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三七总皂苷抗动脉粥样硬化作用的实验研究 被引量:20
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作者 熊敏琪 崔金刚 +1 位作者 陈瑜 张腾 《中国中医药科技》 CAS 2018年第5期656-660,共5页
目的:探讨三七总皂苷抗动脉粥样硬化的效应。方法:在体动物实验:以Apo E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠为研究对象,喂饲高脂饲料模拟动脉粥样硬化发病过程,将9周龄ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组、PNS低剂量组(50 mg/kg)、PNS中剂量组(100 mg/... 目的:探讨三七总皂苷抗动脉粥样硬化的效应。方法:在体动物实验:以Apo E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠为研究对象,喂饲高脂饲料模拟动脉粥样硬化发病过程,将9周龄ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组、PNS低剂量组(50 mg/kg)、PNS中剂量组(100 mg/kg)、PNS高剂量组(200 mg/kg)。接受溶剂治疗的C57BL/6J小鼠及ApoE^(-/-)小鼠分别作为正常对照及模型对照组,腹腔注射进行干预8周。通过H&E染色、Masson’s trichrome染色和油红O染色分别观察主动脉病理形态学改变、血管纤维化及脂质沉积。体外细胞学实验:用LPS诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞产生炎症反应和氧化应激,用不同浓度的PNS进行干预(50、100、200、400 mg/L),采用Real Time-PCR测定RAW264.7细胞炎症相关因子(IL1-β、IL-6、TNF-α和ICAM1)和氧化应激相关基因(Nrf2、HO-1、SOD1和SOD2)的表达水平。结果:主动脉H&E染色、油红O染色和Masson’s trichrome染色结果显示,与模型组比较,PNS低、中、高剂量均能不同程度减小斑块面积、减少斑块上的脂质沉积和减小斑块纤维化面积(P<0.05)。Real timePCR结果显示:与空白组对比,模型组的炎症相关基因IL-1β、IL-6、TNF-α和ICAM1的表达显著上调(P<0.01),氧化应激相关基因Nrf2、HO-1和SOD1的表达无差异,仅SOD2的表达有反应性上调(P<0.01);与模型组对比,PNS各浓度均能显著下调IL-1β、IL-6、TNF-α和ICAM1的表达(P<0.01),不同程度上调Nrf2、HO-1、SOD1和SOD2的表达(P<0.05或P<0.01)。结论:三七总皂苷具有体内抗动脉粥样硬化斑块形成作用和显著的体外抗炎、抗氧化作用。 展开更多
关键词 三七总皂苷 动脉粥样硬化 炎症因子 氧化应激 小鼠 巨噬细胞 体内实验 体外实验
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靛玉红、色胺酮对LPS诱导RAW264.7炎症细胞模型的抗炎作用研究 被引量:15
2
作者 刘丽娟 王允亮 +2 位作者 许树青 魏仕兵 李军祥 《世界中西医结合杂志》 2015年第8期1069-1072,共4页
目的研究靛玉红、色胺酮对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7炎症细胞的抗炎作用。方法以10μg/ml LPS刺激RAW264.7细胞24 h诱导UC体外炎症模型,以MTT法检测靛玉红、色胺酮的对正常细胞的作用,以酶联免疫吸附法(ELISA)研究靛玉红、色胺酮在直... 目的研究靛玉红、色胺酮对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7炎症细胞的抗炎作用。方法以10μg/ml LPS刺激RAW264.7细胞24 h诱导UC体外炎症模型,以MTT法检测靛玉红、色胺酮的对正常细胞的作用,以酶联免疫吸附法(ELISA)研究靛玉红、色胺酮在直接干预、预防干预2种模式下对细胞培养液白细胞介素-6(IL-6)/肿瘤坏死因子(TNF-α)浓度的影响。结果模型组中IL-6/TNF-α浓度较正常组均有明显升高(P<0.01);靛玉红直接干预时,细胞培养液IL-6(5.0、10.0μmol/L)/TNF-α(2.5、5.0、10.0μmol/L)均较模型组有明显下降(P<0.05);色胺酮直接干预时,细胞培养液IL-6(0.8、8.0μmol/L)/TNF-α(0.8μmol/L)均较模型组有明显下降(P<0.01,P<0.05),预防作用模式下,细胞培养液IL-6(0.08、0.8μmol/L)较模型组有明显下降(P<0.05)。结论靛玉红、色胺酮有一定的体外抗炎作用,抗炎模式以直接干预为主,抗炎机制可能为下调IL-6/TNF-α的表达,可用于防治溃疡性结肠炎。 展开更多
关键词 溃疡性结肠炎 青黛 raw264.7 细胞因子 实验研究
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九种黔产植物多糖的体外免疫调节活性研究 被引量:8
3
作者 程新星 孙黔云 +2 位作者 杨娟 杨付梅 乙引 《贵州师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2012年第4期5-8,共4页
目的:评价9种黔产植物多糖的免疫调节作用。方法制备脾淋巴细胞悬液,分别将样品与LPS或ConA共同作用于脾淋巴细胞,用MTT法测定淋巴细胞的增殖情况。将多糖作用于RAW264.7细胞,用ELISA测定细胞上清中TNF-α含量,判断样品对RAW264.7细胞... 目的:评价9种黔产植物多糖的免疫调节作用。方法制备脾淋巴细胞悬液,分别将样品与LPS或ConA共同作用于脾淋巴细胞,用MTT法测定淋巴细胞的增殖情况。将多糖作用于RAW264.7细胞,用ELISA测定细胞上清中TNF-α含量,判断样品对RAW264.7细胞的活化情况。结果:土党参多糖、薯蓣多糖、竹根假万寿竹多糖对LPS刺激B淋巴细胞增殖有促进作用。楮实多糖对ConA刺激T淋巴细胞的增殖有促进作用。轮叶沙参多糖、绞股蓝多糖、党参多糖、金樱子多糖对T、B淋巴细胞增殖均有促进作用。而绞股蓝多糖、薯蓣多糖、金樱子多糖、楮实多糖、竹根假万寿竹多糖能诱导RAW264.7细胞TNF-α表达上调。结论:九种黔产植物多糖在促淋巴细胞增殖和巨噬细胞活化中表现出明显差异,其中绞股蓝多糖有较好的免疫增强活性。 展开更多
