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外源蛋白在巴氏毕赤酵母中高效表达的策略 被引量:19
1
作者 聂东宋 梁宋平 李敏 《吉首大学学报》 2001年第3期40-44,共5页
高效表达外源蛋白 ,在理论和实践上特别是在生物制药中具有重要意义 ,巴氏毕赤酵母 (Pichiapastoris)是表达外源蛋白最理想的真核表达系统之一 .影响外源蛋白在P .pastoris中表达的因素很多 ,主要包括外源基因自身的特性、载体、宿主细... 高效表达外源蛋白 ,在理论和实践上特别是在生物制药中具有重要意义 ,巴氏毕赤酵母 (Pichiapastoris)是表达外源蛋白最理想的真核表达系统之一 .影响外源蛋白在P .pastoris中表达的因素很多 ,主要包括外源基因自身的特性、载体、宿主细胞几个方面 ,了解和灵活运用它们的联系 ,有助于获得外源基因在P . 展开更多
关键词 巴氏毕赤酵母 外源蛋白 高效表达 真核表达系统 生物制药 基因工程菌
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外源蛋白在中国仓鼠卵巢细胞中高效表达的策略 被引量:16
2
作者 刘国奇 王海涛 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第5期496-500,共5页
高效表达外源蛋白 ,在生物制药中有重要意义 .中国仓鼠卵巢细胞 (Chinesehamsterovarycell)是表达外源蛋白的最佳真核表达系统之一 .影响外源蛋白在CHO细胞表达的因素甚多 ,主要包括载体、宿主细胞和外源基因几方面 .深入了解和灵活运... 高效表达外源蛋白 ,在生物制药中有重要意义 .中国仓鼠卵巢细胞 (Chinesehamsterovarycell)是表达外源蛋白的最佳真核表达系统之一 .影响外源蛋白在CHO细胞表达的因素甚多 ,主要包括载体、宿主细胞和外源基因几方面 .深入了解和灵活运用它们之间的关系 。 展开更多
关键词 重组蛋白 CHO细胞 真核表达系统 生物制药
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毕赤巴斯德酵母表达外源蛋白研究进展 被引量:4
3
作者 马孟根 王红宁 《四川农业大学学报》 CSCD 2001年第3期277-280,共4页
毕赤巴斯德酵母表达系统具有真核生物表达的特点 ,现已广泛用于外源蛋白的表达。本文综述了其自身的优点 ,表达载体的特点 ,外源基因拷贝数的多少与表达产量的关系 ,分泌型蛋白的表达 。
关键词 毕赤巴斯德酵母 外源蛋白 高效表达 酵母 酿酒
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P.pastoris高效表达外源蛋白的研究进展 被引量:3
4
作者 涂宣林 宋后燕 《生物工程进展》 CSCD 1998年第4期19-22,共4页
Pichiapastoris表达系统具有原核细胞和哺乳类细胞表达系统的特点,已广泛地应用于表达外源基因。为获得高质量外源蛋白的表达而进行了大量研究并取得了许多进展,如构建并筛选多拷贝的由AOX启动的表达盒,优化培液组... Pichiapastoris表达系统具有原核细胞和哺乳类细胞表达系统的特点,已广泛地应用于表达外源基因。为获得高质量外源蛋白的表达而进行了大量研究并取得了许多进展,如构建并筛选多拷贝的由AOX启动的表达盒,优化培液组分,减少蛋白降解,分泌蛋白的纯化和N-连接寡糖链的特点。 展开更多
关键词 甲醇营养型 酵母 外源蛋白 高效表达 表达载体
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饲料用酶制剂的研究进展与趋势 被引量:18
5
作者 杨培龙 姚斌 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1844-1851,共8页
饲料用酶目前已成为世界工业酶产业中增长速度最快、势头最强劲的一部分。畜牧业开发应用饲料用酶制剂有着重大意义:可缓解饲料资源短缺、人畜争粮的局面,有利于保障粮食安全;提供更为安全、优质的动物产品,有利于保障食品安全;减轻环... 饲料用酶目前已成为世界工业酶产业中增长速度最快、势头最强劲的一部分。畜牧业开发应用饲料用酶制剂有着重大意义:可缓解饲料资源短缺、人畜争粮的局面,有利于保障粮食安全;提供更为安全、优质的动物产品,有利于保障食品安全;减轻环境污染,保障养殖业的可持续发展。饲料用酶的应用效果已在世界范围内得到公认,但酶的使用量还较低,其主要原因在于饲料用酶的性质难以满足饲料工业的要求,以及饲料用酶表达量低,生产成本较高。因此,目前的研发趋势主要体现在:1)饲料用酶基因资源的高通量筛选技术,尤其是特殊环境微生物和未培养微生物中的基因资源;2)酶蛋白的分子改良技术,利用蛋白质工程技术定向改良,创造具有优良特性的酶蛋白质分子,进一步提高饲料用酶的应用性能;3)饲料用酶高效表达和生产技术;4)饲料用酶的应用效果快速评估技术和配套应用技术体系。 展开更多
