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植物组织RNA提取的难点及对策 被引量：320
1
作者 李宏 王新力 《生物技术通报》 CAS CSCD 1999年第1期36-39,共4页
酚类化合物、多糖、蛋白质和未知次级代谢产物是影响植物组织ＲＮＡ提取的几个主要干扰因素。本文对它们在植物ＲＮＡ提取过程中的干扰作用、现象以及消除它们的一些方法进行了综述。
关键词 rna提取 植物组织 影响因素
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利用CTAB/酸酚法提取棉花组织总RNA 被引量：141
2
作者 蒋建雄 张天真 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2003年第3期166-167,共2页
通过借鉴植物DNA的CTAB提取方法,结合总RNA的LiCl沉淀法,摸索出一套适合于棉花组织总RNA提取和纯化的技术—CTAB 酸酚法。该方法与异硫氰酸胍法或冷酚法等相比具有更简便、得到的棉花组织总RNA完整性好和纯度高等优点。
关键词 棉花 组织总rna 提取 CTAB/酸酚法 纯化
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用CTAB-PVP法提取棉花各组织总RNA的研究 被引量：43
3
作者 刘洋 何心尧 +2 位作者 马红波 吴泳历 杨佑明 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期53-56,共4页
针对棉花组织总RNA难以提取、不同组织的提取方法难以统一的问题，借鉴Jaakola等的越橘果实总RNA提取方法（即CTAB-PVP法），对棉花组织总RNA的提取效果进行了分析。实验结果表明：得到的棉花纤维、胚珠、叶片、胚根、花瓣、下胚轴和花... 针对棉花组织总RNA难以提取、不同组织的提取方法难以统一的问题，借鉴Jaakola等的越橘果实总RNA提取方法（即CTAB-PVP法），对棉花组织总RNA的提取效果进行了分析。实验结果表明：得到的棉花纤维、胚珠、叶片、胚根、花瓣、下胚轴和花药各组织的RNA完整性好，其D260／D280比值为1．7～2．0，产率30～180pg／g（鲜质量）；用开花后15d纤维的RNA为材料进行反转录，再利用RT-PCR和3’RACE技术进行克隆，各获得1个大小为542和712bp的cDNA克隆，经序列分析鉴定，这2个片段分别编码棉花微管结合蛋白和微丝结合蛋白。 展开更多
关键词 棉花 rna提取 CTAB-PVP
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百合叶片总RNA提取方法比较及优化 被引量：41
4
作者 尹慧 陈莉 +2 位作者 李晓艳 陈秋明 义鸣放 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期41-45,共5页
为筛选出适合百合叶片RNA提取方法,以铁炮百合‘白天堂’组培苗叶片为材料,比较了改进的CTAB、SDS及传统的Trizol、CTAB、SDS方法提取RNA的效果。结果表明:不论传统及改进的SDS法和Trizol法均不能有效去除百合叶片组织中的多糖、蛋白等... 为筛选出适合百合叶片RNA提取方法,以铁炮百合‘白天堂’组培苗叶片为材料,比较了改进的CTAB、SDS及传统的Trizol、CTAB、SDS方法提取RNA的效果。结果表明:不论传统及改进的SDS法和Trizol法均不能有效去除百合叶片组织中的多糖、蛋白等杂质,传统CTAB法提取RNA存在DNA污染。针对百合叶片组织富含多糖多酚的特点,改进了CTAB法,采用醋酸钠及无水乙醇去除多糖,酚/氯仿反复抽提去除蛋白,DNaseⅠ去除DNA,LiCl有效沉淀RNA。采用此方法提取的RNA条带清晰,经紫外光谱分析D260/D280比值为2.0,D260/D230为2.1,电泳28S、18S条带清晰,比值约为1.5。RT-PCR结果表明,改进的CTAB法提取的总RNA可直接用于分子克隆和基因表达分析等分子生物学实验。 展开更多
