猪圆环病毒2型、猪巨细胞病毒和TTV-2混合感染的流行病学调查 被引量：16

1

作者 刘捷 陆琪 +3 位作者 王先炜 李玉峰 王晓晔 姜平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1095-1098,共4页

本研究根据猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2、猪巨细胞病毒(PCMV)gB基因和TTV2非编码区序列合成引物,利用PCR方法对2009年来自江苏、浙江、上海、广东和广西等5个省市76个患病猪群的仔猪病料进行了病原学检测。结果显示,PCV2阳性率64.5%(49/76)... 本研究根据猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2、猪巨细胞病毒(PCMV)gB基因和TTV2非编码区序列合成引物,利用PCR方法对2009年来自江苏、浙江、上海、广东和广西等5个省市76个患病猪群的仔猪病料进行了病原学检测。结果显示,PCV2阳性率64.5%(49/76),TTV2阳性率47.4%(36/76),PCMV阳性率69.7%(49/76)。在PCV2的阳性病料中,与PCMV和/或TTV2混合感染占93.9%(46/49),PCMV单独感染阳性率18.4%(14/76),表明该地区PCV2感染率明显提高,混合感染种类复杂,从而为有效预防和控制这些疾病提供了理论依据。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 猪巨细胞病毒 TorqueTeno病毒 流行病学

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猪巨细胞病毒的PCR检测及其gB基因特征分析 被引量：9

2

作者 李晶 余兴龙 +5 位作者 李润成 罗维 向卫军 李薇 王亚 葛猛 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期521-525,共5页

根据GenBank登录的猪巨细胞病毒(PCMV)gB基因序列设计检测引物和全长gB基因引物,对来自湖南浏阳和江西景德镇不同养殖场的猪鼻拭子样品(51份)进行PCR检测,60.78%(31/51)的鼻拭子样品扩增出了260bp的特异性条带.再以阳性样品为模板扩增全... 根据GenBank登录的猪巨细胞病毒(PCMV)gB基因序列设计检测引物和全长gB基因引物,对来自湖南浏阳和江西景德镇不同养殖场的猪鼻拭子样品(51份)进行PCR检测,60.78%(31/51)的鼻拭子样品扩增出了260bp的特异性条带.再以阳性样品为模板扩增全长gB基因,并将其克隆到pMD18-T载体,核苷酸序列测定和结果分析表明,所获得PCMVgB基因序列全长2580bp,编码860个氨基酸,与国外PCMV分离株的核苷酸同源性为97.6%～98.9%,氨基酸同源性为97.0%～98.6%,且PCMV可分为2个群:一群为中国湖南株、英国株和德国株,命名为A群;另一群为日本株、瑞士株和西班牙株,命名为B群.抗原表位优势、亲水性、表面可及性预测分析表明,PCMVgB蛋白是理想的免疫学抗原候选蛋白. 展开更多

关键词 猪巨细胞病毒 PCR GB基因 序列分析

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猪巨细胞病毒病研究进展 被引量：6

3

作者 李英伦 房春林 《中国动物保健》 2011年第2期18-20,共3页

猪巨细胞病毒病作为一种传染性疾病,全世界98%以上的猪受到过本病毒的感染,感染猪群98%以上的血清抗体均呈阳性。该病主要通过上呼吸道传播和排毒,对猪场造成较大危害。本文就猪巨细胞病毒病的病原学、流行病学、临床症状、病理变化、... 猪巨细胞病毒病作为一种传染性疾病,全世界98%以上的猪受到过本病毒的感染,感染猪群98%以上的血清抗体均呈阳性。该病主要通过上呼吸道传播和排毒,对猪场造成较大危害。本文就猪巨细胞病毒病的病原学、流行病学、临床症状、病理变化、诊断方法等方面作一综述。 展开更多

关键词 猪巨细胞病毒病 研究进展

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猪巨细胞病毒TaqMan荧光定量PCR检测的建立 被引量：6

4

作者 拜廷阳 赵德明 +4 位作者 吴志明 闫若潜 刘淑敏 赵明军 刘梅芬 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期169-174,共6页