关键词 饲料酶制剂 基因克隆 高通量筛选 蛋白质工程 高效表达 应用技术
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传染性法氏囊病病毒VP_3结构蛋白基因在大肠杆菌中的高效表达 被引量:7
6
作者 姜平 陈溥言 +2 位作者 蔡宝祥 杨奎 郑明球 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期279-283,共5页
传染性法氏囊病病毒(IBDV)是危害养鸡业的重要病原之一,属双股双节段RNA病毒科成员,由A和B两个片段的dsRNA构成,大小分别约3300-3400bp和2800-2900bp。基因片段A首先编码VP2-VP4-V... 传染性法氏囊病病毒(IBDV)是危害养鸡业的重要病原之一,属双股双节段RNA病毒科成员,由A和B两个片段的dsRNA构成,大小分别约3300-3400bp和2800-2900bp。基因片段A首先编码VP2-VP4-VP3聚合蛋白,然后再断裂成VP3、... 展开更多
关键词 VP3结构蛋白 基因 高效表达 IBDV 大肠杆菌
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增生性瘢痕的形成与组织中肿瘤坏死因子含量相关性的研究 被引量:13
7
作者 章建林 林子豪 +2 位作者 刘麒 赵耀忠 吴建明 《中国临床康复》 CSCD 2002年第8期1125-1126,W004,共3页
目的为了解肿瘤坏子因子-α(TNF-α)在不同时期增生性瘢痕组织中的含量及分布情况,探讨TNF-α在增生性瘢痕发生、发展过程中的作用。方法利用TNF-α、巨噬细胞和T淋巴细胞的单克隆抗体对实验收集的不同时期增生性瘢痕组织(33例)、正常瘢... 目的为了解肿瘤坏子因子-α(TNF-α)在不同时期增生性瘢痕组织中的含量及分布情况,探讨TNF-α在增生性瘢痕发生、发展过程中的作用。方法利用TNF-α、巨噬细胞和T淋巴细胞的单克隆抗体对实验收集的不同时期增生性瘢痕组织(33例)、正常瘢痕(5例)的石蜡切片进行免疫组织化学染色。结果随着增生性瘢痕组织的逐渐成熟,TNF-α的阳性细胞的百分比呈阶段性递增趋势。结论生性瘢痕的形成可能与TNF-α在组织中的含量降低有关。 展开更多
关键词 增生性瘢痕 TNF-Α 蛋白水平 动态表达 肿瘤坏子因子-α
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巨大芽孢杆菌表达外源蛋白的特点及其研究进展 被引量:13
8
作者 牟琳 王红宁 邹立扣 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期93-97,共5页
巨大芽孢杆菌是一种很有潜力的分泌型基因工程宿主菌,现已广泛应用于工业和学术研究领域,它具有表达率高、遗传稳定、产物可分泌、发酵工艺成熟等优点。综述了其自身的优点、表达载体的特点、巨大芽孢杆菌的转化方法、外源蛋白的表达、... 巨大芽孢杆菌是一种很有潜力的分泌型基因工程宿主菌,现已广泛应用于工业和学术研究领域,它具有表达率高、遗传稳定、产物可分泌、发酵工艺成熟等优点。综述了其自身的优点、表达载体的特点、巨大芽孢杆菌的转化方法、外源蛋白的表达、高效表达的策略以及表达系统的应用。 展开更多
关键词 巨大芽孢杆菌 外源蛋白 高效表达
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日粮不同蛋白水平对绵羊脂肪和肌肉中FAS基因表达的影响 被引量:12
9
作者 张英杰 刘月琴 刘景云 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期829-834,共6页