关键词 百合 叶片 rna提取 CTAB改进法 多糖 RT-PCR
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改良CTAB法提取核桃总RNA试验 被引量：36
5
作者 刘晓菊 洪海波 +2 位作者 李敏 刘媛 杨克强 《山东农业科学》 2008年第1期97-99,共3页
从植物组织中提取高质量的RNA是进行基因克隆和基因表达分析的基础。不同植物的组织由于组成成分的差别,其RNA的提取有不同的难点。本试验针对核桃嫩叶内含物复杂的典型特点,在对比各种提取方法的特点及总结他人研究的基础上改良了CTAB... 从植物组织中提取高质量的RNA是进行基因克隆和基因表达分析的基础。不同植物的组织由于组成成分的差别,其RNA的提取有不同的难点。本试验针对核桃嫩叶内含物复杂的典型特点,在对比各种提取方法的特点及总结他人研究的基础上改良了CTAB法。此方法提取的核桃嫩叶总RNA的电泳结果可见清晰完整的条带,表明改良CTAB法能有效去除多糖和多酚以及色素等次生代谢物的污染,提取RNA纯度较高、完整性好,易于进行RT-PCR和cDNA文库的构建。此方法简单易行而且所用试剂成本较低。 展开更多
关键词 核桃嫩叶 rna提取 次生代谢物 改良CTAB法
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银杏RNA的提取 被引量：33
6
作者 程水源 陈昆松 +1 位作者 杜何为 许文平 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期428-429,共2页
采用CTAB法提取银杏叶的RNA,结果表明:抽提的RNA经电泳检测,可见28SrRNA和18SrRNA两条主带;紫外吸收值测量,A260/A280接近2.0;反转录合成的cDNA经RAPD扩增,出现清晰的条带,这些说明提取的RNA纯度高,质量好。此方法简便易行,成本也较低,... 采用CTAB法提取银杏叶的RNA,结果表明:抽提的RNA经电泳检测,可见28SrRNA和18SrRNA两条主带;紫外吸收值测量,A260/A280接近2.0;反转录合成的cDNA经RAPD扩增,出现清晰的条带,这些说明提取的RNA纯度高,质量好。此方法简便易行,成本也较低,适合于富含多糖、多酚植物材料的RNA提取。 展开更多
关键词 银杏叶 rna提取 CTAB
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提取高质量茶树总RNA的方法研究 被引量：28
7
作者 史成颖 宛晓春 +1 位作者 江昌俊 孙俊 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期360-363,共4页
由于茶树富含多糖、多酚,从茶苗组织中尤其是从茶苗的根中提取高质量的RNA较为困难,试用了多种方法都未能获得高质量的RNA。为此,作者借鉴多年生的草本植物RNA提取方法—CTAB法,并在此基础上进行了改进,首次提取茶苗嫩根中的总RNA。电... 由于茶树富含多糖、多酚,从茶苗组织中尤其是从茶苗的根中提取高质量的RNA较为困难,试用了多种方法都未能获得高质量的RNA。为此,作者借鉴多年生的草本植物RNA提取方法—CTAB法,并在此基础上进行了改进,首次提取茶苗嫩根中的总RNA。电泳检测显示,该方法提取的总RNA 28S和18S条带清晰且28S较18S条带亮,紫外光谱分析显示A260/A280的比值为1.93。用于RT-PCR反应,成功克隆了492 bp的谷氨酰胺合成酶基因片段。说明用该方法提取的RNA纯度和完整性好。试用该方法从营养成分丰富的茶籽胚中提取总RNA,效果同样很好。 展开更多
关键词 茶树 嫩根 rna提取 CTAB
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一种从香蕉果实提取高质量RNA的方法 被引量：33
8
作者 庄军平 苏菁 陈维信 《分子植物育种》 CAS CSCD 2006年第1期143-146,共4页
