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红曲有效成分洛伐他汀对高脂小鼠血脂代谢及脂蛋白脂酶mRNA表达的作用 被引量:19
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作者 陈运中 陈春艳 张声华 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期713-717,共5页
目的探讨红曲有效成分洛伐他汀对高脂小鼠血脂代谢调节的分子机制。方法昆明种雌性小鼠48只,按血清总胆固醇(TC)分为A、B、C、D、E、F 6组:正常对照组、高脂对照组、绞股蓝总苷阳性对照组、洛伐他汀低、中、高(5、15、30 mg/kg)剂量组。... 目的探讨红曲有效成分洛伐他汀对高脂小鼠血脂代谢调节的分子机制。方法昆明种雌性小鼠48只,按血清总胆固醇(TC)分为A、B、C、D、E、F 6组:正常对照组、高脂对照组、绞股蓝总苷阳性对照组、洛伐他汀低、中、高(5、15、30 mg/kg)剂量组。A组喂饲基础饲料,其他各组喂饲高脂饲料;按剂量分别ig给药6周,禁食12 h后,测定小鼠血脂水平相关指标;用Trizol试剂法提取总RNA,用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肝、脾组织脂蛋白脂酶(LPL)mRNA的表达。结果实验6周末,洛伐他汀低、中、高各剂量组使小鼠动脉硬化指数(AI)均极显著低于高脂组(P<0.01);洛伐他汀中、高剂量组和绞股蓝总苷阳性对照组使高脂小鼠血清TC、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)均极显著低于高脂组(P<0.01);洛伐他汀低、中、高剂量组与高脂组相比,显著升高血清高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)(P<0.01);洛伐他汀低、中、高剂量组均提高肝组织中LPLmRNA的表达,且呈剂量依赖关系。结论洛伐他汀通过促进LPL mRNA转录而调节高脂小鼠血清血脂代谢水平,这可能是其调节血脂,预防动脉粥样硬化(AS)等心脑血管疾病的机制之一。 展开更多
关键词 洛伐他汀 脂蛋白脂酶 有效成分 MRNA表达 血脂代谢 红曲 低密度脂蛋白-胆固醇 动脉粥样硬化(AS) 反转录聚合酶链反应 Trizol试剂 甘油三酯(TG) 阳性对照组 绞股蓝总苷 血清总胆固醇 动脉硬化指数 高密度脂蛋白 剂量依赖关系
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90例病毒性胃肠炎患者粪便中诺如病毒检出情况分析 被引量:19
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作者 高志勇 吕虹 +8 位作者 黄芳 吴晓娜 严寒秋 刘园 刘桂荣 李洁 窦相锋 王全意 庄辉 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2008年第8期564-566,573,共4页
目的了解病毒性胃肠炎患者中诺如病毒感染情况。方法收集北京市2007年2月5~17日共计90例病毒性胃肠炎患者的粪便标本,应用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测粪便中诺如病毒核酸或抗原,并对RT-PCR阳性标本的PC... 目的了解病毒性胃肠炎患者中诺如病毒感染情况。方法收集北京市2007年2月5~17日共计90例病毒性胃肠炎患者的粪便标本,应用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测粪便中诺如病毒核酸或抗原,并对RT-PCR阳性标本的PCR产物进行克隆测序。结果90例病毒性胃肠炎患者的粪便标本中,35例(38.89%)RT-PCR为诺如病毒核酸阳性,序列分析结果显示,诺如病毒GⅡ型34例(97.14%),GⅠ型1例(2.86%);90例中,39例(43.33%)为ELISA检测诺如病毒抗原阳性。以RT-PCR检测结果作为金标准进行比较,ELISA的灵敏度和特异度分别为97.14%(34/35)和90.91%(50/55)。结论诺如病毒是病毒性胃肠炎的主要病原,以GⅡ型流行为主。ELISA快速、简便,其灵敏度和特异度较高,可作为诺如病毒感染的初筛试验。 展开更多
关键词 诺如病毒 病毒性胃肠炎 逆转录聚合酶链反应法(rt-pcr) 酶联免疫吸附试验(ELISA)
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应用反转录-聚合酶链反应检测口蹄疫病毒 被引量:10
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作者 朱彩珠 卢永干 +6 位作者 邱孝高 赵启祖 谢庆阁 张维德 员美蓉 杨福荣 张强 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期272-278,共7页