关键词 多糖 淋巴细胞增殖 巨噬细胞活化 免疫调节 raw264.7细胞
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核仁素对LPS诱导的白细胞介素1β释放的影响 被引量:7
4
作者 张彬 肖献忠 +2 位作者 张文辉 蒋磊 蒋碧梅 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1796-1800,共5页
目的:探讨核仁素在脂多糖(LPS)所致炎症模型中的表达及其对LPS所致的白细胞介素1β(IL-1β)释放的影响。方法:小鼠腹腔注射LPS(15mg/kg)建立内毒素血症模型,LPS(500μg/L)处理建立RAW264.7细胞炎症模型,采用免疫印迹观察核仁素在炎症模... 目的:探讨核仁素在脂多糖(LPS)所致炎症模型中的表达及其对LPS所致的白细胞介素1β(IL-1β)释放的影响。方法:小鼠腹腔注射LPS(15mg/kg)建立内毒素血症模型,LPS(500μg/L)处理建立RAW264.7细胞炎症模型,采用免疫印迹观察核仁素在炎症模型中的表达。利用瞬时转染技术抑制或增加RAW264.7细胞内核仁素表达后,LPS处理,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养基中IL-1β的含量。结果:在内毒素血症小鼠的肺组织和RAW264.7细胞炎症模型中,110kD核仁素表达上调,80kD核仁素片段表达减少。与转空载体对照组比较,核仁素过表达组LPS所致的IL-1β释放明显增加(P<0.05);与正常细胞组和随机寡核苷酸组比较,核仁素低表达组LPS所致的IL-1β释放明显减少(P<0.05)。结论:在LPS所致的炎症模型中,110kD核仁素表达上调,80kD核仁素片段表达减少;核仁素促进LPS所致的IL-1β释放。 展开更多
关键词 核仁素 LPS类 白细胞介素1Β raw264.7细胞 小鼠
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槲皮苷抑制RANKL诱导的破骨细胞形成及骨吸收 被引量:7
5
作者 张健 庄玉明 +2 位作者 尚宝华 孙宏伟 王玉 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第23期2180-2185,共6页
[目的]探讨槲皮苷对核因子κB受体激动剂配体(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)诱导的破骨细胞形成及骨吸收功能的影响。[方法]通过CCK-8法观察不同浓度槲皮苷(0~800μmol/L)干预不同时间(48 h、96 h)... [目的]探讨槲皮苷对核因子κB受体激动剂配体(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)诱导的破骨细胞形成及骨吸收功能的影响。[方法]通过CCK-8法观察不同浓度槲皮苷(0~800μmol/L)干预不同时间(48 h、96 h)对RAW 264.7细胞的生存影响,确定合适的体外用药浓度;利用体外RANKL诱导RAW 264.7细胞形成破骨细胞体系,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色计数评价槲皮苷(200、400μmol/L)对破骨细胞形成和生存的影响;通过骨片吸收实验对骨凹陷和骨吸收面积统计分析评价槲皮苷(200、400μmol/L)3 d内对成熟破骨细胞骨吸收功能的影响;釆用实时定量(Real-Time)PCR技术,检测槲皮苷(200、400μmol/L)对RANKL诱导的破骨细胞特异性基因NFATc1、TRAP和c-fos表达水平的影响。[结果]细胞生存实验发现槲皮苷干预96 h后,槲皮苷(0~800μmol/L)对RAW 264.7细胞4 d内生存未发现显著影响;通过TRAP染色发现200、400μmol/L槲皮苷能显著抑制体外RANKL诱导的破骨细胞形成;通过骨片吸收实验发现200、400μmol/L槲皮苷3d内能显著降低骨吸收面积,提示其抑制成熟破骨细胞骨吸收功能;同时,槲皮苷能呈剂量依赖性抑制RANKL诱导活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)c1、TRAP和c-fos基因表达。[结论]槲皮苷通过抑制NFATc1,TRAP和c-fos的表达,来抑制体外RANKL诱导的破骨细胞形成和骨吸收功能,是一种潜在治疗骨质疏松药物。 展开更多
关键词 槲皮苷 raw 264.7细胞 破骨细胞形成 破骨细胞骨吸收 骨质疏松
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IL-6对RAW264.7细胞成熟分化的体外实验研究 被引量:7
6
作者 王信 张怡 +4 位作者 陈萍 季文军 马亚萍 敖俊 张军 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期62-66,共5页
