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HR-HPV DNA PCR联合TCT检测对宫颈癌前病变的诊断价值 被引量:41
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作者 陈炎添 陈青龙 +5 位作者 熊燕 苏雪棠 黄伟刚 石胜 郭翼华 陈荣策 《检验医学》 CAS 2013年第6期516-518,共3页
目的探讨高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)DNA聚合酶链反应(PCR)联合液基薄层细胞学检查(TCT)对宫颈癌前病变筛查的应用与诊断价值。方法对540例TCT结果为非典型鳞状上皮细胞(ASCUS)及以上的患者进行HR-HPV DNA PCR检测,并对检测结果进行分... 目的探讨高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)DNA聚合酶链反应(PCR)联合液基薄层细胞学检查(TCT)对宫颈癌前病变筛查的应用与诊断价值。方法对540例TCT结果为非典型鳞状上皮细胞(ASCUS)及以上的患者进行HR-HPV DNA PCR检测,并对检测结果进行分析。结果 TCT阳性合并HPV阳性患者共259例,其中ASCUS、低度鳞状上皮内病变(LSIL)、高度鳞状上皮内病变(HSIL)、鳞状细胞癌(SCC)的例数(阳性率)分别为155例(59.8%)、81例(31.3%)、15例(5.8%)、8例(3.1%);259例患者中ASCUS、LSIL、HSIL、SCC合并HR-HPV的阳性例数(阳性率)分别为28例(18.1%)、20例(24.7%)、10例(66.7%)、8例(100.0%)。HR-HPV和TCT单独检测的敏感性与两者联合检测的敏感性比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。HR-HPV、TCT及两者联合检测的阳性预测值分别为25.5%、11.1%、28.2%,阴性预测值分别为68.8%、59.2%、40.8%。结论TCT与HR-HPV DNA PCR检测是筛查宫颈病变的有效方法,能最大程度地发现宫颈异常细胞并及时发现宫颈癌的诱因。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 液基薄层细胞学检查 高危型人乳头瘤病毒 宫颈癌 诊断
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不孕妇女宫颈沙眼衣原体感染的临床观察 被引量:23
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作者 郝翠芳 曹积功 +5 位作者 杨秋花 侯南英 刘秀丽 李宁 张宁 王文娟 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期183-184,共2页
目的 :探讨宫颈沙眼衣原体 (CT)感染对生育的影响。方法 :应用聚合酶链反应 (PCR)技术 ,对 2 16对不孕夫妇宫颈分泌物、尿道分泌物进行 CT- DNA检测 ,并观察宫颈 CT感染对围排卵期宫颈粘液葡萄糖含量及性交后试验的影响。结果 :2 16对... 目的 :探讨宫颈沙眼衣原体 (CT)感染对生育的影响。方法 :应用聚合酶链反应 (PCR)技术 ,对 2 16对不孕夫妇宫颈分泌物、尿道分泌物进行 CT- DNA检测 ,并观察宫颈 CT感染对围排卵期宫颈粘液葡萄糖含量及性交后试验的影响。结果 :2 16对不孕夫妇衣原体感染的阳性率分别为 :女性 32 .4 % ,男性 30 .1%。宫颈 CT感染妇女围排卵期性交后试验与未感染妇女比较 ,每高倍视野的活精数明显减少 (P<0 .0 5 ) ,围排卵期宫颈粘液葡萄糖含量明显减少 (P<0 .0 1)。经治疗后宫颈 CT转阴的妇女 ,围排卵期性交后试验每高倍视野的活精数明显高于治疗前 (P<0 .0 5 ) ,宫颈粘液的葡萄糖含量亦明显高于治疗前 (P<0 .0 1)。治疗后宫颈 CT持续阳性妇女 ,围排卵期性交后试验与治疗前比较 ,每高倍视野的活精数无明显变化 (P>0 .0 5 ) ,宫颈粘液的葡萄糖含量亦无明显变化 (P>0 .0 5 )。结论 :宫颈 CT- DNA感染是不孕的一个重要因素 ,导致不孕的原因 ,可能与患者宫颈粘液葡萄糖含量降低 。 展开更多
关键词 不孕 妇女 宫颈 沙眼衣原体感染 临床观察 聚合酶链反应 性交后试验
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5种方法联合检测对菌阴肺结核诊断价值的研究 被引量:23