目的建立一种特异、灵敏、快速检测猪巨细胞病毒的TaqMan荧光定量PCR方法。方法根据GenBank已登录的猪巨细胞病毒(Porcine Cytomegalovirus,PCMV)DNA序列设计合成特异性引物对和TaqMan荧光探针,经优化反应条件,建立了猪巨细胞病毒的Taq... 目的建立一种特异、灵敏、快速检测猪巨细胞病毒的TaqMan荧光定量PCR方法。方法根据GenBank已登录的猪巨细胞病毒(Porcine Cytomegalovirus,PCMV)DNA序列设计合成特异性引物对和TaqMan荧光探针,经优化反应条件,建立了猪巨细胞病毒的TaqMan荧光定量PCR检测方法(fluorescent quantitative real-time PCR,FQ-PCR),进行了FQPCR检测方法的敏感性、特异性和重复性试验;对疑似PCMV感染临床样品进行了应用检测,并与常规PCR方法进行了比对;对FQ-PCR检测结果为PCMV阳性猪的不同内脏器官进行病毒含量比较检测。结果成功建立了PCMV的FQ-PCR方法,标准曲线的循环阈值(Ct值)与模板浓度有良好的线性关系,相关系数为0.998;检测灵敏度可达1拷贝/μL,是常规PCR的100倍;特异性高,对pGEM-T/PCMV重组质粒扩增呈现阳性反应曲线,而对6个对照病原的扩增曲线均呈现阴性反应;对不同浓度的pGEM-T/PCMV重组质粒分别重复扩增6次,重复结果良好;对15份临床疑似PCMV感染的组织病料进行应用检测表明,其中有9份样品为阳性,与常规PCR方法检测的阳性符合率为100%。猪的内脏器管中PCMV含量最高为扁桃体,最低的为小肠。结论成功建立了PCMV FQ-PCR方法,可用于临床上PCMV感染猪的确诊和隐性感染猪的早期检测,对PCMV的快速诊断、综合防控及净化等具有重要意义。 展开更多

关键词 猪巨细胞病毒 实时荧光定量PCR TaqMan荧光探针 检测 应用

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猪巨细胞病毒病 被引量：3

5

作者 朱事康 李春萍 +5 位作者 周宇 佟铁铸 刘星 刘中勇 林志雄 罗卓军 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第3期82-85,共4页

猪巨细胞病毒(Porcine Cytomegalovirus,PC-MV)是由疱疹病毒科β疱疹病毒亚科巨细胞病毒属的一种[1]。该病毒遍布全球[2],猪感染该病也是普遍存在,在北美、欧洲和日本,90%以上的猪群曾受到感染。对成年猪只通常只呈现隐性感染,而对3周... 猪巨细胞病毒(Porcine Cytomegalovirus,PC-MV)是由疱疹病毒科β疱疹病毒亚科巨细胞病毒属的一种[1]。该病毒遍布全球[2],猪感染该病也是普遍存在,在北美、欧洲和日本,90%以上的猪群曾受到感染。对成年猪只通常只呈现隐性感染,而对3周齡以下仔猪常常诱发致命性的全身感染[3]。 展开更多

关键词 porcine cytomegalovirus PATHOGEN EPIDEMIOLOGY DIAGNOSIS control public health

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猪巨细胞病毒gB蛋白抗原表位富集区的表达和抗原性的分析 被引量：5

6

作者 李晶 余兴龙 +5 位作者 李润成 黄泽彬 葛猛 向卫军 李薇 王亚 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期126-130,共5页

为表达猪巨细胞病毒(PCMV)gB基因,本研究根据GenBank登录的PCMV gB基因序列设计1对引物,以感染PCMV猪肺细胞总DNA为模板,采用PCR扩增得到gB基因片段,克隆于pMD-18T并进行核苷酸序列测定。利用DNAStar分析gB蛋白的抗原表位,选择抗原表位... 为表达猪巨细胞病毒(PCMV)gB基因,本研究根据GenBank登录的PCMV gB基因序列设计1对引物,以感染PCMV猪肺细胞总DNA为模板,采用PCR扩增得到gB基因片段,克隆于pMD-18T并进行核苷酸序列测定。利用DNAStar分析gB蛋白的抗原表位,选择抗原表位富集的2个基因片段(命名为PCMVgB1和PCMVgB2)分别克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒并转化Rosetta(DE3)宿主菌。结果显示:扩增的gB基因与GenBank登录的PCMV gB基因的核苷酸同源性在97.6%～98.9%之间,推导的氨基酸同源性在97%～98.6%之间。经IPTG诱导的含pET-gB1和pET-gB2重组质粒的宿主菌可表达重组gB1和gB2蛋白,SDS-PAGE显示分子量约为62ku和36ku。Western blot和间接ELISA结果表明,重组gB1和gB2蛋白均具有反应原性。 展开更多