建立了一种适用于检测动物(猪、牛、羊)组织(肌肉、淋巴结、脊髓、扁桃体和蹄冠皮)和牛食道-咽部分泌物(O-P液)中的口蹄疫(FMD)病毒核酸(RNA)的反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术。引物对是人工合成的两条... 建立了一种适用于检测动物(猪、牛、羊)组织(肌肉、淋巴结、脊髓、扁桃体和蹄冠皮)和牛食道-咽部分泌物(O-P液)中的口蹄疫(FMD)病毒核酸(RNA)的反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术。引物对是人工合成的两条20mer寡核苷酸片段,它们的序列相应于FMD病毒结构蛋白VP1基因后2/3区段,在4个血清型之间基本一致(保守)。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测。试验结果表明,RT-PCR具有良好的特异性,属该4个血清型的各个毒株都获得了预计长度的DNA片段;而相关的小RNA病毒科的猪水泡病(SVD)和柯赛奇B5(Cox.B5)病毒(特异性对照),及未感染的细胞培养物和动物组织(空白对照)都是阴性。与常规检测方法相比,该RT-PCR的检测灵敏度提高6-12倍,最高可检测20TCID50(细胞毒)或0.16~0.32LD50(组织毒)的病毒量,二次扩增还可提高检测灵敏度100倍。因为直接利用组织样品,检测试验快速简便,可在24小时内获得结果。应用该方法已检测了232份组织样品和58份O-P液样品。 展开更多
关键词 rt-pcr FMDV RNA萃取 动物组织 O-P液
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aFGF和bFGF在卵巢癌中的表达及对细胞增殖的影响 被引量:8
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作者 张颐 尚海 +2 位作者 孙黎光 刘宁 于卉影 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第11期1162-1165,共4页
背景与目的:近年研究发现,成纤维细胞生长因子(fibroblast growthfactor,FGF)在多种恶性肿瘤中均有过度表达,在卵巢癌中已发现存在高表达的碱性FGF(basic FGF,bFGF),但在原发性卵巢癌中,尚未见有关酸性FGF(acidic FGF,aFGF)的报道。本... 背景与目的:近年研究发现,成纤维细胞生长因子(fibroblast growthfactor,FGF)在多种恶性肿瘤中均有过度表达,在卵巢癌中已发现存在高表达的碱性FGF(basic FGF,bFGF),但在原发性卵巢癌中,尚未见有关酸性FGF(acidic FGF,aFGF)的报道。本研究拟检测卵巢癌组织中aFGF和bFGF的表达,以及外源性aFGF和bFGF对卵巢癌细胞株OVCA3细胞增殖的影响,以探讨aFGF和bFGF在卵巢癌发生、发展中的意义。方法:应用逆转录-聚合酶链反应技术(reverse transcriptionpolymerase chain reaction,RT-PCR)对40例上皮性卵巢癌组织中aFGF mRNA和bFGF mRNA的表达进行分析;通过MTT比色法,观察aFGF和bFGF对卵巢癌细胞增殖的影响。结果:aFGF mRNA和bFGF mRNA在上皮性卵巢癌组织中分别为0.981±0.130和1.023±0.131,与正常卵巢(0.636±0.084和0.724±0.079)、卵巢瘤样病变(0.696±0.067和0.742±0.094)及卵巢良性肿瘤(0.694±0.106和 0.737±0.089)相比,差异有统计学意义(P<0.05),在Ⅲ~Ⅳ期卵巢癌中的表达水平明显高于Ⅰ~Ⅱ期。OVCA3细胞株中加入外源性aFGF和bFGF后,增殖比明显增加,并与aFGF和bFGF浓度呈显著正相关。当aFGF浓度为1.2μg/ml时,OVCA3细胞增殖比为对照组的1.51倍;bFGF浓度为100ng/ml时,OVCA3细胞增殖比为对照组的1.85倍。结? 展开更多
关键词 AFGF BFGF 卵巢癌 细胞增殖 成纤维细胞生长因子 碱性成纤维细胞生长因子
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Survivin及其剪接变异体在脑胶质瘤中的表达 被引量:8
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作者 甄海宁 章翔 +6 位作者 付洛安 王西玲 梁景文 姬西团 李立文 张荣 苏明权 《中华神经外科疾病研究杂志》 CAS 2005年第3期237-240,共4页
