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Caspase-3在柔红霉素诱导的人视网膜色素上皮细胞凋亡中作用 被引量:22
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作者 杜红俊 惠延年 +2 位作者 王雨生 韩泉洪 马吉献 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第7期609-611,共3页
目的 探讨天冬酰胺特异酶切的半胱氨酸蛋白酶(caspase)成员 caspase- 3在柔红霉素诱导的人视网膜色素上皮 (RPE)细胞凋亡中的变化 .方法 原代培养的人 RPE细胞经 2 0 0μg· L- 1 柔红霉素诱导 8,2 4和 36 h后 ,按照 caspase- 3... 目的 探讨天冬酰胺特异酶切的半胱氨酸蛋白酶(caspase)成员 caspase- 3在柔红霉素诱导的人视网膜色素上皮 (RPE)细胞凋亡中的变化 .方法 原代培养的人 RPE细胞经 2 0 0μg· L- 1 柔红霉素诱导 8,2 4和 36 h后 ,按照 caspase- 3荧光检测试剂盒说明处理细胞 ,再通过荧光比色法间接检测细胞碎片中 caspase- 3的活性 .结果 正常 caspase- 3的活性为(0 .0 94± 0 .0 0 5 ) nmol AFC,8h后增加为 (0 .44 6± 0 .0 2 9)nm ol AFC,2 4h后为 (0 .75 4± 0 .0 5 6 ) nmol AFC,36 h又下降到 (0 .486± 0 .0 33) nmol AFC,但都高于正常水平 (P<0 .0 1) .加入特异性四肽抑制物 DEVD- CHO1μL 后活性为 (0 .0 40±0 .0 0 3) nm ol AFC,显著低于正常 (P<0 .0 1) .结论  Caspase-3参与了柔红霉素诱导的人视网膜色素上皮细胞的凋亡 ,柔红霉素可使其活性增加 . 展开更多
关键词 柔红霉素 视网膜色素上皮 CASPASE-3 细胞凋亡
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木犀草素调控Nrf2/HO-1通路保护视网膜色素上皮细胞氧化损伤 被引量:14
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作者 洪萌 洪道先 +3 位作者 石荣先 魏聪 赵晓丽 李权达 《国际眼科杂志》 CAS 北大核心 2021年第1期21-26,共6页
目的:探讨木犀草素对H2O2诱导的视网膜色素上皮(RPE)细胞氧化损伤的保护作用及其机制。方法:将ARPE-19细胞分为对照组、H2O2组、不同剂量木犀草素组和Nrf2抑制剂组,除对照组外均采用100μmol/L H2O2制备RPE氧化损伤模型。采用四甲基偶... 目的:探讨木犀草素对H2O2诱导的视网膜色素上皮(RPE)细胞氧化损伤的保护作用及其机制。方法:将ARPE-19细胞分为对照组、H2O2组、不同剂量木犀草素组和Nrf2抑制剂组,除对照组外均采用100μmol/L H2O2制备RPE氧化损伤模型。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活力并确定木犀草素处理浓度,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率及活性氧(ROS)含量,采用试剂盒法检测细胞中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量,采用Western blot检测细胞Caspase-3、多聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶(PARP)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、核因子E2相关因子2(Nrf2)及血红素氧化酶-1(HO-1)蛋白表达水平。结果:100μmol/L木犀草素对ARPE-19具有毒性作用,因此选择25μmol/L和50μmol/L木犀草素进行后续实验。与H2O2组比较,25μmol/L和50μmol/L木犀草素组细胞活力明显升高,凋亡率降低,ROS和MDA含量明显减少,SOD活性明显升高,Caspase-3和PARP蛋白表达水平明显降低,Bcl-2、Nrf2及HO-1蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与50μmol/L木犀草素组比较,Nrf2抑制剂组细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,ROS和MDA含量明显升高[(654.96±26.99)vs(446.52±29.42),(3.89±0.29)nmol/mL vs(2.06±0.19)nmol/mL],SOD活性明显降低[(13.83±1.49)U/mL vs(22.69±1.83)U/mL],Caspase-3和PARP蛋白表达水平明显升高,Bcl-2、Nrf2及HO-1蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:木犀草素能够改善H2O2诱导的RPE细胞氧化损伤,其作用机制与激活Nrf2/HO-1通路有关。 展开更多
关键词 木犀草素 视网膜色素上皮细胞 氧化损伤 核因子E2相关因子2 血红素氧化酶-1
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黄芪甲苷对甲基乙二醛诱导的人视网膜色素上皮细胞损伤的保护作用研究 被引量:14
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作者 周云丰 李琳 +7 位作者 葛争艳 周立东 郭宇洁 金龙 任烨 李彦林 孙兰 许扬 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期915-921,共7页