关键词 猪巨细胞病毒 GB基因 原核表达 间接ELISA

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猪巨细胞病毒GX株gB基因的克隆与序列分析 被引量：5

7

作者 熊毅 王常伟 +3 位作者 陈磊 颜健华 朱伟 刘棋 《动物医学进展》 CSCD 2008年第5期21-24,共4页

从广西病猪的肺组织中分离到猪巨细胞病毒GX株,通过PCR扩增得到猪巨细胞病毒GX株gB基因的一个1736bp片段,扩增产物经克隆、测序,得到的核苷酸序列与GenBank上已发表的猪巨细胞病毒其他分离株的核苷酸序列相比,其同源性在97.8%～98.9%,... 从广西病猪的肺组织中分离到猪巨细胞病毒GX株,通过PCR扩增得到猪巨细胞病毒GX株gB基因的一个1736bp片段,扩增产物经克隆、测序,得到的核苷酸序列与GenBank上已发表的猪巨细胞病毒其他分离株的核苷酸序列相比,其同源性在97.8%～98.9%,与人巨细胞病毒分离株的同源性在32.0%～43.6%,表明gB基因在同种动物间比较保守。在系统进化树中,GX株与其他猪巨化细胞病毒株亲缘关系较近,属于同一个分支,而与人巨化细胞病毒差异较大。 展开更多

关键词 猪巨细胞病毒 GB基因 克隆 序列分析

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猪巨细胞病毒环介导等温扩增方法的建立 被引量：4

8

作者 廖春燕 徐志文 +2 位作者 周远成 朱玲 郭万柱 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期11-15,共5页

根据GenBank已登录的猪巨细胞病毒(Porcine cytomegalovirus,PCMV)gB基因的DNA序列设计合成4对特异性引物,通过优化反应条件,以及敏感性、特异性检测,建立了猪巨细胞病毒的环介导等温扩增检测方法(Loop-mediated isothermal amplificati... 根据GenBank已登录的猪巨细胞病毒(Porcine cytomegalovirus,PCMV)gB基因的DNA序列设计合成4对特异性引物,通过优化反应条件,以及敏感性、特异性检测,建立了猪巨细胞病毒的环介导等温扩增检测方法(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP);用建立的检测方法对2013年来自四川省雅安、成都、绵阳、眉山、乐山、德阳、遂宁、资阳等市的136份病料进行猪巨细胞病毒检测,将检测结果与常规PCR方法检测结果进行比对。结果显示,本试验建立的方法检测灵敏度可达10拷贝/μL,是常规PCR的10倍;136份病料用LAMP检测,其中有89份样品为猪巨细胞病毒阳性,其阳性率与常规PCR方法检测的阳性相符率为100%。结果表明,本试验成功建立了PCMV的LAMP检测方法,可用于临床上PCMV感染猪的确诊,对PCMV的快速诊断、综合防控等具有重要意义。 展开更多

关键词 猪巨细胞病毒 环介导等温扩增技术 检测

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猪巨细胞病毒(PCMV)四川株gB基因的克隆与序列分析 被引量：3

9

作者 何万平 赵玲 +3 位作者 刘艳 刘燕 吴玉梅 徐凯 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第3期80-83,共4页

根据GenBank中猪巨细胞病毒(porcine cytomegalovirus,PCMV)gB基因的核苷酸序列(GenBank登录号:FJ870563.1)设计1对引物,采用PCR方法从确诊为猪巨细胞病毒的阳性样品中扩增gB基因,将其克隆到pMD19-T载体上,转化DH5α感受态细胞,提取重... 根据GenBank中猪巨细胞病毒(porcine cytomegalovirus,PCMV)gB基因的核苷酸序列(GenBank登录号:FJ870563.1)设计1对引物,采用PCR方法从确诊为猪巨细胞病毒的阳性样品中扩增gB基因,将其克隆到pMD19-T载体上,转化DH5α感受态细胞,提取重组质粒T-PCMV-gB,经PCR和酶切鉴定后测序,并与GenBank上gB相应序列进行同源性分析。结果表明,该基因片段长度为2580bp,与其他参考株gB基因的核苷酸同源性达98.0%～99.6%;其推导的氨基酸序列与人疱疹病毒6型和7型比较分析结果显示,其同源性分别为42.9%～43.6%和40.5%～40.6%。这些氨基酸差异对病毒生物学特性的影响有待于进一步研究。 展开更多