目的探讨凋亡蛋白抑制因子Survivin及其剪接变异体SurvivinΔex3、Survivin2B在脑胶质瘤发生发展中的作用。方法采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测Survivin及其剪接变异体SurvivinΔex3、Survivin2BmRNA在62例脑胶质瘤和10例正常脑组... 目的探讨凋亡蛋白抑制因子Survivin及其剪接变异体SurvivinΔex3、Survivin2B在脑胶质瘤发生发展中的作用。方法采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测Survivin及其剪接变异体SurvivinΔex3、Survivin2BmRNA在62例脑胶质瘤和10例正常脑组织标本中的表达水平。结果Survivin、SurvivinΔex3及Survivin2BmRNA在脑胶质瘤中表达阳性率分别为67.7%、30.6%和17.7%,三者在正常脑组织中均无表达;Survivin和SurvivinΔex3mRNA表达阳性率在脑胶质瘤及正常脑组织之间分别具有极显著差异(P=0.000<0.01)和显著差异(P=0.010<0.05);SurvivinmRNA表达阳性率在低恶性度和高恶性度脑胶质瘤之间以及脑胶质瘤不同病理级别间分别具有极显著差异(P=0.002<0.01,P=0.004<0.01)。结论Survivin在脑胶质瘤发生发展过程中具有重要作用,其剪接变异体SurvivinΔex3、Survivin2B也发挥一定作用;Survivin可作为脑胶质瘤生物治疗的一个良好分子靶点。 展开更多
关键词 生存素(存活素) 凋亡蛋白抑制因子 胶质瘤 逆转录聚合酶链反应
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猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR快速鉴别检测方法的建立 被引量:9
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作者 郭抗抗 邓力 +3 位作者 井勇 张彦明 王晶钰 宁蓬勃 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2010年第6期13-18,共6页
【目的】建立猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR快速鉴别检测方法。【方法】根据Gen-Bank中36株猪瘟病毒(CSFV)强毒株和兔化弱毒疫苗株的基因序列,分别设计了针对CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的特异性引物,建立了一种能区分CSFV强毒... 【目的】建立猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR快速鉴别检测方法。【方法】根据Gen-Bank中36株猪瘟病毒(CSFV)强毒株和兔化弱毒疫苗株的基因序列,分别设计了针对CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的特异性引物,建立了一种能区分CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR检测方法。【结果】建立的RT-PCR检测方法可以从CSFV强毒株和兔化弱毒疫苗株中分别扩增出大小为187和492 bp的特异性片段,对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等猪源性病毒的检测结果均为阴性,说明该方法具有较好的特异性。对10份疑似猪瘟临床样品进行检测后发现,利用该方法可以从中分别检测出CSFV强毒和疫苗毒。【结论】建立了可鉴别检测CSFV强毒株和弱毒疫苗株的RT-PCR方法,为猪瘟的早期诊断及疫苗免疫猪和野毒感染猪的鉴别提供了技术参考。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 猪瘟兔化弱毒疫苗 反转录-聚合酶链式反应 鉴别检测
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蒙药童格勒格-1四种粗提物对大鼠肝细胞BRL株低密度脂蛋白受体基因表达的影响 被引量:8
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作者 周成江 和彦苓 +2 位作者 周立社 张智燕 吴刚 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期186-189,共4页
目的观察蒙药童格勒格-1(TGLG-1)四种粗提物对大鼠正常肝细胞BRL株低密度脂蛋白受体(LDL-R)基因表达的影响。方法制备出蒙药童格勒格-1的乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、石油醚的提取物。体外培养大鼠正常肝细胞BRL株,通过MTT比色法观察蒙药... 目的观察蒙药童格勒格-1(TGLG-1)四种粗提物对大鼠正常肝细胞BRL株低密度脂蛋白受体(LDL-R)基因表达的影响。方法制备出蒙药童格勒格-1的乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、石油醚的提取物。体外培养大鼠正常肝细胞BRL株,通过MTT比色法观察蒙药童格勒格-1提取物对大鼠肝细胞体外毒性的量效关系,确定合适的用药浓度。将大鼠肝细胞分为5组,一组为对照组,其余四组为给药组。将四种粗提物以一定的给药浓度与正常大鼠肝细胞培养24 h后,用RT-PCR法测定大鼠肝细胞低密度脂蛋白受体mRNA表达水平。结果蒙药童格勒格-1提取物中正丁醇和乙酸乙酯提取物作用后的大鼠正常肝细胞低密度脂蛋白受体mRNA相对含量高于对照组,具有显著性差异(P<0.01)。乙醇和石油醚提取物与对照组相比,无显著性差异(P>0.05)。结论蒙药童格勒格-1正丁醇和乙酸乙酯提取物能明显增强大鼠正常肝细胞低密度脂蛋白受体基因表达,从而加快血中低密度脂蛋白的清除,起到调控血脂水平的作用。 展开更多