目的研究黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对甲基乙二醛(MGO)诱导的人视网膜色素上皮细胞损伤的保护作用及分子机制。方法利用MGO诱导ARPE-19细胞损伤,CCK-8法检测细胞活力,Hoechst 33342染色法观察细胞核形态,流式细胞仪检测细胞凋亡,试剂盒测定细胞内... 目的研究黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对甲基乙二醛(MGO)诱导的人视网膜色素上皮细胞损伤的保护作用及分子机制。方法利用MGO诱导ARPE-19细胞损伤,CCK-8法检测细胞活力,Hoechst 33342染色法观察细胞核形态,流式细胞仪检测细胞凋亡,试剂盒测定细胞内活性氧(ROS)水平、超氧化物歧化酶(SOD)水平和脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量,JC-1染色法观察线粒体膜电位的变化,Western blot法检测Bcl-2、Bax和PARP蛋白的表达量,荧光酶标法检测caspase家族蛋白caspase-9和caspase-3的活化水平。结果MGO能剂量依赖性地降低ARPE-19的细胞活力,AS-Ⅳ预处理能够明显逆转MGO引起的细胞活力下降(P<0.05),改善细胞核形态,减少细胞凋亡,减少ROS和MDA的产生(P<0.05),增加SOD活力(P<0.05),抑制线粒体膜电位的下降,提高Bcl-2/Bax蛋白表达率(P<0.05)和PARP的表达水平,降低caspase-9和caspase-3的活化水平(P<0.05)。结论 AS-Ⅳ对MGO损伤的ARPE-19细胞有明显的保护作用,其作用机制是提高细胞抗氧化能力,调节线粒体通路蛋白的表达,从而抑制细胞凋亡。 展开更多
关键词 糖尿病视网膜病变 黄芪甲苷 甲基乙二醛 人视网膜色素上皮细胞 抗氧化 细胞凋亡
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兔视网膜色素上皮细胞的体外培养及超微结构研究 被引量:9
4
作者 喻哓兵 吴景天 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期105-107,共3页
目的:将兔视网膜色素上皮(RPE)细胞进行体外培养,观察其超微结构。方法:用胰酶消化法培养兔RPE细胞并传代。扫描电镜和透射电镜观察其超微结构。结果:原代培养的RPE细胞含大量色素呈多角形,传代的细胞透明呈梭形。电镜... 目的:将兔视网膜色素上皮(RPE)细胞进行体外培养,观察其超微结构。方法:用胰酶消化法培养兔RPE细胞并传代。扫描电镜和透射电镜观察其超微结构。结果:原代培养的RPE细胞含大量色素呈多角形,传代的细胞透明呈梭形。电镜显示它们具有细胞极性,含黑色素颗粒、各种细胞器、细胞间连接复合体,与体内一致。结论:培养的大量细胞可用于RPE的体外实验研究。 展开更多
关键词 视网膜色素上皮 细胞培养 超微结构
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水蛭提取液对视网膜色素上皮细胞内游离钙离子的影响 被引量:9
5
作者 郑燕林 陈海燕 +2 位作者 吕帆 王万杰 周春阳 《中国中医眼科杂志》 2007年第1期39-41,共3页
目的观察水蛭提取液对视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)内游离钙离子(Intracellular liber calcium ion,[Ca2+]i)浓度的影响。方法利用体外培养的视网膜色素上皮细胞,采用双波长荧光分光光度计测量法测定视网膜色素... 目的观察水蛭提取液对视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)内游离钙离子(Intracellular liber calcium ion,[Ca2+]i)浓度的影响。方法利用体外培养的视网膜色素上皮细胞,采用双波长荧光分光光度计测量法测定视网膜色素上皮细胞内[Ca2+]i浓度。结果空白组(A)133.4517±13.17789、凝血酶组(A1)192.2037±4.54292、水蛭组(A2)96.9935±8.80148、水蛭和凝血酶同时加组(A3)142.0867±26.47195、先加水蛭后加凝血酶组(A4)162.7284±29.13950、先加凝血酶后加水蛭组(A5)130.4810±20.48673。结论水蛭提取液能使RPE细胞内游离Ca2+浓度下降,为进一步深入研究水蛭提取液抑制RPE细胞增殖的作用机制,防治增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreo-retinopathy,PVR)提供了实验室依据。 展开更多
关键词 水蛭 视网膜色素上皮细胞 细胞内游离钙离子
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藏红花素抑制过氧化氢诱导的视网膜色素上皮细胞凋亡 被引量:13
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作者 李姚 王健 《中国中医眼科杂志》 2019年第5期347-350,共4页