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作者 王国斌 叶德普 +10 位作者 彭义利 刘俊刚 柴文琪 徐翠云 阎国蕊 伍学强 葛广秀 靳鸿建 宋自卫 毛清华 潘风苗 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期47-49,共3页
目的 探讨痰聚合酶链反应 (PCR)TB DNA检测、血清结核分支杆菌胞壁糖脂免疫球蛋白G(LAMIgG)、卡介菌免疫球蛋白G(PPDIgG)、结核特异性循环免疫复合物 (SCIC)与结核菌素 (PPD)0 1U皮试联合检测对菌阴肺结核的诊断价值。方法 以上述 5... 目的 探讨痰聚合酶链反应 (PCR)TB DNA检测、血清结核分支杆菌胞壁糖脂免疫球蛋白G(LAMIgG)、卡介菌免疫球蛋白G(PPDIgG)、结核特异性循环免疫复合物 (SCIC)与结核菌素 (PPD)0 1U皮试联合检测对菌阴肺结核的诊断价值。方法 以上述 5种检测方法用于初治菌阳肺结核 3 1例、健康对照 5 3例、非结核肺疾病 3 0例、初治菌阴肺结核 5 4例同步检测。血清免疫学检测用酶联免疫吸附试验 (ELISA)。对结果分组分析评价。结果 单项检测的敏感性、特异性依次为PCR 96 8% ,96 2 % ;LAMIgG 69 2 % ,98 1% ;PPDIgG 62 1% ,98 1% ;SCIC 3 2 0 % ,98 1% ;PPD 0 1U 5 3 8% ,98 1%。单项检测对菌阴肺结核的检出率相应为 4 1 7% ,2 8 9% ,4 4 4 % ,2 8 9,2 1 4 %。联合检测对菌阴肺结核的检出率 2、3、4、5联分别为 66 9% ,75 0 % ,80 4 % ,85 7%。均明显高于单项检测 ,并高于对菌阳组单项检测的阳性率。联合检测特异性随联合种类增多有轻微下降 ,最大下降幅度仅 9%。2、3、4种联合检测特异性仍保持在 90 %以上。结论  5种方法用于菌阴肺结核诊断 ,联合检测阳性检出率明显增加 ,而特异性仅稍降低。故联合检测用于菌阴肺结核诊断值得推广。 展开更多
关键词 肺结核 聚合酶链反应 结核菌素试验 ELISA
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鲍曼不动杆菌产AmpC酶的检测 被引量:19
4
作者 刘丁 黄鑫 陈萍 《中国感染控制杂志》 CAS 2007年第2期83-85,共3页
目的研究某院临床分离的鲍曼不动杆菌产酶特性。方法参照美国临床实验室标准化研究所(CLSI)标准,采用纸片协同法对鲍曼不动杆菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况进行检测;用酶提取物三维试验法检测AmpC酶;用聚合酶链反应(PCR)法对鲍曼不... 目的研究某院临床分离的鲍曼不动杆菌产酶特性。方法参照美国临床实验室标准化研究所(CLSI)标准,采用纸片协同法对鲍曼不动杆菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况进行检测;用酶提取物三维试验法检测AmpC酶;用聚合酶链反应(PCR)法对鲍曼不动杆菌染色体DNA的ampC基因进行扩增。结果从临床分离的46株鲍曼不动杆菌均不产ESBLs;有22株细菌在AmpC酶三维试验中呈阳性;细菌DNA的PCR扩增,有39株菌为阳性。结论本次研究的鲍曼不动杆菌DNA上普遍存在有ampC结构基因,其对第三代头孢菌素耐药主要是由于产AmpC酶所致,而与ESBLs无关。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 AMPC酶 聚合酶链反应 微生物敏感性试验
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102例乳腺癌中的EB病毒感染 被引量:11
5
作者 杨文涛 许良中 +3 位作者 张泰明 朱伟萍 李小妹 金爱萍 《上海医科大学学报》 CSCD 1998年第3期175-178,共4页
目的探讨国人乳腺癌中EB病毒DNA(EBV-DNA)的检出率及EB病毒(EBV)基因编码蛋白的表达情况。方法(1)在102例乳腺癌中用聚合酶链反应(PCR)技术扩增EBV内部重复序列BamHIW区域,并以34例乳腺纤... 目的探讨国人乳腺癌中EB病毒DNA(EBV-DNA)的检出率及EB病毒(EBV)基因编码蛋白的表达情况。方法(1)在102例乳腺癌中用聚合酶链反应(PCR)技术扩增EBV内部重复序列BamHIW区域,并以34例乳腺纤维腺瘤,3例管内乳头状瘤和10例乳腺导管上皮增生作为对照组;(2)用ABC免疫组织化学技术检测其中73例乳腺癌中的EBV潜在膜蛋白(LMP)和EBV核抗原2(EBNA2)。结果(1)PCR检测显示29例(28.4%)乳腺癌有EBV-DNA,而对照组中仅2例(4.3%)纤维腺瘤有EBV-DNA,两组的差异在统计学上有显著意义(P<0.001);(2)免疫组化技术显示LMP和EBNA2阳性率分别为13.7%和17.8%,且阳性物质定位于肿瘤细胞,而非肿瘤中浸润的淋巴细胞。结论EBV感染与乳腺癌的发病可能有一定关系,明确EBV感染在乳腺癌发病机制中的作用将有十分积极的意义。 展开更多
