Pokemon基因siRNA逆转录病毒重组表达质粒的构建及鉴定 被引量：11

1

作者 邓一静 倪兵 +3 位作者 姜曼 杨玓 李凡 吴玉章 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期203-205,209,共4页

目的针对Pokemon基因对于许多肿瘤抑制基因和原癌基因上游的作用,将其作为RNAi的靶基因,构建表达这些siRNA的重组逆转录病毒表达质粒。方法利用Ambion公司的网上设计工具设计针对Pokemon肿瘤基因的4条siRNA序列,并化学合成4对互补的siRN... 目的针对Pokemon基因对于许多肿瘤抑制基因和原癌基因上游的作用,将其作为RNAi的靶基因,构建表达这些siRNA的重组逆转录病毒表达质粒。方法利用Ambion公司的网上设计工具设计针对Pokemon肿瘤基因的4条siRNA序列,并化学合成4对互补的siRNA的DNA片段。将此双链DNA片段克隆到pSilencer 5.1-H1 Retro vector的BamHⅠ和HindⅢ位点,构建其逆转录病毒重组表达质粒。结果表达人类Pokemon基因的siRNA逆转录病毒重组表达质粒构建成功。结论我们成功构建了人类Pokemon基因的重组逆转录病毒重组表达质粒,为下一步Pokemon基因的RNA干扰提供了实验依据,并且开辟了肿瘤基因治疗的新思路。 展开更多

关键词 pokemon基因 重组逆转录病毒 RNA干扰

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非小细胞肺癌中pokemon表达与p14^(ARF)、bcl-2的相关性及对预后的影响 被引量：6

2

作者 赵智宏 王胜发 +2 位作者 丛德刚 禹亮 王巨 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期121-124,共4页

目的:探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中pokemon表达和p14ARF、bcl-2表达的关系及其对NSCLC临床病理特征和预后的判定价值。方法:应用SP免疫组织化学方法检测pokemon和p14ARF、bcl-2三种蛋白在62例NSCLC肿瘤组... 目的:探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中pokemon表达和p14ARF、bcl-2表达的关系及其对NSCLC临床病理特征和预后的判定价值。方法:应用SP免疫组织化学方法检测pokemon和p14ARF、bcl-2三种蛋白在62例NSCLC肿瘤组织及20例癌旁正常组织中的表达,分析它们与NSCLC病理学特征的关系,以及pokemon与p14ARF、bcl-2的相关性,并结合随访资料观察上述蛋白表达对NSCLC长期预后的影响。结果:正常肺组织中未见pokemon蛋白表达,p14ARF和bcl-2蛋白阳性表达率分别为95.0%和15.0%;在NSCLC组织中pokemon、p14ARF和bcl-2阳性表达率分别为72.6%、66.1%和53.2%。Pokemon表达与p14ARF表达呈负相关(r=-0.287,P<0.05),与bcl-2表达呈正相关(r=0.293,P<0.05)。Pokemon和p14ARF的表达与TNM分期相关(P<0.05),bcl-2表达与病理分型相关(P<0.05)。Pokemon与bcl-2表达阳性组的5年生存率分别为10.95%和13.74%,显著低于阴性组(P<0.05);p14ARF表达阳性组的5年生存率为21.68%,显著高于阴性组(P<0.05)。结论:NSCLC组织中存在pokemon和p14ARF、bcl-2的表达,pokemon表达与p14ARF表达呈负相关、与bcl-2表达呈正相关,它们对NSCLC的预后评估有一定的临床意义。 展开更多

关键词 癌 非小细胞肺 基因表达 pokemon P14^ARF BCL-2 免疫组织化学 预后

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Pokemon基因在肝癌细胞中的表达及意义 被引量：6

3

作者 赵心恺 宁巧明 +1 位作者 孙晓宁 田德安 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期137-139,共3页

目的探讨Pokemon在肝癌细胞中的表达及意义,进一步阐明肝细胞癌发生发展过程中的分子机制。方法选择肝癌细胞HepG2、SMMC7721和人胚胎肝细胞LO2细胞株,应用Western blot法检测Pokemon在不同细胞中的表达;应用基因沉默方法抑制Pokemon在... 目的探讨Pokemon在肝癌细胞中的表达及意义,进一步阐明肝细胞癌发生发展过程中的分子机制。方法选择肝癌细胞HepG2、SMMC7721和人胚胎肝细胞LO2细胞株,应用Western blot法检测Pokemon在不同细胞中的表达;应用基因沉默方法抑制Pokemon在肝癌细胞中的表达,应用流式细胞仪观察肝癌细胞的凋亡情况。结果 Pokemon在肝癌细胞HepG2、SMMC7721中的表达明显高于人胚胎肝细胞LO2;siRNA抑制Pokemon的表达后,肝癌细胞凋亡明显增加。结论原癌基因Poke-mon在肝癌细胞中表达明显增高,Pokemon可能在肝癌的发生、发展过程中起重要作用。 展开更多