关键词 蒙药童格勒格-1(TGLG-1) 低密度脂蛋白受体(LDL-R) rt-pcr 基因表达
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脓毒症大鼠肺高迁移率族蛋白B1的表达及意义 被引量:8
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作者 邱俏檬 李忠旺 +5 位作者 汤鲁明 孙琦 卢中秋 梁欢 洪广亮 李萌芳 《中华急诊医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期177-180,共4页
目的 观察创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织HMGB1表达和肺损伤的动态变化,并探讨HMGB1在创伤弧菌脓毒症肺损伤中作用.方法 温州医学院生命科学院实验室,清洁级SD大鼠60只,随机分为正常组(A组,n=10)和创伤弧菌脓毒症组(B组,n=50),采用大鼠... 目的 观察创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织HMGB1表达和肺损伤的动态变化,并探讨HMGB1在创伤弧菌脓毒症肺损伤中作用.方法 温州医学院生命科学院实验室,清洁级SD大鼠60只,随机分为正常组(A组,n=10)和创伤弧菌脓毒症组(B组,n=50),采用大鼠左下肢皮下注射创伤弧菌悬液(浓度为6×108cfu/mL,剂量为0.1 mL/100 g)制作大鼠创伤弧菌脓毒症模型),B组于染菌后1、6、12、24、48 h后活杀(各时间点n=10),采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)分别检测大鼠肺组织HMGB1基因与蛋白的表达,检测肺含水分数和光镜观察肺组织病理变化,数据采用单因素方差分析,并用LSD法进行组间两两比较,P<0.05为差异有统计学意义.结果 B组染菌后12 h(1.161±0.358,P=0.013)、24 h(1.679±0.235,P=0.000)及48 h(1.258±0.274,P=0.004)大鼠肺组织HMGB1 mRNA表达量较A组(0.652±0.177)明显增高(P<0.05),并于24 h达到高峰;与A组(0.594±0.190)比较,B组HMGB1蛋白表达量于感染后6 h(1.408±0.567,P=0.026)(P<0.05)逐渐增加,24 h达到高峰(2.415±1.064,P=0.000);与A组(0.699±0.054)比较,B组大鼠肺含水分数于感染后6 h(0.759±0.030,P=0.001)、12 h(0.767±0.023,P=0.000)、24 h(0.771±0.043,P=0.000)和48 h(0.789±0.137,P=0.000)明显增大(P<0.05),呈逐渐递增趋势;感染后12 h,大鼠肺内血管明显充血,间质水肿并伴炎性浸润,且逐渐加重,到48 h肺泡腔塌陷明显,肺泡间隔分界不清.结论 大鼠创伤弧菌脓毒症可导致肺脏损伤,HMGB1的表达增加可能是创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织损伤的机制之一. 展开更多
关键词 创伤弧菌 脓毒症 肺损伤 高迁移率族蛋白B1 逆转录聚合酶链式反应 蛋白免疫印迹 肺含水分数 组织病理
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逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测罗氏沼虾诺达病毒 被引量:7
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作者 曾地刚 雷爱莹 《广西农业科学》 CSCD 2006年第6期735-737,共3页
用逆转录聚合酶链式反应方法,检测5尾来自广西某罗氏沼虾养殖场典型白肉病症状罗氏沼虾肌肉中的诺达病毒,结果是阳性5尾,占100%。该检测方法耗时短,特异性、实用性强,灵敏度高。
关键词 罗氏沼虾 诺达病毒 逆转录聚合酶链式反应
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RT-PCR检测乳腺癌淋巴结转移的临床意义 被引量:6
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作者 郝新保 付京 邱福海 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第9期964-967,共4页