关键词 乳腺癌 EB病毒 聚合酶链反应 免疫组织化学
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疟疾病例复核确认过程中检测结果不一致常见问题分析 被引量:15
6
作者 李美 夏志贵 周水森 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期464-471,共8页
显微镜检查、PCR和疟疾快速诊断试剂盒(RDT)是当前普遍采用的疟原虫检测方法。国家和省级疟疾诊断参比实验室在疟疾病例的复核确认过程中,经常会出现同一份血样3种检测方法的结果不一致的情况,有时甚至会影响病例阴阳性的最终判定。为此... 显微镜检查、PCR和疟疾快速诊断试剂盒(RDT)是当前普遍采用的疟原虫检测方法。国家和省级疟疾诊断参比实验室在疟疾病例的复核确认过程中,经常会出现同一份血样3种检测方法的结果不一致的情况,有时甚至会影响病例阴阳性的最终判定。为此,本文收集了与3种检测方法出现假阳性或假阴性结果的可能相关的文献资料,并结合实践经验,期望通过分析,为各相关机构在遇到类似问题时了解其中的原因和解决该问题时提供参考资料。 展开更多
关键词 显微镜检查 PCR 疟疾快速诊断试剂盒 病例确诊 敏感性
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新型冠状病毒肺炎实验室检测策略 被引量:12
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作者 胡孝林 张亮亮 罗阳 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第17期2595-2602,共8页
新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019,COVID-19)的早期快速实验室检测对病毒感染的治疗与预后监测极其关键,是提高救治效果的最重要手段.传统的基于聚合酶链式反应的核酸检测技术和基于免疫反应的蛋白检测技术是目前早期快速检... 新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019,COVID-19)的早期快速实验室检测对病毒感染的治疗与预后监测极其关键,是提高救治效果的最重要手段.传统的基于聚合酶链式反应的核酸检测技术和基于免疫反应的蛋白检测技术是目前早期快速检测的主要手段,但是因方法学本身的限制,每种技术均存在着各自的优缺点.非特异性实验室指标也在COVID-19患者的临床诊疗中具有重要价值.本文主要从核酸、蛋白、常规实验室检测指标三个层面着手,对目前新型冠状病毒的检测方法和策略进行详细论述和对比分析,提出通过综合核酸、蛋白和血清学指标的多指标联合检测有望成为未来感染性疾病临床诊断的重要手段. 展开更多
关键词 新型冠状病毒 实验室检测 聚合酶链式反应 核酸检测 免疫检测
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牛传染性鼻气管炎病毒PCR检测方法的建立 被引量:8
8
作者 林梅 缪德年 +1 位作者 黄克和 张克春 《中国奶牛》 2015年第14期23-26,共4页
为建立一种牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)PCR检测方法,依据IBRV的t K基因序列,设计合成PCR的引物,以IBRV的标准AV20毒株为对象,确定PCR最终反应体系为25μL,并优化了PCR反应条件。结果显示,该PCR方法可以扩增出301bp的特异性片段;对牧场... 为建立一种牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)PCR检测方法,依据IBRV的t K基因序列,设计合成PCR的引物,以IBRV的标准AV20毒株为对象,确定PCR最终反应体系为25μL,并优化了PCR反应条件。结果显示,该PCR方法可以扩增出301bp的特异性片段;对牧场中常见的BVDV进行PCR特异性检测,未检测到BVDV特异性条带;10倍稀释法验证PCR优化反应后的灵敏性为可检测出0.002TCID50的病毒量。结果表明,该方法可为牧场进行IBR疫情监测提供有效技术手段。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 PCR 检测
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新型冠状病毒检测技术的研究进展 被引量:6
