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实时荧光定量PCR技术的类型、特点与应用 被引量：84
1
作者 袁亚男 刘文忠 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第3期27-30,共4页
实时荧光定量PCR技术是一种利用不同的荧光检测方法来定量核酸的技术,具有高度的灵敏性、特异性和精确性。该技术根据荧光作用方式分为:SYBR荧光染料法、TaqMan技术、分子信标和复合探针等类型,依据其各自优缺点可将各技术方法分别应用... 实时荧光定量PCR技术是一种利用不同的荧光检测方法来定量核酸的技术,具有高度的灵敏性、特异性和精确性。该技术根据荧光作用方式分为:SYBR荧光染料法、TaqMan技术、分子信标和复合探针等类型,依据其各自优缺点可将各技术方法分别应用于畜牧兽医领域不同方面的科研工作中,以期得到最优的定量检测效率。 展开更多
关键词 实时荧光定量pcr技术 荧光共振能量转移 荧光探针 淬灭探针
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实时荧光定量PCR的应用和进展 被引量：39
2
作者 付春华 陈孝平 余龙江 《激光生物学报》 CAS CSCD 2005年第6期466-471,共6页
实时荧光定量PCR技术通过检测PCR产物中荧光讯号强度来达到定量的目的,该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,目前已在动植物基因工程,微生物和医学领... 实时荧光定量PCR技术通过检测PCR产物中荧光讯号强度来达到定量的目的,该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,目前已在动植物基因工程,微生物和医学领域中得到广泛应用。本文对实时荧光定量PCR技术的原理、优缺点及近年来新兴起的荧光探针的原理、优缺点进行了评述,重点及创新点是对实时荧光定量PCR技术在动植物基因工程,微生物和医学领域的应用进行了比较全面的综述,并对实时荧光定量PCR技术的普及应用及在基因诊断领域的前景做了进一步的展望。 展开更多
关键词 实时荧光定量pcr 原理 应用
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实时荧光定量PCR及其在微生物生态学中的应用 被引量：44
3
作者 张晶 张惠文 张成刚 《生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期1445-1450,共6页
定量描述微生物群落的组成,在微生物生态学的许多研究领域都是非常重要的。然而由于可培养技术的局限性,定量描述微生物群落成为比较困难的事情。最近包括PCR技术在内的分子生物学技术为人们提供了有力的工具,使对微生物群落的分布、丰... 定量描述微生物群落的组成,在微生物生态学的许多研究领域都是非常重要的。然而由于可培养技术的局限性,定量描述微生物群落成为比较困难的事情。最近包括PCR技术在内的分子生物学技术为人们提供了有力的工具,使对微生物群落的分布、丰度等有了进一步的了解。实时荧光定量PCR技术作为核酸定量检测技术,自从发明以来在微生物生态学研究中逐渐得到了广泛的应用。从微生物生态学角度,综述了实时荧光定量PCR技术的原理、发展、优缺点及其在微生物生态学研究中的应用与研究进展,并探讨了实时荧光定量PCR技术的发展和应用前景。 展开更多
关键词 实时荧光定量pcr技术 SYBR Green I 荧光探针 微生物生态学
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实时荧光定量PCR技术的操作实践 被引量：42
4
作者 杨怡姝 孙晓娜 +3 位作者 王小利 沈思嗣 李泽琳 曾毅 《实验室研究与探索》 CAS 北大核心 2011年第7期15-19,共5页