选择年龄、体质量相近的杂交母羊(萨福克♂×小尾寒羊♀)24只,随机分为3组,分别饲喂不同蛋白水平的日粮:中蛋白日粮(150 g.d-1)、低蛋白日粮(112.5 g.d-1)和高蛋白日粮(187.5 g.d-1)。采用半定量RT-PCR的方法,检测日粮不同蛋白水平... 选择年龄、体质量相近的杂交母羊(萨福克♂×小尾寒羊♀)24只,随机分为3组,分别饲喂不同蛋白水平的日粮:中蛋白日粮(150 g.d-1)、低蛋白日粮(112.5 g.d-1)和高蛋白日粮(187.5 g.d-1)。采用半定量RT-PCR的方法,检测日粮不同蛋白水平对绵羊脂肪和肌肉中FAS基因表达的影响。结果表明:日粮的蛋白质水平影响绵羊腹部皮下脂肪、肠系膜脂肪和半腱肌组织中FAS基因的表达,随着日粮蛋白质水平的升高FAS表达量降低。FAS基因表达量在各组织间有差异,腹部皮下脂肪、肠系膜脂肪中,中蛋白组和低蛋白组间表达差异不显著(P>0.05),高蛋白组显著低于中蛋白组和低蛋白组(P<0.05);在半腱肌组织中,中蛋白组与高蛋白组和低蛋白组间均差异显著(P<0.05),高蛋白组极显著低于低蛋白组(P<0.01)。 展开更多
关键词 绵羊 蛋白水平 FAS 基因表达
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HIV-1gag基因重组痘苗病毒的构建和高效表达 被引量:9
10
作者 毛春生 金宁一 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 1996年第6期561-569,共9页
Gag蛋白是人Ⅰ型免疫缺陷病毒(HIV-1)重要的结构蛋白,可诱导机体产生体液和细胞免疫应答。本试验将HIV-1不同长度的长末端重复序列(LTR)和全长的gagORF置于痘病毒启动子控制下,经过同源重组、红细胞吸附试... Gag蛋白是人Ⅰ型免疫缺陷病毒(HIV-1)重要的结构蛋白,可诱导机体产生体液和细胞免疫应答。本试验将HIV-1不同长度的长末端重复序列(LTR)和全长的gagORF置于痘病毒启动子控制下,经过同源重组、红细胞吸附试验筛选和间接免疫荧光试验鉴定,分离了6株重组痘苗病毒。免疫印迹(Westernblot)和免疫酶试验检测表明,6株病毒均能表达gag基因,其中以v16LG△2的Gag蛋白表达量最高,占细胞裂解物上清的5.19%,相当于14.7μg/106细胞,接近杆状病毒的表达产量。重组蛋白主要为p55gag蛋白前体,但也有一部分被加工,生成成熟蛋白p24gag、p17gag及其中间蛋白。表达的重组蛋白可形成病毒样粒子(VLP)。 展开更多
关键词 HIV-1 GAG蛋白 高效表达 重组痘苗病毒
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饲粮蛋白水平对荣昌猪脂肪细胞和肌纤维发育及相关基因表达的影响 被引量:7
11
作者 章杰 刘一辉 +1 位作者 何航 罗宗刚 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期2115-2124,共10页
旨在探讨饲粮蛋白水平对育肥期荣昌猪屠宰性能、细胞大小、基因表达和线粒体DNA拷贝数的影响。选取24头体重相近的荣昌猪,在育肥阶段随机分为2组,即低蛋白组(10.50%)和高蛋白组(16.50%),每组3个重复,每个重复4头猪。试验结束后,屠宰,测... 旨在探讨饲粮蛋白水平对育肥期荣昌猪屠宰性能、细胞大小、基因表达和线粒体DNA拷贝数的影响。选取24头体重相近的荣昌猪,在育肥阶段随机分为2组,即低蛋白组(10.50%)和高蛋白组(16.50%),每组3个重复,每个重复4头猪。试验结束后,屠宰,测定生产性能、屠宰性能、脂肪细胞体积和肌纤维横截面面积。使用qRT-PCR法定量分析mRNA相对表达水平和线粒体DNA拷贝数。结果显示:1)高蛋白组胴体重、脂肪率、背膘厚和脂肪细胞体积显著高于低蛋白组(P<0.05),瘦肉率、眼肌面积和肌纤维横截面面积在2组间无显著差异(P>0.05);2)与低蛋白组相比,高蛋白组脂质降解基因ADIPOR1、ADIPOR2和LPL的表达量显著降低(P<0.05),脂质生成基因FABP5、FTO和UCP2的表达量极显著升高(P<0.01),基因SCD的表达量变化不显著(P>0.05),肌肉生长基因MYOG、MYOZ1、MYOD1和IGF1的表达量显著升高(P<0.05),抑制肌肉生长基因MSTN的表达量变化不显著(P>0.05);3)与低蛋白组相比,高蛋白组脂肪细胞和肌纤维线粒体DNA拷贝数显著升高(P<0.05)。结果提示,饲粮蛋白可从分子和表型水平来影响育肥期荣昌猪的生长发育,高蛋白饲粮可增强其脂肪沉积。 展开更多
关键词 饲粮蛋白水平 荣昌猪 脂肪细胞 肌纤维 基因表达 拷贝数变化
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CHO/dhfr^-细胞定点整合高效表达系统的建立 被引量:6