关键词 pokemon基因 肝细胞癌 基因沉默

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Pokemon基因siRNA逆转录病毒的制备及其对Hela细胞增殖的影响 被引量：3

4

作者 石晶磊 贾正才 +2 位作者 邓一静 吴玉章 倪兵 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期259-263,267,共6页

目的针对多种肿瘤细胞高表达Pokemon基因的特性,制备表达针对Pokemon基因的siRNA的逆转录病毒,研究其对感染肿瘤细胞中Pokemon基因沉默情况,探讨肿瘤防治的新方法。方法首先利用siRNA预测软件得到4条siRNA编码DNA序列,再构建重组逆转录... 目的针对多种肿瘤细胞高表达Pokemon基因的特性,制备表达针对Pokemon基因的siRNA的逆转录病毒,研究其对感染肿瘤细胞中Pokemon基因沉默情况,探讨肿瘤防治的新方法。方法首先利用siRNA预测软件得到4条siRNA编码DNA序列,再构建重组逆转录病毒siRNA表达质粒;利用RT-PCR技术筛选出高表达Pokemon基因的肿瘤靶细胞。然后,将重组质粒转染靶细胞,利用实时定量RT-PCR和MTT等方法筛选出沉默效果最佳的siRNA。利用逆转录病毒包装细胞制备重组病毒,鉴定病毒滴度及其对体外培养细胞中Pokemon基因的沉默效应。结果通过酶切鉴定和测序等方法证实了预测出的四条siRNA编码DNA片段成功地构建到逆转录病毒表达载体pSilencer5.1-H1中。通过将这些重组质粒转入高表达Pokemon基因的Hela肿瘤细胞中,抗生素压力筛选出相应表达各种siRNA的细胞株,再从中筛选出了1个有50%以上沉默效应的候选siRNA。利用这一条siRNA表达质粒,在逆转录病毒包装细胞中制备出了滴度为105cfu/mL的重组病毒。此重组病毒感染Hela细胞后能显著降低其中Pokemon基因的表达。结论成功制备了表达人Pokemon基因siRNA的重组逆转录病毒,并且在体外实验中证实了该病毒能对肿瘤细胞Hela的增殖产生明显的抑制作用,为下一步的体内抗肿瘤研究提供了有力的佐证。 展开更多

关键词 pokemon基因 逆转录病毒 RNA 肿瘤治疗

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miRNA干扰Pokemon基因对大肠癌细胞增殖的影响及机制 被引量：3

5

作者 白玉贤 刘磊 +2 位作者 隋红 魏孝礼 苑珩珩 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2011年第11期970-973,共4页

目的探索miRNA干扰Pokemon基因后对大肠癌细胞系LoVo增殖和细胞周期的作用。方法构建靶向Pokemon基因的miRNA重组质粒并转染LoVo细胞,设重组质粒组、阴性对照质粒组和脂质体空白对照组,运用实时荧光定量PCR(QPCR)检测干扰后LoVo细胞中Po... 目的探索miRNA干扰Pokemon基因后对大肠癌细胞系LoVo增殖和细胞周期的作用。方法构建靶向Pokemon基因的miRNA重组质粒并转染LoVo细胞,设重组质粒组、阴性对照质粒组和脂质体空白对照组,运用实时荧光定量PCR(QPCR)检测干扰后LoVo细胞中Pokemon mRNA的表达,MTT法和流式细胞仪技术分析转染后细胞的增殖和周期变化。结果成功构建含miRNA片段的重组质粒,依次命名为mR22-1、mR22-2、mR22-3和mR22-4;分别转染LoVo细胞后,PokemonmRNA表达水平明显下调,以mR22-1最强,干扰效率为50%。MTT检测显示,mR22-1可明显抑制细胞增殖,24、48和72h的抑制率分别为(23±2.1)%、(47±3.0)%和(69±2.5)%,呈时间依赖性;流式细胞仪测定转染后LoVo细胞周期阻滞在G1期。结论采用RNAi技术可以特异性阻断Pokemon基因的表达;Pokemon基因有促进大肠癌细胞株LoVo增殖的作用。 展开更多