关键词 猪巨细胞病毒 GB基因 克隆 序列分析

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猪巨细胞病毒PCR检测方法的建立及应用 被引量：2

10

作者 刘红亮 朱玲 +4 位作者 徐志文 王燕群 魏浩澈 郭万柱 赵玲 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第7期5-8,共4页

参考GenBank中收录的猪巨细胞病毒(PCMV)DNA聚合酶基因序列设计合成了一对引物,扩增目的片段为236 bp。进行PCR检测方法的特异性、敏感性和重复性试验,建立了PCMV的PCR检测方法。结果表明,该方法对模板的最低检测量为1.1 pg,具有良好的... 参考GenBank中收录的猪巨细胞病毒(PCMV)DNA聚合酶基因序列设计合成了一对引物,扩增目的片段为236 bp。进行PCR检测方法的特异性、敏感性和重复性试验,建立了PCMV的PCR检测方法。结果表明,该方法对模板的最低检测量为1.1 pg,具有良好的特异性、敏感性和重复性。应用该法对猪同时感染PCMV和PRRSV相关性进行初步探究,36份PRRSV阳性病料中,PCMV检出率为63.89%。该法可用于PCMV的临床发病诊断和流行病学监测等。 展开更多

关键词 猪巨细胞病毒 DNA聚合酶 PCR

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猪巨细胞病毒SC株DNA聚合酶基因的克隆及生物信息学分析 被引量：2

11

作者 王燕群 徐志文 +2 位作者 郭万柱 朱玲 梅淼 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期886-891,共6页

为克隆出猪巨细胞病毒SC株DNA聚合酶(DPOL)基因并对其进行分析,根据GenBank中的DPOL基因序列(AF268040)设计了1对引物,用PCR法扩增出猪巨细胞病毒SC株DPOL基因,将其克隆到T载体,测序并进行生物信息学分析。测序结果表明,猪巨细胞病毒DPO... 为克隆出猪巨细胞病毒SC株DNA聚合酶(DPOL)基因并对其进行分析,根据GenBank中的DPOL基因序列(AF268040)设计了1对引物,用PCR法扩增出猪巨细胞病毒SC株DPOL基因,将其克隆到T载体,测序并进行生物信息学分析。测序结果表明,猪巨细胞病毒DPOL基因全长3 024bp,为一个完整ORF,共编码1 008个氨基酸;与参考毒株的核苷酸同源性为98%,系统进化树表明猪巨细胞病毒与人疱疹病毒6型和7型关系最近;运用生物信息学软件推导出该蛋白的基本性质,并预测出高级结构。成功地进行了猪巨细胞病毒SC株DPOL基因的克隆和生物信息学分析,为今后此基因生物学功能和猪巨细胞病毒复制机理的研究以及病毒系统分类工作提供了参考。 展开更多

关键词 猪巨细胞病毒 SC株 DNA聚合酶基因 克隆 生物信息学分析

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猪巨细胞病毒gB基因的原核表达与间接ELISA检测方法的建立 被引量：2

12

作者 朱月华 刘捷 +3 位作者 白娟 宋艳华 王先炜 姜平 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期40-43,共4页

猪巨细胞病毒(PCMV)是引起新生仔猪死亡、鼻炎、肺炎和生长速度减缓的重要病原之一,我国尚无有效的诊断方法。为建立检测PCMV的ELISA方法,本研究以重组PCMV囊膜糖蛋白B(gB蛋白)为包被抗原,优化反应条件:抗原包被量0.4μg/mL,待检血清稀... 猪巨细胞病毒(PCMV)是引起新生仔猪死亡、鼻炎、肺炎和生长速度减缓的重要病原之一,我国尚无有效的诊断方法。为建立检测PCMV的ELISA方法,本研究以重组PCMV囊膜糖蛋白B(gB蛋白)为包被抗原,优化反应条件:抗原包被量0.4μg/mL,待检血清稀释度1∶100,37℃包被2 h后4℃过夜,5%脱脂乳37℃封闭2 h,二抗1∶10 000稀释,37℃作用2 h,抗体临界值为S/P≥0.354判为阳性,S/P≤0.295判为阴性,介于二者之间为可疑,建立了PCMV抗体间接ELISA检测方法。与猪瘟、猪伪狂犬病、猪附红细胞体病、副猪嗜血杆菌及猪圆环病毒2型等血清抗体无交叉反应,批间和批内重复性较好,对江苏省259份仔猪血清样品进行检测,抗体阳性率达56.76%,从而为PCMV检测和流行病学调查提供了有效方法。 展开更多