12
作者 周宏 刘志刚 +1 位作者 孙志伟 俞炜源 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期756-762,共7页
为了克服随机整合建立高表达细胞株时“位置效应”所带来的不可预知的后果,我们尝试建立基于定点整合的CHO高效表达系统。首先设计一个新的高效筛选载体pMCEscan。该载体含有报告基因(k2tPA)、扩增基因(dhfr)、重组酶识别序列(FRT)及筛... 为了克服随机整合建立高表达细胞株时“位置效应”所带来的不可预知的后果,我们尝试建立基于定点整合的CHO高效表达系统。首先设计一个新的高效筛选载体pMCEscan。该载体含有报告基因(k2tPA)、扩增基因(dhfr)、重组酶识别序列(FRT)及筛选基因(neo),且neo基因的表达经过系统的弱化,确保能够对基因组中的整合位点进行大规模的高效筛选。然后利用该载体转染CHO/dhfr-细胞并进行大规模筛选以获得足够多的阳性克隆,并对阳性克隆进行系统分析,筛选出报告基因表达水平高、单拷贝且扩增效果好的克隆,此克隆被认为筛选载体整合入CHO细胞基因组中转录热点(Hotspot)区域,从而获得了能够实现外源基因在基因组中定点整合和有效表达的CHO/dhfr-细胞系。随后利用位点特异性重组系统(FLP-FRT)将外源基因定点整合到Hotspot区域,以实现外源基因在CHO细胞基因组中的定点整合及高效表达。并利用该细胞系实现了k2tPA的高表达,表达量达到17.1μg/106cell.24h。该研究致力于CHO细胞基因组中高表达位点的寻找和确认,建立基于定点整合的哺乳动物细胞高效表达系统。 展开更多
关键词 CHO细胞 定点整合 高效表达 重组蛋白
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2-十三烷酮诱导棉铃虫(Helicoverpa armigera)细胞色素P450 CYP6B6时空表达规律的研究 被引量:5
13
作者 刘小宁 李芬 +1 位作者 张学涛 朱燕 《干旱区研究》 CSCD 北大核心 2014年第5期978-983,共6页
植物次生物质2-十三烷酮能够诱导棉铃虫细胞色素P450 CYP6B6基因的过量表达,以6龄棉铃虫(Helicoverpa armigera)幼虫为对象,研究2-十三烷酮对棉铃虫细胞色素P450 CYP6B6的诱导作用,并对其表达规律进行了初探。分别采用实时荧光定量PCR(q... 植物次生物质2-十三烷酮能够诱导棉铃虫细胞色素P450 CYP6B6基因的过量表达,以6龄棉铃虫(Helicoverpa armigera)幼虫为对象,研究2-十三烷酮对棉铃虫细胞色素P450 CYP6B6的诱导作用,并对其表达规律进行了初探。分别采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫组化的方法,分析棉铃虫在终浓度为10 mg·g-1的2-十三烷酮胁迫下,不同时间及不同组织部位CYP6B6基因在mRNA水平和蛋白水平上的表达变化规律。qRTPCR结果显示:用添加了2-十三烷酮的人工饲料饲喂棉铃虫不同时间后,在头壳中CYP6B6 mRNA的表达量一直低于对照组,到48 h时与对照组具有显著差异(t4=15.32,P=0.000 1);在脂肪体中随着时间的推移,表达量呈升高趋势,在36 h已过量表达(t4=7.627,P=0.001 6);在24 h时体壁和中肠组织的表达量分别较对照组提高了2.06倍和7.16倍,之后表达量均呈现先降低后升高的趋势,且在48 h时达到最大。免疫组化结果显示:在棉铃虫幼虫组织中发现CYP6B6蛋白在体壁、脂肪体、中肠中均有表达,相比之下在体壁中表达量较高。该研究为深入了解棉铃虫P450 CYP6B6的表达调控机制及其参与杀虫剂抗性的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 棉铃虫(Helicoverpa armigera) 细胞色素P450CYP6B6 2-十三烷酮 MRNA水平 蛋白水平 表达规律
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日粮不同蛋白水平对绵羊脂肪和肌肉中IGF-Ⅰ基因表达的影响 被引量:4
14
作者 刘景云 张英杰 刘月琴 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期197-202,共6页