背景与目的:近年来有报道,应用逆转录-多聚酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)技术检测有关肿瘤细胞标志物的mRNA表达来判断淋巴结转移情况,可以获得较高的检测灵敏度。本研究的目的在于探讨RT-PCR检测癌... 背景与目的:近年来有报道,应用逆转录-多聚酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)技术检测有关肿瘤细胞标志物的mRNA表达来判断淋巴结转移情况,可以获得较高的检测灵敏度。本研究的目的在于探讨RT-PCR检测癌细胞淋巴结转移的临床意义。方法:应用RT-PCR技术检测患者腋窝淋巴结中MUC1和keratin19的mRNA表达,结合HE染色结果判断有无发生腋窝淋巴结转移。HE染色阴性患者随访3年。结果:86例肿瘤组织中可检测出MUC1和keratin19的表达,而正常淋巴结中未发现。在37例HE染色淋巴结阴性的病例中,有11例(29.7%)的keratin19检测结果阳性,这部分病例的3年复发率为45.5%,而keratin19表达阴性的病例其3年复发率仅为12.5%(P<0.01)。结论:RT-PCR检测出的MUC1和keratin19在淋巴结中的表达可作为乳腺癌转移的参考标志,有助于对乳腺癌预后的判断。 展开更多
关键词 rt-pcr 检测 乳腺癌 淋巴结转移
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生脉保元汤体内抗柯萨奇B3病毒的实验研究 被引量:5
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作者 张宏考 熊常初 《郧阳医学院学报》 2004年第4期208-210,213,F0002,共5页
目的 :观察生脉保元汤对柯萨奇B3病毒性心肌炎小鼠的影响并初步探讨其作用机制。方法 :经腹腔注射柯萨奇B3病毒来建立病毒性心肌炎小鼠模型。观察小鼠的一般状况、死亡率 ;观察小鼠心肌组织病理改变 ;采用逆转录———聚合酶链反应方法... 目的 :观察生脉保元汤对柯萨奇B3病毒性心肌炎小鼠的影响并初步探讨其作用机制。方法 :经腹腔注射柯萨奇B3病毒来建立病毒性心肌炎小鼠模型。观察小鼠的一般状况、死亡率 ;观察小鼠心肌组织病理改变 ;采用逆转录———聚合酶链反应方法检测小鼠心肌中干扰素和肿瘤坏死因子的表达。结果 :生脉保元汤能剂量依赖性地降低小鼠死亡率 ,改善发病小鼠的一般状况 ;有效减轻心肌的炎症反应 ;诱生干扰素 ,抑制肿瘤坏死因子的表达。结论 展开更多
关键词 生脉保元汤 病毒性心肌炎 干扰素Γ 肿瘤坏死因子Α 逆转录——聚合酶链反应
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肝癌组织中RUNX3表达及其与临床病理因素的相关性 被引量:7
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作者 卢燕辉 郑瑞丹 +3 位作者 陈洁 陈碧芬 李建国 林志川 《肝脏》 2011年第1期27-30,共4页
目的探讨肝癌组织及其癌旁组织中RUNX3 mRNA和蛋白表达情况,并分析其与临床病理因素的相关性。方法采用反转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学分别检测肝癌组织及其癌旁组织中RUNX3 mRNA和蛋白表达水平,并分析与临床病理因素的... 目的探讨肝癌组织及其癌旁组织中RUNX3 mRNA和蛋白表达情况,并分析其与临床病理因素的相关性。方法采用反转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学分别检测肝癌组织及其癌旁组织中RUNX3 mRNA和蛋白表达水平,并分析与临床病理因素的相关性。结果在51例肝癌组织中RUNX3 mRNA表达量相对值为:0.4509±0.096 3;在51例相对应的癌旁组织中RUNX3 mRNA表达量相对值为:0.914 7±0.022 2;两者间差异有统计学意义(t=33.608 7,P<0.001)。在51例肝癌组织中RUNX3蛋白表达阳性率为49.02%(25/51);而在51例相对应的癌旁组织中RUNX3蛋白表达阳性率为82.35%(42/51);两者间差异有统计学意义(χ2=12.570 6,P<0.005)。RUNX3 mRNA和蛋白表达水平均在分化程度、门静脉癌栓、肝内转移等病理因素间差异有统计学意义(P<0.05),而在性别、肿瘤直径、肿瘤部位、癌肿出血坏死、组织分型的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 RUNX3基因在肝癌组织中mRNA和蛋白表达水平均显著低于在癌旁组织中的表达水平,RUNX3 mRNA和蛋白表达下调可能在肝癌的发生、发展过程中起着重要作用;RUNX3基因可能是肝癌的一种抑癌基因。 展开更多
关键词 RUNX3 肝癌组织 反转录-多聚合酶链反应 免疫组织化学
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肝型脂肪酸结合蛋白在大鼠非酒精性脂肪肝中的动态表达 被引量:6
13
作者 赵和平 梁利群 《中国实验方剂学杂志》 CAS 北大核心 2009年第9期64-66,共3页