目的探讨研究白介素-6(Interleukin-6,IL-6)对核因子NF-κB受体活化因子配体(Receptor activator of nuclear kappa B ligand,RANKL)及对破骨前体细胞的成熟分化和溶骨效应。方法破骨前体细胞RAW264.7细胞经50ng/mL RANKL诱导1 d后将其... 目的探讨研究白介素-6(Interleukin-6,IL-6)对核因子NF-κB受体活化因子配体(Receptor activator of nuclear kappa B ligand,RANKL)及对破骨前体细胞的成熟分化和溶骨效应。方法破骨前体细胞RAW264.7细胞经50ng/mL RANKL诱导1 d后将其分为:1、空白对照组(RANKL+PBS)2、低浓度IL-6组(RANKL+50ng/mL IL-6)3、中浓度IL-6组(RANKL+100ng/mL IL-6)4、高浓度IL-6组(RANKL+150ng/mL IL-6)。连续培养9 d后,进行HE染色检测成熟破骨细胞生成量;通过抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate resistant acid phosphatase, TRAP)染色法观察TRAP阳性多核细胞的情况;运用扫描电镜检测破骨细胞在骨片上的骨吸收陷窝形成情况。结果 HE染色中,成熟破骨细胞生成量中、高浓度IL-6组明显少于低浓度IL-6组(P<0.05),低浓度IL-6组和空白对照组间无明显差别(P>0.05)。②通过TRAP染色后,经染色阳性区域面积与视野面积的百分比计算,中、高浓度IL-6组与明显少于低浓度和空白对照组(P<0.05)。③扫描电镜观察发现骨吸收陷窝面积与视野面积的百分比随着IL-6浓度的增高,相比空白对照组有显著减少,且高浓度IL-6组中陷窝形成最少(P<0.05)。结论 IL-6能直接作用于经RANKL诱导的RAW264.7细胞,能明显抑制破骨细胞激活分化,并降低破骨细胞所致的骨吸收效应。当IL-6浓度超过50ng/mL时,其抑制破骨细胞的骨吸收效应更加明显。 展开更多
关键词 破骨细胞 骨质疏松 raw264.7细胞 RANKL IL-6
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In vitro anti-inflammatory effects of different solution fractions of ethanol extract from Melilotus suaveolens Ledeb 被引量:4
7
作者 ZHANG Xiao-yu TAO Jun-yan +5 位作者 ZHAO Lei HUANG Zhi-jun XIONG Fu-liang ZHANG Shu-ling LI Chong-ming XIAO Fei 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2007年第22期1992-1998,共7页
Background Melilotus suaveolens Ledeb (M. suaveolens Ledeb) has long been used as a folk medicine in inflammation-related therapy. This study was undertaken to determine the anti-inflammatory effect of the plant. Me... Background Melilotus suaveolens Ledeb (M. suaveolens Ledeb) has long been used as a folk medicine in inflammation-related therapy. This study was undertaken to determine the anti-inflammatory effect of the plant. Methods Petroleum ether fraction, ethyl acetate fraction, n-butanol fraction, aqueous fraction were obtained from ethanol extract of M. suaveolens Ledeb and evaluated by high performance liquid chromatography (HPLC). While dexamethasone (DM) was used as a positive control, the effects of different solution fractions of ethanol extract on tumor necrosis factor α (TNF-α) mRNA, cyclooxygenase 2 (COX-2) mRNA, COX-2 and nuclear factor KB (NF-KB) of LPS-stimulated RAW 264.7 cells were studied by real-time PCR, Westem blot analysis and immunocytochemical assay, respectively. Results Coumarin was one of the main ingredients in different solution fractions of ethanol extract except the aqueous fraction with no inflammatory effect. The petroleum ether fraction, ethyl acetate fraction and n-butanol fraction of ethanol extract could inhibit the production of TNF-α mRNA, COX-2 mRNA and NF-KB to some extent. Conclusions Different solution fractions of ethanol extract from M. suaveolens Ledeb had similar anti-inflammatory effect as did dexamethasone except the aqueous fraction. Coumarin was likely to be essential to the anti-inflammatory effect, and other ingredients might attribute to their different anti-inflammatory effects from the HPLC fingerprint. 展开更多