关键词 猪巨细胞病毒 重组囊膜糖蛋白B 原核表达 间接ELISA

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猪巨细胞病毒福建株DPOL基因的克隆及序列分析 被引量：1

13

作者 陈如敬 陈铖 +5 位作者 吴学敏 车勇良 严山 王晨燕 王隆柏 周伦江 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第2期365-370,共6页

为了明确猪巨细胞病毒(porcine cytomegalovirus,PCMV)福建株(PCMV-FJ01株)DPOL基因特征,本研究根据GenBank数据库中PCMV DPOL基因序列特征,利用引物设计软件Oligo 7.0设计针对DPOL基因的引物,以PCMV-FJ01株核酸DNA为模板,对其进行分段... 为了明确猪巨细胞病毒(porcine cytomegalovirus,PCMV)福建株(PCMV-FJ01株)DPOL基因特征,本研究根据GenBank数据库中PCMV DPOL基因序列特征,利用引物设计软件Oligo 7.0设计针对DPOL基因的引物,以PCMV-FJ01株核酸DNA为模板,对其进行分段PCR扩增。将分段扩增的产物经胶回收试剂盒回收后进行克隆测序,对测序结果进行拼接后获得PCMV-FJ01株DPOL基因序列,并进行生物信息学分析。结果表明,PCMV-FJ01株DPOL基因全长为3 021bp,编码1 006个氨基酸;其与GenBank中的PCMV分离株DPOL基因核苷酸和氨基酸同源性分别在98.7%和99.1%以上。遗传进化分析发现,相对于巨细胞病毒属其他种代表株,PCMV分离株DPOL基因在遗传进化上和玫瑰疱病毒属代表株更近。建议根据PCMV DPOL基因遗传进化特征,将其划归为玫瑰疱病毒属的一个病毒新种——猪玫瑰疹病毒(porcine roseolovirus)。 展开更多

关键词 猪巨细胞病毒 DPOL基因 克隆 序列分析 病毒分类

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猪巨细胞病毒gB基因优势抗原表位区的原核表达及间接ELISA方法的建立 被引量：1

14

作者 刘骁 廖珊 +2 位作者 朱玲 周远成 周璐 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期152-158,共7页

扩增了猪巨细胞病毒(PCMV)gB基因的优势抗原表位区,将构建成功的gB基因优势抗原表位区原核表达重组质粒(pET32a-gB)转化入表达菌Rosetta(DE3)中进行表达,以表达的重组蛋白作为包被抗原建立了一种检测PCMV抗体的间接ELISA方法,并对该间接... 扩增了猪巨细胞病毒(PCMV)gB基因的优势抗原表位区,将构建成功的gB基因优势抗原表位区原核表达重组质粒(pET32a-gB)转化入表达菌Rosetta(DE3)中进行表达,以表达的重组蛋白作为包被抗原建立了一种检测PCMV抗体的间接ELISA方法,并对该间接ELISA检测方法进行了优化。结果显示,最佳抗原包被浓度为1.9μg/mL,最佳血清稀释度为1∶160,二抗最佳稀释度为1∶10 000;当样品D450nm≥0.26时判为阳性,当样品D450nm<0.215时判为阴性,介于两者之间时判为可疑。用该间接ELISA方法对138份PCMV阴性血清与240份PCMV阳性血清进行检测的结果显示,它的特异性为97.83%,敏感性为97.9%,变异系数均小于10%。用该ELISA方法和Western-blot对184份临床样品进行检测,结果二者的符合率为92.4%。结果表明,该间接ELISA方法简便快捷,具有良好的特异性、敏感性及重复性,适用于对PCMV抗体的大规模检测。 展开更多