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作者 王子豪 黄瑶 孔桂美 《实用临床医药杂志》 CAS 2022年第11期133-137,共5页
新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的出现导致了新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的大流行,快速而准确的实验室诊断对预防COVID-19的传播具有重要的作用。在获得完整的病毒基因组序列的基础上,中国开发了基于聚合酶链反应(PCR)技术的检测手段。此外,... 新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的出现导致了新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的大流行,快速而准确的实验室诊断对预防COVID-19的传播具有重要的作用。在获得完整的病毒基因组序列的基础上,中国开发了基于聚合酶链反应(PCR)技术的检测手段。此外,大多数患者可被检测到针对SARS-CoV-2的免疫球蛋白G、免疫球蛋白M和免疫球蛋白A的特异性抗体,为血清学检测技术的研发奠定了理论基础。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术是目前SARS-CoV-2的主要检测手段,具有特异性高、检测结果可靠等优势,但对设备和操作者有着较高的要求。本研究对目前SARS-CoV-2检测方法的研究进展进行综述,以期为临床医生及科研工作者提供参考。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 新型冠状病毒肺炎 聚合酶链反应 核酸检测 血清学检测 免疫球蛋白
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多重聚合酶链反应与荚膜肿胀试验对肺炎链球菌血清分型的比较研究 被引量:7
10
作者 彭拓华 李柏生 +3 位作者 曾洪辉 柯碧霞 杨彤 柯昌文 《微生物与感染》 2015年第2期98-102,共5页
为评估多重聚合酶链反应(PCR)对肺炎链球菌血清分型的可行性,分别采用多重PCR和荚膜肿胀试验对568株肺炎链球菌进行血清分型,并对分型结果进行比较分析。结果显示,568株肺炎链球菌中,213株通过荚膜肿胀试验分出16个血清群,主要有血清群1... 为评估多重聚合酶链反应(PCR)对肺炎链球菌血清分型的可行性,分别采用多重PCR和荚膜肿胀试验对568株肺炎链球菌进行血清分型,并对分型结果进行比较分析。结果显示,568株肺炎链球菌中,213株通过荚膜肿胀试验分出16个血清群,主要有血清群19(23.1%,131/568)、6(5.3%,30/568)、23(1.6%,9/568)、14(1.4%,8/568)、9(1.1%,6/568)、15(1.1%,6/568)等,分型率为37.5%(213/568);356株通过多重PCR分出21个血清群,主要有血清群19(27.8%,158/568)、23(8.5%,48/568)、6(7.4%,42/568)、14(4.4%,25/568)、3(4.2%,24/568)、15(3.5%,20/568)等,分型率为62.7%(356/568)。荚膜肿胀试验鉴定出血清群4和18,但多重PCR未能鉴定;多重PCR鉴定出血清群5、12、35、16、17和22,但荚膜肿胀试验未能鉴定。多重PCR与荚膜肿胀试验对19F、19A血清型的鉴定无显著差异。结果提示,这2种方法对肺炎链球菌血清分型结果有差别,多重PCR的分型率高于荚膜肿胀试验。对来源复杂的标本进行肺炎链球菌血清分型,2种方法可相互补充,以提高分型率。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 血清分型 多重聚合酶链反应 荚膜肿胀试验
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三种检测方法在菌阴结核病诊断中的价值 被引量:7
11
作者 王成勇 李翠萍 《临床肺科杂志》 2007年第9期933-934,共2页
目的探讨实时定量聚合酶链反应(PCR)、结核抗体(TB-Ab)、结核菌素(BCG-PPD)5IU皮试三种方法联合检测对菌阴结核病患者临床诊断的意义。方法依上述三种方法检测初治菌阴肺结核121例,结核性胸膜炎93例,肺外结核病41例,非结核疾病35例。结... 目的探讨实时定量聚合酶链反应(PCR)、结核抗体(TB-Ab)、结核菌素(BCG-PPD)5IU皮试三种方法联合检测对菌阴结核病患者临床诊断的意义。方法依上述三种方法检测初治菌阴肺结核121例,结核性胸膜炎93例,肺外结核病41例,非结核疾病35例。结果PCR、TB-Ab、PPD检测对菌阴肺结核的阳性检出率依次为41.3%、37.2%、31.4%,对结核性胸膜炎的阳性检出率依次为30.1%、43.0%、34.4%,肺外结核病组的阳性检出率依次为46.3%、39.0%、34.1%。联合检测与单项检测的最高阳性率相比,菌阴肺结核由41.3%提高到75.2%,结核性胸膜炎由43.0%提高到73.1%,肺外结核组由46.3%提高到74.3%。结论三种方法联合检测对于菌阴结核病的诊断,具有实用意义。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 结核抗体 结核菌素试验 结核/诊断