从香蕉果实在中分离高质量的RNA是从分子水平上研究香蕉果实成熟软化过程中相关基因表达的重要前提。实验表明,用已报道的相关RNA的提取方法,即便利用已报道的从其它果实中成功提取出高质量RNA的方法,也不能从香蕉果实中分离出高质量的... 从香蕉果实在中分离高质量的RNA是从分子水平上研究香蕉果实成熟软化过程中相关基因表达的重要前提。实验表明,用已报道的相关RNA的提取方法,即便利用已报道的从其它果实中成功提取出高质量RNA的方法,也不能从香蕉果实中分离出高质量的RNA。这主要是由于香蕉果实富含多糖、多酚和一些其它次生代谢物,在RNA提取过程中这些物质会与RNA共同沉淀,从而影响RNA的产量和质量。到目前尚无商业化的RNA抽提试剂盒适用于香蕉果实RNA的提取。因此,探索出从香蕉果实中提取高质量RNA的方法就具有十分重要的意义。本文所报道的RNA提取的简便方法,可从以香蕉果肉和果皮中成功提取高质量的RNA,产量可达48￣72μg·g-1·FW-1,且整个提取过程可在一天完成;通过测定其A240/260和A260/280的比值表明,该该方法可有效降低RNA提取过程中多糖、酚类物质和其它次级代谢物以及蛋白质的污染,提取方法所提取的RNA纯度较高;在1%琼脂糖凝胶电泳,EB染色后结果表明RNA在整个的提取过程中结构完整,未发生明显降解;利用RT-PCR技术,从所提RNA中成功克隆出了β-半乳糖苷酶基因cDNA片段,这表明其质量完全可满足进一步分子生物学研究的要求。 展开更多
关键词 香蕉果实 rna提取
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一种广泛适用的RNA提取方法 被引量：34
9
作者 淳俊 郑彦峰 +1 位作者 王胜华 陈放 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第5期591-597,共7页
分离提取高质量的RNA是基因表达、调控与基因工程等研究的基础,而RNase、多糖及多酚类物质严重干扰RNA的分离提取过程.现利用硅藻土对RNase的吸附性,结合PVP、高盐及乙二醇丁醚沉淀等处理,建立了一种广泛适用的RNA提取方法.在富含多糖... 分离提取高质量的RNA是基因表达、调控与基因工程等研究的基础,而RNase、多糖及多酚类物质严重干扰RNA的分离提取过程.现利用硅藻土对RNase的吸附性,结合PVP、高盐及乙二醇丁醚沉淀等处理,建立了一种广泛适用的RNA提取方法.在富含多糖的玉米胚乳,富含RNase的动物肝脏,多酚多油脂的银杏、麻疯树以及木霉、酵母等10多种RNA提取困难的动、植物与微生物材料中都提取出完整性好,得率高的RNA.RT-PCR实验表明,提取的RNA能够用于后续的分子生物学研究.硅藻土-苯酚法提取RNA的得率是异硫氰酸胍法的3倍多.此外,将分离提取的总RNA经过LiCl与PEG8000加NaCl沉淀步骤有效地去除了大片段RNA,以水稻Osa-mir-156的成熟序列设计特异引物做茎环RT-PCR,结果证明,富集得到的小RNA可以用于miRNA克隆等后续实验. 展开更多
关键词 硅藻土 rna提取 小rna 乙二醇丁醚
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杏叶片与果实总RNA提取方法研究 被引量：28
10
作者 李晓颖 曹雪 +1 位作者 房经贵 章镇 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2010年第2期152-156,共5页
以杏叶片及幼果为材料,分别从操作耗时、RNA质量和产量等方面比较了CTAB法、改良CTAB法、Trizol法、SDS-苯酚法和改良SDS法5种不同的RNA提取方法。结果表明:5种方法均能从幼嫩叶片中提取到总RNA;经电泳检测,28S rRNA和18S rRNA两条主带... 以杏叶片及幼果为材料,分别从操作耗时、RNA质量和产量等方面比较了CTAB法、改良CTAB法、Trizol法、SDS-苯酚法和改良SDS法5种不同的RNA提取方法。结果表明:5种方法均能从幼嫩叶片中提取到总RNA;经电泳检测,28S rRNA和18S rRNA两条主带清晰,A260/A280均大于1.8;其中以Trizol法提取效果最佳,改良CTAB法次之,产量分别达到了839.25μg/g和395.21μg/g。在果实RNA提取过程中,改良SDS法以及改良CTAB法能有效减少果实RNA的提取中酚类物质和多糖等杂质的影响,获得质量较高的RNA,二者产量分别为352.65μg/g和361.95μg/g。每种方法提取的叶片和果实的RNA经反转录后形成cDNA,并进行RT-PCR扩增,成功扩出看家基因泛素蛋白UBQ片段,说明了RNA质量能够满足文库构建、基因克隆等研究需要。 展开更多
