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荣筋拈痛方对骨关节炎作用靶点的分析及验证 被引量:10
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作者 林洁 赵忠胜 +4 位作者 黄艳峰 付长龙 叶锦霞 陈俊 吴广文 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期3743-3746,共4页
目的:BATMAN-TCM分析工具及R语言分析荣筋拈痛方对骨关节炎(OA)的作用及靶点并进行动物实验验证。方法:BATMAN-TCM分析工具预测荣筋拈痛方潜在作用靶点、发挥作用的方式途径及可能作用的疾病。R语言分析出OA模型大鼠与正常大鼠膝关节软... 目的:BATMAN-TCM分析工具及R语言分析荣筋拈痛方对骨关节炎(OA)的作用及靶点并进行动物实验验证。方法:BATMAN-TCM分析工具预测荣筋拈痛方潜在作用靶点、发挥作用的方式途径及可能作用的疾病。R语言分析出OA模型大鼠与正常大鼠膝关节软骨组织的差异基因。韦恩图分析荣筋拈痛方潜在作用靶点与软骨组织差异基因的交集,选择靶点分子进行动物实验验证。将2月龄大鼠随机分为空白组、模型组、荣筋拈痛方组,空白组和模型组予0.9%氯化钠溶液灌胃,荣筋拈痛方组予荣筋拈痛方水提溶液灌胃。各组干预12周后,对关节软骨组织进行HE染色观察及Western Blot检测。结果:荣筋拈痛方具有632个化学成分,其中440个化学成分预测到1 787个潜在作用靶点,其通过多途径发挥作用,能治疗疼痛性疾病、心血管疾病、肾脏疾病、免疫性疾病、关节炎性疾病等多种疾病。OA大鼠软骨组织中差异表达的基因共226条。荣筋拈痛方潜在作用靶点与软骨组织差异基因相同的指标有34个,其中选择CXCR4进行验证。动物实验中HE染色及Western Blot检测显示,模型组软骨组织损伤且CXCR4蛋白表达升高(P<0.05),荣筋拈痛方组软骨组织损伤减轻且CXCR4蛋白表达降低(P<0.01)。结论:荣筋拈痛方能延缓OA软骨组织退变,作用机制与调节CXCR4表达有关。 展开更多
关键词 荣筋拈痛方 生物信息学 BATMAN-TCM R语言 骨关节炎
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基于计算机模拟探讨牛膝治疗骨关节炎软骨退变机制 被引量:7
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作者 黄艳峰 谢新宇 +3 位作者 林晴 邱志伟 叶锦霞 付长龙 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第15期148-155,共8页
目的:基于生物信息学和网络药理学方法,筛选荣筋拈痛方君药牛膝相关活性成分,通过动物体内体外实验观察其对骨关节炎相关治疗靶点的影响。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)数据库筛选中药牛膝主要活性成分和治疗靶点;通... 目的:基于生物信息学和网络药理学方法,筛选荣筋拈痛方君药牛膝相关活性成分,通过动物体内体外实验观察其对骨关节炎相关治疗靶点的影响。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)数据库筛选中药牛膝主要活性成分和治疗靶点;通过GEO数据库获得与疾病的差异表达基因,并进行交叉分析;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测牛膝主要活性成分对骨关节炎大鼠体内体外富集治疗靶点的影响。结果:牛膝作用骨关节炎相关活性成分共20种,槲皮素为其中重要成分之一;靶基因共3个,其中骨桥蛋白(OPN),纤维蛋白溶解抑制剂-1(PAI-1)等为该网络中的关键基因;基因本体(GO)分析共获得相关条目227条,涉及到的功能包括创伤生理反应调节(GO:1903034),创伤反应负调节(GO:1903035)等。京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析获得相关通路12条,涉及细胞外基质受体相互作用(hsa04512)等。