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DNAStar软件在动物病毒研究中的应用实例 被引量:16
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作者 黎明 于天飞 《高师理科学刊》 2010年第3期61-63,共3页
利用DNAStar软件包中的Editseq软件将TGEV TH98株spike基因核苷酸序列翻译成氨基酸序列,然后利用Protean软件进行氨基酸序列分析,预测二级结构及B细胞抗原表位.结果表明,TGEV spike蛋白具有丰富的二级结构和多处抗原指数较高的区段,含... 利用DNAStar软件包中的Editseq软件将TGEV TH98株spike基因核苷酸序列翻译成氨基酸序列,然后利用Protean软件进行氨基酸序列分析,预测二级结构及B细胞抗原表位.结果表明,TGEV spike蛋白具有丰富的二级结构和多处抗原指数较高的区段,含有较多潜在的B细胞抗原表位,包括43~56,97~104,117~128,132~173,238~257,391~398,535~706,779~799,918~987,1165~1200,1257~1266和1430~1446aa区段. 展开更多
关键词 DNAStar TGEV spike蛋白 二级结构 抗原表位
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Spike蛋白介导细胞融合程度定量方法的建立及其在药物筛选中的应用
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作者 刘慕仪 张畅 +7 位作者 李辉龙 刘家茏 焉秋林 杨孟欣 黄麟飞 万禄明 钟辉 魏从文 《安徽大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2024年第5期82-93,共12页
新型冠状病毒Spike蛋白(S蛋白)与受体ACE2结合介导细胞融合的发生,为进一步探究新冠感染合胞体发生、发展的规律及致病机制,明确关键蛋白靶点,筛选干预合胞体形成的药物,笔者拟构建新冠S蛋白介导的细胞融合程度的定量方法.利用pCDH-CMV-... 新型冠状病毒Spike蛋白(S蛋白)与受体ACE2结合介导细胞融合的发生,为进一步探究新冠感染合胞体发生、发展的规律及致病机制,明确关键蛋白靶点,筛选干预合胞体形成的药物,笔者拟构建新冠S蛋白介导的细胞融合程度的定量方法.利用pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro、pLV-CMV-MCS-3FLAG-IRES-Bla、S蛋白基因序列、ACE2基因序列、LacZ基因序列、EcoRⅠ限制性内切酶及同源重组酶构建慢病毒穿梭质粒pCDH-S,pCDH-ACE2,pLV-α与pLV-ω,利用该慢病毒质粒分别构建稳定表达S蛋白与ACE2蛋白的293FT和A549细胞系,随后利用pLV-α与pLV-ω慢病毒质粒分别感染上述稳定细胞系,构建出可以定量细胞融合程度的细胞系293FT-S_(1-56),A549-S_(1-56),293FT-ACE2△_(11-41),A549-ACE2△_(11-41).最后采用Western Blot蛋白免疫印迹技术鉴定上述融合定量细胞系中S蛋白与ACE2蛋白的过表达效果,并通过细胞共培养确定融合效果,用β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒定量细胞融合程度.结果显示,慢病毒载体和稳定细胞系构建成功,时间梯度、转染梯度实验显示该系统具有良好的定量灵敏度,并能用于卡莫司他(Camostat mesylate)和氯硝柳胺(Niclosamide)等药物抗融合效果的定量评价.成功构建的新冠病毒Spike蛋白介导细胞融合程度定量系统,可用于不同S蛋白突变体致融合能力评价和抗融合药物筛选评价,可为进一步的研究奠定技术基础. 展开更多
关键词 新型冠状病毒 spike蛋白 ACE2受体 细胞融合定量 慢病毒
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血管紧张素转换酶2在非小细胞肺癌与SARSCoV-2中共表达的研究进展
3