关键词 Melilotus suaveolens Ledeb high performance liquid chromatography fingerprint ANTI-INFLAMMATORY raw 264. 7 cells
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雷公藤次碱对脂多糖诱导RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响 被引量:3
8
作者 杨丽娜 刘志宏 +1 位作者 张晶 宋洪涛 《中国医院药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第14期1164-1167,共4页
目的 观察雷公藤次碱(wilforine)对脂多糖诱导的小鼠单核/巨噬细胞系RAW264.7细胞炎症模型中炎症因子的影响。方法 采用LPS刺激生长良好的RAW264.7细胞,建立细胞炎症模型。以CCK-8法检测不同浓度雷公藤次碱对RAW264.7细胞的毒性作用;... 目的 观察雷公藤次碱(wilforine)对脂多糖诱导的小鼠单核/巨噬细胞系RAW264.7细胞炎症模型中炎症因子的影响。方法 采用LPS刺激生长良好的RAW264.7细胞,建立细胞炎症模型。以CCK-8法检测不同浓度雷公藤次碱对RAW264.7细胞的毒性作用;以酶联免疫吸附试验检测细胞上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)的含量;以硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)的含量。结果 雷公藤次碱在11.5-115 μmolL-1的浓度范围内,对RAW264.7细胞无毒性作用(p〉0.05);脂多糖可以明显诱导RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-6和NO(p〈0.01);雷公藤次碱可使TNF-α、IL-6和NO的释放受到抑制(p〈0.05,p〈0.01)。结论 雷公藤次碱可以抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应,其抗炎作用与减少炎性细胞因子TNF-α、IL-6和NO的产生有关。 展开更多
关键词 雷公藤次碱 脂多糖 raw264 7细胞 肿瘤坏死因子-Α 白介素-6 一氧化氮
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氧化应激活化RAW264.7巨噬细胞对MC3T3-E1成骨细胞迁移、增殖及成骨基因表达影响的实验研究 被引量:3
9
作者 彭建强 易志新 +7 位作者 武明鑫 黄爱军 林昆 靳松 李亮平 黄胜 罗嘉全 邹学农 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1146-1152,共7页
目的探索氧化应激活化RAW264.7巨噬细胞对MC3T3-E1成骨细胞迁移、增殖及成骨基因表达的影响。方法取MC3T3-E1细胞系及RAW264.7细胞系,分别培养传至第7代进行实验。利用不同浓度(0、25、50、100μmol/L)H_2O_2刺激RAW264.7细胞,MTS检测培... 目的探索氧化应激活化RAW264.7巨噬细胞对MC3T3-E1成骨细胞迁移、增殖及成骨基因表达的影响。方法取MC3T3-E1细胞系及RAW264.7细胞系,分别培养传至第7代进行实验。利用不同浓度(0、25、50、100μmol/L)H_2O_2刺激RAW264.7细胞,MTS检测培养1、3、6 h后细胞增殖率,采用超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)检测试剂盒检测培养1 h时细胞内SOD含量,筛选H2O2引起RAW264.7细胞氧化应激的最佳浓度和作用时间,并对应收集RAW264.7细胞(加或不加H_2O_2处理)24 h上清液。取第7代MC3T3-E1细胞,分别以100μL无血清DMEM培养基(A组)、未氧化应激RAW264.7细胞上清液(B组)、氧化应激RAW264.7细胞上清液(C组)培养,采用MTS法检测细胞增殖情况,行划痕实验检测细胞迁移能力;另取细胞分为4组,空白对照组,以完全培养基培养;阳性对照组,以含50μg/m L维生素C及10 nmol/L的β甘油磷酸钠的完全培养基进行成骨诱导培养;正常对照组,以含50μg/m L维生素C及10 nmol/L的β甘油磷酸钠的完全培养基及未氧化应激RAW264.7细胞上清液培养;实验组,以含50μg/m L维生素C及10 nmol/L的β甘油磷酸钠的完全培养基及氧化应激RAW264.7细胞上清液培养。培养3、7、14 d,RT-PCR检测细胞内成骨相关基因ALP、Runx2、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、Ⅰ型胶原蛋白(collagen typeⅠ,COL-Ⅰ)、骨钙素(osteocalcin,OC)、骨唾液酸蛋白(bone sialoprotein,BSP)表达水平。结果 MTS和SOD检测结果显示:25μmol/L H_2O_2刺激1 h为构建RAW264.7细胞氧化应激模型最佳浓度和作用时间。细胞生长检测显示:1、2、3 d B、C组细胞增殖率显著高于A组(P<0.05),C组低于B组,其中2、3 d时组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。划痕实验显示12 h时B、C组MC3T3-E1细胞迁移显著快于A组,C组快于B组,细胞迁移距离比较差异有统计学意义(P<0.05);24 h时B、C组划痕已被细胞爬满。除3 d外,实验组各时间点ALP、Runx2、OC、BSP m RNA相对表 展开更多
关键词 氧化应激 H2O2 MC3T3-E1细胞 raw264.7细胞 成骨分化
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结核分枝杆菌Rv2626c蛋白对RAW264.7细胞凋亡的影响 被引量:3
10
作者 孟露萍 史梦婷 +6 位作者 包海洋 付强 史慧君 王慧勤 乔军 张辉 陈创夫 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第4期892-898,共7页