关键词 猪巨细胞病毒 原核表达 gB基因优势抗原表位区蛋白 间接ELISA

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猪细胞巨化病毒四川株MCP基因克隆及其编码蛋白的生物信息学分析 被引量：1

15

作者 史小红 徐志文 +4 位作者 郭万柱 朱玲 漆信桥 王燕群 赵玲 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1559-1563,共5页

参照GenBank公布的仅有的日本株猪细胞巨化病毒较大衣壳蛋白(MCP)基因序列(登录号:AB051069)设计2对引物,采用分步克隆的方法,将PCMV MCP全序列克隆入pMD19-T载体进行测序,成功获得了pMD-MCP重组质粒,将所得序列录入到GenBank中(登录号:... 参照GenBank公布的仅有的日本株猪细胞巨化病毒较大衣壳蛋白(MCP)基因序列(登录号:AB051069)设计2对引物,采用分步克隆的方法,将PCMV MCP全序列克隆入pMD19-T载体进行测序,成功获得了pMD-MCP重组质粒,将所得序列录入到GenBank中(登录号:HQ025802)。测序结果表明,该MCP基因全长4 017bp,共编码1 338个氨基酸;与NCBI上公布的仅有的日本毒株MCP基因的核苷酸同源性为96.8%,氨基酸同源性为94.1%;进化分析显示:PCMV MCP基因与人疱疹病毒6型或7型的MCP基因亲缘关系较近;利用生物信息学软件对蛋白质结构特征进行分析,发现该蛋白含有59个潜在的磷酸化位点,潜在功能强大;亚细胞定位预测结果表明该蛋白主要存在于线粒体中和细胞质中并各占39.1%和26.1%,内质网占17.4%,高尔基体占8.7%,空泡和细胞核均占4.3%,表明PCMV MCP蛋白属于胞质蛋白,抗原区位集中于胞膜,有向胞质移动的趋势;另该成熟蛋白存在18个主要的抗原位点,将肽链经亲水性与抗原表位的共同分析,发现其肽链的C端极有可能分布有抗原决定簇。 展开更多

关键词 猪细胞巨化病毒 主要衣壳蛋白基因 克隆 生物信息学分析

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猪巨细胞病毒gB基因的克隆与序列分析 被引量：1

16

作者 刘兴彩 尹燕博 +3 位作者 徐守振 李吉达 张毅 郭妍妍 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2012年第2期17-21,共5页

应用PCR方法,从郑州、福建、浙江金华和宁波猪肺脏中分别扩增出4段PCMV gB基因,并将其分别克隆入pMD18-T载体,经蓝白斑筛选和PCR鉴定,将阳性克隆进行序列分析并构建系统进化树。序列分析表明,其gB基因全长为2 580bp,编码860个氨基酸,与P... 应用PCR方法,从郑州、福建、浙江金华和宁波猪肺脏中分别扩增出4段PCMV gB基因,并将其分别克隆入pMD18-T载体,经蓝白斑筛选和PCR鉴定,将阳性克隆进行序列分析并构建系统进化树。序列分析表明,其gB基因全长为2 580bp,编码860个氨基酸,与PCMV其他序列相比,其同源性在96.1%～99.7%,与β疱疹病毒亚科中其他常见毒株同源性在25.9%～38.1%;推导的氨基酸序列,有11个半胱氨酸,17个潜在N-糖基化位点,其裂解位点是RYKR;系统进化树分析发现,推导的氨基酸序列出现两个分支,而且来自上述4个地区PCMV gB糖蛋白氨基酸序列处在不同的分支中。 展开更多

关键词 猪巨细胞病毒 GB基因 克隆 序列分析

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猪巨细胞病毒四川株gB基因的克隆表达及抗原性分析

17

作者 朱玲 史小红 +6 位作者 王潇娣 梅淼 周远成 刘孟良 吴云飞 徐志文 郭万柱 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期854-860,共7页