动物实验中,与正常组比较,模型组OPN,PAI-1 mRNA和蛋白表达量增加与模型组比较,槲皮素组OPN,PAI-1 mRNA和蛋白表达量降低(P<0.05)。细胞实验中,与正常组比较,模型组OPN,PAI-1蛋白表达量增加,Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)蛋白表达量降低;与模型组比较,槲皮素组和抑制剂组OPN,PAI-1蛋白表达量降低,CollagenⅡ蛋白表达量明显增加(P<0.05)。结论:牛膝可能主要通过其活性成分(槲皮素)下调软骨细胞OPN,PAI-1靶mRNA表达,上调CollagenⅡ蛋白表达,实现抑制软骨退变,防治骨关节炎。 展开更多
关键词 槲皮素 软骨退变 生物信息学 网络药理学 机制研究 牛膝 荣筋拈痛方
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荣筋拈痛方调控软骨细胞NLRP3/caspase-1/GSDMD通路改善骨关节炎炎性病变的机制 被引量:6
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作者 林晴 潘丹虹 +4 位作者 李路 付长龙 吴广文 郑春松 叶锦霞 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期5653-5658,共6页
目的:探讨荣筋拈痛方调控NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)/消皮素D(GSDMD)通路减轻软骨细胞焦亡,改善骨关节炎炎性病变的作用机制。方法:将二代软骨细胞随机分为正常组、模型组[脂多糖(LPS)... 目的:探讨荣筋拈痛方调控NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)/消皮素D(GSDMD)通路减轻软骨细胞焦亡,改善骨关节炎炎性病变的作用机制。方法:将二代软骨细胞随机分为正常组、模型组[脂多糖(LPS)+三磷酸腺苷(ATP)]、荣筋拈痛方组(LPS+ATP+荣筋拈痛方)和抑制剂组(LPS+ATP+MCC950)。Hoechst 33342/PI双染检测软骨细胞膜的完整性;双转盘活细胞共聚焦实时成像分析系统观察NLRP3和caspase-1的定位与表达;ELISA检测白细胞介素(IL)-1β和IL-18的水平;RT-PCR检测NLRP3、caspase-1、GSDMD、Ⅱ型胶原蛋白(collagenⅡ)和聚集蛋白聚糖(aggrecan)mRNA水平;Western Blot检测NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1、GSDMD、GSDMD-N、collagenⅡ、aggrecan、基质金属蛋白酶(MMP)-3和MMP-13蛋白表达。结果:与模型组比较,荣筋拈痛方可降低因细胞膜完整性丧失而染上的PI红色荧光强度;降低NLRP3和caspase-1蛋白表达的绿色荧光强度(P<0.01);降低软骨细胞上清液中炎症因子IL-1β和IL-18水平(P<0.01);降低NLRP3、caspase-1、GSDMD mRNA水平(P<0.05,P<0.01),提高collagenⅡ和aggrecan mRNA水平(P<0.01);降低NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1、GSDMD、GSDMD-N、MMP-3和MMP-13蛋白表达(P<0.05,P<0.01),提高collagenⅡ和aggrecan蛋白表达(P<0.05)。结论:荣筋拈痛方可通过调控软骨细胞NLRP3/caspase-1/GSDMD途径,减轻因细胞焦亡而导致的炎症反应,改善骨关节炎炎性病变。 展开更多
关键词 荣筋拈痛方 骨关节炎 焦亡 NLRP3/caspase-1/GSDMD通路
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荣筋拈痛方对白细胞介素-1β诱导大鼠退变软骨细胞增殖的影响 被引量:7
