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Therapeutic Effect and Mechanism of New Maixian Powder on DSS-induced UC Rats 被引量:1
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作者 Minjun FU Rongzhen SHI +2 位作者 Jianjun SHEN Meixia YANG Hongbin ZHENG 《Medicinal Plant》 CAS 2018年第3期58-61,共4页
[Objectives] To study the therapeutic effect and mechanism of New Maixian Powder on ulcerative colitis( UC) rats through observing its regulatory effect on the protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase( PERK)... [Objectives] To study the therapeutic effect and mechanism of New Maixian Powder on ulcerative colitis( UC) rats through observing its regulatory effect on the protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase( PERK)/eukaryotic translation initiation factor-2α( e IF-2α)/nuclear transcription factor-kappa B( NF-κB) signaling pathway. [Methods]First,60 SD rats were randomly divided into normal group,model group,mesalazine group,and New Maixian Powder low,medium and high dose groups,10 rats each group. Then,dextran sulfate sodium( DSS) was used to induce UC rats. The mesalazine group was given 0. 42 g/( kg·d) of mesalazine sustained-release granule suspension,New Maixian Powder low,medium and high dose groups were given 1. 5,3,and 6 g/( kg·d) of New Maixian Powder suspension,respectively,and other groups were given an equal volume of physiological saline,continuous intragastric administration for 14 d. Next,the disease activity index( DAI) of UC rats was evaluated; the expression of NF-κB in serum was measured by enzyme-linked immunosorbent assay( ELISA); the expression of PERK and e IF-2α protein and m RNA in colon tissue was detected by Western blot and real-time quantitative polymerase chain reaction( RT q-PCR). [Results] Compared with the normal group,the DAI score and serum NF-κB level in the model group were significantly higher( P < 0. 05),and PERK and e IF-2α protein and m RNA levels in the colon tissue were increased( P < 0. 05); compared with the model group,the DAI score decreased and serum NF-κB level declined in the New Maixian Powder group,and the expression of PERK and e IF-2α protein and m RNA in New Maixian Powder medium dose and high dose groups declined( P < 0. 05). [Conclusions]New Maixian Powder has good therapeutic effect on UC rats,and its mechanism may be connected with the inhibition of the activation of PERK/e IF-2α/NF-κB signaling pathway. 展开更多
关键词 New Maixian Powder Ulcerative colitis(UC) Protein kinase r-like endoplasmic reticulum kinase(PErK) Eukaryotic translation initiation factor-2α(eIF-2α) Nuclear transcription factor-kappa B(NF-κB)
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独活寄生汤对膝骨关节炎模型大鼠PERK/Bip信号通路的影响 被引量:37
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作者 赵林灿 李薇薇 +1 位作者 吴毅明 段卫峰 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期18-24,共7页