作者 白向豆 曾伟强 +6 位作者 崔百强 王兵 杨宁 贺晓阳 张斯渊 金大成 苟云久 《中国胸心血管外科临床杂志》 CSCD 北大核心 2023年第5期773-778,共6页
自2019年底首例由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)引起的新型冠状病毒感染(corona virus disease 2019,COVID-19)出现以来,该病毒在全球范围内迅速传播,已成为全球公共卫生... 自2019年底首例由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)引起的新型冠状病毒感染(corona virus disease 2019,COVID-19)出现以来,该病毒在全球范围内迅速传播,已成为全球公共卫生问题。在此次病毒流行过程中,相比于普通人群,癌症患者被认为是高度易感人群,尤其是肺癌患者。有部分研究表明血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme,ACE2)可能是SARSCoV-2感染宿主的途径。同时,ACE2常在非小细胞肺癌中呈现出异常表达。因此了解ACE2在COVID-19与非小细胞肺癌中各自的作用机制,对于研究疫苗以及治疗性药物具有极其重要的参考价值,同时也为疫情期间肺癌患者的防护提出有意义的指导意见。本文综述了ACE2在SARS-CoV-2中可能的侵袭机制,以及其在非小细胞肺癌中异常表达的研究进展。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 血管紧张素转换酶2(ACE2) 严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2) spike蛋白 新型冠状病毒感染(COVID-19) 综述
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严重急性呼吸综合征冠状病毒Spike蛋白诱发小鼠免疫损伤的实验研究 被引量:2
4
作者 要国华 杨新艳 徐军 《中国呼吸与危重监护杂志》 CAS 2008年第2期81-87,161,162,共9页
目的研究严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)的Spike蛋白(S蛋白)引起免疫病理损伤的分子机制。方法采用信号转导通路发现者基因芯片筛选相关诱导免疫炎症的信号转导通路基因的表达,通过RT-PCR对基因芯片筛选基因进一步验证并观察信... 目的研究严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)的Spike蛋白(S蛋白)引起免疫病理损伤的分子机制。方法采用信号转导通路发现者基因芯片筛选相关诱导免疫炎症的信号转导通路基因的表达,通过RT-PCR对基因芯片筛选基因进一步验证并观察信号分子阻断剂干预的影响;将SARS-CoV的S蛋白及信号分子阻断剂分别经气管滴注、尾静脉注射的途径感染BALB/c小鼠,通过免疫组织化学观察肺及免疫器官的病理变化。结果S蛋白诱导了与γ干扰素(IFN-γ)类似的JAK-STAT的信号通路相关基因的表达,RT-PCR证实S蛋白诱导了人支气管上皮细胞的γ干扰素诱导蛋白10(IP-10)基因表达,该作用能够被JAK3抑制剂完全阻断。经气管滴注或尾静脉注射S蛋白均可引起小鼠肺损伤和脾脏损伤。JAK3抑制剂能够抑制S蛋白诱导小鼠肺内IP-10表达,减轻病理损伤。结论JAK-STAT信号转导通路的激活可能在SARS-CoV的S蛋白诱导的以IP-10为代表的炎症级联中起重要作用,该发现可为发展抗SARS病毒诱导的免疫损伤治疗提供新的策略。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征 冠状病毒 spike蛋白 γ干扰素诱导蛋白10
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SARS病毒Spike蛋白重组腺病毒疫苗的构建及其免疫学分析 被引量:3
5
作者 郑尚永 张冬梅 +3 位作者 曹毅 张青峰 沈璐辉 潘卫庆 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2009年第5期329-332,336,F0002,共6页