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金黄色葡萄球菌苯唑西林及红霉素耐药基因多重PCR快速检测 被引量:7
12
作者 黄革 周晓红 +2 位作者 蒋文玲 荣卡彬 赵莹 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期533-536,共4页
目的建立金黄色葡萄球菌苯唑西林和红霉素耐药基因的多重PCR快速检测体系,并进行临床应用评价,以了解耐药基因mecA、ermA、ermC在广州地区的流行分布,指导临床合理使用抗生素。方法全自动仪器鉴定菌株及药敏试验,克林霉素耐药试验检测... 目的建立金黄色葡萄球菌苯唑西林和红霉素耐药基因的多重PCR快速检测体系,并进行临床应用评价,以了解耐药基因mecA、ermA、ermC在广州地区的流行分布,指导临床合理使用抗生素。方法全自动仪器鉴定菌株及药敏试验,克林霉素耐药试验检测克林霉素诱导耐药,通过优化PCR反应体系建立多重PCR反应并应用于检测金黄色葡萄球菌耐药基因:mecA、ermA和ermC。结果成功构建四重PCR快速检测体系,临床评价所分离的124株金黄色葡萄球菌中,mecA、ermA、ermC检出率分别为59.7%、50%、33.9%;克林霉素诱导耐药菌株主要是ermC基因;苯唑西林耐药菌株中均能检测出mecA,红霉素耐药菌株中97.7%携带耐药基因ermA或/及ermC。结论所构建的多重PCR检测体系为临床实验室提供快速而有效的菌株耐药基因检测手段。mecA、ermA、ermC是本地区分离的金黄色葡萄球菌对苯唑西林和红霉素耐药的主要机制之一。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 多重PCR 耐药基因 克林霉素诱导耐药试验
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2008-2017年鄂西北地区脑膜炎奈瑟菌药物敏感性及分子分型研究 被引量:7
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作者 高景枝 张雅婷 +4 位作者 何飞 郑向梅 吕静 杨红梅 李国明 《疾病监测》 CAS 2018年第7期552-558,共7页
目的分析鄂西北地区2008–2017年分离到的72株脑膜炎奈瑟菌(Nm)的药物敏感性及分子分型特征。方法对Nm菌株进行生化鉴定和血清学分群,并采用荧光聚合酶链式反应进行基因分群,用K-B纸片和E-test检测试纸条进行药敏试验;选取部分菌株进行... 目的分析鄂西北地区2008–2017年分离到的72株脑膜炎奈瑟菌(Nm)的药物敏感性及分子分型特征。方法对Nm菌株进行生化鉴定和血清学分群,并采用荧光聚合酶链式反应进行基因分群,用K-B纸片和E-test检测试纸条进行药敏试验;选取部分菌株进行多位点序列分型(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)。结果血清分群结果为B群14株、C群10株、W群3株、E群1株、不可分群44株。基因分群结果:B群33株、C群10株、W群3株、E群1株,其他及不可分群25株。70株Nm菌株对复方新诺明、萘啶酸、环丙沙星、米诺环素、氯霉素5种抗生素的敏感率分别为7.14%、21.43%、28.57%、98.57%和98.57%,对美罗培南、亚胺培南、阿奇霉素、头孢曲松、头孢噻肟、青霉素和利福平均敏感。17株菌株共有12种序列型别,其中12株菌株不能归入现有克隆群,其他5株属于CC4821(4株)和CC175(1株)。55株菌株分为48种不同的PFGE带型,带型相同的菌株其基因群亦相同。结论 2008–2017年鄂西北地区分离的Nm菌株主要为B群;对复方新诺明、萘啶酸和环丙沙星具有较高的耐药性。MLST分型以CC4821为优势克隆。PFGE分型特征呈多态性,未出现优势带型。 展开更多
关键词 脑膜炎奈瑟菌 荧光聚合酶链式反应 药敏试验 脉冲场凝胶电泳 多位点序列分型
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11株临床诺卡菌16S rRNA及药敏分析 被引量:6
14