目的:基于蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/免疫球蛋白结合蛋白(Bip)信号通路探讨独活寄生汤缓解膝骨关节炎的可能机制。方法:采用寒冷刺激法建立膝骨性关节炎模型,将大鼠随机分为空白组,模型组,塞来昔布组(0.021 g·kg^(-1))和独活寄... 目的:基于蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/免疫球蛋白结合蛋白(Bip)信号通路探讨独活寄生汤缓解膝骨关节炎的可能机制。方法:采用寒冷刺激法建立膝骨性关节炎模型,将大鼠随机分为空白组,模型组,塞来昔布组(0.021 g·kg^(-1))和独活寄生汤低、中、高剂量组(8.37,16.72,33.48 g·kg^(-1)),空白组和模型组给予等体积的生理盐水,记录各组大鼠膝关节直径变化。采用苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠膝关节软骨病理形态变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β),透明质酸(HA)的表达;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western bolt)检测软骨中PERK,Bip,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)mRNA和蛋白的表达。结果:与模型组比较,塞来昔布组和独活寄生汤高剂量组大鼠膝关节红肿明显改善,且关节直径均显著的减小(P<0.01),塞来昔布组和独活寄生汤高剂量组大鼠膝关节软骨局部裂隙缺损有明显好转。与空白组比较,模型组大鼠TNF-α,IL-1β和HA表达水平显著升高(P<0.01),大鼠软骨中PERK,Bip,Caspase-9的mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,塞来昔布组和独活寄生汤高剂量组大鼠血清中TNF-α,IL-1β和HA表达明显下降(P<0.05,P<0.01),塞来昔布组和独活寄生汤高剂量组大鼠软骨中PERK,Bip,Caspase-9的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:独活寄生汤能缓解膝骨关节炎模型大鼠的症状,其机制可能与调节大鼠软骨中PERK/Bip信号通路有关。 展开更多
关键词 独活寄生汤 骨性关节炎 蛋白激酶r样内质网激酶(PErK) 免疫球蛋白结合蛋白(Bip) 信号通路
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酸枣仁-合欢花对抑郁模型大鼠行为学及内质网应激PERK/ATF4/CHOP通路的影响 被引量:26
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作者 曹智怡 李玲 +3 位作者 范丽丽 王明杰 郭超峰 施学丽 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期66-72,共7页
目的:研究酸枣仁-合欢花对抑郁模型大鼠行为学及内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/活化的转录因子4(ATF4)/CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)通路的影响,并探讨其抗抑郁作用的机制。方法:将雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常组... 目的:研究酸枣仁-合欢花对抑郁模型大鼠行为学及内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/活化的转录因子4(ATF4)/CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)通路的影响,并探讨其抗抑郁作用的机制。方法:将雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常组,模型组,盐酸文拉法辛组(0.008 g·kg^(-1)),酸枣仁-合欢花高、中、低剂量组(16,8,4 g·kg^(-1)),每组15只。除正常组外,其余5组采用慢性不可预见性温和应激(CUMS)结合孤养的方式建立抑郁模型,造模的同时给予正常组和模型组大鼠等体积的蒸馏水灌胃,各给药组大鼠予相应剂量的药物灌胃,连续21 d。于实验的第1天和第21天进行旷场实验和糖水消耗实验观察各组大鼠行为学变化;采用透射电镜观察大鼠海马神经元超微结构变化;采用原位末端标记(TUNEL)法检测大鼠海马区神经元凋亡情况;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)技术检测大鼠海马组织PERK,CHOP,B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠旷场实验得分、糖水消耗率显著下降(P<0.01);与模型组大鼠比较,酸枣仁-合欢花各剂量组及盐酸文拉法辛组大鼠旷场实验得分、糖水消耗率均显著升高(P<0.01);透射电镜显示,与正常组比较,模型组大鼠海马区神经元损伤明显,与模型组比较,酸枣仁-合欢花各剂量组及盐酸文拉法辛组大鼠海马区神经元损伤减轻;TUNEL显示,与正常组比较,模型组大鼠海马区神经元凋亡数量增加(P<0.01),与模型组比较,酸枣仁-合欢花各剂量组及盐酸文拉法辛组大鼠海马区神经元凋亡数量减少(P<0.01)。Western blot结果显示,与正常组大鼠比较,模型组大鼠海马PERK,CHOP,Bax,Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与模型组大鼠比较,盐酸文拉法辛组和酸枣仁-合欢花各剂量组大鼠海马PERK,CHOP,Bax,Caspase-3蛋白表达水平均降低(P< 展开更多
关键词 酸枣仁-合欢花 抑郁症 内质网应激蛋白激酶r样内质网激酶(PErK) CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)
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脾虚型功能性消化不良大鼠胃组织PERK蛋白表达及脾虚一号方干预作用 被引量:13
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作者 吕林 王凤云 +5 位作者 唐旭东 黄穗平 王静 陈婷 马祥雪 尹晓岚 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期3963-3967,共5页
目的:探讨脾虚型功能性消化不良(FD)大鼠胃组织PERK蛋白表达及脾虚一号方干预。方法:60只10日龄雄性SD大鼠随机分为正常对照组(10只)、脾虚型FD模型组(50只)。正常组给予2%蔗糖溶液灌胃,脾虚型FD模型组给予0.1%蔗糖碘乙酰胺蔗糖溶液灌胃... 目的:探讨脾虚型功能性消化不良(FD)大鼠胃组织PERK蛋白表达及脾虚一号方干预。方法:60只10日龄雄性SD大鼠随机分为正常对照组(10只)、脾虚型FD模型组(50只)。正常组给予2%蔗糖溶液灌胃,脾虚型FD模型组给予0.1%蔗糖碘乙酰胺蔗糖溶液灌胃,每天0.2m L/只,连续6d。脾虚型FD模型组正常饲料喂养至6周龄后叠加改良小平台站立,连续14d。造模结束后随机分为模型组,多潘立酮组,脾虚一号方低、中、高剂量组,每组10只,分别给予蒸馏水1m L·100g-1·d-1,多潘立酮0.3125mg·100g-1·d-1,脾虚一号方0.1275、0.255、0.51g·100g-1·d-1,正常组给予等体积蒸馏水,灌胃14d。采用Western blot和免疫组化方法检测大鼠胃窦组织PERK蛋白表达量。结果:与模型组比较,Western blot方法检测中,脾虚一号方中、高剂量组大鼠胃组织PERK蛋白表达量显著降低(P<0.05);免疫组织化学方法检测中,脾虚一号方中剂量组大鼠胃组织PERK蛋白光密度值降低(P<0.05)。结论:脾虚型FD大鼠存在内质网应激(ERS)现象,脾虚一号方能够减少PERK蛋白的表达,减轻ERS。 展开更多
关键词 内质网应激 未折叠蛋白反应 蛋白激酶样内质网激酶 功能性消化不良 脾虚证 脾虚一号方
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地黄饮子对能量障碍致SH-SY5Y细胞内质网应激的保护作用 被引量:12
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作者 高俊峰 张志辰 +3 位作者 温彬宇 唐旭 黄倩倩 马涛 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第21期118-123,共6页