目的构建基于SARS病毒Spike(S)蛋白的重组腺病毒,并对该重组腺病毒进行初步鉴定和免疫学探讨。方法通过全基因合成得到全长S蛋白基因,利用Ad5腺病毒系统构建S蛋白基因的重组腺病毒,采用间接免疫荧光(IFA)试验和蛋白免疫印迹法(Western b... 目的构建基于SARS病毒Spike(S)蛋白的重组腺病毒,并对该重组腺病毒进行初步鉴定和免疫学探讨。方法通过全基因合成得到全长S蛋白基因,利用Ad5腺病毒系统构建S蛋白基因的重组腺病毒,采用间接免疫荧光(IFA)试验和蛋白免疫印迹法(Western blot)对S蛋白的表达进行鉴定,再用重组腺病毒免疫小鼠,观察小鼠抗体诱生情况,从而对该重组腺病毒的免疫效果进行初步评价。结果PCR扩增重组腺病毒质粒外源片段,大小为800 bp,与预期值一致;Western blot和IFA结果表明,重组腺病毒(rAd-S)表达S蛋白能被马抗SARS血清识别;ELISA检测结果显示,rAd-S能刺激小鼠机体产生抗体。结论重组腺病毒系统成功表达了SARS病毒S蛋白,免疫小鼠产生S蛋白特异的抗体。 展开更多
关键词 SARS spike蛋白 重组腺病毒 疫苗
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冠状病毒Spike蛋白及其针对性治疗研究进展 被引量:2
6
作者 林欢 冯旰珠 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1095-1103,共9页
冠状病毒(coronavirus,CoV)是可以感染人类及动物的正链RNA病毒,其包含的最大RNA基因组长度为32 kb,可分为4类:α、β、γ和δ。冠状病毒颗粒包含4个标准结构蛋白:包膜蛋白(E)、膜蛋白(M)、核衣壳蛋白(N)和刺突蛋白(S)。S蛋白既包含受... 冠状病毒(coronavirus,CoV)是可以感染人类及动物的正链RNA病毒,其包含的最大RNA基因组长度为32 kb,可分为4类:α、β、γ和δ。冠状病毒颗粒包含4个标准结构蛋白:包膜蛋白(E)、膜蛋白(M)、核衣壳蛋白(N)和刺突蛋白(S)。S蛋白既包含受体结合域(receptor-binding domain,RBD),又包含融合相关结构域,使其成为CoV进入过程中的关键蛋白。本文主要阐述S蛋白的主要结构、结构域以及该蛋白在病毒入侵宿主细胞过程中的自身水解切割、构象变化等相关特点,并就该蛋白的相关中和抗体以及CoV尤其是新型冠状病毒(SARS-CoV-2)灭活疫苗、亚单位疫苗RNA疫苗等研究现状进行介绍。 展开更多
关键词 冠状病毒 spike蛋白 受体结合域 膜融合 中和抗体
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Spike蛋白的生物信息学研究分析 被引量:1
7
作者 郑柳凤 伊嘉豪 +1 位作者 梁定发 叶远浓 《中国科技论文在线精品论文》 2022年第3期288-294,共7页
本研究通过挖掘国内外文献,系统地分析了Spike(S)蛋白的作用机制和生物信息学方面的研究进展。总结目前国内外科学家利用生物信息学领域工具开发Spike蛋白的药物、疫苗等方面的研究。此外,还对现有的Spike蛋白数据资源进行了系统整理。... 本研究通过挖掘国内外文献,系统地分析了Spike(S)蛋白的作用机制和生物信息学方面的研究进展。总结目前国内外科学家利用生物信息学领域工具开发Spike蛋白的药物、疫苗等方面的研究。此外,还对现有的Spike蛋白数据资源进行了系统整理。总结分析了现有国内外与Spike蛋白相关的生物信息学工具及数据库,最后对病毒Spike蛋白在该领域的研究提出了展望。本综述旨在为研究Spike蛋白的生物学家、病毒学家等研究人员提供系统的Spike蛋白研究参考,以促进Spike蛋白机制研究、有效药物和疫苗研发。 展开更多
关键词 生物物理学 spike蛋白 综述 冠状病毒 SARS-CoV-2 生物信息学 数据库
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基于免疫信息学的SARS-CoV-2表位筛选及疫苗分子设计分析 被引量:1
8
作者 邓辉雄 王革非(指导) +3 位作者 李雁嫘 宋鑫利 谷李铭 李蕊(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期838-847,共10页