采用Mx3000P型实时荧光定量PCR仪,以SYBRGreen I法相对定量技术为例,设计1例检测针对HIV-1 vpr基因的特异性siRNA基因沉默效果的实验。介绍了实时荧光定量PCR技术上机前样本的制备过程、检测程序及相关参数的设置方法等操作流程;结合... 采用Mx3000P型实时荧光定量PCR仪,以SYBRGreen I法相对定量技术为例,设计1例检测针对HIV-1 vpr基因的特异性siRNA基因沉默效果的实验。介绍了实时荧光定量PCR技术上机前样本的制备过程、检测程序及相关参数的设置方法等操作流程;结合熔解曲线、扩增曲线进行结果分析;强调了实验整体设计、引物设计与PCR反应体系的优化和内参的恰当选择在实时荧光定量PCR技术中的重要性。 展开更多
关键词 荧光定量pcr SYBRGreenI 扩增曲线 熔解曲线
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TaqMan探针法实时荧光定量PCR的应用和研究进展 被引量：35
5
作者 姜文灿 岳素文 +1 位作者 江洪 王成彬 《临床检验杂志（电子版）》 2015年第1期797-805,共9页
TaqMan探针法实时荧光定量PCR因其重复性好、特异性强、线性范围宽等特点在各个领域有着广泛的应用,内标系统的引入进一步提升了该方法的灵敏度,增加了其可靠性和实用性。然而,这一技术也因为假阴性和假阳性问题存在着改进的空间。本文... TaqMan探针法实时荧光定量PCR因其重复性好、特异性强、线性范围宽等特点在各个领域有着广泛的应用,内标系统的引入进一步提升了该方法的灵敏度,增加了其可靠性和实用性。然而,这一技术也因为假阴性和假阳性问题存在着改进的空间。本文从TaqMan探针法的简介、研究进展以及应用前景展开综述。 展开更多
关键词 实时荧光定量pcr TAQMAN探针 引物二聚体 内标系统
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血清miR-122—5p和miR-486—5p在肝癌诊断中的临床应用 被引量：34
6
作者 何佳 肖斌 +3 位作者 杭建峰 杨永泉 李林海 孙朝晖 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期41-46,共6页
目的探讨肝癌患者血清miR－122－5p和miR－486－5p的表达水平，及两指标单独或与甲胎蛋白（AFP）联合诊断肝癌的临床应用价值。方法采用病例对照研究。选择2016年6月至2017年3月在广州军区广州总医院住院的60例肝癌患者（HCC组），20例... 目的探讨肝癌患者血清miR－122－5p和miR－486－5p的表达水平，及两指标单独或与甲胎蛋白（AFP）联合诊断肝癌的临床应用价值。方法采用病例对照研究。选择2016年6月至2017年3月在广州军区广州总医院住院的60例肝癌患者（HCC组），20例肝炎患者（肝炎组），20例肝硬化患者（肝硬化组），20例乳腺癌患者（乳腺癌组），20例胃癌患者（胃癌组）及20名健康体检人员（正常对照组），提取总RNA，采用实时荧光定量PCR技术，检测血清中miR－122－5p和miR－486－5p的相对表达量。用受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic，ROC）分析miRNA对肝癌诊断的特异度和灵敏度，并与肿瘤标志物AFP的测定结果进行比较。根据ROC曲线下面积判断诊断效能，评估其在肝癌诊断中的应用价值。各组间比较采用非参数秩和检验进行分析。结果肝癌组、肝炎组、肝硬化组、乳腺癌组、胃癌组及健康对照组中血清miR－122－5p的相对表达量分别是0.14（0.05～0.51）、0.45（0.32～0.58）、0.53（0.34～0.67）、0.14（0.07～0.28）、0.29（0.13～0.36）和0.73（0.63～0.95），血清miR－486－5p的相对表达量分别是0.50（0.23～0.77）、0.62（0.48～0.82）、0.65（0.54～0.85）、0.23（0.08～0.40）、0.29（0.15～0.45）和0.76（0.69～1.23）。肝炎组、肝硬化组、肝癌组中血清miR－122－5p的相对表达量较健康对照组低，差异均有统计学意义（U值分别为315.37，393.46，429.08, P均〈0.01），肝炎组、肝硬化组、肝癌组中血清miR－486－5p的相对表达量较健康对照组较低，差异均有统计学意义（U值分别为103.67，156.18，207.35，P均〈0.05）。单项检测HCC时，AFP的敏感度最高（73.7%），miR－122－5p的特异度最高（95%）。双项检测HCC时，AFP＋miR－122－5p的敏感度最高（93%），miR－122－5p和miR－486－5p的特异度最高（70%），AFP＋miR－122－5 展开更多
