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血清SAA、CysC、Hcy、SF表达与糖尿病周围神经病变的相关性研究 被引量:2
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作者 肖俊锐 吴石贵 +3 位作者 黄舒婕 吴邦泰 许旭昀 陈子睿 《糖尿病新世界》 2022年第16期21-25,共5页
目的研究血清SAA、CysC、Hcy、SF表达与糖尿病周围神经病变的相关性。方法选取汕头市中医医院2020年8月—2021年12月收治的200例2型糖尿病患者,根据患者的足部神经感觉阈值系统检测结果,将阈值低于15 V的100例患者归为单纯糖尿病组,将... 目的研究血清SAA、CysC、Hcy、SF表达与糖尿病周围神经病变的相关性。方法选取汕头市中医医院2020年8月—2021年12月收治的200例2型糖尿病患者,根据患者的足部神经感觉阈值系统检测结果,将阈值低于15 V的100例患者归为单纯糖尿病组,将阈值高于15 V的100例患者归为糖尿病周围神经病变组,另选取同时间段内在本院接受体检的100名健康人群作为对照组。对3组研究对象的血糖(空腹血糖、糖化血红蛋白)、血脂(三酰甘油、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、胱抑素C(CysC)、同型半胱氨酸(Hcy)、铁蛋白(SF)进行检测。结果①糖尿病周围神经病变组和单纯糖尿病组的空腹血糖、糖化血红蛋白均高于对照组,且糖尿病周围神经病变组高于单纯糖尿病组,差异有统计学意义(P<0.05);②糖尿病周围神经病变组和单纯糖尿病组的总胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白均高于对照组,且糖尿病周围神经病变组的总胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白均高于单纯糖尿病组,差异有统计学意义(P<0.05),3组的高密度脂蛋白对比差异无统计学意义(P>0.05);③糖尿病周围神经病变组和单纯糖尿病组的血清SAA、CysC、Hcy、SF表达均高于对照组,且糖尿病周围神经病变组的各项指标均显著高于单纯糖尿病组,差异有统计学意义(P<0.05);④血清SAA、CysC、Hcy、SF与糖化血红蛋白呈正相关。结论血清SAA、CysC、Hcy、SF表达与糖尿病周围神经病变有明显相关性,共同参与了糖尿病周围神经病变的发生和发展。 展开更多
关键词 血清SAA CYSC HCY sf表达 糖尿病周围神经病变 相关性
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Construction and Expression of Eukaryotic Expression Vector of Mature Polypeptide of Duck Interferon Alpha Gene
2
作者 PEI Fucheng LI Jingpeng +2 位作者 LI Lu ZHANG Jianguang REN Guiping 《Journal of Northeast Agricultural University(English Edition)》 CAS 2006年第2期133-135,共3页
To study biological activities of Duck Interferon Alpha (DuIFN-α) and prepare antivirus medicine, the eukaryotic expression vector of mature polypeptide of Duck Interferon Alpha (mDuIFN-α) gene was constructed a... To study biological activities of Duck Interferon Alpha (DuIFN-α) and prepare antivirus medicine, the eukaryotic expression vector of mature polypeptide of Duck Interferon Alpha (mDuIFN-α) gene was constructed and expressed in insect cell. By means of PCR technique, the mDuIFN-α gene was cloned from pMD-18-duIFN-α recombinant_ The gene was then inserted to pGEM-T vector and identified by restriction endonuclease analysis and sequencing The mDuIFN-α gene was ligated with the eukaryotic expression vector pMelBacA. then transfected into Sf9 cell line. Recombinant polypeptide was effectively expressed in insect cell and its molecular weight was 34 ku. 展开更多