目的:观察肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)在大鼠非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型中的动态表达,探讨L-FABP在大鼠NAFLD所起的作用。方法:选取Wistar大鼠40只,随机分为对照组和模型组。其中对照组给予普通饲料,模型组给予高脂饲料。分别于4,8,12... 目的:观察肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)在大鼠非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型中的动态表达,探讨L-FABP在大鼠NAFLD所起的作用。方法:选取Wistar大鼠40只,随机分为对照组和模型组。其中对照组给予普通饲料,模型组给予高脂饲料。分别于4,8,12周处死。测血清中的丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、血清胆固醇(TC)、血清甘油三酯(TG)。并测定空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS),计算ISI。HE染色观察肝脏脂肪组织病理变化。并应用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定大鼠的肝脏组织中L-FABPmRNA的表达。结果:4周、8周1、2周模型组大鼠肝脏中L-FABPmRNA表达增强(P<0.01),且随着造模时间的延长,L-FABP的表达逐渐增高,与对照组差异显著(P<0.01)。模型组血清ALT、AST、TC、TG的水平均较对照组显著增高(P<0.01),而ISI明显降低(P<0.01)。结论:持续12周的高脂饮食可以成功复制大鼠NAFLD模型,且随着造模时间的延长可引起L-FABP表达逐渐增强。 展开更多
关键词 非酒精性脂肪肝 肝型脂肪酸结合蛋白 半定量反转录聚合酶链反应
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东乡野生稻NBS类抗病基因同源片段的克隆及序列分析 被引量:5
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作者 却志群 沈春修 卢其能 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第1期78-82,共5页
根据已知的NBS-LRR类抗病基因结构中氨基酸的保守区域,设计简并引物,通过RT-PCR扩增及克隆,从东乡野生稻(Dongxiang Oryza rufipogon Griff.)中共获得7个新的NBS-LRR类抗病基因同源片段。所有7个抗病基因同源序列均含有NBS-LRR类抗病基... 根据已知的NBS-LRR类抗病基因结构中氨基酸的保守区域,设计简并引物,通过RT-PCR扩增及克隆,从东乡野生稻(Dongxiang Oryza rufipogon Griff.)中共获得7个新的NBS-LRR类抗病基因同源片段。所有7个抗病基因同源序列均含有NBS-LRR类抗病基因的保守序列,如P-loop、Kinase 2、Kinase 3a以及跨膜区域等。通过氨基酸同源性比较和分析,发现克隆到的抗病基因同源序列与已克隆的水稻白叶枯抗病基因Xa1的相应氨基酸序列存在约40%的同源性,其中的3个NBS抗病基因同源序列还与小麦抗叶锈病基因Lr1存在40%的同源性。 展开更多
关键词 东乡野生稻 抗病基因 rt-pcr NBS-LRR同源序列
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RT-PCR对新城疫病毒(NDV)分离株的鉴定及其临床应用 被引量:5
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作者 温贵兰 瞿继红 李永明 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1137-1140,共4页
采用新城疫病毒的通用引物PA+PB、强毒引物PA+PC、弱毒引物PA+PD对11株贵州新城疫分离毒株与4株新城疫参考毒株进行了RT-PCR扩增。结果15株新城疫毒株均被PA+PB引物扩增出359bp的条带,F48E8、ND98、Fw、H2、P3、BY、L2、P1、P2被PA+PC... 采用新城疫病毒的通用引物PA+PB、强毒引物PA+PC、弱毒引物PA+PD对11株贵州新城疫分离毒株与4株新城疫参考毒株进行了RT-PCR扩增。结果15株新城疫毒株均被PA+PB引物扩增出359bp的条带,F48E8、ND98、Fw、H2、P3、BY、L2、P1、P2被PA+PC引物扩增出254bp的条带,而PA+PD引物未扩增出DNA条带;ND89、Lasota被PA+PD引物扩增出254bp的条带,而PA+PC引物未扩增出DNA条带。采用3对引物对自然发病斗鸡脑、脾、咽喉试子、泄殖腔试子进行RT-PCR检测,确诊为斗鸡新城疫强毒感染,且与传统病毒分离与毒力鉴定的结果相一致。 展开更多
关键词 新城疫病毒 rt-pcr 斗鸡
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RECK在子宫内膜异位症中的表达及其与MMP-9和VEGF的关系 被引量:5