关键词 pokemon基因 大肠癌 RNA干扰

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Pokemon基因与顺铂作用关系的初步探讨 被引量：2

6

作者 赵智宏 王胜发 +8 位作者 禹亮 王巨 丛德刚 常浩 王雪峰 张铁娃 张健 付凯 姜久仰 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第17期1211-1213,共3页

目的探讨Pokemon基因与顺铂作用机制的相关性。方法体外培养人肺腺癌细胞株（A549、AGZY83-a），人肺鳞癌细胞株（HE-99），人肺巨细胞癌细胞株（95D）等4种肺癌细胞株，实验组在培养过程中加入顺铂，对照组在培养过程不加入顺铂；应用R... 目的探讨Pokemon基因与顺铂作用机制的相关性。方法体外培养人肺腺癌细胞株（A549、AGZY83-a），人肺鳞癌细胞株（HE-99），人肺巨细胞癌细胞株（95D）等4种肺癌细胞株，实验组在培养过程中加入顺铂，对照组在培养过程不加入顺铂；应用RT-PCR、Western印迹检测两组Pokemon基因mRNA和蛋白表达的情况。结果4种细胞株中Pokemon mRNA及蛋白均呈较高表达。实验组中细胞株经顺铂作用后Pokemon基因表达没有明显变化，与对照组相比差异无统计学意义（均P〉0．05）。结论顺铂对A549、AGZY83-a、HE-99、95D细胞株中Pokemon基因的表达没有明显影响。 展开更多

关键词 顺铂 抗药性 pokemon基因

原文传递

Pokemon表达慢病毒载体的构建及鉴定 被引量：1

7

作者 祖旭宇 刘文 谭晶晶 《中南医学科学杂志》 CAS 2013年第4期332-335,共4页

目的构建Pokemon表达慢病毒载体。方法通过PCR扩增Pokemon cDNA,将Pokemon cDNA连接于GV165载体,经测序确认后,将GV165/Pokemon与pHelper 1.0和pHelper 2.0共转染至293T细胞中,收获病毒,通过Real time PCR测定滴度;将Pokemon表达慢病毒... 目的构建Pokemon表达慢病毒载体。方法通过PCR扩增Pokemon cDNA,将Pokemon cDNA连接于GV165载体,经测序确认后,将GV165/Pokemon与pHelper 1.0和pHelper 2.0共转染至293T细胞中,收获病毒,通过Real time PCR测定滴度;将Pokemon表达慢病毒载体侵染293T细胞通过免疫荧光和Western blot检测Pokemon表达慢病毒载体的转染效率和Pokemon的表达能力。结果在感染Pokemon慢病毒载体293T细胞中能检查到Pokemon-GFP融合蛋白的表达。结论成功构建表达Pokemon的慢病毒载体。 展开更多

关键词 pokemon 慢病毒载体 基因治疗 293T细胞

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利用RNA干扰技术分析Pokemon对Lovo增殖过程的影响 被引量：1

8

作者 白玉贤 刘磊 +2 位作者 隋红 魏孝礼 苑珩珩 《实用肿瘤学杂志》 CAS 2011年第5期406-410,共5页

目的 探索干扰Pokemon基因对大肠癌细胞系Lovo增殖和细胞周期的影响.方法 采用miRNA技术干扰Pokemon基因不同位点,运用q-PCR检测干扰后Lovo细胞中Pokemon mRNA的表达,MTT和流式细胞仪分析转染后细胞增殖和细胞周期的变化.结果 成功构建... 目的 探索干扰Pokemon基因对大肠癌细胞系Lovo增殖和细胞周期的影响.方法 采用miRNA技术干扰Pokemon基因不同位点,运用q-PCR检测干扰后Lovo细胞中Pokemon mRNA的表达,MTT和流式细胞仪分析转染后细胞增殖和细胞周期的变化.结果 成功构建含miRNA片段的重组质粒,依次命名为mR22-1、2、3、4.转染Lovo细胞后,Pokemon基因的mRNA表达水平明显下调,以mR22-1最强,干扰效率为50%±2.7%,对照组之间有统计学意义（P＜0.01）.MTT显示mR22-1可明显抑制细胞增殖,24h、48h和72h的抑制率分别为23%±2.1%、47%±3.0%和69%±2.5%,呈时间依赖性;流式细胞仪测定转染后Lovo细胞周期阻滞在G1期.结论 采用RNAi技术可以特异性阻断Pokemon基因的表达;Pokemon基因有促进大肠癌细胞株Lovo增殖的作用. 展开更多