关键词 DUCK α -interferon eukaryotic expression sf9
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鳞翅目核仁小RNA Sf-15在逆境胁迫下的表达分析
3
作者 邱妩洁 庞佳林 +4 位作者 马田田 霍春月 杨宗霖 申雅文 李丹丹 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期769-772,共4页
核仁小RNA(small nucleolar RNA,snoRNA)除了能够指导rRNA修饰外,在肿瘤发生及生物响应逆境胁迫中也发挥着重要作用。课题组在前期研究中发现一个家蚕C/D box snoRNA Bm-15在鳞翅目昆虫中高度保守,在草地贪夜蛾细胞Sf9中干涉此snoRNA同... 核仁小RNA(small nucleolar RNA,snoRNA)除了能够指导rRNA修饰外,在肿瘤发生及生物响应逆境胁迫中也发挥着重要作用。课题组在前期研究中发现一个家蚕C/D box snoRNA Bm-15在鳞翅目昆虫中高度保守,在草地贪夜蛾细胞Sf9中干涉此snoRNA同源序列Sf-15后,细胞出现凋亡现象,与逆境相关的基因表达变化显著。为了进一步研究该snoRNA的功能,对Sf9细胞施加非生物胁迫紫外线照射(ultraviolet,UV)和生物胁迫病毒感染,检测snoRNA Sf-15在胁迫条件下表达量的变化。结果发现,UV处理后Sf9细胞中snoRNA Sf-15迅速响应,处理后4 h表达即上调,至8 h达高峰,随后其表达量逐渐下降;而且随着UV剂量的增大,snoRNA Sf-15的诱导表达量逐渐升高。Sf9细胞被AcMNPV病毒感染后,snoRNA Sf-15呈现先下降后上升再下降的趋势,感染后48 h表达量最高,病毒感染组48 h后Sf-15表达量整体高于对照组。结果表明snoRNA Sf-15在细胞响应非生物及生物胁迫过程中均发挥着重要的作用。该研究在鳞翅目昆虫中发现snoRNA可以参与细胞的逆境胁迫反应,为探索昆虫snoRNA的功能提供了新的思路。 展开更多
关键词 鳞翅目 核仁小RNA sf-15 逆境响应 表达
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抗菌肽B基因的点突变及在昆虫细胞中的表达 被引量:12
4
作者 吴代飞 曾宪松 +3 位作者 张银东 彭存智 黄亚东 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1999年第3期54-59,共6页
抗菌肽B基因经PCR定点突变技术改造后,克隆到杆状病毒转移载体pAcGP67B中的信号肽位点上,随后与野生AcNPV-DNA共转染Sf9细胞,经空斑筛选、PCR检测证实获得含该基因的重组病毒。重组病毒在Sf9细胞中扩... 抗菌肽B基因经PCR定点突变技术改造后,克隆到杆状病毒转移载体pAcGP67B中的信号肽位点上,随后与野生AcNPV-DNA共转染Sf9细胞,经空斑筛选、PCR检测证实获得含该基因的重组病毒。重组病毒在Sf9细胞中扩增并表达抗菌肽B基因。取含表达产物的细胞培养液检测其生物活性表明:改造过的抗菌肽B基因在Sf9细胞中获得初步表达,且表达的分泌型产物对EscherichiacoliK12D31有抑菌活性。 展开更多
关键词 抗菌肽 PCR 杆状病毒 sf9细胞 表达
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中国家蚕抗菌肽人工合成类CMⅣ基因在甜菜夜蛾虫体中的表达 被引量:6
5
作者 赵东红 戴祝英 +1 位作者 周开亚 张林元 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期680-685,共6页
将人工合成的中国家蚕抗菌肽类CMⅣ基因与抗菌肽信号肽基因连接 ,经EcoRⅠ、HindⅢ双酶切后 ,克隆于pFASTBacⅠ的EcoRⅠ、HindⅢ酶切位点之间 ,得到重组转座载体pFASTBac ABP ,经测序证明阳性克隆正确。将重组转座载体转化HD1 0Bac大肠... 将人工合成的中国家蚕抗菌肽类CMⅣ基因与抗菌肽信号肽基因连接 ,经EcoRⅠ、HindⅢ双酶切后 ,克隆于pFASTBacⅠ的EcoRⅠ、HindⅢ酶切位点之间 ,得到重组转座载体pFASTBac ABP ,经测序证明阳性克隆正确。将重组转座载体转化HD1 0Bac大肠杆菌 ,得到重组Bacmid ABP。将重组Bacmid转染sf2 1细胞及感染甜菜夜蛾 (Laphygmaexigua)幼虫 ,在培养细胞上清及虫体血淋巴中均测到抗菌活性。经Northernblotting证明感染甜菜夜蛾幼虫中有类CMⅣmRNA的存在。且表达产物在酸性电泳中电泳行为与天然抗菌肽CMⅣ组分相似。为进一步利用昆虫细胞及虫体生产抗菌肽药物打下了基础。 展开更多