目的:以葡萄糖剥夺致能量代谢障碍SH-SY5Y细胞为模型,探讨地黄饮子药物血清通过调节蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase r-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)/真核细胞起始因子2α(eukaryotic initiation factor 2α,e IF... 目的:以葡萄糖剥夺致能量代谢障碍SH-SY5Y细胞为模型,探讨地黄饮子药物血清通过调节蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase r-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)/真核细胞起始因子2α(eukaryotic initiation factor 2α,e IF2α)通路改善能量代谢障碍致SH-SY5Y细胞内质网应激的作用机制。方法:以成人临床用药量10倍剂量对SD大鼠灌胃给药,制备地黄饮子药物血清。SH-SY5Y细胞葡萄糖剥夺处理6 h后,分别以0,1.25%,2.5%,5%,10%地黄饮子含药血清孵育。噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PERK,e IF2α磷酸化水平,B淋巴细胞瘤-2(Bcell lymphoma-2,Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)表达水平。Annexin V/碘化丙啶(PI)双染流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:与模型组比较,地黄饮子药物血清能显著提高葡萄糖剥夺SH-SY5Y细胞的存活率(P〈0.01),明显减少PERK和e IF2α磷酸化激活(P〈0.05,P〈0.01),提高Bcl-2水平和降低Bax表达量(P〈0.05,P〈0.01)。抑制能量代谢障碍SH-SY5Y细胞凋亡率(P〈0.01)。结论:地黄饮子可以减少PERK/e IF2α通路的激活,抑制能量代谢障碍致内质网应激造成的细胞凋亡。 展开更多
关键词 地黄饮子 阿尔茨海默病 能量代谢障碍 内质网应激 蛋白激酶r样内质网激酶(PErK)/真核细胞起始因子2α(eIF2α) 凋亡
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地黄饮子调节PERK/elF2α通路抑制能量代谢障碍AD小鼠脑内β淀粉样蛋白累积的作用机制 被引量:11
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作者 张志辰 温彬宇 +3 位作者 高俊峰 唐旭 黄倩倩 马涛 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第21期91-98,共8页
目的:以能量代谢障碍淀粉样前体蛋白(APP)/早老素基因1(PS1)转基因小鼠为阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型,探讨地黄饮子通过调控蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase r-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)... 目的:以能量代谢障碍淀粉样前体蛋白(APP)/早老素基因1(PS1)转基因小鼠为阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型,探讨地黄饮子通过调控蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase r-like endoplasmic reticulum kinase,PERK),真核细胞起始因子2α(eukaryotic initiation factor 2α,eI F2α)通路抑制内质网应激导致的β-淀粉样蛋白(Aβ)累积的作用机制。方法:4月龄APP/PS1转基因小鼠随机分为正常组、模型组、阳性药(安理申)组、地黄饮子低、中、高剂量组。除正常组小鼠腹腔注射无菌生理盐水外,其余各组小鼠均腹腔注射100 mg·kg-13-硝基丙酸(3-nitropropionic acid,3-NP) 1次。小鼠造模后,立即给药。灌胃给药1周后,Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力,高效液相色谱法检测小鼠脑内三磷酸腺苷(ATP),二磷酸腺苷(ADP),一磷酸腺苷(AMP)含量,并计算脑能荷(energy charge,EC)。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠脑内PERK,eI F2α磷酸化水平,β-淀粉样前体蛋白水解酶1(BACE1)表达水平。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测BACE1 mRNA表达水平。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠脑内Aβ含量。结果:与正常组比较,Morris水迷宫实验结果显示,在定位巡航实验中,地黄饮子可以明显缩短模型小鼠的逃避潜伏期(P 〈0. 05,P 〈0. 01);空间探索实验中,地黄饮子可以增加模型小鼠穿越目标区域的次数(P 〈0. 05,P 〈0. 01)和在目标象限的停留时间(P 〈0. 01),减少相对象限的停留时间(P 〈0. 05,P 〈0. 01)。地黄饮子可以显著降低AMP水平,明显升高ATP,ADP水平,显著提高模型小鼠脑内EC水平(P 〈0. 05,P 〈0. 01),抑制PERK,eI F2α的磷酸化(P 〈0. 01)和BACE1的蛋白水平(P 〈0. 01),但对BACE1 mRNA转录没有显著影响。地黄饮子能够减少模型小鼠脑内Aβ的含量(P 〈0. 01)。结论:� 展开更多
关键词 地黄饮子 阿尔茨海默病 能量代谢障碍 内质网应激 蛋白激酶r样内质网激酶(protein KINASE r-likeendoplasmic reticulum kinase PErK)/真核细胞起始因子2α(eukaryotic initiation factor eIF2α) β-淀粉样蛋白
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柴胡皂苷-b2抑制内质网应激信号通路减轻四氯化碳致小鼠急性肝损伤 被引量:11
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作者 吕行直 李瑞芳 +3 位作者 高子涵 王红伟 李三强 王建刚 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2019年第2期109-115,共7页