选择年龄、体质量相近的杂交母羊(萨福克♂×小尾寒羊♀)24只,随机分为3组,分别饲喂不同蛋白水平的日粮(中蛋白日粮,低蛋白日粮和高蛋白日粮)。采用半定量RT-PCR方法,检测日粮不同蛋白水平对绵羊脂肪和肌肉中IGF-Ⅰ基因表达的影响... 选择年龄、体质量相近的杂交母羊(萨福克♂×小尾寒羊♀)24只,随机分为3组,分别饲喂不同蛋白水平的日粮(中蛋白日粮,低蛋白日粮和高蛋白日粮)。采用半定量RT-PCR方法,检测日粮不同蛋白水平对绵羊脂肪和肌肉中IGF-Ⅰ基因表达的影响。结果表明:日粮的蛋白质水平影响绵羊腹部皮下脂肪、肠系膜脂肪和半腱肌组织IGF-Ⅰ基因的表达,随着日粮蛋白质水平的升高IGF-Ⅰ表达量增加。但表达具有组织特异性,在腹部皮下脂肪、肠系膜脂肪中,中蛋白组和高蛋白组均显著高于低蛋白组(P<0.05),在半腱肌组织中,高蛋白组极显著高于低蛋白组(P<0.01),而中蛋白组与高蛋白组和低蛋白组间均无显著差异(P>0.05)。 展开更多
关键词 绵羊 蛋白水平 IGF-Ⅰ 基因表达
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不同蛋白质水平精料对色瓦绵羊生产性能及生长速度、肉品质相关基因表达的影响 被引量:5
15
作者 王耀梅 田孟芳 +2 位作者 孙家乐 任子利 赵彦玲 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第16期92-98,共7页
为了研究不同蛋白质水平精料对色瓦绵羊生产性能及生长速度、肉品质相关基因表达的影响,试验将60只体重相近的2岁健康色瓦绵羊随机分为4组,即对照组、低蛋白质组、中蛋白质组和高蛋白质组,每组3个重复,每个重复5只,上午放牧,下午3个试验... 为了研究不同蛋白质水平精料对色瓦绵羊生产性能及生长速度、肉品质相关基因表达的影响,试验将60只体重相近的2岁健康色瓦绵羊随机分为4组,即对照组、低蛋白质组、中蛋白质组和高蛋白质组,每组3个重复,每个重复5只,上午放牧,下午3个试验组(低蛋白质组、中蛋白质组、高蛋白质组)分别补饲含14%、16%、18%蛋白质水平的精料,对照组不补饲精料,每组单圈饲喂,预试期10 d,正试期60 d。于试验期第1天和第60天测定空腹状态下试验羊只体重,每天记录精料投喂量和剩余量,计算总增重、平均日增重和料重比。试验结束后测定试验羊只屠宰后24 h内背最长肌pH值、剪切力、肉色(L^(*)值、a^(*)值和b^(*)值)、系水力肉品质指标。采用RT-qPCR检测色瓦绵羊背最长肌中影响生长速度的基因[胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、肌细胞生成素(MyoG)]和影响肉品质的基因[钙蛋白酶抑制蛋白(CAST)、肌肉生长抑制素(MSTN)]的mRNA相对表达量。结果表明:低蛋白质组试验羊只的平均日增重显著高于对照组(P<0.05),但与中、高蛋白质组差异不显著(P>0.05);料重比与高、中蛋白组差异不显著(P>0.05);pH值、剪切力、肉色(L^(*)值、a^(*)值和b^(*)值)、系水力肉品质各项指标与其他3组均差异不显著(P>0.05);IGF-1、MyoG基因的mRNA相对表达量显著高于对照组(P<0.05),但与中、高蛋白质组差异不显著(P>0.05);CAST、MSTN基因的mRNA相对表达量与其他3组均差异不显著(P>0.05)。说明补饲低蛋白质水平(14%)精料对色瓦绵羊进行育肥是可行的。 展开更多
关键词 色瓦绵羊 蛋白水平 生产性能 基因表达 育肥
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大肠杆菌志贺毒素stxB融合基因的构建及其高效表达 被引量:3
16
作者 刘军 冯书章 +5 位作者 齐翀 孙洋 祝令伟 郭学军 尹铁勇 庄永菊 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期28-30,共3页
利用 PCR方法 ,从肠出血性大肠杆菌 O15 7∶ H7的基因组 DNA中 ,分别扩增出 Stx1B和 Stx2 B亚基的结构基因片段 ,然后再通过 PCR将这 2个片段连接起来 ,并定向克隆到表达质粒 p ET2 8a的 Nco 和 Eco R 位点之间 ,构建了重组表达质粒 p ... 利用 PCR方法 ,从肠出血性大肠杆菌 O15 7∶ H7的基因组 DNA中 ,分别扩增出 Stx1B和 Stx2 B亚基的结构基因片段 ,然后再通过 PCR将这 2个片段连接起来 ,并定向克隆到表达质粒 p ET2 8a的 Nco 和 Eco R 位点之间 ,构建了重组表达质粒 p MB1。将重组质粒转化到宿主菌 BL2 1(DE3)中 ,对重组菌株 BL2 1(p MB1)用 IPTG进行诱导表达 ,并对最佳诱导时间进行了探索。 SDS- PAGE电泳检测结果表明 ,重组菌株表达出了 16 30 0的目的蛋白 Stx2 B- L-Stx1B;经薄层扫描分析表明 ,表达量约占菌体总蛋白的 6 8.4 % ,且目的蛋白为包涵体表达 ,表达量约占细菌沉淀的84 .6 %。研究还表明 ,未用 IPTG诱导的 BL2 1(p MB1)菌株也可有少量目的蛋白的基础表达。不同诱导时间的结果表明 ,在 3~ 7h的诱导时间内 。 展开更多