关键词 pokemon基因 大肠癌 RNA干扰

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Pokemon、c-myc在结直肠癌中的表达及意义

9

作者 刘叔敏 范玉磊 +1 位作者 梁婷婷 孙影 《承德医学院学报》 2014年第3期198-199,共2页

目的:探讨结直肠癌组织Pokemon和c-myc蛋白表达的变化和意义。方法:SP免疫组化法检测60例结直肠癌组织和癌旁正常组织Pokemon和c-myc蛋白的表达情况。结果:结直肠癌组织Pokemon和c-myc蛋白的阳性表达率均明显高于正常组织(P<0.01);... 目的:探讨结直肠癌组织Pokemon和c-myc蛋白表达的变化和意义。方法:SP免疫组化法检测60例结直肠癌组织和癌旁正常组织Pokemon和c-myc蛋白的表达情况。结果:结直肠癌组织Pokemon和c-myc蛋白的阳性表达率均明显高于正常组织(P<0.01);结直肠癌组织Pokemon和c-myc蛋白的阳性表达与分化程度、Dukes分期和淋巴结转移有关(P<0.01,P<0.05);结直肠癌组织中,Pokemon和c-myc蛋白的表达呈显著正相关(r=0.615,P<0.05)。结论:Pokemon和c-myc对结直肠癌的诊断和预后评判具有一定的价值。 展开更多

关键词 pokemon基因 C-MYC基因 结直肠癌

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X射线对人肺腺癌A549细胞Pokemon基因表达的影响

10

作者 王璐 邹跃 +4 位作者 江其生 李伟 宋秀军 周湘艳 王翠兰 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期177-179,共3页

目的研究不同剂量X射线照射及照射后不同时间点对人肺腺癌A549细胞Pokemon基因表达的影响。方法用吸收剂量分别为2、4、6和8Gy的X射线照射体外培养的人肺腺癌A549细胞，2、4、8、12、24、48和72h后，用实时定量PCR技术检测其中的Pokemon... 目的研究不同剂量X射线照射及照射后不同时间点对人肺腺癌A549细胞Pokemon基因表达的影响。方法用吸收剂量分别为2、4、6和8Gy的X射线照射体外培养的人肺腺癌A549细胞，2、4、8、12、24、48和72h后，用实时定量PCR技术检测其中的PokemonmRNA表达水平，以未照射组为对照。结果在2、4、6、8GyX射线照射后的早期（除2Gy照射后的2和4h外）PokemonmRNA的表达降低，但在晚期（48h以后）呈升高趋势，在大部分时间点实验组与对照组的差异有统计学意义（t=3.40～154.76，P〈0.05）。结论较大剂量的X射线在早期可下调A549细胞Pokemon基因mRNA的表达，诱导肿瘤细胞凋亡；但在晚期又可诱导A549细胞高表达PokemonmRNA，这可能与辐射所致A549细胞的DNA损伤修复和细胞周期调控有关。 展开更多

关键词 肺癌 pokemon基因 A549细胞 X射线 照射

原文传递

siRNA表达载体对SW480细胞原癌基因Pokemon的抑制 被引量：6

11

作者 郭睿 李喜霞 解军 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期7-13,共7页

观察siRNA表达载体对SW480细胞中Pokemon原癌基因的抑制效应,为进一步研究该基因的功能奠定基础。构建针对Pokemon基因的RNAi质粒表达载体,脂质体法转染人结直肠癌SW480细胞系,观察转染效率及细胞表型变化。稳定转染后,实时荧光定量PCR... 观察siRNA表达载体对SW480细胞中Pokemon原癌基因的抑制效应,为进一步研究该基因的功能奠定基础。构建针对Pokemon基因的RNAi质粒表达载体,脂质体法转染人结直肠癌SW480细胞系,观察转染效率及细胞表型变化。稳定转染后,实时荧光定量PCR和Western blot检测SW480细胞中Pokemon mRNA及蛋白质的表达情况;MTT法检测siRNA对SW480细胞恶性增殖的影响;流式细胞仪分析细胞凋亡改变。镜下观察阳性转染率约36%,转染表达载体后细胞形态发生了显著变化;Pokemon mRNA及蛋白质的表达受到明显抑制:与阴性对照组相比,表达质粒产生的siRNA对Pokemon mRNA的抑制率在转染后24h和48h分别为34.2%和67.7%;对蛋白的抑制率在48h和72h分别为48.3%和73.6%。MTT法检测细胞生长曲线表明Pokemon抑制可使SW480细胞生长速度明显减慢;流式细胞仪分析显示转染Pokemon siRNA表达质粒后SW480细胞凋亡增加。构建的RNAi表达载体可以有效抑制SW480细胞中Pokemon基因的表达,并对SW480细胞的生长具有明显抑制及诱导凋亡作用。 展开更多