目的探讨柴胡皂苷-b2(SS-b2)对四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用及其对内质网应激通路的影响。方法 60只雄性BALB/c小鼠分为正常对照组、模型组、SS-b2(5,10和20 mg·kg-1)组和阳性药(水飞蓟宾10 mg·kg-1)组。各... 目的探讨柴胡皂苷-b2(SS-b2)对四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用及其对内质网应激通路的影响。方法 60只雄性BALB/c小鼠分为正常对照组、模型组、SS-b2(5,10和20 mg·kg-1)组和阳性药(水飞蓟宾10 mg·kg-1)组。各组小鼠连续7 d每天ig给予不同剂量的SS-b2、水飞蓟宾或生理盐水;末次给药后2 h,除正常对照组外,各组分别一次性ip给予5%CCl4建立小鼠急性肝损伤模型。比色法检测血清中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;HE染色检测肝组织病理变化,免疫组织化学和Western蛋白印迹法检测小鼠肝组织中内质网应激通路蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、磷酸化真核起始因子2α(p-eIF2α)、转录激活因子4(ATF4)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,模型组小鼠血清中GPT和GOT的活性及MDA的含量明显升高(P<0.05,P<0.01),SOD活性明显降低(P<0.01),同时,肝组织内质网应激通路相关蛋白PERK,p-eIF2α,ATF4,GRP78和CHOP表达水平显著增高(P<0.01)。与模型组相比,不同浓度SS-b2组小鼠血清中GPT和GOT的活性及MDA的含量明显降低(P<0.05,P<0.01),SOD的活性明显升高(P<0.01);肝组织上述内质网应激通路相关蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05,P<0.01)。HE染色结果显示,不同浓度的SS-b2明显改善CCl4引起的小鼠肝细胞肿胀、肝小叶周围胞核溶解和肝索排列紊乱,使细胞形态明显好转。结论 SS-b2对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤具有保护作用,其机制可能与改善氧化应激损伤,抑制内质网应激通路的激活有关。 展开更多
关键词 柴胡皂苷-b2 药物性肝损伤 急性 氧化应激 内质网应激 蛋白激酶r样内质网激酶
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基于PERK/Nrf2信号通路研究山豆根提取物诱导鼻咽癌细胞铁死亡作用机制 被引量:6
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作者 丁虹 吴紫陆 蔡纪堂 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期2471-2479,共9页
目的 基于蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)/核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)通路探究山豆根提取物(Sophorae Tonkinensis Radix et Rhizoma ext... 目的 基于蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)/核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)通路探究山豆根提取物(Sophorae Tonkinensis Radix et Rhizoma extract,TSRE)诱导鼻咽癌细胞铁死亡作用机制。方法 为研究TSRE对鼻咽癌CNE1细胞的抑制作用,设置对照组和TSRE低、中、高剂量(100、200、400 mg/L)组;为研究铁死亡在TSRE致CNE1细胞增殖抑制中的作用以及PERK/Nrf2信号通路对铁死亡的影响,TSRE处理过程中分别用铁死亡抑制剂Fer-1、PERK抑制剂GSK2606414、Nrf2 siRNA进行干预。MTT法检测细胞活性;流式细胞术检测细胞周期;荧光探针检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)和脂质过氧化水平;比色法检测铁离子和谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平;Western blotting检测溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member11,SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、p-PERK、Nrf2和血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白表达;免疫荧光检测p-PERK表达和Nrf2入核情况。结果 TSRE组细胞存活率以及SLC7A11和GPX4蛋白表达水平均显著降低(P<0.05、0.01),G_(0)/G_(1)期和S期细胞比例显著降低(P<0.05、0.01),G_(2)/M期细胞比例显著增加(P<0.05、0.01),Fe^(2+)、ROS和脂质过氧化水平升高(P<0.01),GSH水平显著降低(P<0.01);与TSRE组比较,Fer-1干预缓解了TSRE诱导的细胞存活率降低(P<0.01),降低CNE1细胞中Fe^(2+)、ROS及脂质过氧化水平(P<0.01),提高细胞中GSH水平(P<0.01)。机制研究表明,TSRE诱导Nrf2表达水平的升高并促进Nrf2入核(P<0.01);与NC siRNA组比较,Nrf2 siRNA能抑制TSRE引起的细胞脂质过氧化和Fe^(2+)水平升高和GSH水平降低(P<0.01)。进一步研究发现,TSRE组细胞中的p-PERK蛋白表达水平较对照组明显升高(P<0.01);PERK抑制剂GSK2606414减弱了TSRE诱导的Nrf2信号活化(P<0.01)。结论 TSRE诱导的鼻咽癌细胞铁死亡可能与其激活PERK/Nrf2 展开更多
关键词 山豆根提取物 鼻咽癌细胞 铁死亡 蛋白激酶r样内质网激酶 核因子E2相关因子2 苦参碱 氧化苦参碱
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黄芪皂苷通过调控蛋白激酶R样内质网激酶途径抑制高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞自噬的研究 被引量:10
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作者 余静 赵海岚 +2 位作者 程凯尧 沈平宇 金黄林 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2019年第4期361-368,共8页