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作者 徐云钊 张玉泉 糜媛媛 《交通医学》 2010年第2期125-128,共4页
目的:探讨RECK基因在子宫内膜异位症(EM)患者在位内膜和异位病灶中的表达及其与血管生成、组织浸润转移因子的关系。方法:采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测异位内膜40份,在位内膜24份和正常内膜20份中RECK、MMP-9和VEGF的表达... 目的:探讨RECK基因在子宫内膜异位症(EM)患者在位内膜和异位病灶中的表达及其与血管生成、组织浸润转移因子的关系。方法:采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测异位内膜40份,在位内膜24份和正常内膜20份中RECK、MMP-9和VEGF的表达。结果:异位病灶中RECK mRNA的相对表达水平较正常内膜和EM患者的在位内膜均降低(P<0.05);RECK mRNA在Ⅰ、Ⅱ期中的相对表达水平较Ⅲ、Ⅳ期显著降低(P<0.05);MMP-9 mRNA、VEGF mRNA在3组内膜组织之间相对表达量相比差异均有统计学意义。结论:RECK基因在EM中表达减少,而MMP-9 mRNA、VEGF mRNA在EMs中表达升高。RECK基因的表达减少或缺失可能为EM的发生发展机制之一,RECK基因的表达可能起到抑制MMP-9 mRNA、VEGF mRNA表达的作用。 展开更多
关键词 子宫内膜异位症 RECK基因 基质金属蛋白酶 血管内皮生长因子 逆转录聚合酶链反应
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香蕉花叶心腐病检测的两步法及一步法RT-PCR比较研究 被引量:5
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作者 周莉娟 郑伟文 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 2003年第5期776-779,共4页
香蕉花叶心腐病由黄瓜花叶病毒(CMV)引起,它有一个三分体正单链RNA基因组。从不同模板制备方法、RT和PCR过程引物浓度的选择等方面,用两步法RT-PCR对香蕉花叶心腐病的检测技术进行了研究。为了简化检测程序,在两步法RT-PCR检测程序的基... 香蕉花叶心腐病由黄瓜花叶病毒(CMV)引起,它有一个三分体正单链RNA基因组。从不同模板制备方法、RT和PCR过程引物浓度的选择等方面,用两步法RT-PCR对香蕉花叶心腐病的检测技术进行了研究。为了简化检测程序,在两步法RT-PCR检测程序的基础上,进一步研究香蕉CMV一步法RT-PCR检测技术,并对两种方法的检测灵敏度进行了比较。结果发现,两种方法都能从相当于100ng的香蕉叶组织中扩增到病毒带,但一步法RT-PCR的灵敏度比两步法略有提高。 展开更多
关键词 香蕉 花叶心腐病 检测 两步法 一步法 反转录聚合酶链式反应
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饲粮添加锌对蛋鸡金属硫蛋白基因表达的影响 被引量:2
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作者 李发弟 张军霞 +4 位作者 倪迎冬 赵茹茜 郝正里 郎侠 刘建斌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期305-308,共4页
选用66只18周龄商品代伊莎蛋鸡,随机分为3组,每组22只。对照组饲喂基础饲粮,试验1、2组在基础饲粮中分别添加60和180 mg/kg锌(以ZnSO4.H2O形式),10周后屠宰采样。采用相对定量反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法检测不同锌添加水平对蛋... 选用66只18周龄商品代伊莎蛋鸡,随机分为3组,每组22只。对照组饲喂基础饲粮,试验1、2组在基础饲粮中分别添加60和180 mg/kg锌(以ZnSO4.H2O形式),10周后屠宰采样。采用相对定量反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法检测不同锌添加水平对蛋鸡肝脏和肾脏中金属硫蛋白(Metallothionein,MT)mRNA表达水平的影响。结果表明:试验1组蛋鸡肝脏中MT mRNA表达丰度显著高于试验2组和对照组(P<0.05),而试验2组与对照组之间无明显差异(P>0.05)。试验1组蛋鸡肾脏MT mRNA表达丰度显著高于试验2组(P<0.05),而试验1、2组与对照组之间均无显著性差异(P>0.05)。在饲粮中添加低水平锌可显著上调蛋鸡肝脏和肾脏中MTmRNA的表达。 展开更多
关键词 伊莎蛋鸡 金属硫蛋白 反转录多聚酶链式反应 肝脏 肾脏
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鼻咽癌患者糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D活性及其表达水平的初步研究 被引量:4