关键词 肝癌 微小RNA 生物学标记物 实时聚合酶链反应
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北京地区慢性丙型肝炎患者血清HCV-RNA定量检测与基因分型的研究 被引量：27
7
作者 严艳 李卓 +1 位作者 郭向华 林尊会 《医学理论与实践》 2007年第7期756-757,共2页
目的:探讨北京地区慢性丙型肝炎患者血清HCV-RNA定量检测和HCV基因分型的相关性。方法:用荧光定量PCR法检测310例北京地区慢性丙型肝炎患者血清HCV-RNA标本,应用RT-PCR和型特异性引物法对310例标本进行基因分型。结果:在310例标本中,HC... 目的:探讨北京地区慢性丙型肝炎患者血清HCV-RNA定量检测和HCV基因分型的相关性。方法:用荧光定量PCR法检测310例北京地区慢性丙型肝炎患者血清HCV-RNA标本,应用RT-PCR和型特异性引物法对310例标本进行基因分型。结果:在310例标本中,HCV1b型有217例(70%),2a型74例(23.9%),2b型8例(2.6%),1b/2a混合型5例(1.6%),未分型6例(1.9%)。对299例HCV单基因型患者的基因型与性别的相关性进行统计学分析,结果显示没有统计学差异(χ2=0.028,P<0.978)。299例患者的首次血清病毒RNA定量测定与基因型之间有明显的统计学差异(F=16.525,P<0.01)。结论:北京地区丙型肝炎病毒感染以1b型为主,基因型在性别上的分布没有差异。治疗前HCV基因型与体内病毒的含量密切相关。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 HCV-RNA定量检测 基因分型
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10676例泌尿生殖道感染门诊患者淋球菌、沙眼衣原体和解脲支原体感染分析 被引量：29
8
作者 陈佳婕 张欢欢 +4 位作者 贾亦斐 孙晴 胡永奇 王立平 徐伟红 《传染病信息》 2020年第3期236-238,共3页
目的探讨2016年7月-2017年3月来上海某医院门诊就诊的10676例泌尿生殖道感染患者淋球菌(Neisseria gonorrhoeae,NG)、沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)和解脲支原体(Ureaplasma urealyticum,UU)的感染分布情况。方法运用实时荧光定... 目的探讨2016年7月-2017年3月来上海某医院门诊就诊的10676例泌尿生殖道感染患者淋球菌(Neisseria gonorrhoeae,NG)、沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)和解脲支原体(Ureaplasma urealyticum,UU)的感染分布情况。方法运用实时荧光定量PCR方法对10676例泌尿生殖道感染患者分别或同时进行NG、CT和UU测定。结果NG、CT和UU 3种病原体总检出率分别为1.47%、7.57%、71.27%,其中合并感染756例。检出率以21~30岁年龄段患者最高。在男性患者的样本中,CT的检出率为10.60%,UU的检出率为33.05%,NG的检出率为32.70%。在女性患者中,UU的检出率居首位,为72.16%,CT检出率为7.51%,NG检出率最低为0.89%。结论UU和NG的检出率具有明显的性别差异。随着患者年龄的增长,3种病原体检出的阳性样本数逐渐下降。 展开更多
关键词 实时荧光定量pcr 淋球菌 沙眼衣原体 解脲支原体
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实时荧光定量PCR的数据分析方法 被引量：26
9
作者 易健明 屈武斌 张成岗 《生物技术通讯》 CAS 2015年第1期140-145,共6页