目的研究藏红花素(Crocin)对过氧化氢(H2O2)诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的影响及可能机制。方法采用300μmol·L^-1的H2O2培养RPE细胞建立细胞氧化损伤模型,用10μmol·L^-1及100μmol·L^-1的藏红花素干预,观察... 目的研究藏红花素(Crocin)对过氧化氢(H2O2)诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的影响及可能机制。方法采用300μmol·L^-1的H2O2培养RPE细胞建立细胞氧化损伤模型,用10μmol·L^-1及100μmol·L^-1的藏红花素干预,观察藏红花素对在H2O2作用下RPE细胞活性、细胞内活性氧(ROS)水平、凋亡细胞比例和线粒体凋亡相关信号分子Bcl-2及Bax表达的干预。结果对照组RPE细胞存活率为98.33%,氧化损伤组RPE细胞存活率为43.12%,与对照组比较差异有统计学意义(F=48.08,P<0.05),不同浓度藏红花素干预后,RPE细胞存活率分别提高到61.76%和77.67%,与氧化损伤组比较差异均有统计学意义(F低=40.89,F高=90.33,均P<0.05);H2O2处理RPE细胞内ROS水平明显升高,10μmol·L^-1及100μmol·L^-1的藏红花素可不同程度抑制H2O2处理后RPE细胞内ROS水平;流式细胞仪的检测结果,与对照组(4.33%)比较,氧化损伤组RPE细胞凋亡率(63.12%)明显升高(F=89.02,P<0.05),随着藏红花素作用浓度的递增,H2O2诱导的RPE细胞凋亡率呈剂量依赖性递减(39.00%、18.00%),与氧化损伤组比较差异均有统计学意义(F低=192.40,F高=95.76,均P<0.05);此外,藏红花素可以改变细胞内Bcl-2及Bax的表达。结论藏红花素通过抑制RPE细胞内ROS生成、改变线粒体凋亡相关信号分子Bcl-2及Bax的表达,防止RPE细胞凋亡反应的发生。 展开更多
关键词 藏红花素 过氧化氢 视网膜色素上皮细胞 凋亡
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体内实验观察bFGF对视网膜色素上皮细胞再生的促进作用 被引量:9
7
作者 周浩 褚仁远 +1 位作者 周行涛 戴锦晖 《眼科新进展》 CAS 2003年第2期97-99,共3页
目的 观察重组人碱性成纤维细胞生长因子 ( basic fibroblast growth factor,b FGF)在体内对兔视网膜色素上皮 ( retinal pigm ent epithelium,RPE)细胞再生的作用。方法 应用氩绿激光照射 ,造成兔 RPE损伤模型 ,照射后应用 b FGF 3 0... 目的 观察重组人碱性成纤维细胞生长因子 ( basic fibroblast growth factor,b FGF)在体内对兔视网膜色素上皮 ( retinal pigm ent epithelium,RPE)细胞再生的作用。方法 应用氩绿激光照射 ,造成兔 RPE损伤模型 ,照射后应用 b FGF 3 0 0 0 U /5 0μL玻璃体腔内注射 ,眼底荧光素血管造影检查 ,测定照射后 1~ 4d透见荧光面积和荧光素渗漏面积 ,并与对照眼进行比较。结果 照射后第 1天和第 2天 ,2组眼的透见荧光面积和荧光素渗漏面积无显著差异 ( P=0 .5 34,0 .2 83) ,第 3天和第 4天 ,2组眼的透见荧光面积和荧光素渗漏面积有显著差异 ( P=0 .0 180 ,0 .0 0 0 7)。结论 体内外源性 b FGF能促进 RPE的再生和修复 ,b FGF不具有种属特异性。 展开更多
关键词 碱性成纤维细胞生长因子 视网膜色素上皮细胞 体内实验
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Clinical and experimental study on angiopoietin-like protein 8 associated with proliferative diabetic retinopathy 被引量:9
8
作者 Chang-Xia Dong Cai-Ping Song +4 位作者 Chun-Ping Zhang Mei Dong Xiu-Rong Gong He-Ying Gao Hong Wang 《International Journal of Ophthalmology(English edition)》 SCIE CAS 2017年第12期1819-1823,共5页
AIM:To confirm the role of angiopoietin-like protein 8(Angptl 8) in proliferative diabetic retinopathy(PDR).METHODS:The sera and aqueous humor of 10 PDR patients and 10 non-diabetic retinopathy(NDR) patients(... AIM:To confirm the role of angiopoietin-like protein 8(Angptl 8) in proliferative diabetic retinopathy(PDR).METHODS:The sera and aqueous humor of 10 PDR patients and 10 non-diabetic retinopathy(NDR) patients(idiopathic macular hole patients) were collected and the expression of Angptl 8 was detected by enzyme linked immune-sorbent assay(ELISA).Experimental diabetes mice model was induced with streptozotocin.The expression of glycosylated hemoglobin and Angptl 8 in sera was detected.Recombinant Angptl 8 was re-infused into