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作者 黄艳峰 陈俊 +4 位作者 林洁 赵忠胜 叶锦霞 李西海 吴广文 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期2077-2082,共6页
目的:探讨荣筋拈痛方对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导退变软骨细胞增殖的作用机制。方法:CCK8法筛选荣筋拈痛方对退变软骨细胞最佳干预条件后,将软骨细胞随机分为正常组、模型组、抑制剂组和荣筋拈痛方组,分组干预后采用激光共聚焦观察各... 目的:探讨荣筋拈痛方对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导退变软骨细胞增殖的作用机制。方法:CCK8法筛选荣筋拈痛方对退变软骨细胞最佳干预条件后,将软骨细胞随机分为正常组、模型组、抑制剂组和荣筋拈痛方组,分组干预后采用激光共聚焦观察各组Ⅱ型胶原蛋白表达;流式细胞术检测各组周期分布情况;RTPCR与Western Blot检测各组G1/S检测点相关调节因子p16、Cyclin D1、CDK4、pRB基因和蛋白表达。结果:荣筋拈痛方100μg/mL干预退变软骨细胞48h可显著增强软骨细胞活力(P<0.01)。与正常组比较,模型组和抑制剂组Ⅱ型胶原蛋白表达量显著降低(P<0.01);与模型组和抑制剂组比较,荣筋拈痛方组Ⅱ型胶原蛋白表达量显著增加(P<0.01)。与正常组比较,模型组和抑制剂组G0/G1期比例升高,G2/M期、S期比例显著降低(P<0.01);与模型组和抑制剂组比较,荣筋拈痛方组G0/G1期比例显著降低,G2/M期、S期比例显著升高(P<0.01)。与正常组比较,模型组和抑制剂组Cyclin D1、CDK4、pRB基因和蛋白表达量显著降低,p16基因和蛋白表达量显著增加(P<0.01,P<0.05);与模型组和抑制剂组比较,荣筋拈痛方组Cyclin D1、CDK4、pRB基因和蛋白表达量显著增加,p16基因和蛋白表达量显著降低(P<0.01)。结论:荣筋拈痛方可调控软骨细胞G1/S期的转换,促进Ⅱ型胶原蛋白表达和软骨细胞增殖。 展开更多
关键词 荣筋拈痛方 膝骨性关节炎 本痿标痹 白细胞介素-1Β 退变软骨细胞 细胞周期 增殖 大鼠
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荣筋拈痛方调控lncRNA MGC-Mirg减轻骨关节炎软骨细胞内质网应激的作用 被引量:2
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作者 付长龙 谢新宇 +4 位作者 邱志伟 林晴 金灵璐 涂海水 叶锦霞 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期2561-2566,共6页
目的:探讨荣筋拈痛方调控lncRNA MGC-Mirg减轻骨关节炎(OA)软骨细胞内质网应激的作用与机制。方法:构建lncRNA MGC-Mirg沉默软骨细胞;采用荧光原位杂交实验检测25μmol/L毒胡萝卜素(T G)诱导的软骨细胞中lncRNA MGC-Mirg的分布及表达;Re... 目的:探讨荣筋拈痛方调控lncRNA MGC-Mirg减轻骨关节炎(OA)软骨细胞内质网应激的作用与机制。方法:构建lncRNA MGC-Mirg沉默软骨细胞;采用荧光原位杂交实验检测25μmol/L毒胡萝卜素(T G)诱导的软骨细胞中lncRNA MGC-Mirg的分布及表达;Real-timePCR检测lncRNA MGC-Mirg沉默后的软骨细胞中EDEM1、Caspase-3 mRNA水平变化;使用第一代软骨细胞进行后续实验,设置空白组、模型组、荣筋拈痛方组,其中空白组予以含10%胎牛血清的DMEM培养;模型组先以25μmol/L TG干预4 h,再予以含10%胎牛血清的DMEM继续培养;荣筋拈痛方组先以25μmol/L TG干预4 h,再更换含300μg/mL的荣筋拈痛方继续培养12 h。采用Real-time PCR检测TG诱导的软骨细胞中lncRNA MGC-Mirg、EDEM1、PERK、ATF4、BIP、GADD153、Caspase-3基因相对表达水平;流式细胞术检测软骨细胞凋亡率。