目的:基于新型冠状病毒(SARS-CoV-2)全病毒或Spike蛋白作为免疫原可能存在的无关抗原表位干扰,筛选鉴定优势保护性抗原表位,构建候选多价表位疫苗。方法:以免疫信息学确定诱导主要中和抗体、激活细胞免疫应答的细胞保护性抗原表位,以Rap... 目的:基于新型冠状病毒(SARS-CoV-2)全病毒或Spike蛋白作为免疫原可能存在的无关抗原表位干扰,筛选鉴定优势保护性抗原表位,构建候选多价表位疫苗。方法:以免疫信息学确定诱导主要中和抗体、激活细胞免疫应答的细胞保护性抗原表位,以Raptor X、trRosetta预测蛋白疫苗的二级、三级结构,并对候选蛋白疫苗进行二硫键的设计及对接分析,以C-ImmSim服务器模拟预测分析多表位疫苗的免疫原性和免疫应答。结果:实验筛选了Spike蛋白免疫原性强的B细胞表位,具有高保守性和人群覆盖度广的IFN-γ、IL-4阳性的Th表位及CTL表位,计算模拟验证了疫苗的免疫应答特性。结论:信息学分析结果初步显示候选表位疫苗具有良好的平衡体液免疫和细胞免疫应答能力。 展开更多
关键词 新冠病毒 spike蛋白 抗原表位 平衡免疫 免疫信息学
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SARS冠状病毒S蛋白RBD片段抗原多肽的合成及其多克隆抗体制备 被引量:2
9
作者 徐德意 肖洪广 高俊 《热带医学杂志》 CAS 2010年第9期1062-1064,共3页
目的研究SARS冠状病毒spike蛋白的抗原优势表位,合成多肽免疫小鼠获得多克隆抗体。方法通过固相Fmoc法合成spike蛋白三条多肽CQ19、LV11、TY14,与KLH肽链结合,免疫小鼠。结果固相多肽合成法合成KLH-CQ19、KLH-LV11和KLH-TY14三条多肽,用... 目的研究SARS冠状病毒spike蛋白的抗原优势表位,合成多肽免疫小鼠获得多克隆抗体。方法通过固相Fmoc法合成spike蛋白三条多肽CQ19、LV11、TY14,与KLH肽链结合,免疫小鼠。结果固相多肽合成法合成KLH-CQ19、KLH-LV11和KLH-TY14三条多肽,用KLH-CQ19多肽片段免疫小鼠获得多克隆抗体。结论 KLH-CQ19片段免疫小鼠获得有效多克隆抗体,为SARS的抗体后续研究提供了物质基础。 展开更多
关键词 SARS冠状病毒 spike蛋白 RBD 抗体
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人冠状病毒冠状病毒HKU1 Spike蛋白受体结合域结构预测 被引量:1
10
作者 陶靖隆 王爱昕 +5 位作者 张伟 王俊虹 赵国平 胡役兰 周卫红 魏茂提 《武警后勤学院学报(医学版)》 CAS 2016年第6期421-423,427,F0002,共5页
【目的】探索人冠状病毒HKU1(human HKU1 coronavirus,h HKU1-CoV)Spike蛋白受体结合域(receptor binding domain,RBD)蛋白结构。【方法】利用已经发表的h HKU1-CoV Spike基因序列,通过蛋白建模获得该冠状病毒Spike空间结构,运用PDB... 【目的】探索人冠状病毒HKU1(human HKU1 coronavirus,h HKU1-CoV)Spike蛋白受体结合域(receptor binding domain,RBD)蛋白结构。【方法】利用已经发表的h HKU1-CoV Spike基因序列,通过蛋白建模获得该冠状病毒Spike空间结构,运用PDBsum平台进行蛋白结构分析。【结果】人冠状病毒HKU1-CoV Spike氨基酸序列(No.AGW27881.1)535~673位可能存在RBD,二级结构显示该区域共有4个β折叠股、6个α螺旋,2个β-α-β单元。蛋白质空间结构分析显示RBD可分为核心区和Loop区。核心区由2个平行的β折叠股和4个α螺旋顺序链接组成,Loop区位于核心区外围,由ASN589-PRO673之间氨基酸构成1个含有3个边缘的柔性区域和2个反向平行的β折叠共同组成的腔隙结构,该区域可能是h HKU1-Co V与宿主受体作用的关键部位。【结论】h HKU1-CoV Spike蛋白与宿主受体作用的关键部位可能位于SER606~PRO673,这与已知结构的β冠状病毒相同区域在Loop区存在差异,但冠状病毒受体尚需进一步探索。 展开更多
关键词 蛋白质结构预测 同源建模 穿线法 人冠状病毒HKU1 spike蛋白 受体结合域