目的:探讨黄芪皂苷通过调控蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)途径影响高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19细胞)自噬水平。方法:体外培养人视网膜色素上皮细胞,实验分为正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖),高糖组(30 mmol/L葡萄糖),黄芪皂苷... 目的:探讨黄芪皂苷通过调控蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)途径影响高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19细胞)自噬水平。方法:体外培养人视网膜色素上皮细胞,实验分为正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖),高糖组(30 mmol/L葡萄糖),黄芪皂苷组(30 mmol/L葡萄糖+2.5、5、10μg/mL黄芪皂苷)。噻唑蓝比色(MTT)法检测ARPE-19细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测自噬相关蛋白及PERK途径关键因子表达水平。添加PERK特异性抑制剂GSK2606414,Western blot检测对细胞自噬水平的影响。结果:与正常对照组比较,高糖组ARPE-19细胞活性降低,凋亡率升高,自噬相关蛋白LC3表达水平明显升高,另一自噬相关蛋白p62蛋白表达水平明显降低。PERK途径关键因子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、Perk和增强子结合蛋白的同源蛋白(CHOP)表达水平明显上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。与高糖组比较,黄芪皂苷组ARPE-19细胞活性升高,凋亡率降低,LC3蛋白表达水平明显下调,p62蛋白表达水平明显上调,GRP78、Perk和CHOP蛋白水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。PERK特异性抑制剂GSK2606414能够进一步抑制黄芪皂苷组ARPE-19细胞LC3蛋白表达水平,上调p62蛋白表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:黄芪皂苷能够抑制高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞自噬水平,其作用机制可能与抑制蛋白激酶R样内质网激酶途径有关。 展开更多
关键词 黄芪皂苷 蛋白激酶r样内质网激酶途径 人视网膜色素上皮细胞 细胞自噬 糖尿病视网膜病变
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脑缺血及后适应对树鼩海马内质网应激信号分子PERK及GRP78的影响 被引量:9
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作者 陈理军 马艳 +3 位作者 李霞 陈静 李树清 张颖 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1105-1110,共6页
目的:探讨脑缺血及后适应对树鼩海马内质网应激信号分子蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)及葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的影响及后适应的脑保护机制。方法:光化学反应诱导树鼩局部血栓性脑缺血,于脑缺血后3.5 h夹闭、打开缺血侧颈总动脉交替3... 目的:探讨脑缺血及后适应对树鼩海马内质网应激信号分子蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)及葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的影响及后适应的脑保护机制。方法:光化学反应诱导树鼩局部血栓性脑缺血,于脑缺血后3.5 h夹闭、打开缺血侧颈总动脉交替3个循环(每次5 min)以复制缺血后适应模型。HE染色观察缺血侧海马神经元损伤及超微结构变化,RT-PCR检测脑缺血及后适应不同时间海马组织PERK及GRP78 mRNA表达的变化,免疫组织化学法与Western blot法检测PERK及GRP78的蛋白定位及表达变化。结果:海马神经元随脑缺血时间延长而损伤加重,缺血24 h损伤最为严重,后适应可减轻损伤。脑缺血4 h、24 h及72 h PERK的mRNA及蛋白表达较假手术组增高(P<0.05),后适应组与相应的缺血组相比,PERK的mRNA及蛋白表达减少,4 h、24 h差异显著(P<0.05);脑缺血4 h、24 h及72 h GRP78的mRNA及蛋白表达与假手术组无明显差异,后适应24 h组较缺血24 h组表达增高(P<0.05)。结论:树鼩局部血栓性脑缺血可激活缺血侧海马内质网应激反应,引起PERK/e IF2α信号转导通路中相关分子PERK的mRNA及蛋白表达增高。缺血后适应处理通过下调PERK、上调GRP78的表达,减轻内质网应激反应,减少神经元损伤,具有一定的脑保护作用。 展开更多
关键词 蛋白激酶r样内质网激酶 葡萄糖调节蛋白78 缺血后适应 内质网应激 海马 光化学反应 树鼩
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槲皮素对子宫颈癌荷瘤小鼠移植瘤生长的影响及其机制 被引量:8
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作者 脱淑梅 张彦骅 +2 位作者 党云 脱勋员 龙丽霞 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期150-152,156,共4页
目的探讨槲皮素对子宫颈癌荷瘤小鼠移植瘤的抗肿瘤作用,并分析其作用机制。方法将Hela细胞接种于裸鼠皮下建立人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型,将荷瘤小鼠随机分为模型组、阳性对照组、实验组,每组10只。连续给药14 d后,计算肿瘤体积及抑瘤... 目的探讨槲皮素对子宫颈癌荷瘤小鼠移植瘤的抗肿瘤作用,并分析其作用机制。方法将Hela细胞接种于裸鼠皮下建立人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型,将荷瘤小鼠随机分为模型组、阳性对照组、实验组,每组10只。连续给药14 d后,计算肿瘤体积及抑瘤率,用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡情况,用蛋白质印迹法检测蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(p-PERK)、真核起始因子2α(eIF 2α)、磷酸化eIF2α(p-eIF2α)、转录激活因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)蛋白表达水平。结果模型组、阳性对照组和实验组小鼠的肿瘤体积分别为(1.53±0.20),(1.04±0.31),(1.12±0.37)cm3;模型组、阳性对照组和实验组肿瘤细胞凋亡率分别为0,(48.39±7.51)%,(45.44±6.20)%;模型组、阳性对照组和实验组PERK蛋白相对表达水平分别为0.74±0.15,0.61±0.23,0.50±0.14;模型组、阳性对照组和实验组p-PERK蛋白相对表达水平分别为0.65±0.09,1.02±0.20,1.64±0.12;模型组、阳性对照组和实验组eIF2α蛋白相对表达水平分别为0.66±0.11,0.40±0.21,0.42±0.18;模型组、阳性对照组和实验组p-eIF2α蛋白相对表达水平分别为0.58±0.13,1.15±0.25,1.30±0.17;模型组、阳性对照组和实验组ATF4蛋白相对表达水平分别为0.31±0.06,0.53±0.05,0.72±0.09;模型组、阳性对照组和实验组CHOP蛋白相对表达水平分别为0.26±0.07,0.39±0.04,0.63±0.10,模型组与阳性对照组比较或实验组和模型组比较,上述指标的差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论槲皮素对人宫颈癌移植瘤的生长具有明显的抑制作用,其机制与通过诱导PERK和eIF2α蛋白磷酸化,上调ATF4及CHOP表达,激活内质网应激有关。 展开更多