实时荧光定量PCR是目前检测目的核酸拷贝数及分析靶基因在mRNA表达水平相对变化的主流技术。研究表明,分析结果的准确性依赖于数据分析方法的可靠性。我们简要综述实时荧光定量PCR的数据分析方法。
关键词 实时荧光定量pcr 绝对定量 相对定量 动力学法
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实时荧光定量PCR技术研究进展及其在兽医学中的应用 被引量：21
10
作者 薛霜 独军政 +1 位作者 高闪电 常惠芸 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2010年第7期11-15,共5页
实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)技术融汇了传统PCR技术灵敏、快速、特异的特点以及光谱技术的高敏感性和高精确定量的优点,直接探测PCR过程中荧光信号的变化以获得定量的结果。随着现代医学和分子生... 实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)技术融汇了传统PCR技术灵敏、快速、特异的特点以及光谱技术的高敏感性和高精确定量的优点,直接探测PCR过程中荧光信号的变化以获得定量的结果。随着现代医学和分子生物学的飞速发展,该技术已在兽医学的基础研究及临床应用方面发挥着越来越大的作用。笔者将对FQ-PCR技术的原理、检测方法研究进展以及目前的应用状况等作一综述。 展开更多
关键词 实时荧光定量pcr 探针 应用
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实时荧光定量PCR技术在乳酸菌定量检测中的应用 被引量：25
11
作者 赵文静 李妍 +1 位作者 高鹏飞 张和平 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期433-437,共5页
与传统的菌落计数、杂交技术及PCR技术等相比,实时荧光定量PCR技术作为一种检测和定量微生物的方法,具有较高的灵敏度及可重复性,而且反应过程快速,污染较小。作者综述了实时荧光定量PCR技术的定量原理,荧光检测物质,目的基因序列以及... 与传统的菌落计数、杂交技术及PCR技术等相比,实时荧光定量PCR技术作为一种检测和定量微生物的方法,具有较高的灵敏度及可重复性,而且反应过程快速,污染较小。作者综述了实时荧光定量PCR技术的定量原理,荧光检测物质,目的基因序列以及其特点,并且列举了在乳酸菌定量检测中的应用,同时对其应用前景进行了展望。 展开更多
关键词 实时定量pcr 乳酸菌 定量检测
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实时荧光定量PCR技术的实验研究 被引量：20
12
作者 袁继红 《现代农业科技》 2010年第13期20-22,共3页
实时荧光定量PCR技术是在普通PCR定性技术基础上发展起来的核酸定量技术,已广泛应用于不同研究领域。论述了荧光定量PCR技术的基本原理、主要类型和定量实验方法,探讨了实验条件的控制、影响因素和优化实验结果的方法。
关键词 荧光定量pcr技术 原理 主要类型 定量方法 优化
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猪流感病毒M基因实时荧光定量PCR诊断方法的建立 被引量：20
13
作者 张春明 乔传玲 +4 位作者 陈艳 杨焕良 辛晓光 陈化兰 冉多良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期805-810,共6页
根据猪流感病毒(SIV)M基因的保守序列,设计并合成一对特异性引物和TaqManMGB探针,建立了SIVM基因实时荧光定量PCR检测方法。使用含有M基因的重组质粒pMD-M作为标准品绘制标准曲线,其相关系数为0.999,检测结果表明:该方法的敏感性可达到1... 根据猪流感病毒(SIV)M基因的保守序列,设计并合成一对特异性引物和TaqManMGB探针,建立了SIVM基因实时荧光定量PCR检测方法。使用含有M基因的重组质粒pMD-M作为标准品绘制标准曲线,其相关系数为0.999,检测结果表明:该方法的敏感性可达到1个EID50,组间与组内重复试验变异系数分别为0.21%和0.65%,除SIV外,其他5种猪病病毒检测均为阴性,样品检测与病毒滴定及病毒分离结果的符合率均达到100%,该方法特异性强、重复性好,有望成为SIV的一种特异、敏感、快速的定量检测方法。 展开更多