关键词 中国家蚕抗菌肽类 CMⅣ基因 昆虫杆状病毒表达系统 Bac-to-Bac策略 sf21细胞 甜菜夜蛾幼虫
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人胰岛素基因杆状病毒表达载体的构建及其在Sf_9细胞中的表达 被引量:5
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作者 李华 刘维全 +5 位作者 王吉贵 江禹 王本旭 王萍 齐顺章 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期258-262,共5页
对人胰岛素基因组基因真核表达载体 ( p CMA/m INS)进行 Xho 酶切 ,回收的含人胰岛素基因组基因的 1 60 8bp片段与线性化的杆状病毒载体 p Fast Bac 进行连接 ,获得重组载体 p Fast/m INS。将该重组载体转化 DH1 0 Bac感受态细菌 ,在体... 对人胰岛素基因组基因真核表达载体 ( p CMA/m INS)进行 Xho 酶切 ,回收的含人胰岛素基因组基因的 1 60 8bp片段与线性化的杆状病毒载体 p Fast Bac 进行连接 ,获得重组载体 p Fast/m INS。将该重组载体转化 DH1 0 Bac感受态细菌 ,在体内进行重组 ,并经 2次抗性与蓝白斑筛选 ,得到杆状病毒重组载体 Bacmid/m INS。将该载体转染 Sf9细胞 ,获得了重组杆状病毒 ,经 Tricine-SDS-PAGE和 Western-blotting检测 ,重组杆状病毒在 Sf9细胞中的表达产物是胰岛素原 。 展开更多
关键词 人胰岛素基因 杆状病毒表达系统 表达载体 sf9细胞 基因表达
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利用Bac-to-Bac系统表达棉蚜的乙酰胆碱酯酶 被引量:7
7
作者 董双林 韩召军 Martin S WILLIAMSON 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期75-80,共6页
Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统是一种高效真核表达系统。采用重组DNA技术构建棉蚜乙酰胆碱酯酶1(AChE1)表达质粒,应用该系统在昆虫Sf9细胞系中成功表达了棉蚜的AChE1。表达的AChE以可溶性形式释放于细胞培养液中,对其自然底物类似... Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统是一种高效真核表达系统。采用重组DNA技术构建棉蚜乙酰胆碱酯酶1(AChE1)表达质粒,应用该系统在昆虫Sf9细胞系中成功表达了棉蚜的AChE1。表达的AChE以可溶性形式释放于细胞培养液中,对其自然底物类似物ATCh1的Km值为(144.5±28.6)μm;对抗蚜威、唑蚜威、氧化乐果和灭赐松等4种杀虫剂的敏感性指数(Ki值)分别为513、l883、5和23(mM·min)^-1,与文献报道的测定结果基本一致。昆虫细胞被重组病毒感染后第2-3天所得产物的活性最高;该产物在-20℃保存90d后活性没有明显下降,4℃保存60d后下降40%,室温(22℃)保存7d后即下降70%。 展开更多
关键词 Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统 棉蚜 乙酰胆碱酯酶 sf9细胞系
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猪流行性腹泻病毒S1基因在昆虫细胞中的表达与鉴定 被引量:8
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作者 杨德强 李慧春 +10 位作者 陈鹏飞 王康 李先斌 张文超 虞凌雪 姜一峰 高飞 黄勤峰 于海 童光志 周艳君 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2017年第3期18-22,共5页