关键词 子宫颈癌 槲皮素 蛋白激酶r样内质网激酶 真核起始因子2α 转录激活因子4 C/EBP同源蛋白
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糖尿病周围神经病变中内质网应激诱导的细胞凋亡机制研究进展 被引量:8
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作者 韩朔 朱笳悦 +4 位作者 李潇 姚伟洁 杨鑫伟 许利平 张旻昱 《医学综述》 2018年第22期4533-4538,共6页
糖尿病周围神经病变(DPN)的发病机制复杂,不可缓解的内质网应激反应(ERS)可诱导细胞凋亡,损伤神经细胞结构和功能,从而导致DPN。当未折叠的或折叠错误的蛋白在内质网上过度积累时,会触发内质网产生一系列应激反应以保护细胞,即未折叠蛋... 糖尿病周围神经病变(DPN)的发病机制复杂,不可缓解的内质网应激反应(ERS)可诱导细胞凋亡,损伤神经细胞结构和功能,从而导致DPN。当未折叠的或折叠错误的蛋白在内质网上过度积累时,会触发内质网产生一系列应激反应以保护细胞,即未折叠蛋白反应(UPR),一般用UPR来提示ERS的发生。UPR主要包括3个信号通路:蛋白激酶R样内质网激酶通路、激活转录因子6通路和肌醇需求酶1通路。分析DPN中ERS诱导的细胞凋亡机制,可为预防和治疗DPN提供参考及新思路。 展开更多
关键词 内质网应激 蛋白激酶r样内质网激酶 激活转录因子6 肌醇需求酶1 转录因子X盒结合蛋白1
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妊娠期糖尿病产妇胎盘组织内质网应激状态及其对胎盘组织形态学的影响 被引量:8
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作者 叶梓莹 黎晔 +2 位作者 赵震 曾宇婷 林俊汕 《山东医药》 CAS 2014年第30期23-25,共3页
目的观察妊娠期糖尿病(GDM)产妇胎盘组织内质网应激(ERS)发生情况并探讨其对胎盘组织形态学的影响。方法 GDM产妇(GDM组)和健康产妇(对照组)各30例,分娩时收集胎盘组织,Western blot法检测胎盘组织中的磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(p-PE... 目的观察妊娠期糖尿病(GDM)产妇胎盘组织内质网应激(ERS)发生情况并探讨其对胎盘组织形态学的影响。方法 GDM产妇(GDM组)和健康产妇(对照组)各30例,分娩时收集胎盘组织,Western blot法检测胎盘组织中的磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(p-PERK)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)。HE染色对胎盘组织行病理学观察。结果 GDM组p-PERK、CHOP相对表达量均高于对照组(P均<0.05)。病理检查显示,GDM组胎盘组织出现绒毛成熟不良、干绒毛小动脉管壁增厚及管腔狭窄、合体细胞结节增多、绒毛间质内毛细血管过度充盈、细胞滋养叶细胞及血管合体膜形成增加的例数高于对照组(P均<0.05)。GDM组胎盘组织中p-PERK、CHOP表达与胎盘组织异常形态学改变呈正相关关系(r分别为0.359、0.366,P均<0.05)。结论 GDM产妇胎盘组织呈ERS状态,其与产妇胎盘组织异常形态学改变有关。 展开更多
关键词 妊娠期糖尿病 胎盘 内质网应激 蛋白激酶r样内质网激酶 CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白
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人参皂苷Rb1对慢性心力衰竭作用机制研究简况 被引量:8
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作者 邓建南 李占全 孔宏亮 《实用中医内科杂志》 2016年第2期97-99,共3页
人参皂苷Rb1是人参主要有效成分之一,对心脏作用广泛,可以调节心脏凋亡相关蛋白和mRNA,抑制心肌细胞凋亡,提高心肌细胞耐缺氧能力,减轻心肌细胞肥大,影响心肌细胞凋亡cTnI水平,调整蛋白激酶R样内质网激醇(PERK)通路,影响心肌细胞葡萄糖... 人参皂苷Rb1是人参主要有效成分之一,对心脏作用广泛,可以调节心脏凋亡相关蛋白和mRNA,抑制心肌细胞凋亡,提高心肌细胞耐缺氧能力,减轻心肌细胞肥大,影响心肌细胞凋亡cTnI水平,调整蛋白激酶R样内质网激醇(PERK)通路,影响心肌细胞葡萄糖转运栽体-4,影响心肌细胞核因子-kB,通过多种途径提高心肌收缩力、抗心律失常、双向调节血管舒缩功能、维持缺氧心肌细胞存活等。未来仍需更有力、更确切的分子生物学机制证实人参皂苷Rb1对慢性心力衰竭的作用机制。 展开更多
关键词 人参皂苷rB1 慢性心力衰竭 mrNA 心肌细胞凋亡 心肌细胞耐缺氧能力 cTnI水平 蛋白激酶r样内质网激酶(PErK) 心肌细胞葡萄糖转运载体-4 心肌细胞核因子-kB 心律失常 双向调节 中医药现代化
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内质网应激在吸烟COPD模型小鼠膈肌细胞凋亡中的作用及机制研究 被引量:3
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作者 任慧敏 韩树池 +2 位作者 薛乾隆 王慧 王佳 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期22-26,33,共6页
目的:研究内质网应激(ERS)在吸烟慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型小鼠膈肌细胞凋亡中的作用及机制。方法:野生型雄性C57BL/6小鼠分为对照组、COPD模型组、激动剂组、拮抗剂组,Perk基因敲除小鼠分为PERK-KO组、PERKKO+模型组,采用被动吸烟法... 目的:研究内质网应激(ERS)在吸烟慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型小鼠膈肌细胞凋亡中的作用及机制。方法:野生型雄性C57BL/6小鼠分为对照组、COPD模型组、激动剂组、拮抗剂组,Perk基因敲除小鼠分为PERK-KO组、PERKKO+模型组,采用被动吸烟法复制COPD模型,给予ERS激动剂毒胡萝卜素或拮抗剂4-苯基丁酸干预,检测0.3 s用力呼气容积与用力肺活量比(FEV_(0.3)/FVC)、最高峰值流速(PEF)、血清及支气管肺泡灌流液(BALF)中IL-1β及IL-6含量、肺组织病理改变、膈肌中细胞凋亡率及蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、肌醇酶1α(IRE1α)、活化转录因子6(ATF6)、p-eIF2α、ATF4、C/EBP同源蛋白(CHOP)、Caspase-12表达水平。结果:与对照组相比,模型组FEV_(0.3)/FVC、PEF降低,肺组织出现病理改变,膈肌中细胞凋亡率及PERK、p-eIF2α、CHOP、Caspase-12表达水平提高(P<0.05);与模型组相比,激动剂组膈肌中细胞凋亡率及PERK、peIF2α、CHOP、Caspase-12表达水平提高(P<0.05),拮抗剂组膈肌中细胞凋亡率及PERK、p-eIF2α、CHOP、Caspase-12表达水平降低(P<0.05);敲除PERK后,与模型组相比,PERK-KO+模型组膈肌中细胞凋亡率及eIF2α、CHOP、Caspase-12表达水平降低。结论:吸烟COPD模型小鼠膈肌细胞凋亡过度激活,ERS的PERK通路激活与膈肌细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 慢性阻塞性肺疾病 内质网应激 膈肌细胞凋亡 蛋白激酶r样内质网激酶