关键词 SIV TAQ Man MGB探针 实时荧光定量pcr
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盐胁迫下构树DREB转录因子基因表达的实时荧光定量PCR分析 被引量：20
14
作者 杨帆 丁菲 杜天真 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第4期146-150,共5页
转录因子是指那些专一性地结合于DNA特定序列上、能激活或抑制其他基因转录的蛋白质（王少峡等,2004）。DREB（dehydration responsive element binding protein）转录因子是一种特异性的转录因子,当植物在干旱、低温及盐等逆境胁迫下,
关键词 实时荧光定量pcr 构树 DREB转录因子 CT值 盐胁迫
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紫草素对人喉癌Hep-2细胞生长的作用研究 被引量：20
15
作者 鲁昊 康健 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2011年第2期350-354,共5页
目的:研究紫草素对人喉癌Hep-2细胞生长的作用。方法:以不同浓度的紫草素作用于人喉癌Hep-2细胞,MTT法检测紫草素对人喉癌Hep-2细胞生长的抑制率,荧光显微镜观察人喉癌Hep-2细胞凋亡情况,流式细胞仪分析细胞周期分布及凋亡率变化,荧光定... 目的:研究紫草素对人喉癌Hep-2细胞生长的作用。方法:以不同浓度的紫草素作用于人喉癌Hep-2细胞,MTT法检测紫草素对人喉癌Hep-2细胞生长的抑制率,荧光显微镜观察人喉癌Hep-2细胞凋亡情况,流式细胞仪分析细胞周期分布及凋亡率变化,荧光定量PCR法测量人喉癌Hep-2细胞增殖诱导配体(APRIL)的表达量。结果:紫草素对人喉癌Hep-2细胞的增殖有明显抑制作用,并呈明显的量效关系和时间依赖性。紫草素主要阻滞细胞G1期向S期的发展。紫草素作用人喉癌Hep-2细胞后其APRIL mRNA表达量随时间的延长和浓度的增加而升高,48 h后各紫草素浓度组APRIL mRNA表达与空白组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:紫草素可以抑制喉癌Hep-2细胞的增殖,未凋亡的人喉癌Hep-2细胞因APRIL表达升高而有增殖能力增强的潜在趋势。 展开更多
关键词 紫草素 喉癌HEP-2细胞 增殖诱导配体 实时荧光定量pcr
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棘孢木霉Trichoderma asperellum在土壤中定殖量的荧光定量PCR检测 被引量：18
16
作者 贺字典 宋士清 +2 位作者 高玉峰 石延霞 李宝聚 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期552-558,共7页
为快速准确检测棘孢木霉Trichoderma asperellum在土壤中的定殖量,构建了荧光定量PCR检测体系,并运用该体系对防治黄瓜枯萎病后土壤中的棘孢木霉数量进行了检测。结果表明:所建立的荧光定量PCR检测体系对棘孢木霉DNA特异性强,R^2为0.998... 为快速准确检测棘孢木霉Trichoderma asperellum在土壤中的定殖量,构建了荧光定量PCR检测体系,并运用该体系对防治黄瓜枯萎病后土壤中的棘孢木霉数量进行了检测。结果表明:所建立的荧光定量PCR检测体系对棘孢木霉DNA特异性强,R^2为0.998,检测限点为15 fg/μL;在灭菌土壤中检测到的棘孢木霉DNA的拷贝数大于1 866 fg/μL时,对黄瓜枯萎病的防治效果高于64.29%;在黄瓜整个生育期内,检测到土壤中的棘孢木霉定殖量呈现先降后升的变化趋势,第7天时,棘孢木霉DNA拷贝数为320 ng/μL,56 d后棘孢木霉DNA拷贝数迅速上升,最高可达5.16×10~4ng/μL,且对黄瓜枯萎病的防治效果为64.29%~76.81%。研究表明,荧光定量PCR方法检测土壤中棘孢木霉数量具有快速、灵敏度高、可靠性强等优点,可用于检测生防菌棘孢木霉施用后的定殖量和生防效果。 展开更多