本文以猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)流行毒株FJzz1/2011株的S1蛋白的切割位点设计合成特异性引物,通过RT-PCR扩增获得S1基因,将其克隆至转移载体p Fast Bac HTA中,获得了重组质粒p Fast Bac HTA-S1,将该重... 本文以猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)流行毒株FJzz1/2011株的S1蛋白的切割位点设计合成特异性引物,通过RT-PCR扩增获得S1基因,将其克隆至转移载体p Fast Bac HTA中,获得了重组质粒p Fast Bac HTA-S1,将该重组质粒转化E.coli DH10Bac感受态细胞,得到重组穿梭质粒r Bacmid-S1,再将重组穿梭质粒r Bacmid-S1转染Sf9细胞,48 h后即可观察到明显的细胞病变。将收获的r Bac-S1-P1代病毒在Sf9细胞上连续传3代后,收获细胞培养物,分别用间接免疫荧光鉴定(indirect immunofluorescence assay,IFA)、SDS-PAGE电泳和Western blot分析。结果显示,P3代重组病毒r Bac-S1感染的细胞均呈现亮绿色荧光,证实表达产物可以被PEDV阳性血清和抗S1蛋白的单抗特异性识别;SDS-PAGE电泳结果显示在大约120 k Da左右可观察到特异性条带;Western blot结果证实该蛋白可以被抗S1蛋白的特异性单抗识别。综上研究结果,证明利用杆状病毒表达系统在Sf9细胞中成功表达了PEDV的S1蛋白,为进一步研究PEDV S蛋白的抗原性奠定了基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 S1蛋白 杆状病毒 sf9细胞
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应当引起关注的昆虫细胞中的弹状病毒污染
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作者 魏佳琪 孙振 +8 位作者 薛秀 孟子燕 于馨 刘洋 张建龙 姜琳琳 张兴晓 朱洪伟 于佳玉 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期432-437,共6页
Sf弹状病毒(Sf-rhabdovirus,Sf-RV)是2014年从雌性草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda,Sf)蛹中分离得到的昆虫细胞系(Sf)中发现的一种弹状病毒,为线性负义单链RNA病毒。在Sf细胞系中发现的新弹状病毒(Sf-RV)使人们对昆虫细胞杆状病毒表... Sf弹状病毒(Sf-rhabdovirus,Sf-RV)是2014年从雌性草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda,Sf)蛹中分离得到的昆虫细胞系(Sf)中发现的一种弹状病毒,为线性负义单链RNA病毒。在Sf细胞系中发现的新弹状病毒(Sf-RV)使人们对昆虫细胞杆状病毒表达载体系统(Insect cell baculovirus expression vector system,IC-BEVS)生产的生物制剂的安全性表示质疑。本文主要对该病毒基因组构成、组成蛋白功能、感染宿主细胞能力宿主细胞对病毒的影响以及病毒带来的潜在安全性问题等方面进行简要阐述,以增加人们的认识。 展开更多
关键词 sf弹状病毒 sf细胞系 昆虫细胞杆状病毒表达载体系统
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鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒的制备 被引量:7
10
作者 李芹 王建忠 +6 位作者 黄楚荻 穆昱 周玉龙 高超 杨闽楠 赛度 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1725-1731,共7页
为了制备鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒,本试验通过RT-PCR技术扩增出鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株JL株的VP2全长基因,并将其插入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中,构建含有IBDV VP2基因的重组供体质粒pFast-VP2,转化DH10Bac E.... 为了制备鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒,本试验通过RT-PCR技术扩增出鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株JL株的VP2全长基因,并将其插入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中,构建含有IBDV VP2基因的重组供体质粒pFast-VP2,转化DH10Bac E.coli感受态细胞中,经蓝白斑筛选,获得重组杆粒rBacmid-VP2,将重组杆粒rBacmid-VP2转染sf9细胞后得到重组杆状病毒vBac-VP2。rBac-VP2感染sf9细胞,提取DNA,经PCR电泳分析,得到1条与预期大小相符的特异性条带;间接免疫荧光检测,可见特异性荧光;Western-blotting分析,在大约53 000处出现1条特异性的蛋白条带;电镜观察感染重组杆状病毒的细胞上清和沉淀,均可见重组VP2蛋白自行组装形成的病毒样颗粒。试验结果表明IBDV VP2基因在昆虫细胞中得到了表达,并自组装成了IBDV病毒样颗粒。本试验为研制鸡传染性法氏囊病病毒样颗粒疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病毒 VP2 真核表达 病毒样颗粒 sf9细胞