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PERK在重症急性胰腺炎大鼠淋巴细胞中的表达及其与细胞凋亡的相关性 被引量:7
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作者 徐晨阳 覃月秋 +5 位作者 宋嗣恩 潘静 梁运轩 杨复锵 周喜汉 黄赞松 《右江民族医学院学报》 2019年第1期6-10,共5页
目的探讨重症急性胰腺炎(SAP)大鼠淋巴细胞蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)表达水平的变化及其与凋亡的相关性。方法成年雄性SPF级SD大鼠20只,随机分为假手术组(SO组)、SAP组,每组10只。SAP组大鼠采用5%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射法建立SAP... 目的探讨重症急性胰腺炎(SAP)大鼠淋巴细胞蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)表达水平的变化及其与凋亡的相关性。方法成年雄性SPF级SD大鼠20只,随机分为假手术组(SO组)、SAP组,每组10只。SAP组大鼠采用5%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射法建立SAP模型,SO组大鼠仅翻动胰腺后关腹。术后18h取材,HE染色观察胰腺组织病理损伤程度并进行评分,qPCR检测脾脏淋巴细胞PERK mRNA、Caspase-3mRNA的表达情况,ELISA法检测血清中Caspase-3含量。结果与SO组比较,SAP组脾脏淋巴细胞PERK mRNA、Caspase-3mRNA表达明显升高(P<0.05),血清中Caspase-3含量升高(P<0.05),脾淋巴细胞PERK mRNA水平与脾淋巴细胞Caspase-3 mRNA、血清Caspase-3水平呈正相关(P<0.05)。结论 PERK表达升高与SAP淋巴细胞凋亡有关,可作为SAP治疗的靶点。 展开更多
关键词 胰腺炎 蛋白激酶r样内质网激酶 内质网应激 细胞凋亡
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当归拈痛汤调控PERK/Bip通路减轻膝关节骨性关节炎大鼠软骨损伤实验研究 被引量:3
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作者 张有为 李小宏 李凯 《辽宁中医药大学学报》 CAS 2023年第5期34-38,F0003,共6页
目的观察当归拈痛汤对膝关节骨性关节炎(KOA)大鼠软骨损伤的影响,并分析其作用机制。方法50只SD雄性大鼠通过随机数表法分为对照组(n=10)与造模组(n=40),通过木瓜蛋白酶关节腔内注射法建立KOA大鼠模型。将造模成功大鼠随机分为模型组(n=... 目的观察当归拈痛汤对膝关节骨性关节炎(KOA)大鼠软骨损伤的影响,并分析其作用机制。方法50只SD雄性大鼠通过随机数表法分为对照组(n=10)与造模组(n=40),通过木瓜蛋白酶关节腔内注射法建立KOA大鼠模型。将造模成功大鼠随机分为模型组(n=10),当归拈痛汤组(低、中、高剂量,n=10)。当归拈痛汤组分别按照低剂量6.5 g/kg、中剂量13.0 g/kg、高剂量26.0 g/kg的药量进行灌胃,对照组与模型组给予等量生理盐水灌胃,连续给药1个月。采用游标卡尺测量大鼠双侧膝关节直径;通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;采用甲苯胺蓝染色观察各组大鼠膝关节软组织病理变化;通过实时荧光定量PCR(Real time-PCR)与免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、免疫球蛋白结合蛋白(Bip)、半胱胺酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)mRNA与蛋白表达水平。结果给药期间对照组大鼠未见膝关节肿胀,与对照组比较,模型组大鼠双侧膝关节直径显著增加,采用中、高剂量当归拈痛汤治疗后大鼠膝关节直径显著缩短(P<0.05);病理观察结果显示模型组大鼠膝关节软骨局部裂隙缺损,采用中、高剂量当归拈痛汤治疗后大鼠膝关节软骨局部裂隙缺损症状显著改善;与对照组比较,模型组大鼠血清TNF-α、IL-1β含量,PERK、Bip、Caspase-9 mRNA与蛋白表达水平均显著提高,采用当归拈痛汤治疗可以下调大鼠血清TNF-α、IL-1β含量,PERK、Bip、Caspase-9 mRNA与蛋白表达水平,中、高剂量当归拈痛汤组大鼠以上各项指标与模型组比较均有统计学意义(P<0.05)。结论当归拈痛汤可以有效减轻KOA大鼠膝关节肿胀程度,降低血清炎性细胞因子含量,减轻软骨损伤,其机制可能与调控PERK/Bip通路,下调PERK、Bip、Caspase-9 mRNA与蛋白表达水平有关。 展开更多
关键词 当归拈痛汤 膝关节骨性关节炎 软骨损伤 蛋白激酶r样内质网激酶 免疫球蛋白结合蛋白
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Salubrinal对铜负荷诱导的PERK/eIF2α内质网应激信号通路介导肝细胞凋亡的干预作用 被引量:7
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作者 陈永华 杨文明 +1 位作者 江海林 唐露露 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期990-996,共7页
Wilson病是一种以肝损害为常见临床表现的常染色体隐性遗传铜代谢障碍性疾病,但铜蓄积导致的肝细胞损害的具体分子机制尚不明确。本研究拟采用硫酸铜模拟肝细胞铜负荷进行体外实验,选用Western印迹法测试铜负荷肝细胞内蛋白激酶R样内质... Wilson病是一种以肝损害为常见临床表现的常染色体隐性遗传铜代谢障碍性疾病,但铜蓄积导致的肝细胞损害的具体分子机制尚不明确。本研究拟采用硫酸铜模拟肝细胞铜负荷进行体外实验,选用Western印迹法测试铜负荷肝细胞内蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)及p-eIF2α蛋白质的表达;并探究特异性eIF2α磷酸化抑制剂Salubrinal对铜负荷诱导的肝细胞凋亡、胱天蛋白酶-3活性、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)mRNA转录的影响。选用流式细胞仪测试肝细胞凋亡率;比色法测试肝细胞内的胱天蛋白酶-3活性;Real-time PCR法检测肝细胞内CHOP mRNA转录水平。本研究结果显示:(1)铜负荷显示出时间依赖性地增加肝细胞内PERK及p-eIF2α蛋白质表达(P<0.05,P<0.01)。(2)相比较对照组,铜负荷培养肝细胞24 h明显增加了肝细胞的凋亡率(P<0.01),增强了肝细胞内的胱天蛋白酶-3活性,促进肝细胞内CHOP mRNA的转录,加入特异性eIF2α磷酸化抑制剂Salubrinal后可抑制上述过程。(3)相比较对照组,铜负荷促进肝细胞PERK及p-eIF2α蛋白质表达,加入特异性eIF2α磷酸化抑制剂Salubrinal后,对铜负荷诱导的肝细胞PERK蛋白质表达无影响(P>0.05),但可显著抑制铜负荷诱导的肝细胞p-eIF2α蛋白质表达(P<0.01)。本研究结果提示,铜负荷可以诱发肝细胞内质网应激,铜负荷引起的肝细胞凋亡机制与激活内质网应激PERK/eIF2α信号通路密切相关,Salubrinal具有干预该信号通路作用,能够抑制铜负荷后肝细胞的凋亡。 展开更多