关键词 棘孢木霉 荧光定量pcr 定殖量 检测技术
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东海海参酶解液提高小鼠记忆力和抗疲劳功能的研究 被引量：18
17
作者 王奇 李妍妍 +3 位作者 芦红艳 金春华 董明敏 苏秀榕 《营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期580-583,588,共5页
目的探讨东海海参酶解液对小鼠空间和时间记忆的影响及其抗疲劳的功能。方法选用复合蛋白酶,在55℃的条件下酶解150min制得海参酶解液,灌胃ICR小鼠,42d后,利用Morris水迷宫、Y字形迷宫和转棒式疲劳仪进行空间、时间记忆能力和抗疲劳的研... 目的探讨东海海参酶解液对小鼠空间和时间记忆的影响及其抗疲劳的功能。方法选用复合蛋白酶,在55℃的条件下酶解150min制得海参酶解液,灌胃ICR小鼠,42d后,利用Morris水迷宫、Y字形迷宫和转棒式疲劳仪进行空间、时间记忆能力和抗疲劳的研究;测定小鼠血清中超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力以及丙二醛(MDA)的含量研究其抗氧化活性,利用荧光定量PCR研究记忆相关基因的表达。结果东海海参酶解液能显著强化小鼠的空间和时间记忆力,增强小鼠抗疲劳能力,提高血清SOD和GSH-Px的活性,并能降低血清MDA的含量,明显提高抗氧化活性。能够上调小鼠脑内记忆相关基因转录水平的表达。结论东海海参营养丰富,具有抗疲劳、抗氧化和提高记忆力的功能,可能是一种很好的保健食品原料。 展开更多
关键词 东海海参 MORRIS水迷宫 荧光定量pcr 抗疲劳 提高记忆力
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鸡IFN-α和IFN-β及IFN-γ基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：17
18
作者 张贺楠 赖汉漳 +4 位作者 齐岩 孔留五 张小桃 曹伟胜 廖明 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期173-177,共5页
根据GenBank上鸡α-、β-、γ-干扰素（ChIFNα-、β-、γ-）基因的序列，在保守区设计并合成各自特异引物，并以鸡3-磷酸甘油脱氢酶（GAPDH）基因为内参，采用SYBRGreen工染料以建立实时荧光定量PCR检测方法。将IFNα-、β-、γ-基因... 根据GenBank上鸡α-、β-、γ-干扰素（ChIFNα-、β-、γ-）基因的序列，在保守区设计并合成各自特异引物，并以鸡3-磷酸甘油脱氢酶（GAPDH）基因为内参，采用SYBRGreen工染料以建立实时荧光定量PCR检测方法。将IFNα-、β-、γ-基因克隆至pGEM-T载体上，以各阳性质粒作为标准品，构建标准曲线，并进行了熔解曲线分析。结果表明，鸡IFNα-、β-、γ-和GAPDH基因的C1值与标准品稀释度在1×10^2～1×10^8 copies／μL范围分别呈良好的线性关系，r^2均大于0．990。熔解曲线分析表明，产物为特异的单峰，检测周期从RNA提取到荧光定量PCR结束只需4h。建立的鸡IFNα-、β-、γ-基N实时荧光定量PCR灵敏度高、特异性强、检测周期短，为在mRNA水平对鸡IFN的定量分析奠定了基础。 展开更多
关键词 实时荧光定量pcr 鸡 Α-干扰素 Β-干扰素 γ-干扰素
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人巨细胞病毒DNA检测在小儿人巨细胞病毒感染诊断中的应用 被引量：18
19