试验旨在研究结核分枝杆菌Rv2626c蛋白对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞凋亡的影响。根据GenBank数据库中结核分枝杆菌Rv2626c基因序列设计引物,并以结核分枝杆菌国际标准株H37Rv cDNA为模板,PCR扩增Rv2626c基因并克隆至慢病毒表达载体pLEX-E... 试验旨在研究结核分枝杆菌Rv2626c蛋白对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞凋亡的影响。根据GenBank数据库中结核分枝杆菌Rv2626c基因序列设计引物,并以结核分枝杆菌国际标准株H37Rv cDNA为模板,PCR扩增Rv2626c基因并克隆至慢病毒表达载体pLEX-EGFP中,包装慢病毒并感染RAW264.7细胞,使用Western blotting和流式细胞仪技术检测Rv2626c蛋白表达水平和RAW264.7细胞凋亡率变化。结果显示,成功构建慢病毒表达载体pLEX-EGFP-Rv2626c;成功包装慢病毒并感染RAW264.7细胞;Rv2626c蛋白在RAW264.7细胞中高水平表达显著促进了细胞凋亡。本试验结果表明,在RAW264.7细胞中过表达结核分枝杆菌Rv2626c蛋白能显著性增加其凋亡水平。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 Rv2626c raw264.7细胞 凋亡
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地拉罗司通过NF-κB信号抑制小鼠单核细胞RAW264.7向破骨细胞分化 被引量:3
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作者 赵国阳 程千 +3 位作者 王波 王亮 张鹏 徐又佳 《中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志》 2016年第2期149-156,共8页
目的探讨地拉罗司(deferasirox,DFS)体外对小鼠单核细胞RAW264.7向破骨细胞分化的影响及相关机制。方法体外培养小鼠单核细胞RAW264.7,在核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)的作用下诱导分化为破骨... 目的探讨地拉罗司(deferasirox,DFS)体外对小鼠单核细胞RAW264.7向破骨细胞分化的影响及相关机制。方法体外培养小鼠单核细胞RAW264.7,在核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)的作用下诱导分化为破骨细胞,并使用不同浓度DFS(0、5、10、20μmol/L)进行干预,用CCK-8法检测细胞的增生活性,抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色法观察TRAP阳性破骨细胞的形态并计数,实时定量PCR法检测细胞转录因子c-Fos、转录因子活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cell c1,NFATc-1)和组织蛋白酶K(cathepsin K,CTK)mRNA的表达,双荧光素酶报告基因系统检测核转录因子κB(nuclear transcription factor kappa B,NF-κB)报告基因的表达,蛋白免疫印迹(Western blotting)法分别检测细胞质蛋白、核蛋白NF-κB P65的表达。结果 DFS 0、5、10、20μmol/L组TRAP染色阳性的数目分别为63.67±3.78、55.33±3.21、34.00±5.00、16.00±4.58,各浓度组组间比较,差异有统计学意义(P<0.05),提示DFS在实验浓度围内可减少RANKL诱导的RAW264.7细胞TRAP染色阳性的数目;DFS 0、5、10、20μmol/L组c-Fos mRNA表达量分别为1.83±0.11、1.46±0.13、0.88±0.13、0.30±0.09,各浓度组组间比较,差异有统计学意义(P<0.05),NFATc-1 mRNA表达量分别为4.09±0.20、3.21±0.22、2.28±0.23、1.47±0.22,各浓度组组间比较,差异有统计学意义(P<0.05),CTK mRNA表达量分别为3.51±0.08、3.21±0.19、2.55±0.22、1.50±0.19,各浓度组组间比较,差异有统计学意义(P<0.05),以上结果提示DFS在实验浓度围内可下调c-Fos、NFATc-1、CTK mRNA的表达;在RANKL的基础上加入DFS后NF-κB报告基因的表达量为0.119±0.019,与RANKL组0.202±0.017比较明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),提示DFS可抑制RAW264.7细胞NF-κB报告基因的表达;在RANKL的基础上加入DFS后细胞质内NF-κB P65蛋白表达量为0.56±0.08,与RANKL组0.42±0.09比较明� 展开更多
关键词 地拉罗司 raw264.7细胞 核转录因子ΚB 骨质疏松
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辐射诱导对小鼠巨噬细胞钙结合蛋白S100A8表达及调控影响的初步研究 被引量:2
12
作者 丛悦 饶亚岚 +6 位作者 陈肖华 董波 李峰生 王治东 高荣莲 高玲 罗庆良 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期580-582,共3页