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SARS冠状病毒S基因的最近共同祖先序列重建及Spike蛋白的适应性进化检测 被引量:2
11
作者 张原 郑楠 +1 位作者 郝沛 钟扬 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第11期1121-1122,共2页
关键词 SARS冠状病毒 S基因 最近共同祖先序列 spike蛋白 适应性 严重急性呼吸系统综合症
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SARS冠状病毒的Spike蛋白以及病毒的细胞侵入机制 被引量:1
12
作者 潘淑媛 胡显文 陈惠鹏 《生物技术通讯》 CAS 2005年第5期541-544,共4页
严重急性呼吸系统综合征(SARS)是由SARS冠状病毒(SARS-CoV)引起的一种新型人类疾病,具有高致病性、高传染性、高死亡率的特点。Spike蛋白是冠状病毒膜表面的糖蛋白突出,构成病毒的包膜子粒,在病毒与其受体结合、通过膜融合进入宿主细胞... 严重急性呼吸系统综合征(SARS)是由SARS冠状病毒(SARS-CoV)引起的一种新型人类疾病,具有高致病性、高传染性、高死亡率的特点。Spike蛋白是冠状病毒膜表面的糖蛋白突出,构成病毒的包膜子粒,在病毒与其受体结合、通过膜融合进入宿主细胞以及诱导机体产生中和性抗体的过程中发挥着重要的作用。目前利用Spike蛋白开发出的一些防治SARS的药物和疫苗在动物和体外实验中有良好的抗病毒作用。本文阐述了SARS-CoVSpike蛋白的结构与功能,为抗SARS药物及疫苗的研发提供一定的理论基础。 展开更多
关键词 SARS冠状病毒 spike蛋白 受体 膜融合 中和抗体
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猪传染性胃肠炎病毒spike蛋白亲和肽的原核表达 被引量:1
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作者 于天飞 董慧莹 +4 位作者 谢鹏宇 孙婉姝 尹海畅 黎明 于志丹 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2020年第1期49-56,共8页
【目的】原核表达猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)spike蛋白亲和肽(SQHT),检测其病毒亲和性,为建立TGEV诊断方法奠定理论和物质基础。【方法】人工合成TGEV spike蛋白亲和肽基因,亚克隆后将该... 【目的】原核表达猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)spike蛋白亲和肽(SQHT),检测其病毒亲和性,为建立TGEV诊断方法奠定理论和物质基础。【方法】人工合成TGEV spike蛋白亲和肽基因,亚克隆后将该基因分别插入至原核表达载体pET-32a和pGEX-6p-1中,构建重组质粒pET-32a-SQHT和pGEX-6p-SQHT,对重组质粒进行BamHⅠ单酶切和BamHⅠ/XhoⅠ双酶切及测序鉴定。将重组质粒分别转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),用IPTG进行诱导表达,对其表达产物的生物学活性进行检测。【结果】亚克隆获得了150 bp的TGEV spike蛋白亲和肽基因。成功构建了重组质粒pET-32a-SQHT和pGEX-6p-SQHT,并诱导表达出重组蛋白TRX-SQHT和GST-SQHT,其分子质量分别为25和31 ku。Western blot分析表明,2种重组蛋白与TGEV病毒粒子具有良好的亲和性;Dot-ELISA分析表明,2种重组蛋白与TGEV病毒粒子的最低结合滴度TCID50为5×102 mL-1。特异性试验表明,重组蛋白TRX-SQHT和GST-SQHT均可与TGEV产生特异性结合,而不与猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪轮状病毒(PoRV)结合。【结论】使用原核细胞成功表达了TGEV spike蛋白亲和肽,表达的重组蛋白具有很好的TGEV特异亲和性。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 spike蛋白 亲和肽 原核表达