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mIL-4昆虫表达载体pIZT/V5-His的构建及其高效表达 被引量:3
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作者 孙延波 李菁华 史红艳 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期194-195,198,共3页
目的:构建昆虫表达载体pIZT/V5-His的基础上,建立能稳定高效表达mIL-4的昆虫细胞系。方法:PCR体外扩增mIL-4,将目的基因mIL-4和昆虫表达载体pIZT/V5-His用EcoRI和XbaI做双酶切,通过T4 DNA连接酶构建成含mIL-4目的基因的表达载体pIZT/V5-... 目的:构建昆虫表达载体pIZT/V5-His的基础上,建立能稳定高效表达mIL-4的昆虫细胞系。方法:PCR体外扩增mIL-4,将目的基因mIL-4和昆虫表达载体pIZT/V5-His用EcoRI和XbaI做双酶切,通过T4 DNA连接酶构建成含mIL-4目的基因的表达载体pIZT/V5-His-IL4。采用脂质体法将重组DNA转染到生长良好的昆虫细胞Sf9中。转染后的第3天,用ELISA方法检测转染细胞的培养上清中分泌型蛋白mIL-4的含量。结果:转染后的昆虫细胞Sf9能产生大量的mIL-4,含量可达1 mg.L-1,明显高于对照组(0.003 mg.L-1)。结论:昆虫表达载体pIZT/V5-His可用于mIL-4的高效表达。 展开更多
关键词 白细胞介素4 昆虫细胞sf9 基因表达 遗传载体
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HIV-1SF2株env基因(120)在大肠杆菌中的表达 被引量:6
12
作者 王斌 邵一鸣 曾毅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第1期18-22,共5页
运用基因重组技术,将HIV-1SF2株编码外膜蛋白gp120的env基因片段与原核载体pBV220进行重组,构建成质粒pBVSF2env,并在肠杆菌(ECoilDH10b)中获得表达,经Westernblot反应证实... 运用基因重组技术,将HIV-1SF2株编码外膜蛋白gp120的env基因片段与原核载体pBV220进行重组,构建成质粒pBVSF2env,并在肠杆菌(ECoilDH10b)中获得表达,经Westernblot反应证实,该重组蛋白可与来自HIV-1感染者的血清(含多克隆抗体)发生特异性反应。 展开更多
关键词 艾滋病毒 艾滋病毒1 毒株 ENV基因 基因表达
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利用杆状病毒Bac-to-Bac系统在Sf9细胞中表达真菌细胞色素P450nor(英文) 被引量:3
13
作者 周建刚 江月 +2 位作者 段媛媛 彭建新 刘德立 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期177-181,共5页
利用Bac to Bac杆状病毒载体表达系统将真菌细胞色素P4 5 0nor基因克隆至转移载体pFastBac1中 ,得到重组质粒pFastBac P4 5 0nor,再将其转化进入含穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac中发生转座作用 ,得到含P4 5 0nor基因的重组穿梭载体rBac... 利用Bac to Bac杆状病毒载体表达系统将真菌细胞色素P4 5 0nor基因克隆至转移载体pFastBac1中 ,得到重组质粒pFastBac P4 5 0nor,再将其转化进入含穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac中发生转座作用 ,得到含P4 5 0nor基因的重组穿梭载体rBacmidpAc P4 5 0nor。分离提取重组BacmidDNA ,并转染培养的昆虫细胞Sf9,得到重组病毒rAc p4 5 0nor。经酶切和PCR鉴定 ,细胞色素P4 5 0nor基因正确地插入到病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下 ,SDS PAGE分析证明 :表达蛋白的分子量为 4 3kD左右。Westernblotting分析结果表明 :有一条特定的杂交带存在 ,且分子量相同 (约 4 3kD)。进一步证明了含有真菌细胞色素P4 5 0nor基因的重组表达载体和重组病毒构建成功 ,并在昆虫细胞Sf9中实现了高效表达 ,经MTT法测定表达的细胞色素P4 5 0nor具有还原NO的生物学活性。 展开更多