作者 刘涛华 王颜颜 +4 位作者 牟丽丽 吕倩 陈燕 张荣庆 康颖倩 《贵阳医学院学报》 CAS 2016年第3期268-271,共4页
目的:探讨应用11株临床诺卡菌16S rRNA序列鉴定该菌菌种名,同时观察该菌的药敏情况。方法:将11株临床分离的诺卡菌菌株分别接种于脑心浸液琼脂培养基分离培养,观察其生长情况;提取菌株DNA,聚合酶链式反应(PCR)扩增其16S rRNA序列,并测... 目的:探讨应用11株临床诺卡菌16S rRNA序列鉴定该菌菌种名,同时观察该菌的药敏情况。方法:将11株临床分离的诺卡菌菌株分别接种于脑心浸液琼脂培养基分离培养,观察其生长情况;提取菌株DNA,聚合酶链式反应(PCR)扩增其16S rRNA序列,并测定其基因序列,所获序列与Gen Bank数据库进行BLAST比对,鉴别其菌种名;采用Kirby-Bauey纸片扩散法检测11株菌株药敏情况。结果:11株临床诺卡菌在脑心浸液琼脂培养基上生长迅速;PCR扩增菌株16S rRNA基因序列经BLAST比对,结果与Gen Bank中已知的诺卡.菌同源性>98%,分离的菌株分别为Nocardia otitidiscaviarum 4株、Nocardia cyriacigeorgica 3株、Nocrdia wallacei1株及Nocardia farcinica3株;药敏实验结果显示11株诺卡菌均对阿米卡星敏感,对亚胺培南耐药,其中Nocardia cyriacigeorgica对氨苄西林、环丙沙星、克拉霉素及阿莫西林的药物敏感性结果与其它菌株截然不同。结论:测定16S rRNA序列能够快速、简便、准确地鉴定诺卡菌菌种,各菌株均对阿米卡星敏感,对亚胺培南耐药。 展开更多
关键词 诺卡菌 放线菌 16S RRNA 聚合酶链式反应 序列分析 DNA 药敏试验
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天麻PCR‑层析试纸条快速可视化检测方法的建立与评价
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作者 马秋贺 马玉贺 +9 位作者 刘悦 李涛 刘昂 徐子强 柴金军 王艳茹 高丽君 夏薇 李明成 曲永梅 《上海中医药杂志》 CSCD 2024年第3期79-85,共7页
目的通过聚合酶链式反应(PCR)与层析试纸条结合的方法,实现天麻快速可视化真伪鉴别,并对其检测效果进行评价。方法采用一步法提取天麻及其伪品基因组DNA,应用NCBI数据库设计天麻特异性引物。采用DNA分子克隆技术制备天麻阳性质粒,作为... 目的通过聚合酶链式反应(PCR)与层析试纸条结合的方法,实现天麻快速可视化真伪鉴别,并对其检测效果进行评价。方法采用一步法提取天麻及其伪品基因组DNA,应用NCBI数据库设计天麻特异性引物。采用DNA分子克隆技术制备天麻阳性质粒,作为天麻阳性对照品。建立PCR-层析试纸条法鉴定天麻真伪,摸索最优实验条件,并进行方法学评价。结果①样品DNA提取的纯度符合要求,最优的PCR反应引物浓度为1μmol/L,循环为29次。②分子克隆的天麻阳性质粒序列与天麻DNA分子标记特异性指纹区片段序列同源性为98%,可作为天麻PCR-层析试纸条法的阳性对照品。③PCR-层析试纸条法的方法学评价结果显示:天麻对照药材在试纸条上出现两个条带,伪品和阴性对照品出现1个条带,与琼脂糖凝胶电泳法结果一致,特异性良好;PCR-层析试纸条法较琼脂糖凝胶电泳法的灵敏度高100倍,天麻DNA浓度为10-1 mg/L时,试纸条仍有模糊条带;在第3、6、9、12个月采用PCR-层析试纸条法进行检测,检测结果与预期一致,稳定性良好;混合样品验证显示,PCR-层析试纸条法的最低检测限为10%,而琼脂糖凝胶电泳法的最低检测限为50%。④采用PCR-层析试纸条法对15份市售天麻样品进行检测,鉴别出3个伪品,与琼脂糖凝胶电泳法结果一致。结论所构建的PCR-层析试纸条检测方法特异性强、灵敏度高、操作简便快速,可在短时间内实现鉴定结果的可视化,检测结果准确、稳定,为道地药材天麻的真伪鉴别提供了新方法。 展开更多
关键词 天麻 聚合酶链式反应 试纸条 分子克隆 可视化鉴定 中药研究
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快速鉴定松茸及其制品的可视化核酸试纸条方法建立
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作者 朱建宇 尹荣 +2 位作者 王艳双 常明珠 周亭亭 《食品科技》 CAS 北大核心 2024年第5期342-348,共7页