关键词 MB 表达量 蛋白S 融合基因 志贺毒素 再通 薄层扫描 诱导时间 位点 IPTG
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不同载体-宿主菌组合对重组蛋白表达量的影响 被引量:4
17
作者 杨刚刚 王泽 +2 位作者 白海静 杨亚娟 徐存拴 《河南科技大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2016年第2期78-81,87,共5页
研究了不同载体-宿主菌组合对毕赤酵母重组蛋白表达量的影响。以豹蛙抗瘤酶(onconase,ONC)、IL-1α、IL-1β、IL-1Ra、人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)与ONC的融合蛋白即HSA-(Gly_4Ser_1)_3-ONC(简称HSA-ONC)等5种重组蛋白为报... 研究了不同载体-宿主菌组合对毕赤酵母重组蛋白表达量的影响。以豹蛙抗瘤酶(onconase,ONC)、IL-1α、IL-1β、IL-1Ra、人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)与ONC的融合蛋白即HSA-(Gly_4Ser_1)_3-ONC(简称HSA-ONC)等5种重组蛋白为报告蛋白,设计并合成了5种基因。分别插入3种酵母表达载体p PIC9、p PIC9K和p PICZα-A中,转化3种毕赤酵母受体菌X-33、GS115和SMD1168。筛选得到7种载体-宿主菌组合,在摇瓶规模进行诱导并定量。研究结果表明:5种外源蛋白在p PICZα-A/X-33组合中表达量最高,在p PIC9/SMD1168组合中最低。从重组蛋白表达量来说,p PICZα-A/X-33组合优于其他6种载体-宿主菌组合。 展开更多
关键词 载体 宿主菌 载体-宿主菌组合 重组蛋白 表达量
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在大肠杆菌中高效表达重组Protein A 被引量:4
18
作者 蔡仕英 刘亚霞 +1 位作者 强伯勤 姚志建 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1992年第2期123-127,共5页
本文构建了高效表达质粒pPA-3,其在大肠杆菌中表达的重组Protein A仅含天然Protein A的免疫球蛋白Fc段结合区,表达量达菌体可溶蛋白的20%。SDS-PAGE及Westernblot结果显示,重组Protein A的分子量有4种,即33、32.2、29.5和28.6kDa,其中33... 本文构建了高效表达质粒pPA-3,其在大肠杆菌中表达的重组Protein A仅含天然Protein A的免疫球蛋白Fc段结合区,表达量达菌体可溶蛋白的20%。SDS-PAGE及Westernblot结果显示,重组Protein A的分子量有4种,即33、32.2、29.5和28.6kDa,其中33kDa与理论计算结果一致,推测其它分子量可能是由于胞内蛋白酶降解所致。一步亲和层析即可将重组Protein A从细胞裂解上清液中纯化出来。火箭电泳及酶联免疫分析结果表明,等蛋白量的该重组Protein A比天然Protein A能结合更多的免疫球蛋白。 展开更多
关键词 重组 高效表达 大肠杆菌
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St udy on Hsp90 Expression in Different Tissues and Its Antibody in Serum of Chickens Infected with Marek's Diseases 被引量:2
19
作者 LI Yu-bao LI Juan +1 位作者 WANG Zhi-liang LIU Si-dang 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2014年第6期1355-1362,共8页