关键词 杆状病毒 BAC-TO-BAC系统 sf9细胞 表达 真菌 细胞色素P450nor 基因 生物学活性
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昆虫细胞表达的网状内皮组织增殖症病毒囊膜糖蛋白及其免疫性 被引量:6
14
作者 王锡乐 张志 +1 位作者 姜世金 崔治中 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期593-597,共5页
利用Bac-to-BacBaculovirusExpressionSystems构建了能表达禽网状内皮组织增殖症病毒(REV)囊膜糖蛋白基因(env)的重组杆状病毒。用REV特异性单克隆抗体分别做间接免疫荧光抗体试验(IFA)和免疫转印试验,均可从感染的Sf9昆虫细胞中检出REV... 利用Bac-to-BacBaculovirusExpressionSystems构建了能表达禽网状内皮组织增殖症病毒(REV)囊膜糖蛋白基因(env)的重组杆状病毒。用REV特异性单克隆抗体分别做间接免疫荧光抗体试验(IFA)和免疫转印试验,均可从感染的Sf9昆虫细胞中检出REVenv。重组杆状病毒感染的Sf9细胞裂解后制备成油乳疫苗免疫SPF鸡后,可以诱发维持45d以上的特异性抗REV抗体,并可抵抗REV病毒感染。 展开更多
关键词 网状内皮组织增殖症病毒(REV) 囊膜糖蛋白基因(env) 表达 sf9细胞 免疫原性
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人促甲状腺激素受体A亚单位蛋白在昆虫细胞体系中的分泌性表达
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作者 张萌 张恺宁 +5 位作者 陈子怡 王玲 伍丽萍 王悦 刘冰 施秉银 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期409-414,共6页
目的拟构建昆虫细胞分泌表达体系,在草地夜蛾卵巢细胞分泌性促甲状腺激素受体(thyroid stimulating hormone receptor,TSHR)A亚单位蛋白。方法将TSHR A亚单位蛋白(22-289)和绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因连接到质粒... 目的拟构建昆虫细胞分泌表达体系,在草地夜蛾卵巢细胞分泌性促甲状腺激素受体(thyroid stimulating hormone receptor,TSHR)A亚单位蛋白。方法将TSHR A亚单位蛋白(22-289)和绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因连接到质粒,并通过转化、蓝白斑筛选获得重组杆粒,将其转染入sf9昆虫细胞收获重组杆状病毒,扩增并测定滴度。最终通过蛋白印迹实验鉴定重组蛋白的表达并优化表达条件。结果在蛋白表达体系的构建过程中,PCR鉴定和测序均证实了重组质粒和重组杆粒序列的正确性。将重组杆粒转染入细胞后观察到病毒出芽迹象,空斑实验鉴定P1代病毒的滴度为2×10^(7) pfu/m。蛋白印迹显示重组蛋白分子质量为55 ku,主要在培养基中。蛋白表达的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)为1,最佳感染时程为72 h。结论本研究构建了TSHR A亚单位的昆虫细胞杆状病毒表达体系,该体系能够外泌性表达分子质量为55 ku左右的蛋白TSHR 22-289,且蛋白能够成功的糖基化修饰。该系统为其工业化平台的建设及生产提供前期基础,也针对日后TSHR蛋白的研究和Graves病的病因预防提供了有用的工具。 展开更多
关键词 人促甲状腺激素受体A亚单位 昆虫细胞体系 分泌型表达 sf9细胞 GRAVES病
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鸡源九次跨膜蛋白TM9SF2基因克隆及其蛋白特征分析
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作者 张敏霞 池周颖 +4 位作者 瞿孝云 刘杨 曾庆航 李昌 廖明 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期2298-2307,共10页