目的探讨辐射诱导后小鼠巨噬细胞中钙结合蛋白S100A8 mRNA的表达情况及其调控机制。方法体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,按处置方法不同分为4组:A组正常培养48h;B组经10Gy射线照射后培养48h;C组用5g/ml LPS培养24h后,更换新鲜培养基继续... 目的探讨辐射诱导后小鼠巨噬细胞中钙结合蛋白S100A8 mRNA的表达情况及其调控机制。方法体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,按处置方法不同分为4组:A组正常培养48h;B组经10Gy射线照射后培养48h;C组用5g/ml LPS培养24h后,更换新鲜培养基继续培养24h;D组经10Gy射线照射后培养24h,然后添加5g/ml LPS继续培养24h。采用RT-PCR及定量PCR方法检测各组细胞S100A8 mRNA表达的变化。分别采用H2O2和喜树碱处理细胞,定量PCR检测S100A8 mRNA表达的变化。构建上游5′端系列报告基因表达载体并转染细胞,采用双荧光素酶法检测报告基因的表达水平。结果经γ射线或LPS刺激后,RAW264.7细胞S100A mRNA表达明显增加,二者联合作用后增加更为明显(P<0.05);H2O2处理后S100A8 mRNA表达增加,而喜树碱处理后其表达没有明显变化。单独经γ射线或LPS刺激后,报告基因的表达无明显变化,而二者联合作用后报告基因表达明显增加(P<0.05)。结论辐射诱导可促进RAW264.7细胞中钙结合蛋白S100A8 mRNA的表达。 展开更多
关键词 辐射效应 raw264.7细胞 基因 S100A8
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LPS影响p38蛋白在单核细胞内定位 被引量:1
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作者 张琳 刘怒云 +2 位作者 姜勇 李庆林 张璐 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1212-1215,共4页
目的:探讨LPS作用下p38蛋白激酶激活的动力学特点及其在细胞内超微结构中的定位。方法:应用激酶活性测定、胶体金标记的免疫电镜技术观察LPS刺激前后p38蛋白激酶的动力学特点及在单核细胞株Raw264.7中的分布特征。结果:动力学检测结果显... 目的:探讨LPS作用下p38蛋白激酶激活的动力学特点及其在细胞内超微结构中的定位。方法:应用激酶活性测定、胶体金标记的免疫电镜技术观察LPS刺激前后p38蛋白激酶的动力学特点及在单核细胞株Raw264.7中的分布特征。结果:动力学检测结果显示,LPS作用后15min,p38磷酸化活性明显升高,30min达到高峰,2h达基线水平;p38在LPS浓度为100μg/L时达最大激活效应。超微定位结果显示,未受刺激的及EGF刺激的细胞,p38在胞浆和胞核中金颗粒呈弥散性分布,金颗粒弥散在细胞的各个部分,如细胞质中线粒体、内质网、溶酶体;单核细胞株受到LPS刺激后,细胞核区的金颗粒明显增多,而胞浆区域的金颗粒显著减少。结论:单核细胞株Raw264.7受LPS刺激后,其p38蛋白激酶由胞浆移位到胞核。 展开更多
关键词 脂多糖类 P38激酶 raw264.7细胞
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锌依赖的金属蛋白酶1促进巨噬细胞凋亡 被引量:2
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作者 李鹏 何永林 +1 位作者 张继明 方陈城 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1585-1587,1592,共4页
目的构建锌依赖的金属蛋白酶1(zmp1)基因的真核表达质粒,探讨其对巨噬细胞凋亡的影响。方法以卡介苗(BCG)基因组DNA为模板,采用PCR法扩增zmp1基因;克隆到真核表达质粒p EGFP-N1的多克隆位点中,构建真核表达质粒p EGFP-N1-zmp1并转染RAW2... 目的构建锌依赖的金属蛋白酶1(zmp1)基因的真核表达质粒,探讨其对巨噬细胞凋亡的影响。方法以卡介苗(BCG)基因组DNA为模板,采用PCR法扩增zmp1基因;克隆到真核表达质粒p EGFP-N1的多克隆位点中,构建真核表达质粒p EGFP-N1-zmp1并转染RAW264.7细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,实时定量PCR(qRT-PCR)检测zmp1 mRNA的水平;藻红蛋白标记的膜联素Ⅴ/7-氨基放线菌素D(annexinⅤ-PE/7-AAD)双染色结合流式细胞术检测Zmp1蛋白对细胞凋亡影响。结果扩增出zmp1基因;真核表达质粒经过XhoⅠ和Bam HⅠ双酶切及基因测序鉴定构建成功;转染细胞24 h后,经荧光倒置显微镜观察到绿色荧光;qRT-PCR结果显示转染p EGFP-N1-zmp1的RAW264.7细胞zmp1 mRNA的表达显著升高;转染后48 h,细胞早期凋亡率有所增加。结论在RAW264.7细胞中成功表达了Zmp1并能促进巨噬细胞凋亡。 展开更多
关键词 卡介苗 锌依赖的金属蛋白酶1(Zmp1) 真核表达 raw264.7细胞 细胞凋亡
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当归补血汤对ox—LDL激活RAW264.7细胞核转录因子.KBp65蛋白表达的影响 被引量:2
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作者 孙娟 黄水清 +2 位作者 马文静 孙璐 乐智卿 《北京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期608-610,648,F0003,共5页