wild type(WT) diabetic mice and spatial frequency threshold and contrast sensitivity were measured.In vitro retinal pigment epithelium(RPE) were stimulated by recombinant Angptl 8 for 24 h.MMT assay were used to detect cell proliferation.At the same time,q RT-PCR and Western blot was used to measure the expression of proliferation-related factors in PRE cells.RESULTS:The expression of Angptl 8 was markedly increased in the sera and aqueous humor of PDR patients(F=99.02,P〈0.0001 in sera;t=10.42,P〈0.0001 in aqueous).After successfully establishing the diabetic mice model,we found that glycosylated hemoglobin and Angptl 8 expression levels were increased.Re-infusion of recombinant Angptl 8 into WT diabetic mice could further decrease spatial frequency threshold and contrast sensitivity(P〈0.01).In vitro,RPE cells stimulated by recombinant Angptl 8could increase the relative absorbance of MMT assay(1.486±0.042 vs 1.000±0.104,P〈0.05) and proliferating cell nuclear antigen(PCNA) expression(0.55±0.01 vs 0.29±0.03,P〈0.05).The proliferative effect of Angptl 8 is mainly mediated by increasing the expression of proliferation-activating factors cyclin A1(4.973±0.205 vs 2.720±0.197,P〈0.05),cyclin F(5.690±0.219 vs 4.297±0.292,P〈0.05) and E2 F2(2.297±0.102 vs 1.750±0.146,P〈0.05),and reducing the expression of proliferation-inhibiting factors cdkn1(2.370±0.074 vs 3.317±0.135,P〈0.05) and cdkn2(4.793±0.065 vs 5.3 展开更多
关键词 angiopoietin-like protein 8 proliferative diabeticretinopathy retinal pigment epithelium proliferation
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人参皂甙Rb_2对培养人视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用 被引量:9
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作者 明月 于澎 +1 位作者 庞利民 拱中华 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 2002年第5期359-361,共3页
目的 研究人参皂甙Rb2 (Ginsenoside Rb2 )对体外培养视网膜色素上皮细胞增生的直接抑制作用及可能机制。方法 通过活细胞计数法与MTT比色法分别检测不同浓度 (2 5 0、2 0 0、15 0、12 0、10 0、5 0、10 μg ml)Rb2 和Rb215 0 μg ml... 目的 研究人参皂甙Rb2 (Ginsenoside Rb2 )对体外培养视网膜色素上皮细胞增生的直接抑制作用及可能机制。方法 通过活细胞计数法与MTT比色法分别检测不同浓度 (2 5 0、2 0 0、15 0、12 0、10 0、5 0、10 μg ml)Rb2 和Rb215 0 μg ml在不同作用时间 (6~ 12 0h)对RPE细胞增生及代谢的影响。 结果 Rb2 组细胞增殖受到抑制并出现细胞脱落 ,Rb2 2 0 0 μg ml具有最强的抑制效应 ,其明显抑制效应在 6h即出现 ,96h达高峰。Rb2 组A值明显低于对照组 ,RPE细胞生存率下降。结论 Rb2 可能通过阻滞钙通道降低细胞内钙浓度。 展开更多
关键词 抑制作用 视网膜色素上皮 细胞培养 人参皂甙 Rb2
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中心性浆液性脉络膜视网膜病变的研究进展 被引量:10
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作者 童桂芳 周琼 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2013年第3期290-293,共4页