关键词 杏 果实 rna提取 RT-PCR
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一种从花生种子中提取RNA的改进方法 被引量：22
11
作者 王芳 张斌 +2 位作者 单雷 毕玉平 许泽永 《花生学报》 2002年第4期24-26,共3页
花生种子中富含蛋白质、多糖和酚类化合物,从而增加了从中提取RNA的难度。作者通过实验对几种方法做了比较,并对其中的异硫氰酸胍方法稍做改变,结果得到的RNA产率较高,质量好,符合分子生物学实验要求。
关键词 花生种子 rna 提取 改进方法
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番茄叶片总RNA提取方法的比较 被引量：26
12
作者 谭丽丽 燕正民 +2 位作者 徐亚英 杨继峰 王勇 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期29-32,共4页
番茄叶片富含酚类、多糖、蛋白质等次生代谢物质,用普通方法提取番茄叶片总RNA时很难将其去除,试验比较研究了RNA plant Reagent、UNIQ-10柱总RNA抽提试剂盒和改进Trizol三种方法的提取效果。结果表明,改进的Trizol法能从番茄叶片中提... 番茄叶片富含酚类、多糖、蛋白质等次生代谢物质,用普通方法提取番茄叶片总RNA时很难将其去除,试验比较研究了RNA plant Reagent、UNIQ-10柱总RNA抽提试剂盒和改进Trizol三种方法的提取效果。结果表明,改进的Trizol法能从番茄叶片中提取纯度较高的RNA,凝胶电泳显示条带清晰完整,分光光度计检测A260/A280比值为1.88。用该方法提取的番茄叶片总RNA可以用于逆转录、RT-PCR、Northern blot等分子生物学研究。 展开更多
关键词 番茄叶片 rna提取 改进Trizol法
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CTAB法提取中草药材滇紫草细胞的总RNA 被引量：21
13
作者 刘志 杨永华 《生物技术通讯》 CAS 2004年第4期372-373,共2页
介绍一种适合富含次生产物的中草药材滇紫草细胞总RNA的提取方法———CTAB法。采用CTAB作为去污剂,分别用氯仿和水饱和酚反复抽提以及LiCl沉淀以去除蛋白质、碳水化合物和次生代谢物等杂质,最后用纯乙醇沉淀获得RNA。该方法不但能获得... 介绍一种适合富含次生产物的中草药材滇紫草细胞总RNA的提取方法———CTAB法。采用CTAB作为去污剂,分别用氯仿和水饱和酚反复抽提以及LiCl沉淀以去除蛋白质、碳水化合物和次生代谢物等杂质,最后用纯乙醇沉淀获得RNA。该方法不但能获得完整性好和纯度高的总RNA,而且操作简单、快速、成本低廉,对其它富含次生物质的植物特别是中草药材组织总RNA的提取具有借鉴意义。 展开更多
关键词 CTAB 中草药 滇紫草 细胞 总rna
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植物RNA提取方法的研究进展 被引量：21
14
作者 张晓丽 代红军 《北方园艺》 CAS 北大核心 2014年第8期175-178,共4页