根据鸡九次跨膜超家族成员2(chicken transmembrane 9 superfamily 2,chTM9SF2)预测序列设计引物,以原代鸡胚成纤维细胞CEF、鸡成纤维细胞系DF1和鸡肝癌细胞LMH的cDNA为模板,采用PCR方法扩增chTM9SF2编码序列,并利用MEGA 7.0、Clustal W... 根据鸡九次跨膜超家族成员2(chicken transmembrane 9 superfamily 2,chTM9SF2)预测序列设计引物,以原代鸡胚成纤维细胞CEF、鸡成纤维细胞系DF1和鸡肝癌细胞LMH的cDNA为模板,采用PCR方法扩增chTM9SF2编码序列,并利用MEGA 7.0、Clustal W、SWISS-MODEL等生物信息学工具对鸡、鸭、人、鼠等不同物种来源的九次跨膜超家族成员2(transmembrane 9 superfamily 2,TM9SF2)进行遗传进化、同源性、结构域及结构模拟等分析;进而通过构建真核表达质粒,利用Western blot、激光共聚焦显微镜探究chTM9SF2的表达和亚细胞定位。结果显示,分别在3类细胞中均可成功获得编码序列一致的chTM9SF2基因,与禽类的同源性最高,且高度保守;该基因能够在DF-1细胞中表达,且主要定位于晚期内体或溶酶体膜。结果表明,成功扩增获得chTM9SF2基因,并在DF-1细胞成功表达,分析其定位于晚期内体或溶酶体膜,为进一步研究chTM9SF2的生理功能及在病原感染中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 chTM9sf2 克隆 序列分析 表达
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鸡TM9SF2蛋白胞外结构域的原核表达及其家兔抗血清的制备
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作者 张敏霞 杜寿文 +2 位作者 李昌 廖明 瞿孝云 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期878-883,共6页
为了探究鸡源九次跨膜超家族成员2(TM9SF2)的生物学功能,通过软件分析TM9SF2蛋白的氨基酸序列保守性,选择其胞外区,经密码子优化后进行基因合成,命名为chTM9ECD;将该基因亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,成功构建重组表达质粒pET-chTM... 为了探究鸡源九次跨膜超家族成员2(TM9SF2)的生物学功能,通过软件分析TM9SF2蛋白的氨基酸序列保守性,选择其胞外区,经密码子优化后进行基因合成,命名为chTM9ECD;将该基因亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,成功构建重组表达质粒pET-chTM9ECD,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达;用纯化的重组TM9SF2蛋白与佐剂混合后免疫新西兰大白兔制备多抗血清。SDS-PAGE和Western-blot均证实重组TM9SF2蛋白以包涵体形式表达,分子质量约为33.6 ku。经ELISA检测,抗体效价达1∶128 000,Western-blot证实家兔抗重组TM9SF2血清可特异性识别293细胞中表达的TM9SF2。结论,本试验应用大肠杆菌成功表达了重组TM9SF2胞外蛋白,具有免疫原性,并获得家兔源阳性血清,为TM9SF2生物学功能研究奠定基础。 展开更多
关键词 TM9sf2 跨膜蛋白 原核表达 抗血清
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猪圆环病毒2型Rep蛋白在Sf9昆虫细胞中的表达和纯化
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作者 梁太润 熊谋康 +8 位作者 王爽云 张歆明 王志朋 王磊 刘献辉 于林洋 刘燕玲 张乐宜 宋长绪 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2023年第1期7-13,122,123,共9页
为了在Sf9昆虫细胞中表达猪圆环病毒2型(PCV-2)Rep蛋白,试验以PCV-2毒株(PCV-2b)的DNA为模板扩增ORF1基因,将ORF1基因插入到转移载体质粒pQB3s上,构建重组质粒pQB3s-PCV-2b-Rep,将重组质粒与杆状病毒表达载体qBac-ⅢG共同转染Sf9昆虫细... 为了在Sf9昆虫细胞中表达猪圆环病毒2型(PCV-2)Rep蛋白,试验以PCV-2毒株(PCV-2b)的DNA为模板扩增ORF1基因,将ORF1基因插入到转移载体质粒pQB3s上,构建重组质粒pQB3s-PCV-2b-Rep,将重组质粒与杆状病毒表达载体qBac-ⅢG共同转染Sf9昆虫细胞,获得P0代重组杆状病毒,经连续传代获得P1、P2、P3代重组杆状病毒,将P3代重组杆状病毒接种到Sf9昆虫细胞中进行悬浮培养,收集细胞并利用镍柱纯化重组表达的蛋白,通过荧光显微镜观察感染重组杆状病毒的Sf9昆虫细胞中的荧光量,通过SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定重组蛋白的表达情况。