中心性浆液性脉络膜视网膜病变(central serous chorioretinopathy,CSC)是一种累及视网膜和脉络膜的自限性眼底黄斑区疾病,病因和发病机制尚不明确。目前,CSC的治疗方法主要有药物治疗、激光光凝、微脉冲半导体激光、经瞳孔温热疗法、... 中心性浆液性脉络膜视网膜病变(central serous chorioretinopathy,CSC)是一种累及视网膜和脉络膜的自限性眼底黄斑区疾病,病因和发病机制尚不明确。目前,CSC的治疗方法主要有药物治疗、激光光凝、微脉冲半导体激光、经瞳孔温热疗法、光动力疗法等,同时国际上亦出现了治疗CSC的新方法:玻璃体内注射新生血管内皮生长因子抑制剂。本文在分析CSC病因及发病机制的基础上,对CSC的治疗方法进行阐述。 展开更多
关键词 中心性浆液性脉络膜视网膜病变 视网膜色素上皮 血管内皮生长因子 光动力疗法
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血脂异常对ApoE基因缺失小鼠视网膜及Bruch膜的影响 被引量:10
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作者 莫亚 曾庆华 +2 位作者 谢礼丹 刘小虎 唐春燕 《国际眼科杂志》 CAS 2011年第9期1518-1520,共3页
目的:研究血脂异常对ApoE基因缺失(apolipoprotein E-deficient,ApoE-/-)小鼠视网膜及Bruch膜的影响。方法:随机将24只2月龄(ApoE-/-)小鼠和24只C57BL/6J小鼠分别分为高脂组和普食组,每组动物12只,喂养4mo后检测其体质量、血浆总胆固醇... 目的:研究血脂异常对ApoE基因缺失(apolipoprotein E-deficient,ApoE-/-)小鼠视网膜及Bruch膜的影响。方法:随机将24只2月龄(ApoE-/-)小鼠和24只C57BL/6J小鼠分别分为高脂组和普食组,每组动物12只,喂养4mo后检测其体质量、血浆总胆固醇,视网膜及Bruch膜行光镜和电镜检查。结果:6月龄ApoE-/-高脂组的血浆总胆固醇均显著性高于对照组(P<0.05);6月龄ApoE-/-高脂组外核层厚度、色素上皮细胞层厚度显著低于对照组(P<0.05),而其Bruch膜厚度则显著大于对照组(P<0.05)。结论:血脂异常使ApoE-/-动物的视网膜光感受器细胞、色素上皮细胞及Bruch膜发生病理改变,其改变相似于早期年龄相关性黄斑变性的改变。 展开更多
关键词 血脂异常 ApoE-/- 光感受器细胞 色素上皮细胞 BRUCH膜
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急性中心性浆液性脉络膜视网膜病变FFA与频域OCT图像对比研究 被引量:10
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作者 童桂芳 周琼 邵毅 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2015年第8期735-738,共4页
目的观察急性中心性浆液性脉络膜视网膜病变(central serous chorioretinopathy,CSC)荧光素眼底血管造影(fundus fluorescein angiography,FFA)和频域光学相干断层扫描(frequency domain optical coherence tomography,FD-OCT)图像特征... 目的观察急性中心性浆液性脉络膜视网膜病变(central serous chorioretinopathy,CSC)荧光素眼底血管造影(fundus fluorescein angiography,FFA)和频域光学相干断层扫描(frequency domain optical coherence tomography,FD-OCT)图像特征,对比研究2种检查方法定位病灶的一致性。方法回顾性分析79例急性CSC患者(81眼)的FFA和FD-OCT图像资料,观察患眼FFA荧光素渗漏点与FD-OCT中视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)异常改变的对应关系。结果 81眼急性CSC患眼中,FFA检查发现荧光素渗漏点86个,在FD-OCT图像上表现为视网膜色素上皮脱离(pigment epithelial detachment,PED)、小隆起、粗糙紊乱等RPE层异常改变。此外尚有13眼(16.05%)在荧光素渗漏点以外区域存在着低荧光、荧光染色、透见荧光,在FDOCT上RPE亦表现为PED、小隆起、粗糙紊乱混合存在。还有6眼(7.41%)无任何异常荧光区域,在FD-OCT上RPE也显示有PED、小隆起、粗糙紊乱等改变。结论急性CSC的FFA渗漏点与FD-OCT中RPE异常改变部位基本对应,而FFA渗漏点以外区域FD-OCT亦有RPE层异常改变,在急性CSC诊治中FD-OCT不可完全替代FFA。 展开更多
关键词 中心性浆液性脉络膜视网膜病变 渗漏点 荧光素眼底血管造影 视网膜色素上皮 频域光学相干断层扫描
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蓝光损伤视网膜的机制及防护 被引量:10
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作者 秦珊 卢怡洁 秦波 《国际眼科杂志》 CAS 北大核心 2019年第10期1696-1699,共4页
蓝光是自然光线的重要组成部分,其波长主要介于400~500nm,是一种短波长光,它是高能可见光谱的一部分。蓝光损伤指的是由这一波长的辐射照射后引起的光化学作用,导致视网膜的损伤。可见光中蓝光对视网膜敏感性最高、穿透力最强,因而产生... 蓝光是自然光线的重要组成部分,其波长主要介于400~500nm,是一种短波长光,它是高能可见光谱的一部分。蓝光损伤指的是由这一波长的辐射照射后引起的光化学作用,导致视网膜的损伤。可见光中蓝光对视网膜敏感性最高、穿透力最强,因而产生的光化学损伤作用最强,其中最主要损伤的是视网膜色素上皮细胞(RPE)和视网膜感光细胞。目前针对于蓝光的防护的研究已经逐步开展。本文依据现已证实的蓝光损伤视网膜的机制对其防护机制研究进展进行综述。 展开更多