To investigate the dynamic change of heat shock protein 90 (Hsp90) in the genesis and development of tumor, we successfully established tumor animal model using Marek’s disease and then determined the location of H... To investigate the dynamic change of heat shock protein 90 (Hsp90) in the genesis and development of tumor, we successfully established tumor animal model using Marek’s disease and then determined the location of Hsp90 in the tumor tissue using immunohistochemistry method, the antibody titer level of Hsp90 in the serum and the expression level in the tissue using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) method. Our result showed that Hsp90 location in the tumor tissue was signiifcantly associated with the tumor cell and most in the cytoplasm of the tumor cell, and Hsp90 expression level in the tissue and the antibody titer level in the serum was most signiifcantly increased with the development of tumor. This is the ifrst report to show the presence of Hsp90 in tumor tissues induced by the Marek’s disease, with its expression correlated to the tumoral grading. These data may also be valuable for developing new molecular anti-cancer therapies. 展开更多
关键词 heat shock protein 90 Marek's disease IMMUNOHISTOCHEMISTRY expression antibody titer level
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克服位置效应提高外源基因在CHO细胞中稳定高效表达的策略 被引量:3
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作者 周宏 刘志刚 俞炜源 《生物技术通讯》 CAS 2006年第6期945-949,共5页
能够生产有功用的治疗性蛋白的一个重要前提是获得稳定的重组蛋白高表达细胞株,然而筛选一个能够持续稳定表达外源蛋白的重组细胞株是费时费力的过程。有多篇文献报道了重组蛋白细胞株表达的不稳定性。位置效应是高表达细胞株不稳定性... 能够生产有功用的治疗性蛋白的一个重要前提是获得稳定的重组蛋白高表达细胞株,然而筛选一个能够持续稳定表达外源蛋白的重组细胞株是费时费力的过程。有多篇文献报道了重组蛋白细胞株表达的不稳定性。位置效应是高表达细胞株不稳定性的重要因素,克服或利用位置效应是当前获得稳定高表达重组蛋白细胞株的有效途径。为解决外源基因插入的随机性所带来的不可预知的后果,可以事先在CHO细胞基因组中筛选转录热点区域,再通过位点特异性或同源重组的方式,实现外源基因的定点整合。各种调节位置效应的DNA元件陆续被发现,可以利用它们去调控基因表达及增加细胞株的稳定性。 展开更多
关键词 CHO细胞 稳定性 重组蛋白 高效表达
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