目的通过当归补血汤对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)激活单核细胞核转录因子-κBp65(NF-κBp65)信号转导通路的作用研究,探讨当归补血汤早期阻断动脉粥样硬化病变发展进程的可能性及其机理。方法新西兰大耳白兔随机分为对照血清组、含药血清... 目的通过当归补血汤对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)激活单核细胞核转录因子-κBp65(NF-κBp65)信号转导通路的作用研究,探讨当归补血汤早期阻断动脉粥样硬化病变发展进程的可能性及其机理。方法新西兰大耳白兔随机分为对照血清组、含药血清组,分别灌胃生理盐水和当归补血汤药液制备血清。将RAW264.7细胞悬液接种于培养瓶中,培养24 h,分为空白对照组、ox-LDL组、抑制剂组、含药血清组,除空白对照组外其余各组均加入100 mg/L ox-LDL刺激细胞。孵育4 h,收集细胞。免疫组化法检测NF-κBp65的表达,免疫印迹法检测RAW264.7细胞中NF-κBp65的蛋白活化量。结果ox- LDL组细胞浆和核内可见大量棕黄色阳性颗粒,含药血清组棕黄色阳性颗粒较少;ox-国LDL组蛋白条带灰度比值为1.288 3±0.013 9,含药血清组为0.918 9±0.015 3,与ox-LDL组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论当归补血汤可下调经ox-LDL刺激后RAW264.7细胞中NF-κBp65的蛋白表达及活化,因此阻断NF-κB信号转导通路可能是当归补血汤抗动脉粥样硬化的作用机理之一。 展开更多
关键词 当归补血汤 raw264.7细胞 核转录因子-κBp65 氧化低密度脂蛋白
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羧胺三唑对脂多糖诱导的RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响 被引量:1
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作者 朱蕾 陈玮 +7 位作者 孙瑞雪 于晓丽 郭磊 罗丽丰 武丹威 李娟 叶菜英 张德昌 《中华临床医师杂志(电子版)》 CAS 2013年第9期105-108,共4页
目的研究羧胺三唑对脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症模型中炎症因子的影响。方法脂多糖(1μg/ml)刺激生长良好的RAW264.7细胞,建立细胞炎症模型,并用不同浓度羧胺三唑处理。CCK-8法检测羧胺三唑对RAW264.7细胞的毒性作用,ELISA法检测细胞... 目的研究羧胺三唑对脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症模型中炎症因子的影响。方法脂多糖(1μg/ml)刺激生长良好的RAW264.7细胞,建立细胞炎症模型,并用不同浓度羧胺三唑处理。CCK-8法检测羧胺三唑对RAW264.7细胞的毒性作用,ELISA法检测细胞上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6含量,分光光度法检测一氧化氮(NO)含量。结果羧胺三唑在2.5~40μmol/L的浓度范围内对RAW264.7细胞无毒性作用(P>0.05)。脂多糖可以明显诱导RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6和NO(P<0.01),10、20、40μmol/L的羧胺三唑能够显著抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞释放TNF-α、IL-6和NO的水平(P<0.05和P<0.01),20、40μmol/L的羧胺三唑能够抑制脂多糖诱导的IL-1β的释放(P<0.01)。结论羧胺三唑可以抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症反应,其抗炎作用与减少炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6和NO有关。 展开更多
关键词 脂多糖类 一氧化氮 细胞因子类 羧胺三唑 raw264 7细胞
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胍丁胺对脂多糖诱导RAW264.7细胞氧化应激损伤的保护作用 被引量:1
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作者 侯凤艳 罗莉 +5 位作者 朱俊宇 康文渊 范霞 柴鉴深 卢中秋 梁华平 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期949-953,共5页
目的探讨胍丁胺(agmatine,AGM)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7氧化应激的抑制作用及其机制。方法 RAW264.7细胞经LPS(10μg/m L)刺激发生氧化应激,同时AGM(1 mmol/L)对其进行干预。分为对照组、LPS组、LP... 目的探讨胍丁胺(agmatine,AGM)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7氧化应激的抑制作用及其机制。方法 RAW264.7细胞经LPS(10μg/m L)刺激发生氧化应激,同时AGM(1 mmol/L)对其进行干预。分为对照组、LPS组、LPS+AGM组、AGM组。药物作用24 h,以2,7-二氢二氯荧光素二乙酸酯(2',7'-dichlorofluoresce in diacetate,DCFH-DA)为荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;Griess法检测细胞内一氧化氮(NO)水平;Western blot检测细胞内的iNOS蛋白及细胞质细胞核内Nrf2蛋白表达;RT-PCR检测Nrf2下游抗氧化酶血红素氧合酶(heme oxygenase-1,HO-1)mRNA的表达。结果与对照组相比,LPS可显著增加RAW264.7细胞中ROS、NO以及iNOS蛋白水平,而AGM干预后上述指标含量均明显降低(P<0.05)。AGM干预组中细胞核的Nrf2表达及其下游分子HO-1 mRNA表达水平较LPS单独刺激组显著升高,表明Nrf2信号通路在AGM的作用下被活化。结论 AGM可通过活化转录因子Nrf2促进抗氧化酶HO-1的表达,进而减轻细胞内的氧化应激损伤。 展开更多
关键词 胍丁胺 raw264.7细胞 氧化应激 NRF2
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靶向高迁移率族蛋白1基因的高效RNA干扰序列的筛选