关键词 铜负荷 凋亡 内质网应激 蛋白激酶r样内质网激酶 OUMS29人肝细胞系 Salubrinal
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人参皂甙Rbl对心力衰竭大鼠蛋白激酶R样内质网激酶途径的影响 被引量:7
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作者 孔宏亮 侯爱洁 +1 位作者 郭翠艳 王俊丰 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2013年第4期290-295,共6页
目的探讨人参皂甙Rbl(Gs-Rb1)改善阿霉素所致心力衰竭(HF)效应是否与调整蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)通路有关。方法阿霉素(Adr)诱导的HF大鼠随机分为HF组(n=15)和Gs-Rbl组(70mg/kg/d,n=17),另随机选取同龄大鼠作为对照组(n=10)。干预... 目的探讨人参皂甙Rbl(Gs-Rb1)改善阿霉素所致心力衰竭(HF)效应是否与调整蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)通路有关。方法阿霉素(Adr)诱导的HF大鼠随机分为HF组(n=15)和Gs-Rbl组(70mg/kg/d,n=17),另随机选取同龄大鼠作为对照组(n=10)。干预结束并进行心脏超声检查后,TUNNEL检测心肌细胞凋亡率(AR),Western blot和Rt-PCR检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、PERK、p-PERK、真核细胞起始因子2α(eIF2α)、p-eIF2α、C/EBP同源蛋白(CHOP)和cleaved caspase-12。结果 1.Adr干预成功构建HF模型,Gs-Rb1显著提高左室射血分数(LVEF)和降低心肌细胞AR(P<0.01);2.HF组GRP78mRNA和蛋白均显著高于对照组,Gs-Rb1显著低于HF组和对照组二组的表达(P<0.01);3.Gs-Rb1显著降低HF大鼠PERK和p-PERK表达(P<0.01);4.HF导致eIF2αmRNA和蛋白、p-eIF2α显著升高,Gs-Rb1显著下调三者的表达(P<0.01);5.HF组CHOP mRNA和蛋白显著高于对照组,Gs-Rb1组显著抑制其表达(P<0.01);6.Gs-Rb1显著抑制阿霉素所致的caspase-12mRNA和cleaved caspase-12蛋白表达(P<0.01)。结论 Gs-Rb1通过调节PERK内质网通路介导其改善HF效应。 展开更多
关键词 人参皂甙rB1 心力衰竭 蛋白激酶r样内质网激酶 真核细胞起始因子2α C/EBP同源蛋白
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基于PERK/ATF4/CHOP的益肾通络方抑制内质网应激改善肾小管上皮细胞凋亡的作用机制 被引量:1
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作者 苏烜 赵靓 +5 位作者 王萌萌 丁婧 张振强 张效威 徐江雁 谢治深 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期26-36,共11页
目的:验证益肾通络方(YSTLP)对肾小管上皮细胞凋亡的影响,并基于内质网应激通路蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/活化转录因子4(ATF4)/转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)探讨其作用机制。方法:将db/db小鼠随机分为模型组、缬沙坦组(10 mg·k... 目的:验证益肾通络方(YSTLP)对肾小管上皮细胞凋亡的影响,并基于内质网应激通路蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/活化转录因子4(ATF4)/转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)探讨其作用机制。方法:将db/db小鼠随机分为模型组、缬沙坦组(10 mg·kg^(-1)·d^(-1))、YSTLP低、中、高剂量组(1、2.5、5 g·kg^(-1)·d^(-1))给予药物干预8周后取材。同窝的db/m小鼠作为正常组。体外培养人肾小管上皮细胞(HK-2),分为正常组、糖基化终产物(AGEs)组、AGEs+益肾通络方低、中、高质量浓度组(100、200、400 mg·L^(-1));原位末端标记(TUNEL)染色检测HK-2细胞的凋亡情况;细胞活力测定实验检测HK-2细胞存活率;钙离子荧光探针染色,以及荧光素酶报告基因法检测为折叠蛋白反应元件(UPRE)荧光素酶活力,检测内质网应激情况;免疫组化法(IHC)检测小鼠肾脏中磷酸化(p)-PERK蛋白的表达(p-PERK)、CHOP、ATF4的蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测小鼠肾脏、HK-2细胞中CHOP、X盒结合蛋白1(XBP1)的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肾脏、HK-2细胞中p-PERK、PERK、CHOP、ATF4、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、切割型胱天蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)的蛋白表达水平。结果:细胞实验中,与正常组比较,AGEs组HK-2细胞活力显著降低,凋亡率显著升高(P<0.01),凋亡相关因子Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.01),Bax的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.01),cleaved Caspase-3的蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与AGEs组比较,YSTLP给药处理后,细胞活力提升,凋亡率降低(P<0.01),Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平呈时间、剂量依赖性显著升高(P<0.01),Bax的mRNA和蛋白表达水平呈时间、剂量依赖性显著降低,cleaved Caspase-3的蛋白表达水平呈时间、剂量依赖性显著降低(P<0.01)。与正常组比较,AGEs组细胞内Ca2+失衡,UPRE荧光素酶荧光强度增加(P<0. 展开更多
关键词 益肾通络方 内质网应激 凋亡 机制 蛋白激酶r样内质网激酶(PErK)/活化转录因子4(ATF4)/转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)信号通路
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