关键词 蓝光 损伤 防护 视网膜色素上皮细胞 感光细胞 机制
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维拉帕米诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡及细胞内钙变化 被引量:7
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作者 庞东渤 洪晶 《国际眼科杂志》 CAS 2006年第2期324-327,共4页
目的:探讨钙通道拮抗剂—维拉帕米(verapamil,Ver)对体外培养的人视网膜色素上皮(humanretinalpigmentepithelium,hRPE)细胞凋亡诱导作用及凋亡过程中细胞内钙浓度[Ca2+]i的变化。方法:应用80mg/L的Ver作用体外培养hRPE细胞12,24及48h,... 目的:探讨钙通道拮抗剂—维拉帕米(verapamil,Ver)对体外培养的人视网膜色素上皮(humanretinalpigmentepithelium,hRPE)细胞凋亡诱导作用及凋亡过程中细胞内钙浓度[Ca2+]i的变化。方法:应用80mg/L的Ver作用体外培养hRPE细胞12,24及48h,采用吖叮橙(AO)荧光染色法、透射电镜、流式细胞术观察hRPE细胞凋亡;Fluo-3/AM负载技术,观察凋亡过程中细胞[Ca2+]i的变化。结果:一定浓度Ver可诱导hRPE细胞凋亡,荧光显微镜及电镜观察hRPE细胞具有早期凋亡特征:核荧光呈黄绿色,电镜下核染色质浓染、边集。流式细胞术显示,Ver作用后的hRPE细胞凋亡百分率增加(F=12.3415,P<0.05)。Ver作用的hRPE细胞内钙浓度([Ca2+]i)呈下降趋势(F=23.607,P<0.01)。结论Ver能诱导体外培养的hRPE细胞凋亡,细胞内[Ca2+]i浓度的变化可能是诱导hRPE凋亡的机制之一。 展开更多
关键词 视网膜色素上皮细胞 维拉帕米 凋亡 钙离子
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柔红霉素和Bax过表达对培养人视网膜色素上皮细胞凋亡的影响 被引量:8
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作者 杜红俊 惠延年 +2 位作者 王雨生 韩泉洪 马吉献 《第四军医大学学报》 北大核心 2002年第19期1783-1786,共4页
目的 观察柔红霉素 (DNR)和外源 bax基因转染对培养人视网膜色素上皮 (RPE)细胞凋亡的影响 .方法 通过脂质体法将外源 bax基因转入 RPE细胞 .采用 TUNEL荧光染色方法 ,观察 2 0 0 μg·L- 1 DNR作用 12 h对正常和转基因后 RPE细... 目的 观察柔红霉素 (DNR)和外源 bax基因转染对培养人视网膜色素上皮 (RPE)细胞凋亡的影响 .方法 通过脂质体法将外源 bax基因转入 RPE细胞 .采用 TUNEL荧光染色方法 ,观察 2 0 0 μg·L- 1 DNR作用 12 h对正常和转基因后 RPE细胞凋亡的影响 ;同时采用专用试剂盒 ,通过荧光比色法检测细胞碎片中半胱氨酸蛋白酶 - 3(Caspase- 3)的活性 .结果 正常 RPE细胞可见 TU NEL 阳性着色 ,经 bax基因转染和 DNR作用后阳性细胞比例增加 ,而且染色加深 .经DNR作用不同时间后 ,转基因 RPE细胞的 Caspase- 3活性升高比例均大于正常细胞 Caspase- 3活性升高的比例 (P<0 .0 1) .结论  DNR可以诱导 RPE细胞的凋亡 . bax基因转染可以促进细胞的凋亡 ,并增加 展开更多
关键词 柔红霉素 视网膜色素上皮 半胱氨酸蛋白酶-3 细胞凋亡 BAX基因
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蓝光照射致人视网膜色素上皮细胞线粒体凋亡的途径及机制 被引量:9
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作者 李红 吕建平 +3 位作者 蔡善君 宿罡 武志鹏 宫鑫 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期16-20,共5页
背景 研究已证实蓝光照射可导致视网膜色素上皮细胞(RPE)凋亡,但其机制目前尚不完全清楚. 目的 探讨线粒体凋亡通路是否参与蓝光照射诱导体外培养的人RPE细胞凋亡过程.方法 分离新鲜的供体视网膜,对人RPE细胞进行原代培养和传代,用角... 背景 研究已证实蓝光照射可导致视网膜色素上皮细胞(RPE)凋亡,但其机制目前尚不完全清楚. 目的 探讨线粒体凋亡通路是否参与蓝光照射诱导体外培养的人RPE细胞凋亡过程.方法 分离新鲜的供体视网膜,对人RPE细胞进行原代培养和传代,用角蛋白单克隆抗体行细胞鉴定.将体外培养的人RPE细胞分为无光照组、单纯光照组、光照+硝苯地平组、光照+钙磷酸结合蛋白C(calphostin C)组、光照+佛波酯(PMA)组.光照组细胞用(2 000±500) lx的蓝光照射人RPE细胞6h,然后继续培养24 h后终止.采用Western blot法比较两个组间RPE细胞中凋亡相关调控因子bax、bcl-2、bcl-xl的相对表达,以评价蓝光照射对RPE细胞凋亡的影响.光照+硝苯地平组、光照+calphostin C组、光照+PMA组细胞在蓝光照射前1h分别在培养基中加入相应药物,然后以(2 000±500) lx的蓝光照射人RPE细胞6h,并继续培养24 h,采用Westernblot法检测5个组细胞中caspase-9蛋白表达量的变化,观察钙通道和蛋白激酶C(PKC)通路对RPE细胞线粒体的影响.