关键词 RNA干扰 pokemon SW480 基因表达

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人宫颈癌致癌基因和Pokemon在肝细胞癌中的表达及其相关性 被引量：4

12

作者 计勇 马毅 +1 位作者 何晓顺 张韧 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期192-193,共2页

目的观察人宫颈癌致癌基因（HCCR）和Pokemon在肝细胞癌中的表达水平，探讨两者间的关系。方法应用实时定量逆转录－聚合酶链反应（RT—PCR）法检测41例肝癌组织、43例癌旁组织及其相应44例血液标本、3例肝硬化组织及其相应的3例血液标... 目的观察人宫颈癌致癌基因（HCCR）和Pokemon在肝细胞癌中的表达水平，探讨两者间的关系。方法应用实时定量逆转录－聚合酶链反应（RT—PCR）法检测41例肝癌组织、43例癌旁组织及其相应44例血液标本、3例肝硬化组织及其相应的3例血液标本以及3例正常肝组织中HCCR、Pokemon的表达水平，分析肝细胞癌（HCC）患者血液样本中HCCR、Pokemon表达水平与临床指标的关系。结果肝癌、癌旁、肝硬化及正常肝组织HCCR阳性表达率分别为100．00％、97．67％、100．00％、100．00％；Pokemon阳性表达率分别为97．56％、97．67％、100．00％、100．00％。但HCCR、Pokemon在各类组织中的表达水平差异有统计学意义（P〈0．05），肝细胞癌、癌旁、肝硬化、正常肝等组织中的表达水平呈递减趋势。肝细胞癌患者血液中HCCR、Pokemon阳性率分别为79．55％及50．00％。两者的表达水平显著相关。结论HCCR和Pokemon可能可以做为HCC相关的肿瘤标记物。HCCR和Pokemon在肝细胞癌患者中存在某种程度的关系。 展开更多

关键词 癌 肝细胞 基因表达pokemon

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X射线对人肺癌细胞Pokemon表达影响

13

作者 梁小芳 邹跃 +2 位作者 王璐 江其生 李峰生 《中华放射肿瘤学杂志》 CSCD 北大核心 2012年第1期83-86,共4页

目的研究不同剂量X射线照射及照射后不同时间点对体外培养的人肺癌A549细胞系Pokemon基因和蛋白表达的影响。方法用X射线2、4、6、8Gy吸收剂量照射体外培养的A549细胞系，分别采用荧光实时定量PCR技术和蛋白印记法检测A549细胞照射后2、... 目的研究不同剂量X射线照射及照射后不同时间点对体外培养的人肺癌A549细胞系Pokemon基因和蛋白表达的影响。方法用X射线2、4、6、8Gy吸收剂量照射体外培养的A549细胞系，分别采用荧光实时定量PCR技术和蛋白印记法检测A549细胞照射后2、4、8、12、24、48h的PokemonmRNA和蛋白表达水平，以未照射组为对照。采用二苯基四氮唑溴盐法分别检测2Gy照射1、2、3、4、5d后A549细胞增殖能力变化，以未照射组为对照。结果PokemonmRNA的表达在2、4、6、8Gy照射后早期呈降低趋势，但晚期呈升高趋势，大部分时间点差异有统计学意义（t=3．40-154．76，P=0．000-0．041）；Pokemon蛋白的表达较对照组均升高，且各剂量组均在照射后8h达峰值，在大部分时间点实验组与对照组差异有统计学意义（t=4．18-89．64，P=0．000-0．039）。照射组细胞接种后第3-5天细胞增殖能力显著低于对照组（t=2．34-18．19，P=0．000-0．040）。结论一定剂量X射线在特定条件下可诱导人肺癌A549，细胞PokemonmRNA和蛋白表达升高，可能与A549细胞辐射抗性有关。 展开更多

关键词 细胞系 肺肿瘤 人 pokemon基因表达 X射线 照射

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