结果表明:经PCR鉴定在945 bp处出现特异性条带;通过荧光显微镜观察,在转染后第1天就出现绿色荧光,第4~5天出现大量绿色荧光,P2、P3代重组杆状病毒感染Sf9昆虫细胞及P3代重组杆状病毒感染悬浮培养的Sf9昆虫细胞后在第4~5天出现大量绿色荧光;P2、P3代重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞的细胞裂解液及纯化的重组Rep蛋白,通过SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定在约38 ku处出现目的条带。说明试验成功构建出重组质粒pQB3s-PCV-2b-Rep及重组杆状病毒,构建的重组杆状病毒可以在悬浮培养的Sf9昆虫细胞中表达重组蛋白Rep。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 重组蛋白Rep sf9昆虫细胞 杆状病毒表达载体 纯化
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Bac-to-Bac系统表达鹿源BVDV E2蛋白及其免疫原性 被引量:3
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作者 穆昱 操时伟 +2 位作者 周玉龙 李芹 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1899-1905,共7页
为了制备针对鹿源BVDV E2蛋白的单克隆抗体,本试验通过RT-PCR技术扩增出鹿源BVDV E2的全长基因,并将其插入杆状病毒bac to bac表达系统的供体质粒pFast BacHTA中,构建含有BVDV E2基因的重组供体质粒pFast-E2,转化至含穿梭载体Bacmid的... 为了制备针对鹿源BVDV E2蛋白的单克隆抗体,本试验通过RT-PCR技术扩增出鹿源BVDV E2的全长基因,并将其插入杆状病毒bac to bac表达系统的供体质粒pFast BacHTA中,构建含有BVDV E2基因的重组供体质粒pFast-E2,转化至含穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac E.coli感受态中,经半乳糖苷酶的蓝白斑筛选,获得重组杆粒rBacmid-E2,然后将其转染sf9细胞后得到重组杆状病毒vBac-E2,E2基因会随着杆状病毒的增殖而获得表达。表达产物经直接免疫荧光检测,可见特异性荧光;Western-Blot定性分析,在大约38 000处出现1条特异性的蛋白印迹与预期大小相符,表明BVDV E2基因在该系统中得到了表达。本研究为研制针对鹿源BVDV E2蛋白的单克隆抗体及胶体金试纸条奠定了基础。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻-黏膜病病毒 E2 真核表达 杆状病毒表达系统 sf9细胞
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神经营养素-4(NT-4)在昆虫杆状病毒表达系统中的克隆与表达 被引量:4
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作者 马晓骊 黄秉仁 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期141-144,共4页
目的 通过昆虫杆状病毒表达系统的优势,表达出具有生物学活性的神经营养素-4( hNT-4)蛋白。方法 通过 PCR方法获得 hNT-4成熟肽的基因,将其连接到昆虫表达载体 pAcGP67B上,在昆虫细胞 Sf9中进行表达。对表达产物进行免疫原性和生... 目的 通过昆虫杆状病毒表达系统的优势,表达出具有生物学活性的神经营养素-4( hNT-4)蛋白。方法 通过 PCR方法获得 hNT-4成熟肽的基因,将其连接到昆虫表达载体 pAcGP67B上,在昆虫细胞 Sf9中进行表达。对表达产物进行免疫原性和生物学活性测定。结果 获得 hNT-4蛋白的表达产物, SDS-PAGE电泳显示表达产物相对分子质量为 15 000。 经 Western-blot验证,表达上清及细胞全蛋白均有一条能与抗人 NT-4抗体发生特异性免疫反应的条带。经 PC12细胞测定,表达上清中的 rNT-4蛋白具有明确的生物学活性。结论 hNT-4在昆虫杆状病毒表达系统中的表达为今后进一步深入研究 hNT-4的功能及其在临床中的应用提供了条件。 展开更多
关键词 神经营养素-4 载体PacGP67B sf 细胞 昆虫杆状病毒 表达系统 克隆表达
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