结果 培养的细胞生长良好,细胞质内充满色素颗粒,呈铺路石样排列,对角蛋白呈阳性反应.无光照组和单纯光照组均可见bax、bcl-2及bcl-xl蛋白条带,相对分子质量分别为23 000、26 000和30 000.与无光照组比较,单纯光照组bax、bcl-2和bcl-xl蛋白表达相对值(A)下降,差异均有统计学意义(t=-4.409,P=0.012;t=7.575,P=0.002;t=6.068,P=0.004).与无光照组比较,单纯光照组、光照+calphostin C组、光照+PMA组细胞中caspase-9蛋白表达均升高,差异均有统计学意义(P=0.005、0.002、0.000),而光照+硝苯地平组与无光照组比较差异无统计学意义(P=0.191).与单纯光照组比较,光照+PMA组caspase-9蛋白表达升高,差异有统计学意义(P=0.005);而光照+硝苯地平组及光照+calphostin C组caspase-9蛋白表达差异均无统计学意义� 展开更多
关键词 蓝光 光损伤 视网膜色素上皮 凋亡 线粒体 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 细胞培养
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聚嘧啶束结合蛋白相关剪接因子对过氧化氢诱导下视网膜色素上皮细胞凋亡的影响 被引量:9
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作者 田芳 李文博 +6 位作者 黄亮瑜 高美子 赵今稚 胡博杰 张晓敏 李筱荣 东莉洁 《中华眼底病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期159-163,共5页
目的 观察聚嘧啶束结合蛋白相关剪接因子(PSF)高表达对过氧化氢(H2O2)诱导下视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的影响。 方法 体外培养的人RPE细胞分为正常细胞组、损伤组(N+H2O2组)、空载体对照组(Vec+H2O2组)、PSF高表达组(PS... 目的 观察聚嘧啶束结合蛋白相关剪接因子(PSF)高表达对过氧化氢(H2O2)诱导下视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的影响。 方法 体外培养的人RPE细胞分为正常细胞组、损伤组(N+H2O2组)、空载体对照组(Vec+H2O2组)、PSF高表达组(PSF+H2O2组)。应用脂质体2000将pEGFP空载体、pEGFP-PSF真核表达质粒分别导入Vec+H2O2组、PSF+H2O2组;N+H2O2组仅作转染处理;正常细胞组为正常培养细胞。细胞转染24 h后,以200 μmol/L H2O2刺激细胞2 h。苏木精-伊红染色观察各组细胞形态;噻唑蓝比色法检测N+H2O2组、Vec+H2O2组、PSF+H2O2细胞活性,以酶联免疫检测仪测量波长490 nm处各组细胞的吸光度[A,旧称光密度(OD)]值表示;LIVE/DEAD 细胞活性/细胞毒性试剂盒检测各组细胞生存力;细胞凋亡检测试剂盒检测N+ H2O2组、Vec+H2O2组、PSF+H2O2组细胞凋亡;二氯荧光素二乙酸酯检测各组细胞内活性氧(ROS)水平。 结果 N+H2O2组、Vec+H2O2组细胞体积缩小,胞质致密浓缩、嗜酸性染色增强;PSF+H2O2组细胞形态尚饱满,胞质染色较均匀,偶见体积缩小。与PSF+H2O2组比较,N+H2O2组、Vec+H2O2组细胞活性下降,差异有统计学意义(F=46.98,P=0.000)。正常细胞组细胞呈绿色,偶见红色荧光;N+H2O2组、Vec+H2O2组细胞中呈红色荧光的死亡细胞数量明显增多,呈绿色荧光的活细胞数量显著减少;PSF+H2O2组活细胞数量明显增多,死亡细胞数量显著减少。与N+H2O2组、Vec+H2O2组细胞凋亡比较,PSF+ H2O2组细胞凋亡下降,差异有统计学意义(F=62.24,P=0.000)。与N+H2O2组、Vec+H2O2组比较,PSF+H2O2组细胞中ROS表达量下降,差异有统计学意义(F=295.235,P=0.000)。 结论 高表达PSF通过抑制ROS的产生缓解H2O2诱导的人RPE细胞凋亡。 展开更多
关键词 视网膜色素上皮 聚嘧啶区结合蛋白质 细胞凋亡 过氧化氢
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过氧化氢诱导人视网膜色素上皮细胞衰老及其机制探讨 被引量:9
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作者 赵颖 牛膺筠 周占宇 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2011年第9期804-806,共3页
目的研究过氧化氢诱导人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞氧化损伤中的细胞衰老现象并探讨其机制。方法培养的人RPE细胞随机分为正常对照组和过氧化氢处理组,过氧化氢处理组根据用600μmol·L-1过氧化氢处理的... 目的研究过氧化氢诱导人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞氧化损伤中的细胞衰老现象并探讨其机制。方法培养的人RPE细胞随机分为正常对照组和过氧化氢处理组,过氧化氢处理组根据用600μmol·L-1过氧化氢处理的不同时段分为1h、6h、12h、24h及72h组。流式细胞术分析各组细胞周期,计算G0/G1期细胞所占比率;流式细胞术检测各组细胞线粒体膜电位的变化;免疫组织化学法检测各组细胞Caspase-9的变化。结果与正常对照组相比,过氧化氢作用6h组G0/G1期细胞所占比率增高(P<0.05),且随作用时间的延长而增加,72h组最高(P<0.01),达到(89.12±0.21)%;过氧化氢损伤导致RPE细胞膜电位降低,且随时间延长逐渐降低,72h组最低(62.48±0.59);Caspase-9蛋白在过氧化氢作用1h时表达开始增高,且随时间延长逐渐增加,在24h时达到高峰(36·2±0.4),72h时略有回落(26.4±0.8),但仍较正常组(3.2±0.2)高。结论过氧化氢作用下,人RPE细胞生长停滞于G/G期,呈现衰老现象。线粒体膜电位的降低和线粒体凋亡途径上游因子Caspase-9的活化可能是细胞衰老的机制之一。 展开更多