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作者 向新颖 唐红梅 +2 位作者 胡正茂 夏昆 唐建华 《肿瘤药学》 CAS 2011年第5期450-456,共7页
目的①通过研究正常人和鼻咽癌患者的糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI-PLD)的酶活性和酶促反应的3-D图,探索鼻咽癌患者该酶活性的变化情况及该酶促反应的可能机制。②通过研究正常人和鼻咽癌患者GPI-PLD mRNA的表达水平,探寻鼻咽癌... 目的①通过研究正常人和鼻咽癌患者的糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI-PLD)的酶活性和酶促反应的3-D图,探索鼻咽癌患者该酶活性的变化情况及该酶促反应的可能机制。②通过研究正常人和鼻咽癌患者GPI-PLD mRNA的表达水平,探寻鼻咽癌患者该酶活性变化的可能机制,为鼻咽癌的诊断、预后估计提供有效指标。方法①采用我室自制的具完整GPI结构的胎盘型碱性磷酸酶(PLAP)作底物进行酶促反应,测定正常人和鼻咽癌患者GPI-PLD的酶活性并应用韩国新科有限公司生产的Photodiode Array Uv-Vis Spectrophotometer仪器研究了该酶的催化机理,并且利用该机所带软件作出3-D图。②采用逆转录PCR(RT-PCR)检测正常人和鼻咽癌患者的GPI-PLD mRNA的表达水平,以RT-PCR结果的琼脂糖电泳照片的积分光密度值(IA)比值代表GPI-PLD mRNA的表达水平。结果①正常人和鼻咽癌患者血清GPI-PLD的活性水平(均以转化底物百分比表示)分别为17.6%±2.7%和20.6%±2.4%,鼻咽癌患者的血清GPI-PLD活性比正常人血清GPI-PLD活性显著增高(P<0.05)。并且其酶促反应的3-D图显示有直观差异。2.RT-PCR检测GPI-PLD mRNA的表达,结果表明正常人鼻咽上皮细胞中GPI-PLD mRNA琼脂糖电泳照片的平均积分光密度比值(IA比值)是2.6131±0.7653,鼻咽癌患者鼻咽上皮细胞中GPI-PLD mRNA琼脂糖电泳照片的平均积分光密度比值(IA比值)是9.3522±5.2879,鼻咽癌患者的GPI-PLD mRNA的表达水平比正常人鼻咽上皮细胞中GPI-PLD mRNA的表达水平显著性增高(P<0.05)。结论①鼻咽癌患者的血清GPI-PLD活性比正常人显著增高,其酶促反应的3-D图也与正常人有明显差异,提示测定GPI-PLD活性可作为临床诊断鼻咽癌的生化指标。②鼻咽癌患者GPI-PLD mRNA的表达水平高于正常人。GPI-PLD mRNA表达增强是导致鼻咽癌患者GPI-PLD酶活性增高的主要机制。 展开更多
关键词 糖基化磷脂酰肌醇 特异性磷脂酶D rt-pcr
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斜纹夜蛾表皮蛋白基因克隆及表达谱分析 被引量:4
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作者 赵鹏 张帅 +3 位作者 赵晨晨 胡方梅 崔金杰 李绍勤 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2020年第4期292-304,共13页
【目的】分析斜纹夜蛾不同发育阶段14个表皮蛋白(Cuticular protein, CP)基因的表达方式,为深入探究CP在斜纹夜蛾生长发育过程中的功能提供参考。【方法】利用聚合酶链反应(Polymerase chain reaction, PCR)扩增斜纹夜蛾表皮蛋白基因cDN... 【目的】分析斜纹夜蛾不同发育阶段14个表皮蛋白(Cuticular protein, CP)基因的表达方式,为深入探究CP在斜纹夜蛾生长发育过程中的功能提供参考。【方法】利用聚合酶链反应(Polymerase chain reaction, PCR)扩增斜纹夜蛾表皮蛋白基因cDNA序列,分析其核苷酸序列和相应的氨基酸序列,并使用MEGA5.2软件构建了鳞翅目系统发育树。采用逆转录PCR(Reverse transcription PCR, RT-PCR)技术检测分析表皮蛋白基因在3~6龄幼虫各组织和2日龄成虫生殖器官中的表达。【结果】克隆了14个斜纹夜蛾表皮蛋白基因(Insect cuticular protein gene, ICPG),序列分析表明斜纹夜蛾表皮蛋白具有35~36个氨基酸残基保守基序,属于几丁质结合蛋白,它们与棉铃虫的CP具有高度的序列同源性。RT-PCR结果表明,14个ICPG在3~6龄幼虫和2日龄成虫中均有表达,其相对表达量在高龄期幼虫的表皮中较高,在低龄期幼虫的脂肪体中也较高。此外,所有14个ICPG均在睾丸和卵巢中低水平表达。在蛹期,SlICPG-11和SlICPG-14相对表达量最高。【结论】克隆了14个斜纹夜蛾CP基因的cDNA。其表达表现出组织和发育阶段特异性,暗示它们在斜纹夜蛾发育中的功能不同,为控制斜纹夜蛾靶标位点的选择奠定了基础。 展开更多
关键词 斜纹夜蛾 表皮蛋白 基因克隆 逆转录聚合酶链反应(rt-pcr) 组织表达 发育阶段
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