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作者 李小凤 夏云 +1 位作者 苏小燕 王慧娟 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第4期437-440,共4页
目的筛选靶向晚期炎症因子高迁移率族蛋白1(High mobility group box 1 protein,HMGB1)基因的高效RNA干扰(siRNA)序列,并检测其体外生物学效应。方法选择针对HMGB1基因mRNA的3条不同序列,用T7体外转录系统合成3条siRNA,转染RAW264.7细胞... 目的筛选靶向晚期炎症因子高迁移率族蛋白1(High mobility group box 1 protein,HMGB1)基因的高效RNA干扰(siRNA)序列,并检测其体外生物学效应。方法选择针对HMGB1基因mRNA的3条不同序列,用T7体外转录系统合成3条siRNA,转染RAW264.7细胞,6 h后,加入500 ng/ml脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)分别刺激24、48 h,另设单纯LPS刺激组和只加培养液的对照组。采用RT-PCR检测各组细胞中HMGB1基因mRNA的转录水平,ELISA检测细胞培养上清液中HMGB1的含量。结果体外合成的HMGB1 siRNA1~3经琼脂糖凝胶电泳分析,均可见21 bp的RNA片段;经LPS刺激24和48 h,RAW264.7细胞中HMGB1基因mRMA的转录水平和细胞培养上清液中HMGB1的含量与对照组相比均显著升高,3条HMGB1 siRNA均能抑制细胞中HMGB1基因mRNA的转录水平,并减少细胞培养上清液中HMGB1的含量,其中以HMGB1siRNA1的效果最为明显。结论 LPS可刺激RAW264.7细胞释放大量HMGB1,同时增加细胞中mRNA的转录水平;HMGB1siRNA能有效降低HMGB1蛋白和mRNA水平,有望成为控制晚期炎症发展的新的治疗手段。 展开更多
关键词 HMGB1蛋白质 RNA干扰 raw264.7细胞
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重楼提取液对小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖的影响
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作者 刘友 姜树原 +2 位作者 刘晓蕾 邵国 周卫华 《包头医学院学报》 CAS 2016年第10期1-2,共2页
目的:观察重楼提取液对小鼠巨噬细胞RAW 264.7增殖的影响。方法:采用不同浓度(0μL/m L、1μL/m L、10μL/m L、50μL/m L、100μL/m L)的重楼提取液,作用于体外培养的小鼠巨噬细胞RAW264.7,使用倒置显微镜观察细胞形态的变化;通过四唑... 目的:观察重楼提取液对小鼠巨噬细胞RAW 264.7增殖的影响。方法:采用不同浓度(0μL/m L、1μL/m L、10μL/m L、50μL/m L、100μL/m L)的重楼提取液,作用于体外培养的小鼠巨噬细胞RAW264.7,使用倒置显微镜观察细胞形态的变化;通过四唑盐比色法检测小鼠巨噬细胞RAW264.7的增殖情况。结果:与阴性对照组相比,作用24 h后,50μL/m L、100μL/m L重楼提取液均能抑制RAW264.7细胞的增殖;作用48 h后,5μL/m L、10μL/m L、50μL/m L、100μL/m L均能抑制RAW264.7细胞的增殖,并且具有时间及浓度依赖性,其抑制效果在100μL/m L作用48 h时最好。结论:高浓度重楼提取液抑制细胞增殖,细胞接触变松,密度降低,贴壁能力减弱,可见较长伪足,生长状态差。 展开更多
关键词 重楼提取液 小鼠巨噬细胞raw264.7 细胞增殖
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瑶药黄稔根不同极性部位对LPS诱导RAW264.7细胞炎症的保护作用
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作者 龚雪 韩奇亨 +3 位作者 任凯 张国俊 张春红 李旻辉 《中国民族医药杂志》 2018年第7期59-61,共3页
目的:黄稔根不同极性部位对脂多糖(LPS)刺激小鼠单核巨噬白血病细胞RAW264.7细胞炎症保护作用的初步探讨。方法:用系列浓度(12.5、25、50、100、200μg/m L)的黄稔根的不同极性部位(石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位)处理R... 目的:黄稔根不同极性部位对脂多糖(LPS)刺激小鼠单核巨噬白血病细胞RAW264.7细胞炎症保护作用的初步探讨。方法:用系列浓度(12.5、25、50、100、200μg/m L)的黄稔根的不同极性部位(石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位)处理RAW264.7细胞,MTT法检测细胞增殖活性;通过LPS(1μg/m L)诱导RAW264.7细胞建立炎症模型,采用系列浓度黄稔根不同极性部位处理炎症模型,MTT法检测黄稔根4个不同极性部位对细胞的保护作用。结果:在实验浓度范围内,黄稔根的不同极性部位对细胞无细胞毒性作用。与LPS模型组比较,浓度为50、100、200μg/m L黄稔根乙酸乙酯部位和正丁醇部位能显著改善LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7的炎症反应,具有较好的浓度依赖性。黄稔根石油醚部位与LPS模型组相比仅在200μg/m L浓度下有保护性作用。而不同浓度的黄稔根水部位未表现出保护作用。结论:初步证明了黄稔根乙酸乙酯部位及正丁醇部位对LPS诱导RAW264.7巨噬细胞炎症的保护作用。 展开更多
关键词 黄稔根 raw264.7细胞 脂多糖 抗炎
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