高质量的RNA是进行植物分子生物学研究的重要前提,由于植物组织细胞内组成成分的复杂多样性,使得植物组织RNA的提取方法具有多样性。现对已报道的异硫氰酸胍法、苯酚-SDS法、CTAB法、改良CTAB法、Trizol法等RNA提取方法在各种植物组织... 高质量的RNA是进行植物分子生物学研究的重要前提,由于植物组织细胞内组成成分的复杂多样性,使得植物组织RNA的提取方法具有多样性。现对已报道的异硫氰酸胍法、苯酚-SDS法、CTAB法、改良CTAB法、Trizol法等RNA提取方法在各种植物组织中的研究结果进行概括,旨在为进一步开展RNA提取工作提供参考。 展开更多
关键词 rna提取 异硫氰酸胍法 苯酚-SDS法 CTAB法Trizol法 研究进展
原文传递
白桦花芽RNA的快速提取 被引量：15
15
作者 杨传平 姜 静 +1 位作者 那冬辰 魏志刚 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期1-4,共4页
酚类化合物、多糖、蛋白质和未知次级代谢产物,是影响白桦（BetuLa pLatyphyLLa）花芽组织RNA提取的几个主要干扰因素。笔者在以往草本植物DNA和微生物RNA提取方法基础上,提出了提取白桦雄花芽组织RNA的3种方法。
关键词 白桦 花芽 rna 快速提取 酚类化合物 多糖 蛋白质 次级代谢产物
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一种适用于RT-PCR的杉树类植物中总RNA提取的方法 被引量：17
16
作者 李菁芳 黄劭毅 +2 位作者 田仁鹏 张珞珍 方呈祥 《武汉植物学研究》 CSCD 2004年第6期551-556,共6页
杉树类植物含大量的多糖、多酚类物质,这使得此植物的总RNA提取较困难。研究通过比较几种有代表性的提取植物总RNA的方法,建立了一种酸酚法和PEG8000沉淀法相结合的改良的CTAB法。此方法操作简单,使用的试剂均为常规试剂,成本低,能够有... 杉树类植物含大量的多糖、多酚类物质,这使得此植物的总RNA提取较困难。研究通过比较几种有代表性的提取植物总RNA的方法,建立了一种酸酚法和PEG8000沉淀法相结合的改良的CTAB法。此方法操作简单,使用的试剂均为常规试剂,成本低,能够有效去除植物组织中多糖和多酚类等次生物质,从而得到高质量的RNA。使用这种改良的方法制备的总RNA产物对P450基因成功地进行了反转录聚合酶链式反应(reversetrans-criptase-polymerasechainreaction,RT-PCR),证明此方法是一种适用于RT-PCR的杉树类植物组织中总RNA提取的方法。 展开更多
关键词 杉树类植物 rna提取 次生物质 RT—PCR
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不同保存和处理方式对全血标本总RNA提取的影响 被引量：17
17
作者 何松哲 何慧 +2 位作者 陈懿 陈羽 余道军 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2015年第2期224-226,共3页
目的分析全血标本RNA提取的影响因素,并对全血RNA提取条件进行优化。方法收集100例全血标本,混匀后分为低渗红细胞溶解组(A组,50例)和全血直接提取组(B组,50例),利用Trizol试剂提取放置在不同温度、不同保存时间的全血标本总RNA,并采用U... 目的分析全血标本RNA提取的影响因素,并对全血RNA提取条件进行优化。方法收集100例全血标本,混匀后分为低渗红细胞溶解组(A组,50例)和全血直接提取组(B组,50例),利用Trizol试剂提取放置在不同温度、不同保存时间的全血标本总RNA,并采用Ur-2401紫外分光光度计测定其浓度和纯度;另选60例全血标本作为反复冻融组(C组),取不同次数反复冻融的全血标本利用Trizol法直接提取其RNA。结果 A组和B组新鲜标本中所获取的RNA浓度分别为450.0 ng/μL和458.8 ng/μL,37℃保存7 d标本中的RNA浓度分别为374.8 ng/μL和375.2 ng/μL,不同的保存温度与时间均对总RNA浓度(P=0.003、P=0.002)和纯度(P值均为0.011)的差异均有统计学意义,而相同条件下提取的总RNA浓度和纯度的差异无统计学意义(P=0.984、P=0.311);C组全血标本反复冻融的次数与保存时间对总RNA浓度(P=0.002、P=0.001)、纯度(P值均为0.008)差异均有统计学意义,而保存温度对总RNA浓度和纯度差异无统计学意义(P=0.611、P=0.362)。结论不同条件下全血标本中所获取的总RNA浓度有所差异,但在总RNA纯度和成功率方面,低渗破坏红细胞法优于直接全血提取法,反复冻融影响全血RNA提取效率和得率。 展开更多