为研究猪巨细胞病毒(PCMV)SC株gB蛋白的免疫学活性,采用PCR扩增PCMV SC株gB全基因和不含跨膜区及信号肽的gB基因片段,将后者克隆至pET-30a(+)载体,转化Rosetta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导以获得高效表达。将纯化蛋白免疫家兔制备多克隆... 为研究猪巨细胞病毒(PCMV)SC株gB蛋白的免疫学活性,采用PCR扩增PCMV SC株gB全基因和不含跨膜区及信号肽的gB基因片段,将后者克隆至pET-30a(+)载体,转化Rosetta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导以获得高效表达。将纯化蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,分别用琼脂扩散试验和Western-blot对多克隆抗体和复性的gB蛋白进行检测。结果显示,扩增的PCMV gB基因全长2 580bp,编码860个氨基酸。与国内外参考株的核苷酸和氨基酸序列相似性分别为97.8%～99.5%和96.6%～99.0%;与其他9株β疱疹病毒核苷酸和氨基酸序列相似性分别为33.3%～41.4%和13.3%～49.4%;系统进化分析显示,PCMV与人疱疹病毒6型和7型属于一个分支。gB肽链N端1～23位氨基酸为信号肽,729～751位氨基酸间含有跨膜区。构建的表达载体pET30a-gB-B在Rosetta(DE3)感受态细胞中经IPTG诱导后以包涵体形式表达出大小约80ku的蛋白。所制备的血清琼扩抗体效价为1∶16,Western-blot显示重组gB蛋白可与PCMV阳性猪血清反应。结果表明,PCMV gB基因较为保守,与国内外不同地区的PCMV毒株具有较高的相似性,所表达的重组蛋白具有很好的抗原性。 展开更多

关键词 猪巨细胞病毒 GB基因 克隆 原核表达 抗原性

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猪巨细胞病毒福建株gB基因的克隆和序列分析

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作者 陈如敬 周伦江 +7 位作者 吴学敏 车勇良 王晨燕 王隆柏 黄晓凤 严山 刘玉涛 魏宏 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2017年第1期7-11,共5页

为明确猪巨细胞病毒福建株(PCMV-FJ01)的gB基因特征,根据其序列特征,设计特异性引物对其进行分段扩增,并对目的片段进行克隆测序。结果发现,PCMV-FJ01株gB基因全长为2 580bp,编码859个氨基酸;其和GenBank数据库中的PCMV分离株的gB基因... 为明确猪巨细胞病毒福建株(PCMV-FJ01)的gB基因特征,根据其序列特征,设计特异性引物对其进行分段扩增,并对目的片段进行克隆测序。结果发现,PCMV-FJ01株gB基因全长为2 580bp,编码859个氨基酸;其和GenBank数据库中的PCMV分离株的gB基因的核苷酸和氨基酸同源性分别均在98.3%和97.9%以上。此外,本研究还发现部分(约50%)PCMV代表株的gB基因存在ACA三核苷酸缺失(436位氨基酸存在谷氨酰胺Q的缺失)。除ZZ株外,PCMV不同分离株的gB基因是否存在基因缺失和其遗传进化正相关。 展开更多

关键词 猪巨细胞病毒 GB基因 克隆 序列分析

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猪巨细胞病毒gB优势抗原表位区的原核表达及其多克隆抗体的制备

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作者 江一帆 刘骁 +2 位作者 廖珊 朱玲 周远成 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期936-940,共5页

为制备猪巨细胞病毒(PCMV)gB优势抗原表位区重组蛋白的多克隆抗体,进一步分析PCMV gB蛋白的生物学特性,建立PCMV抗体血清学检测方法。对PCMV gB基因优势抗原表位区进行了PCR扩增,将回收的目的片段连接入pET32a(+)表达载体,转化入E.coli ... 为制备猪巨细胞病毒(PCMV)gB优势抗原表位区重组蛋白的多克隆抗体,进一步分析PCMV gB蛋白的生物学特性,建立PCMV抗体血清学检测方法。对PCMV gB基因优势抗原表位区进行了PCR扩增,将回收的目的片段连接入pET32a(+)表达载体,转化入E.coli Rosetta(DE3),构建了重组表达菌E.coli Rosetta-pET32a(+)-gB,经IPTG诱导表达了gB优势抗原表位区重组蛋白。对重组蛋白进行纯化后,通过Western-blot试验验证了重组蛋白的反应原性,并免疫家兔制备了多克隆抗体。结果表明,该重组蛋白大量可溶性表达,且具有良好的反应原性。琼脂扩散试验及Western-blot检测表明,多克隆抗体效价达到1∶8,且能与gB优势抗原表位区重组蛋白特异性结合。证实,成功制备了PCMV gB优势抗原表位区重组蛋白多克隆抗体。 展开更多

关键词 猪巨细胞病毒 gB优势抗原表位区 多克隆抗体

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