作者 朱艳 周灵玲 +3 位作者 蓝俊伟 刘思宇 黄建胜 赵志钢 《中华全科医学》 2020年第3期460-462,466,共4页
目的探讨小儿血液、尿液及其母亲母乳的人巨细胞病毒DNA检测结果在人巨细胞病毒感染的诊断价值。方法选取2017年-2018年期间在浙江大学丽水医院就诊的疑似人巨细胞病毒感染的患儿328例为研究对象。收集患儿血液、尿液和对应母乳标本,进... 目的探讨小儿血液、尿液及其母亲母乳的人巨细胞病毒DNA检测结果在人巨细胞病毒感染的诊断价值。方法选取2017年-2018年期间在浙江大学丽水医院就诊的疑似人巨细胞病毒感染的患儿328例为研究对象。收集患儿血液、尿液和对应母乳标本,进行实时荧光定量PCR,检测人巨细胞病毒DNA载量;再将患儿血清用化学发光法检测HCMV-IgM,比较不同标本不同检测方法的阳性率。针对阳性患儿,对不同临床症状分布构成进行分析。结果 328例患儿检测总阳性率为71.04%,男性患儿和女性患儿阳性率分别为71.02%和69.74%,差异无统计学意义(χ~2=0.065,P=0.799)。血液、尿液和乳汁的人巨细胞病毒阳性率分别为49.09%、70.43%和58.23%,尿液阳性率最高,差异有统计学意义(χ~2=31.147,P<0.001)。新生儿组的乳汁阳性率最高,为72.41%,28 d到1岁之间和1岁以上患儿尿液阳性率最高,各年龄组之间阳性率差异有统计学意义(P<0.05);血人巨细胞病毒DNA和血清HCMV-IgM阳性率检出率分别为49.09%(161/328)和16.16%(53/328),2种方法联合检测的阳性检出率为49.69%,对比单一血DNA检测方法,两者差异无统计学意义(P>0.05)。临床症状小于1岁患儿主要以黄疸,腹泻为主,大于1岁的患儿主要以肝损害和肺炎为主。结论在小儿血液、尿液及其母亲母乳HCMV-DNA的检测中,尿液HCMV-DNA对诊断患儿人巨细胞病毒有更好的临床应用价值。且尿标本留取方便、无创,易为家长和小儿接受,所以采用FQ-PCR方法对小儿尿标本进行检测能起到快速、简洁、灵敏的作用,对提高HCMV感染的诊断率有实际的临床意义,对于小月龄患儿临床应推广尿液HCMV-DNA检测。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 感染 实时荧光定量pcr 化学发光
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施肥对设施菜地氨氧化细菌群落和丰度的影响 被引量：18
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作者 王亚男 曾希柏 +4 位作者 俄胜哲 白玲玉 李莲芳 苏世鸣 沈灵凤 《农业环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期2425-2432,共8页
以甘肃武威设施菜地为对象,采用amoA基因末端限制性片段多态性分析（PCR-TRFLP）技术与实时荧光定量PCR（Real-time PCR）相结合的方法,研究了不同施肥处理下土壤中氨氧化细菌群落组成和丰度的变化。结果表明：设施菜地中氨氧化细菌的... 以甘肃武威设施菜地为对象,采用amoA基因末端限制性片段多态性分析（PCR-TRFLP）技术与实时荧光定量PCR（Real-time PCR）相结合的方法,研究了不同施肥处理下土壤中氨氧化细菌群落组成和丰度的变化。结果表明：设施菜地中氨氧化细菌的优势种群均为Nitrosospira cluster 3属,亦含有少量Nitrosomanas cluster 7属。定量PCR分析发现在当地农民习惯施肥用量一半的处理下（1/2MNPK）,0~20cm和20~40cm土层中氨氧化细菌的丰度最大值分别为每克干土9.95×107、6.65×107拷贝数,比不施肥处理增加了105.0%和315.3%。施肥类型、土壤层次均是导致氨氧化细菌群落结构和丰度变化的重要因素。研究结果对进一步探讨设施栽培条件下氨氧化细菌的功能、环境适应机理及其在土壤氮素循环中的作用等,均具有较大的参考意义。 展开更多
关键词 氨氧化细菌 施肥 群落结构 T-RFLP 实时荧光定量pcr
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