关键词 视网膜色素上皮细胞 过氧化氢 细胞衰老 线粒体膜电位 CASPASE-9
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50岁以上患者视网膜色素上皮脱离的眼底特征分析 被引量:8
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作者 孙祖华 文峰 +5 位作者 陈艳丽 吴德正 黄时洲 罗光伟 关天芹 刘彩娇 《中华眼底病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期224-227,共4页
目的探讨50岁以上患者视网膜色素上皮脱离(PED)的眼底改变特征。方法回顾分析2001年10月至2004年8月经荧光素眼底血管造影(FFA)确诊为PED的31例(34只眼)50岁以上连续性病例,眼底改变的特征,患者均进行眼底彩色照相、FFA及吲哚青绿血管造... 目的探讨50岁以上患者视网膜色素上皮脱离(PED)的眼底改变特征。方法回顾分析2001年10月至2004年8月经荧光素眼底血管造影(FFA)确诊为PED的31例(34只眼)50岁以上连续性病例,眼底改变的特征,患者均进行眼底彩色照相、FFA及吲哚青绿血管造影(ICGA)检查。结果31例34只PED患眼中,FFA显示浆液性PED18只眼,占52.9%,血液性PED8只眼,占23.5%,浆液血液性PED8只眼,占23.5%。ICGA结果显示,12只眼(35.3%)伴发脉络膜新生血管(CNV),17只眼(50.0%)伴发息肉状脉络膜血管病变(PCV),1只眼(2.9%)同时伴发CNV及PCV,4只眼(11.8%)不伴有脉络膜血管性病变。结论50岁以上患者PED可发生于CNV、PCV及无脉络膜血管性病变患眼,其中PCV患眼最常见。 展开更多
关键词 视网膜脱离 色素上皮 荧光素血管造影术 吲哚花青绿
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丁基苯酞对H2O2诱导下视网膜色素上皮细胞凋亡的保护作用 被引量:9
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作者 邢小丽 黄亮瑜 +4 位作者 张哲 黄欣远 王琼 李筱荣 东莉洁 《中华眼底病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期480-487,共8页
目的观察丁基苯酞(NBP)对H2O2诱导下RPE细胞凋亡的保护作用。方法以人ARPE-19细胞系为实验细胞,并将其分为对照组、模型组及NBP组。对照组单纯采用完全培养基培养细胞。模型组采用200 μmol/L的H2O2刺激细胞2 h,换液后给予完全培养基培... 目的观察丁基苯酞(NBP)对H2O2诱导下RPE细胞凋亡的保护作用。方法以人ARPE-19细胞系为实验细胞,并将其分为对照组、模型组及NBP组。对照组单纯采用完全培养基培养细胞。模型组采用200 μmol/L的H2O2刺激细胞2 h,换液后给予完全培养基培养细胞。NBP组采用200 μmol/L的H2O2及1 μmol/L的NBP共同培养细胞2 h,换液后给予完全培养基联合1 μmol/L的NBP继续培养细胞。采用MTT法检测细胞受到氧化应激刺激后的细胞活力;HE染色对RPE细胞形态进行观察;Hoechst33258染色观察RPE细胞凋亡形态;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)观察细胞膜电位改变及细胞早期凋亡变化;2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色观察细胞内ROS生成堆积情况;细胞免疫荧光和Western blot分析NBP对血红素氧合酶1 (HO-1)表达的影响。结果MTT法检测结果显示,细胞培养24、48 h,对照组(t=17.710、13.760,P<0.000 1、<0.000 1)、NBP组(t=4.857、9.225,P=0.000 7、P<0.000 1)细胞生存力均较模型组更强,差异均有统计学意义。HE染色及Hoechst33258染色观察发现,与对照组比较,模型组细胞数量明显变少,细胞形态不完整;与模型组比较,NBP组细胞数量明显增多,细胞形态更好。JC-1法检测结果显示,模型组凋亡细胞数较对照组明显增多,NBP组凋亡细胞数较模型组明显减少。DCFH-DA染色观察发现,模型组细胞内ROS堆积较对照组更多,NBP组细胞内ROS堆积较模型组更少。免疫染色观察发现,NBP组细胞的HO-1荧光强度较对照组明显增高,差异有统计学意义(t=10.270,P=0.000 5)。Western blot检测结果显示,NBP以时间依赖性的方式上调HO-1的表达水平;NBP作用4、8、12 h时HO-1相对表达量较0 h时呈明确升高趋势,差异有统计学意义(F=164.91,P<0.05)。结论氧化应激损伤可下调RPE细胞的生存力并诱导其出现凋亡,NBP通过上调HO-1的表达,有效提高RPE细胞抗氧化能力,减轻细胞损伤并抑制细胞凋亡。 展开更多
关键词 视网膜色素上皮 细胞凋亡 丁基苯酞 氧化应激
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