-Fe2O3@Au复合磁性颗粒表面.通过扫描仪检测其捕捉Cy3标记寡核苷酸序列后的荧光信号,证明了链霉亲和素修饰的γ-Fe2O3@Au复合磁性颗粒有生物活性,且没有荧光背景,在生物检测领域表现出了很大的应用前景. 展开更多
关键词 MPTES(3-Merca ptopropyltriethoxysilane) γ-Fe2O3@Au复合颗粒 链霉亲和素 生物检测 生物电子学
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链霉亲和素-人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子融合蛋白的制备与活性鉴定 被引量:1
19
作者 孙晶莹 李研 +4 位作者 黄晓燕 靳占奎 徐翠香 常乐 王建华 《陕西医学杂志》 CAS 2023年第1期3-6,22,共5页
目的:制备链霉亲和素(SA)连接的人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)融合蛋白(SA-hGM-CSF),并对其生物学活性进行鉴定。方法:在NCBI数据库中查找SA和hGM-CSF序列,将序列合成后连接入Pet28表达载体中,构建SA-hGM-CSF-Pet28重组表达载... 目的:制备链霉亲和素(SA)连接的人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)融合蛋白(SA-hGM-CSF),并对其生物学活性进行鉴定。方法:在NCBI数据库中查找SA和hGM-CSF序列,将序列合成后连接入Pet28表达载体中,构建SA-hGM-CSF-Pet28重组表达载体,在BL21(DE3)表达感受态中利用IPTG诱导剂诱导表达,经His镍柱纯化,尿素梯度复性,聚丙烯酰胺凝胶电泳法和蛋白质印迹法(WB)鉴定融合蛋白,通过TF-1细胞检测融合蛋白的生物学活性。结果:SA-hGM-CSF融合蛋白可在BL21(DE3)中高效诱导表达,经His镍柱纯化后该融合蛋白纯度较高。经尿素梯度复性后,细胞学实验验证该融合蛋白具有生物学活性。结论:成功表达具有生物活性的融合蛋白SA-hGM-CSF,该结果为SA-hGM-CSF表面锚定修饰的肿瘤细胞疫苗的研究提供了实验基础。 展开更多
关键词 人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 链霉亲和素 融合蛋白 蛋白纯化 表达载体构建 蛋白活性鉴定
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转铁蛋白受体单链抗体与链亲和素融合基因的克隆及其在大肠杆菌中的可溶性表达 被引量:2
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作者 颜冰 赵莉霞 黄培堂 《生物技术通讯》 CAS 2006年第5期688-691,共4页
目的:转铁蛋白受体特异性富含于血脑屏障和肿瘤细胞的表面,是当前中枢神经系统疾病和肿瘤治疗中定向转运的重要靶标。拟获得在大肠杆菌中能高效可溶表达的转铁蛋白受体单链抗体与链亲和素(SA)的重组融合蛋白。方法:根据GenBank数据库报... 目的:转铁蛋白受体特异性富含于血脑屏障和肿瘤细胞的表面,是当前中枢神经系统疾病和肿瘤治疗中定向转运的重要靶标。拟获得在大肠杆菌中能高效可溶表达的转铁蛋白受体单链抗体与链亲和素(SA)的重组融合蛋白。方法:根据GenBank数据库报道的SA的核苷酸序列分段合成基因,连接后经PCR获得完整的基因片段,插入pGEM-T载体中测序。将序列正确的SA基因与大鼠转铁蛋白受体单链抗体基因ox26-scFv分别插入原核表达载体pTIG-Trx中,构建重组表达克隆pTIG-Trx/scFv-SA,并在大肠杆菌中诱导表达。ELISA检测融合蛋白的生物学活性。结果:对pGEM-T/SA克隆的测序结果显示,合成的SA基因与文献报道相符。重组融合蛋白在大肠杆菌中获得了可溶性表达,约占菌体上清总蛋白量的30%;ELISA结果表明该融合蛋白具备与转铁蛋白受体和生物素的结合的双重活性。结论:有活性的重组融合蛋白的获得为构建一个通用性的以转铁蛋白受体介导的血脑屏障和肿瘤转运靶向载体打下了基础。 展开更多
关键词 转铁蛋白受体 单链抗体 链亲和素 转运
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