关键词 外周全血 rna提取 rna浓度 rna纯度
原文传递
棉花高质量RNA的提取及MADS-box基因保守区段的克隆 被引量：16
18
作者 李继刚 郭三堆 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2004年第1期3-7,共5页
研究和探讨了一种可用于高质量棉花总RNA提取的热硼酸法,并用于棉花MADS box基因的RT PCR分析,结果表明,该方法制备的RNA质量较高,克隆得到的基因片段序列与已知MADS box基因序列之间具有较高同源性。
关键词 棉花 rna 提取 MADS-BOX基因 保守区 基因克隆 热硼酸法
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山药组织总RNA提取方法的比较与分析 被引量：18
19
作者 覃芳 王军民 +5 位作者 何海旺 何龙飞 李创珍 韦本辉 何虎翼 甘秀芹 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期755-759,共5页
采用异硫氰酸胍-巯基乙醇联合变性法、Trizol法和CTAB-LiCl法等3种方法,分别对山药叶片和块茎进行总RNA提取效果进行了比较。结果表明,Trizol法难以提取RNA,异硫氰酸胍-巯基乙醇联合变性法提取RNA效果不理想,存在DNA污染,这2种方法不适... 采用异硫氰酸胍-巯基乙醇联合变性法、Trizol法和CTAB-LiCl法等3种方法,分别对山药叶片和块茎进行总RNA提取效果进行了比较。结果表明,Trizol法难以提取RNA,异硫氰酸胍-巯基乙醇联合变性法提取RNA效果不理想,存在DNA污染,这2种方法不适合于富含多糖类物质的山药组织总RNA的提取;CTAB-LiCl法提取叶片和块茎组织总RNA质量高、完整性好、成功率高,可作为山药类植物总RNA提取的首选方法。 展开更多
关键词 山药 rna提取 异硫氰酸胍-巯基乙醇联合变性法 TRIZOL法 CTAB—LiCl法
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一种适用于油菜、大豆、花生、芝麻四种油料作物种子的RNA提取方法 被引量：18
20
作者 孙海波 王智慧 +3 位作者 刘学群 黄军艳 董彩华 刘胜毅 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期353-358,共6页
油料作物种子中,大量油脂、蛋白、酚类物质的存在和易氧化的特点导致RNA提取困难。为了解决这一问题,本研究在商业化RNA提取试剂盒的基础上,通过以下3方面的改进,使之成功应用于油菜、花生、芝麻和大豆的各个时期种子RNA提取和后期的荧... 油料作物种子中,大量油脂、蛋白、酚类物质的存在和易氧化的特点导致RNA提取困难。为了解决这一问题,本研究在商业化RNA提取试剂盒的基础上,通过以下3方面的改进,使之成功应用于油菜、花生、芝麻和大豆的各个时期种子RNA提取和后期的荧光定量分析实验:1)增加抗氧化剂巯基乙醇和PVP;2)根据不同作物的油脂含量调整氯仿的比例;3)改进RNA沉淀方法,加大洗脱液体积后用乙醇沉淀。与常规的CTAB、TRIZOL及文献报道的RNA提取方法比较,本方法提取的RNA更完整、得率更高、纯度更高;所得RNA被成功应用于FAD2基因的荧光定量表达分析,发现了四种作物种子不同发育时期的FAD2基因的表达差异,证明了改良方法的有效性。 展开更多
关键词 rna提取 油料作物 种子 荧光定量 油菜 大豆 花生 芝麻
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