结果:lncRNA MGCMirg主要分布于软骨细胞的胞质中,与对照组比较,模型组软骨细胞中lncRNA MGC-Mirg相对拷贝数明显增多。与TG+sh-NC组比较,TG+sh-Mirg组EDEM1、Caspase-3 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05)。与空白组比较,模型组软骨细胞中lncRNA MGC-Mirg、EDEM1、PERK、ATF4、BIP、GADD153、Caspase-3 mRNA相对表达水平显著增高(P<0.05);与模型组比较,荣筋拈痛方组lncRNA MGC-Mirg、EDEM1、PERK、ATF4、BIP、GADD153、Caspase-3 mRNA相对表达水平显著降低(P<0.05)。模型组软骨细胞凋亡率高于空白组和荣筋拈痛方组。结论:荣筋拈痛方可通过调控lncRNA MGC-Mirg,减轻OA软骨细胞内质网应激反应,延缓软骨细胞退变。 展开更多
关键词 骨关节炎 荣筋拈痛方 内质网应激 痹证 软骨细胞 lncRNA MGC-Mirg
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基于lncRNA MGC-Mirg与PERK通路探讨荣筋拈痛方延缓膝骨关节炎小鼠软骨退变
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作者 谢新宇 林晴 +4 位作者 黄艳峰 马德尊 叶锦霞 李西海 付长龙 《福建中医药》 2024年第2期31-35,共5页
目的 基于长链非编码RNA(lncRNA) MGC-Mirg与PRKR样内质网激酶(PERK)通路探讨荣筋拈痛方延缓膝骨关节炎模型小鼠软骨退变的机制。方法 48只8周龄小鼠适应性喂养1周后,采用随机数字表法分为空白组12只和造模组36只,造模组采用改良Hulth... 目的 基于长链非编码RNA(lncRNA) MGC-Mirg与PRKR样内质网激酶(PERK)通路探讨荣筋拈痛方延缓膝骨关节炎模型小鼠软骨退变的机制。方法 48只8周龄小鼠适应性喂养1周后,采用随机数字表法分为空白组12只和造模组36只,造模组采用改良Hulth法诱导建立KOA模型,将造模成功的小鼠分为模型组、荣筋拈痛方组和阳性对照组各12只。荣筋拈痛方组按9 g/(kg·d)给予荣筋拈痛方药液灌胃;阳性对照组按500 mg/(kg·d)给予特异性内质网应激抑制剂牛磺熊去氧胆酸溶液灌胃;空白组和模型组按10 mL/(kg·d)给予生理盐水灌胃,均连续灌胃8周。采用HE染色与番红O-固绿染色观察小鼠关节软骨组织病理改变;Western blot检测膝关节软骨组织PERK、激活转录因子4(ATF4)、结合免疫球蛋白(BIP)、ER降解增强α-甘露糖苷酶样蛋白1(EDEM1)、生长停滞与DNA损伤诱导蛋白(GADD153)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)蛋白表达量;qPCR检测膝关节软骨组织lncRNA MGC-Mirg RNA相对表达水平。结果 与空白组比较,模型组关节间隙变窄,软骨膜表层发生破坏,软骨层纤维方向出现偏移、变薄,软骨细胞数量降低,且胫骨平台处的软骨下骨出现塌陷,各层结构不完整;膝关节软骨组织PERK、ATF4、BIP、EDEM1、GADD153、Caspase-3蛋白表达量和lncRNA MGC-Mirg RNA相对表达水平均明显升高(P<0.05)。与模型组比较,荣筋拈痛方组与阳性对照组软骨层结构基本完整;膝关节软骨组织PERK、ATF4、BIP、EDEM1、GADD153、Caspase-3蛋白含量表达和lncRNA MGC-Mirg RNA相对表达水平均明显降低(P<0.05)。结论 荣筋拈痛方可以有效延缓KOA小鼠软骨退变,其机制可能与下调lncRNA MGC-Mirg基因、PERK通路相关蛋白表达,抑制细胞内质网应激有关。 展开更多
关键词 膝骨关节炎 荣筋拈痛方 lncRNA 内质网应激 PERK通路
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