松茸(Tricholoma matsutake)是一种稀有、珍贵的野生食用菌,至今还无法人工栽培,目前菌菇市场中存在大量假冒松茸商品。文章建立了快速鉴定松茸及其制品的可视化核酸试纸条法。该方法设计特异性引物,通过聚合酶链式反应(Polymerase Chai... 松茸(Tricholoma matsutake)是一种稀有、珍贵的野生食用菌,至今还无法人工栽培,目前菌菇市场中存在大量假冒松茸商品。文章建立了快速鉴定松茸及其制品的可视化核酸试纸条法。该方法设计特异性引物,通过聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增特异性鉴定松茸特异性基因标志物,优化扩增条件为退火温度63 ℃、15个循环。扩增产物使用胶体金核酸试纸条检测,松茸样本均出现2条红色条带,同时凝胶电泳验证可扩增出352 bp特异性DNA片段。其他菌类及空白对照均在质控线出现1条红色条带,检测线无显色条带,且凝胶电泳无扩增条带,结果特异良好。该方法灵敏度高、稳定性强,模板DNA的最低检出量为0.1 ng/μL,检测试纸条可在常温保存至少12个月。所建立的松茸特异性基因标志物成分检测的可视化核酸试纸条方法检测性能优异,结果稳定可视、操作简便,适用于松茸原料和加工制品的现场检测。 展开更多
关键词 松茸 快速鉴定 聚合酶链式反应 核酸试纸条 可视化检测
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中药全蝎快速鉴定方法的开发与应用 被引量:1
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作者 孟媛 孙淼 +6 位作者 吴楠 周童 李洋洋 张宇彤 李明成 高丽君 艾金霞 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期396-402,共7页
目的构建一种能够可视化快速鉴定中药全蝎及其伪混品的方法。方法应用改良十二烷基硫酸钠碱变性(SDS)法提取基因组DNA。选取细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列设计全蝎特异性引物,进行标记。优化聚合酶链式反应(polymerase chain rea... 目的构建一种能够可视化快速鉴定中药全蝎及其伪混品的方法。方法应用改良十二烷基硫酸钠碱变性(SDS)法提取基因组DNA。选取细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列设计全蝎特异性引物,进行标记。优化聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)体系,克隆制备全蝎阳性质控品作为对照。构建PCR产物检测试纸条,鉴定市售样品的真伪。结果只有正品中药全蝎在286 bp处扩增出特异性条带,且试纸条的检测结果为阳性,检测灵敏度达到1.0×10^(-2)ng·μL^(-1)。20个全蝎市售样品中18个正品样品,2个不合格样品。结论建立的中药全蝎可视化试纸条检测的方法特异、灵敏、稳定、简单、快速,为中药全蝎的真伪鉴定提供了安全可行的方法。 展开更多
关键词 全蝎 改良十二烷基硫酸钠碱变性法 聚合酶链式反应 分子克隆 核酸试纸条
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PCR检验法和细菌培养法在阴道细菌检验中的效果对比 被引量:1
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作者 廖丽琴 莫国富 邹毅梅 《中国现代药物应用》 2023年第6期81-84,共4页
目的分析在阴道细菌检验中选用聚合酶链反应(PCR)检验法和细菌培养法两种手段所呈现出的不同效果。方法50例阴道细菌感染性疾病患者,分别进行PCR检验法、细菌培养法检验,对比两种检验方式的阳性检出率、各病原菌阳性检出率、患者认可度... 目的分析在阴道细菌检验中选用聚合酶链反应(PCR)检验法和细菌培养法两种手段所呈现出的不同效果。方法50例阴道细菌感染性疾病患者,分别进行PCR检验法、细菌培养法检验,对比两种检验方式的阳性检出率、各病原菌阳性检出率、患者认可度。结果PCR检验法阳性检出率88.00%高于细菌培养法的62.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。PCR检验法对加特纳菌的阳性检出率为59.09%,高于细菌培养法的35.48%,差异有统计学意义(P<0.05)。两种检验方式对棒状杆菌、肠球菌阳性检出率对比,差异无统计学意义(P>0.05)。患者对PCR检验法的总认可度为98.00%,高于细菌培养法的76.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在阴道细菌检验中选用PCR检验法相较于细菌培养法的检验效果更佳,尤其是在加特纳菌检验中效果突出,可为临床诊治提供重要参考依据,值得推广使用。 展开更多
关键词 聚合酶链反应检验法 细菌培养法 阴道细菌检验 细菌性阴道疾病
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单克隆抗体标志乳胶凝集试验快速检测金黄色葡萄球菌及其耐药性 被引量:2