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光敏水凝胶免疫识别严重急性呼吸综合征冠状病毒2 Spike蛋白的快速纳米检测方法
14
作者 段醒妹 陈小华 帅明 《中国药业》 CAS 2022年第7期71-74,共4页
目的建立严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)Spike(S)蛋白的快速检测方法。方法基于抗原-抗体免疫识别反应、纳米技术、光敏水凝胶技术,制备同时偶联抗体和光敏剂的纳米粒子溶液,SARS-CoV-2表面的S蛋白可与纳米粒子上的抗体形成... 目的建立严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)Spike(S)蛋白的快速检测方法。方法基于抗原-抗体免疫识别反应、纳米技术、光敏水凝胶技术,制备同时偶联抗体和光敏剂的纳米粒子溶液,SARS-CoV-2表面的S蛋白可与纳米粒子上的抗体形成牢固的非共价结合,去除其余干扰性结合后,在波长为405 nm的蓝光和光引发剂Irgacure 2959的作用下,S蛋白可使甲基丙烯酰化明胶(GelMA)水凝胶溶液由液态转变为固态。结果制备的检测溶液中,S蛋白抗体质量为50~100 mg,疏基-Irgacure 2959质量为5~10 mg。同时,当GelMA水凝胶溶液的浓度为5%~30%(m/V)时,检测效果较好。结论该方法生产成本低,检测效率高,易于贮存和运输,对设备和操作人员的依赖性低,可用于快速检测SARS-CoV-2表面的S蛋白。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征冠状病毒2 spike蛋白 抗原-抗体免疫识别反应 光敏水凝胶技术 纳米技术 快速检测
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SARS病毒Spike蛋白具有中和活性的抗原表位预测和初步鉴定 被引量:1
15
作者 潘浩 周晓明 +5 位作者 朱凤才 史智扬 李显 郭喜玲 韩卫宁 汪华 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期628-629,632,共3页
目的:预测并合成SARS病毒Spike蛋白中具有中和活性的抗原表位,鉴定其在免疫检测和疫苗设计中的作用。方法:使用二级结构以及基因组对比预测方法,预测Spike蛋白中具有较高抗原活性的肽段序列并人工合成。用直接ELISA法检测在SARS确诊阳... 目的:预测并合成SARS病毒Spike蛋白中具有中和活性的抗原表位,鉴定其在免疫检测和疫苗设计中的作用。方法:使用二级结构以及基因组对比预测方法,预测Spike蛋白中具有较高抗原活性的肽段序列并人工合成。用直接ELISA法检测在SARS确诊阳性患者血清和健康人血清之间相应抗体的检出差别,确定预测肽段是否为SARS的抗原肽段。结果:预测并人工合成了具有抗原活性的GEVFNATKFPSVYAW多肽,在ELISA检测中,可检测出SARS阳性血清中的针对性抗体,阳性符合率为71.4%,在健康人血清中不能检测出对应的抗体,阴性符合率为92%。结论:预测并合成了具有SARS病毒Spike蛋白的中和表位抗原,其特异性高于全病毒抗原,为SARS的诊断及疫苗的设计奠定了基础。 展开更多
关键词 SARS病毒 spike蛋白 多肽 中和表位
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SARS相关冠状病毒Spike蛋白定点诱变
16
作者 刘利东 涂洪斌 李冰 《热带医学杂志》 CAS 2007年第1期30-33,共4页
目的分析确定SARS-CoV Spike蛋白序列中对SARS-CoV的感染能力相关性较强的位点,并进行定点诱变。方法比对不同来源株SARS-CoV的Spike蛋白的序列,计算其相应位点的突变墒值和突变几率,结合进一步的生物信息学分析,筛选出经预测可能影响Sp... 目的分析确定SARS-CoV Spike蛋白序列中对SARS-CoV的感染能力相关性较强的位点,并进行定点诱变。方法比对不同来源株SARS-CoV的Spike蛋白的序列,计算其相应位点的突变墒值和突变几率,结合进一步的生物信息学分析,筛选出经预测可能影响Spike蛋白与其受体结合进而导致SARS病毒对宿主细胞的膜融合侵染能力的7个位点,对各个位点用重叠延伸PCR法或直接PCR法进行人工定点诱变,获7个突变片段,之后将各片段亚克隆至克隆载体PSP72中。结果经PCR和测序确认各片段点突变成功,并正确插入克隆载体PSP72中。结论成功实施Spike蛋白的定点诱变,获得7个突变片段的重组子,这些突变体可为研究这些突变位点在Spike蛋白与受体结合中的意义,进而可为阐述Spike蛋白的结构与功能的关系、揭示Spike蛋白变异与SARS病毒侵入(染)细胞能力的相关性提供坚实的实验基础。 展开更多
关键词 SARS-COV spike蛋白 定点诱变
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MERS-CoV棘突蛋白主要特性及B/T细胞抗原表位预测分析
17
作者 于娟 李红 +4 位作者 卢囡囡 饶华祥 雷有菊 姜双应 赵生仓 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第7期627-630,共4页
目的应用生物信息学方法分析中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)棘突蛋白(Spike,S)的主要特性,预测可能的B/T细胞抗原表位。结果 MERS-CoV的S蛋白氨基酸序列基本保守,具有多个糖基化、酰... 目的应用生物信息学方法分析中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)棘突蛋白(Spike,S)的主要特性,预测可能的B/T细胞抗原表位。结果 MERS-CoV的S蛋白氨基酸序列基本保守,具有多个糖基化、酰胺化及磷酸化翻译后修饰位点。综合各种单参数预测MERS-CoV S蛋白可能存在4个B细胞抗原表位、7个CTL细胞表位和5个Th细胞表位。方法以MERS-CoV S蛋白的氨基酸序列一级结构为基础分析其保守性,采用ProtParam预测S蛋白的理化特性,SOPMA预测其二级结构,MotifScan预测翻译后修饰位点,DNAStar分析其序列的亲水性指数、柔韧性指数、可及性参数以及抗原指数,推测B细胞抗原表位的可能位置,采用SYFPEITHI的T细胞表位预测工具预测CTL和Th细胞表位。结论生物信息学方法预测MERS-CoV S蛋白氨基酸保守序列,该蛋白可能含有B/T细胞抗原表位,为MERS-CoV疫苗研制及其他相关研究奠定了基础。 展开更多
关键词 MERS-CoV spike蛋白 B/T细胞表位 生物信息学
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SARS冠状病毒的刺突蛋白
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作者 廖信辉 赖庆文 徐灵均 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期744-746,共3页
严重急性呼吸系统综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)是由严重急性呼吸系统综合征冠状病毒(SARS corona-vims,SARS-CoV)引起的呼吸系统疾病。SARS-CoV的刺突蛋白(spike protein)具有S1和S2两个独特的功能结构域,研究发现... 严重急性呼吸系统综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)是由严重急性呼吸系统综合征冠状病毒(SARS corona-vims,SARS-CoV)引起的呼吸系统疾病。SARS-CoV的刺突蛋白(spike protein)具有S1和S2两个独特的功能结构域,研究发现两者都是进行疫苗和抗体研究的理想和有效的靶点。对非典疫苗的研究生产非常有价值,对预防和治疗SARS也有重大意义。 展开更多
关键词 严重急性呼吸系统综合征 冠状病毒 spike蛋白
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猪传染性胃肠炎病毒spike蛋白C抗原位点的原核表达研究 被引量:2
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作者 于天飞 朱可佳 +5 位作者 张双 杨怀娇 李赫 闫健哲 张晓琳 陈刚 《黑龙江畜牧兽医(下半月)》 CAS 北大核心 2015年第3期72-74,共3页
为猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的血清学检测方法的建立提供必要的诊断抗原,通过基因重组的方法,在大肠杆菌表达系统中表达了猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)spike蛋白C抗原位点。Western blot试验表明:表达的重组蛋白具有良好的抗原性。研究为T... 为猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的血清学检测方法的建立提供必要的诊断抗原,通过基因重组的方法,在大肠杆菌表达系统中表达了猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)spike蛋白C抗原位点。Western blot试验表明:表达的重组蛋白具有良好的抗原性。研究为TGEV血清学检测方法的建立提供了必要的物质基础。 展开更多
关键词 TGEV PRCV spike蛋白(纤突蛋白) C抗原位点 Western BLOT法
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严重急性呼吸综合征冠状病毒S蛋白引起肺损伤的可能机制 被引量:4
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作者 杨新艳 要国华 +1 位作者 徐军 钟南山 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期587-590,共4页
目的研究严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)通过微血管内皮细胞释放细胞因子/趋化因子,介导急性肺损伤的可能机制。方法广州呼吸疾病研究所2003年2月至5月确诊为 SARS 的住院患者23例,男15例,女8例,年龄27~55岁,平均(36±6)岁... 目的研究严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)通过微血管内皮细胞释放细胞因子/趋化因子,介导急性肺损伤的可能机制。方法广州呼吸疾病研究所2003年2月至5月确诊为 SARS 的住院患者23例,男15例,女8例,年龄27~55岁,平均(36±6)岁。用液相蛋白芯片系统测定 SARS 患者不同阶段血中的细胞因子/趋化因子水平,免疫组化方法检测 SARS 患者肺组织中γ干扰素诱导蛋白10(interferon-γ inducible protein 10,IP-10)的表达;通过昆虫-杆状病毒表达系统表达 SARS-CoV 的 S 蛋白,并经镍亲和磁珠纯化,将重组的 S 蛋白作用于人脐静脉内皮细胞(HUVEC)观察其形态学变化并检测相应细胞因子/趋化因子的变化。结果 IP-10在健康对照组水平较低[(1200±500)ng/L],疾病早期就显著增高[(7600±2400)ng/L,P<0.01],并且在进展期[(8100±2300)ng/L,P<0.01]和疾病晚期[(8000±2800)ng/L,P<0.01]都保持显著增高的水平,直至恢复期[(1 250±450)ng/L,P>0.05]才正常,其在 SARS 患者肺组织显著表达。S 蛋白作用于人血管内皮细胞可引起细胞内出现空泡,细胞变圆有脱落,随时间延长细胞破碎溶解。基础状态下内皮细胞并不生成 IP-10,S 蛋白(5、20、40 mg/L)分别作用后可见 IP-10生成呈显著量效反应,如12 h分别为[(179±34)、(889±212)、(1676±199)ng/L,P 均<0.05]。结论 (1)SARS-CoV 感染的患者血中 IP-10活性显著增高,一直持续到恢复期,肺中 IP-10的表达增加。(2)SARS-CoV 可通过其 S蛋白诱导血管内皮细胞合成释放 IP-10,损害内皮细胞。(3)SARS-CoV 的 S 蛋白诱导 IP-10在宿主细胞的生成不依赖 IFN-γ。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征 冠状病毒 内皮细胞 γ干扰素诱导蛋白10 spike蛋白
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