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作者 王崇义 俞晓春 徐晓 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期126-128,共3页
目的探讨金黄色葡萄球菌(SAU)的细菌学快速检测鉴定及其耐药性分析的试验方法。方法目标菌落先经传统鉴别方法怀疑葡萄球菌,采用Slidex MRSA Detection乳胶快速检测SAU菌株青霉素结合蛋白2a(PBP2a),确认耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)... 目的探讨金黄色葡萄球菌(SAU)的细菌学快速检测鉴定及其耐药性分析的试验方法。方法目标菌落先经传统鉴别方法怀疑葡萄球菌,采用Slidex MRSA Detection乳胶快速检测SAU菌株青霉素结合蛋白2a(PBP2a),确认耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA);设立SAU耐苯唑西林筛选试验对照,两组不符合菌株经PCR方法检测MceA基因确认。结果456株葡萄球菌中Slidex(staph.plus乳胶凝集法阳性(鉴定为SAU)135株,135株凝集法阳性菌中最后确认为SAU 127株,321株凝集法阴性菌最后确认为SAU11株,乳胶凝集法鉴定金黄色葡萄球菌灵敏度92.0%,特异性97.5%;Slidex MRSA Detection乳胶快速检测138株SA的PBP2a,阳性52株,138株SAU经苯唑西林筛选试验及PCR测定mceA基因,确定MRSA57株,乳胶凝集法快速检测SAU的PBP2a确定MRSA,灵敏度91.2%,特异性100%。结论单克隆抗体乳胶凝集法快速检测SAU及鉴定MRSA,具有较高灵敏度和特异性。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 mceA基因 聚合酶链反应 青霉素结合蛋白2a) 单克隆抗体 乳胶凝集法
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聚合酶链反应检验应用于肺结核早期诊断的准确性评价 被引量:3
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作者 王瑜 《实用检验医师杂志》 2022年第4期361-364,共4页
目的 探讨聚合酶链反应(PCR)检验应用于肺结核早期诊断的准确性。方法 选择2020年1月—2022年8月在烟台肺科医院就诊的120例疑似肺结核患者作为研究对象,在患者中开展痰涂片检查、结核菌素皮肤试验和PCR检验。以临床综合诊断结果作为诊... 目的 探讨聚合酶链反应(PCR)检验应用于肺结核早期诊断的准确性。方法 选择2020年1月—2022年8月在烟台肺科医院就诊的120例疑似肺结核患者作为研究对象,在患者中开展痰涂片检查、结核菌素皮肤试验和PCR检验。以临床综合诊断结果作为诊断“金标准”,比较痰涂片检查、结核菌素皮肤试验和PCR检验对肺结核诊断效能的各项指标(包括敏感度、特异度、准确度、阳性预测值及阴性预测值),分析痰涂片检查、结核菌素皮肤试验和PCR检验对于肺结核的诊断结果与诊断“金标准”结果的一致性,并比较痰涂片检查、结核菌素皮肤试验和PCR检验对不同分期肺结核的诊断符合率。结果 依照诊断“金标准”,在肺结核诊断时,PCR检验的敏感度、特异度、准确度、阳性预测值及阴性预测值均明显高于结核菌素皮肤试验和痰涂片检查(敏感度:96.25%比86.25%、71.25%,特异度:97.50%比82.50%、62.50%,准确度:96.67%比85.00%、68.33%,阳性预测值:98.72%比90.79%、79.17%,阴性预测值:92.86%比75.00%、52.08%,均P<0.05)。采用PCR检验和结核菌素皮肤试验进行肺结核诊断所得结果与病理诊断结果高度一致(κ值分别为0.892、0.745),而采用痰涂片检查所得诊断结果与病理诊断结果的一致性为中度(κ值为0.561)。在活动期和好转期肺结核患者中,PCR检验的诊断符合率均明显高于结核菌素皮肤试验和痰涂片检查[活动期:94.92%(56/59)比83.05%(49/59)、66.10%(39/59),好转期:100.00%(21/21)比80.95%(17/21)、47.62%(10/21),均P<0.05]。结论 采用PCR检验对肺结核具有良好的诊断价值,其诊断准确度优于痰涂片检查和结核菌素皮肤试验,可更加灵敏、准确地检出肺结核,减少误诊和漏诊,还能辅助鉴别和诊断肺结核的分期。 展开更多
关键词 肺结核 诊断 聚合酶链反应检验 痰涂片检查 结核菌素皮肤试验
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